DNA甲基化转移酶1介导体外高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤的实验观察

目的研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷,Dnmt1-siRNA),培养48h,RT-PCR检测其Dnmts mRNA表达;免疫印迹检测Dnmt1、nephrin及podocin蛋白表达;Transwell转板迁移实验观察不同处理后足细胞迁移数目。结果与正常糖对照组比较,高糖刺激组足细胞Dnmt1mRNA及蛋白表达增加(P0.01),Dnmt3a及Dnmt3bmRNA表达未见明显改变。经5-氮杂-2′-脱氧胞苷或Dnmt1-siRNA处理48h后,高糖刺激组导致Dnmt1高表达得到抑制,降低的足细胞裂孔膜蛋白podocin、nephrin表达增加(P0.01)。结论高糖上调足细胞Dnmt1蛋白表达,Dnmt1参与体外高糖诱导的小鼠足细胞损伤。     

亚砷酸钠抑制血小板源性生长因子受体β介导的细胞迁移及其机制

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)介导细胞迁移的影响及其作用机制。方法用脂质体介导的细胞转染技术将人PDGFRβ表达载体转染体外培养的不表达PDGFRβ的PAE细胞,G418抗性筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR检测PDGFRβ的表达;用细胞损伤修复实验观察细胞损伤24 h完全修复所需的PDGFBB最低浓度;划痕实验观察加入不同浓度NaAsO224 h后,细胞迁移的抑制率;RT-PCR分析不同浓度NaAsO2组中MMP3 mRNA表达水平。结果 RT-PCR检测转染组细胞表达PDGFRβ;细胞损伤修复实验检测细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB(PDGFBB)最低浓度为10μg/L;NaAsO2明显抑制了PDGFRβ介导的细胞迁移,呈典型的剂量效应关系;同时显著下调MMP-3 mRNA表达水平。结论下调MMP3基因表达在NaAsO2抑制PDGFRβ介导的细胞迁移中起重要作用。     

基质细胞衍生因子-1的介导机制及心血管疾病干细胞治疗

目前利用干细胞治疗心血管疾病一个更好的治疗策略就是利用细胞因子动员自体骨髓源干细胞(BMDCs)进入外周血并迁移到心肌梗死部位再生修复受损的心脏。其中一个关键环节就是动员BMDCs靶向迁移到心肌梗死部位。基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其配体CXC型趋化因子受体4(CXCR4)所构成的SDF-1/CXCR4轴具有调控干细胞迁移及归巢的作用。近来,国内外以SDF-1/CXCR4轴为靶点探索SDF-1介导的干细胞动员迁移到损伤组织部位作了大量研究。该文就SDF-1/CXCR4轴在干细胞动员迁移到损伤部位修复受损的组织器官,尤其SDF-1/CXCR4轴介导的干细胞治疗心血管疾病的前景简要综述。     

骨髓间充质干细胞诱导的胰岛样细胞治疗大鼠胰腺损伤

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导后促进胰腺损伤修复的方法.方法 应用贴壁法分离、纯化大鼠MSCs,经bFGF、EGF、HGF、2%B27、activeA、β巯基乙醇、尼克酰胺诱导12～14 d,RT-PCR鉴定后,以DAPI标记治疗胰腺损伤模型大鼠.治疗1 w后激光共聚焦显微镜观察胰岛样细胞的迁移、定位,RT-PCR鉴定参与胰腺损伤修复的细胞来源.结果 MSCs经诱导12～14 d,分化为可表达Ins1、Ins2的胰岛样细胞,经DAPI标记后治疗胰腺损伤模型大鼠1 w,使炎性细胞浸润明显、细胞结构不清、胰岛结构崩解的损伤区的胰腺组织结构开始恢复,胰岛再建;RT-PCR检测Sry进一步证实损伤区胰腺组织内存在输注的胰岛样细胞.结论 MSCs可诱导分化成胰岛样细胞,该细胞参与损伤胰腺组织的修复.     

足细胞和糖尿病及其肾病

肾小球足细胞损伤和丢失是肾小球硬化形成和发展的关键因素。糖尿病时足细胞可出现密度和数量减少、足突增宽、足细胞脱落等改变,且可从尿中丢失,继而导致糖尿病肾病的发生。高血糖、高血压、氧化应激及一氧化氮等可直接损伤足细胞,并抑制α3β1整合素、nephrin的表达,促进血管内皮生长因子、Ⅳ型胶原、糖基化终末产物受体、转化生长因子β等的表达而加重足细胞损伤。因而,探索足细胞损伤在糖尿病肾病发生、发展中的病理发展过程对糖尿病肾病的防治具有重要意义。     

基质细胞衍生因子-1的介导机制及心血管疾病干细胞治疗

目前利用干细胞治疗心血管疾病一个更好的治疗策略就是利用细胞因子动员自体骨髓源干细胞（BMDCs）进入外周血并迁移到心肌梗死部位再生修复受损的心脏。其中一个关键环节就是动员BMDCs靶向迁移到心肌梗死部位。基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其配体CXC型趋化因子受体4（CXCR4）所构成的SDF-1／CXCR4轴具有调控干细胞迁移及归巢的作用。近来,国内外以SDF-1／CXCR4轴为靶点探索SDF-1介导的干细胞动员迁移到损伤组织部位作了大量研究。该文就SDF-1／CXCR4轴在干细胞动员迁移到损伤部位修复受损的组织器官,尤其SDF-1／CXCR4轴介导的干细胞治疗心血管疾病的前景简要综述。     

SB431542对高糖环境中小鼠足细胞Cdk5/p35表达的影响

目的应用SB431542及Roscovitine处理高糖培养的足细胞,观察抑制转化生长因子(TGF)-β1通路对高糖培养足细胞中Cdk5/p35表达的影响及抑制Cdk5激酶活性对高糖和TGF-β1诱导足细胞凋亡的影响。方法采用不同浓度SB431542(0.1,1.0,10μmol/L)处理高糖培养的足细胞,Western印迹法及RT-PCR技术检测各处理组Cdk5及p35蛋白和mRNA的表达变化情况。应用流式细胞术检测Roscovitine对高糖及TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响。结果高糖(HG组)Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平明显增高,显著高于正常血糖组(NG)组和甘露醇组(M组)(P0.05),并且呈时间依赖性升高。加入SB431542后,高糖培养导致的足细胞内Smad-2蛋白磷酸化水平明显降低。同时,HG+SB431542组足细胞内Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平呈浓度依赖性显著降低,明显低于HG组(P0.05)。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1诱导足细胞的足细胞凋亡水平显著下降(P0.05)。结论高糖可能通过活化TGF-β1通路上调Cdk5/p35表达从而诱导足细胞凋亡。     

β-神经生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究β-神经生长因子(β-NGF)基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移相关功能的影响。方法将人源β-NGF基因重组的真核表达质粒(p EGFP-N1/β-NGF)转染至HUVEC,同时设置p EGFP-N1空载组、正常组(未转染质粒)、酪氨酸激酶受体A(Trk A)抑制剂组(β-NGF基因转染组加入1∶1000的K252a)。观察转染前后细胞形态学变化,利用real-time PCR和Western blot检测β-NGF基因转染表达效果,MTT法检测β-NGF基因转染对细胞增殖的影响,平板单克隆实验检测β-NGF基因转染对细胞单克隆形成能力的变化,流式细胞术检测β-NGF基因转染对细胞周期和细胞凋亡率的影响,Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力的变化,Western blot检测β-NGF基因转染前后Trk A和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果β-NGF基因成功转染HUVEC 48 h后能够显著提高β-NGF mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),同时促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率(P0.05)。β-NGF基因转染HUVEC后Trk A和VEGF表达水平也随之显著上升(P0.05),但受到Trk A抑制剂的抑制。结论β-NGF基因能够成功转染HUVEC并显著表达,进而促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率,而其发挥作用与Trk A结合诱导VEGF表达上调有关。     

白果内酯通过调控miR-93-5p表达对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探究白果内酯对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其机制。方法 体外培养小鼠足细胞(MPC5),经不同剂量(15、30、60μmol/L)白果内酯干预后,建立高糖诱导的损伤模型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β]含量,流式细胞术、Western印迹法分别测定凋亡率和凋亡关联蛋白[活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)3、9]表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)测定miR-93-5p表达。分别转染miR-93-5p模拟物或抑制剂至MPC5,经0、60μmol/L白果内酯干预后,建立高糖诱导的损伤模型,上述相同方法检测炎症因子水平、凋亡率及凋亡相关蛋白表达。结果 与高糖组比较,白果内酯各剂量组TNF-α、IL-6、IL-1β水平、凋亡率、cleaved-caspase3、9表达显著降低,miR-93-5p表达显著增高(P<0.05)。与高糖+miR-NC组比较,高糖+miR-93-5p组miR-93-5p表达明显升高,TNF-α、IL-6、IL-1β水...     

足细胞和糖尿病及其肾病

肾小球足细胞损伤和丢失是肾小球硬化形成和发展的关键因素。糖尿病时足细胞可出现密度和数量减少、足突增宽、足细胞脱落等改变，且可从尿中丢失，继而导致糖尿病肾病的发生。高血糖、高血压、氧化应激及一氧化氮等可直接损伤足细胞，并抑制α3β1整合素、nephrin的表达，促进血管内皮生长因子、Ⅳ型胶原、糖基化终末产物受体、转化生长因子β等的表达而加重足细胞损伤。因而，探索足细胞损伤在糖尿病肾病发生、发展中的病理发展过程对糖尿病肾病的防治具有重要意义。