MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论 MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。     

葱白提取物干预脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的实验研究

目的:探讨葱白提取物对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤的影响及分子机制。方法:将H9c2细胞随机分为NC组、LPS组、葱白提取物低剂量组、葱白提取物中剂量组、葱白提取物高剂量组、anti-miR-194-5p+LPS组、anti-miR-NC+LPS组、miR-194-5p+葱白提取物高剂量组+LPS组、miR-NC+葱白提取物高剂量组+LPS组。蛋白质印迹法检测Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-194-5p表达水平。结果:LPS诱导的心肌细胞中Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和H9c2细胞凋亡率升高,MDA含量升高,SOD和CAT活性降低,miR-194-5p表达水平升高(P<0.05)。低、中、高剂量葱白提取物处理后,Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD和CAT活性升...     

circ＿0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的 探讨circ＿0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织；A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ＿0081666组(转染si-circ＿0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ＿0081666组(转染pcDNA-circ＿0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ＿0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-con)、si-circ＿0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ＿0081666和miR-330-5p表达水平；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性；Transwell检测细胞迁移和侵袭；双荧光素酶报告实验检测circ＿0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果...     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

miR-877靶向TRIM72调控脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡

目的研究miR-877对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及潜在的分子机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测miR-877和三重基序(TRIM)72 mRNA的表达,Western印迹测定TRIM72蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导心肌细胞H9c2后培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-877与TRIM72的调控关系。结果 LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2中miR-877表达量显著上升(P0.05),TRIM72 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);LPS可诱导H9c2细胞大量产生炎症因子TNF-α和IL-6,诱导细胞凋亡;抑制miR-877表达或过表达TRIM72均可减轻LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症反应,降低TNF-α和IL-6的产生,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-877靶向负调控TRIM72的表达;抑制TRIM72表达可逆转下调miR-877对LPS诱导的H9c2细胞炎症因子表达和细胞凋亡的作用。结论 miR-877通过靶向TRIM72以减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应,抑制细胞凋亡。     

普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制

[目的]探讨普鲁卡因对缺氧诱导的N9细胞、PC12细胞损伤的影响及分子机制。[方法] N9细胞、PC12细胞分为对照组、缺氧组、低、中、高剂量普鲁卡因组(缺氧+2、6、18 mg/L普鲁卡因)、anti-miR-con组、anti-miR-369-3p组、miR-con+高剂量普鲁卡因组(转染miR-con+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)、miR-369-3p+高剂量普鲁卡因组(转染miR-369-3p+缺氧+18 mg/L普鲁卡因)。流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,RT-qPCR检测miR-369-3p表达水平。[结果]相比于对照组,缺氧组N9细胞、PC12细胞凋亡率升高,MDA、ROS含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,miR-369-3p表达水平升高(P<0.05)。相比于缺氧组,低、中、高剂量普鲁卡因组N9细胞和PC12细胞凋亡率降低,MDA、ROS含量...     

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的：探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组：对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外，其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；以流式细胞术检测细胞凋亡率；以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果：与对照组比较...     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

miR-212-5p调控NF-κB影响CSE诱导的MRC-5细胞炎症因子释放和凋亡

目的 研究miR-212-5p对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症因子释放和凋亡的影响和机制。方法 MRC-5分成对照(Control)组、CSE(CSE诱导)组、CSE+miR-NC(转染mimics control, CSE诱导)、CSE+miR-212-5p(转染miR-212-5p mimics, CSE诱导)组，实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-212-5p表达，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平，用CCK-8法检测细胞增殖活性，用流式细胞术检测细胞凋亡变化，用Western印迹方法检测细胞中C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、核因子(NF)-κB p65蛋白表达。用NF-κB信号激活剂和miR-212-5p mimics联合处理经CSE诱导的MRC-5,同样测定细胞中炎症因子分泌、细胞增殖、凋亡和C-Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达。结果 与Control组比较，CSE组MRC-5中miR-212-5p表达水平明显降低，细胞分...     

苦豆碱通过调控miR-210对脂多糖致心肌细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的:探讨苦豆碱对脂多糖(LPS)致心肌细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将大鼠心肌H9c2细胞分为NC组(不作任何处理)、LPS组、LPS+苦豆碱低剂量组、LPS+苦豆碱中剂量组、LPS+苦豆碱高剂量组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-210组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-NC组、LPS+苦豆碱中剂量组+anti-miR-210组。通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术、蛋白免疫印迹法检测细胞增殖、凋亡及其相关蛋白表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-210表达水平。结果:不同浓度苦豆碱处理后,LPS处理的心肌细胞活性及Ki-67、Bcl-2、miR-210蛋白表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达水平降低,IL-1β、TNF-α水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-210后LPS处理的心肌细胞活性、Ki-67、Bcl-2表达水平增加,细胞凋亡率及p21、Bax表达水平降低,IL-1β、TN...     

哌拉西林通过调控miR-127-5p影响重症肺炎大鼠炎症因子的分子机制

目的 探讨哌拉西林对重症肺炎大鼠炎症因子的影响及分子机制。方法 用肺炎克雷伯菌构建重症肺炎大鼠模型，将大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组(50 mg/kg哌拉西林)、中剂量组(100 mg/kg哌拉西林)、高剂量组(200 mg/kg哌拉西林)、anti-miR-con+模型组、anti-miR-127-5p+模型组、anti-miR-con+高剂量组、anti-miR-127-5p+高剂量组。酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β水平；髓过氧化物酶(MPO)活性测定试剂盒检测MPO活性；Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-p65蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-127-5p表达水平。结果 重症肺炎大鼠模型中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平升高，MPO活性升高，MMP2、MMP9、p-p65蛋白的相对表达水平升高，miR-127-5p相对表达水平降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量哌拉西林处理后，重症肺炎大鼠中IL-6、T...     

miR-7靶向Sp3对急性胰腺炎腺泡细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种发病急、进展快、死亡率高的严重疾病,其病因复杂,近年来研究发现, miRNA在AP的发生和发展中发挥重要作用,研究miRNA在AP中的机制对于AP的治疗、预防等有一定的帮助.而miR-7与胃癌、肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种肿瘤的进展相关,但在AP中研究鲜有报道.目的研究miR-7对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置NC组、Cerulein组、miR-con组(转染miR-con)、miR-7组(转染miR-7mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-7组(转染anti-miR-7)、Cerulein+anti-miR-con组(Cerulein处理后转染antimiR-con)、Cerulein+anti-miR-7组(Cerulein处理后转染anti-miR-7)、Cerulein+pc DNA组(Cerulein处理后转染pcDNA)、Cerulein+pcDNA-特异性蛋白3(specific protein3,Sp3)组(Cerulein处理后转染pcDNA-Sp3)、Cerulein+anti-miR-7+si-con组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-con)、Cerulein+anti-miR-7+si-Sp3组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-Sp3),用脂质体法转染至AR42J细胞. ELISA法检测雨蛙素处理AR42J细胞的淀粉酶(Amylase, AMY)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达;qRT-PCR检测雨蛙素处理AR42J细胞中miR-7、Sp3 mRNA的表达水平;WesternBlot检测Sp3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙素处理AR42J细胞后, AMY、TNF-α、IL-6的表达均呈现先升高后下降的趋势,且均在8h时达到最大,建模成功.相较于NC组, Cerulein组miR-7的表达水平显著升高; Sp3 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P0.01).相较于Cerulein+anti-miR-con组,Cerulein+anti-miR-7组miR-7的表达水平显著下降,细胞凋亡率显著降低(P0.01).相较于Cerulein+pcDNA组, Cerulein+pcDNA-Sp3组Sp3蛋白的表达水平显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.01). miR-7靶向负调控Sp3;抑制Sp3表达逆转了敲减miR-7对雨蛙素处理AR42J细胞的凋亡抑制作用.结论敲减miR-7表达可以抑制AP腺泡细胞凋亡,其机制可能与靶向调控SP3有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

维立西呱通过调控circ PRKCI表达对脂多糖致大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨维立西呱对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响以及其对环状RNA PRKCI(circ PRKCI)表达的调控机制。方法 取大鼠心肌细胞H9C2,采用LPS诱导方式构建心肌细胞损伤模型;按随机数字表法分为对照组、LPS组、LPS+维立西呱-L组（1μmol/L）、LPS+维立西呱-M组（3μmol/L）、LPS+维立西呱-H组（10μmol/L）、LPS+空载体质粒（p c DNA）组、LPS+c irc PRKCI过表达载体（p c DNA-c irc PRKCI）组、LPS+维立西呱-H+阴性对照（s h-NC）组、LPS+维立西呱-H+circ PRKCI慢病毒短发夹RNA(sh-circ PRKCI)组。检测并比较各组H9C2细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)等炎症因子水平,细胞凋亡率和裂解的胱天蛋白酶（Cleaved Caspase）-3、Cleaved Ca s p a s e-9等凋亡相关蛋白表达水平,以及c irc PRKCI mRNA表达水平。结果 与对照组比较,LPS组TNF-α水平、IL-6水平、细胞凋亡率...     

lncRNA Gm4419靶向miR-204-5p调控LPS诱导的心肌细胞损伤机制

目的 研究lncRNA Gm4419对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响及潜在机制.方法 用10 mg/L LPS诱导心肌细胞H9C2细胞6 h,qRT-PCR检测细胞中lncRNA Gm4419和miR-204-5p的表达.在H9C2细胞中转染GM4419干扰物(si-GM4419)和miR-204...     

姜黄素调控miR-21对病毒性心肌炎细胞凋亡、炎症反应及NF-κB信号通路的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)是否通过调控微小RNA-21(miR-21)影响病毒性心肌炎(VMC)心肌细胞的凋亡及炎症反应。方法:用柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞建立VMC心肌细胞模型记为CVB3组,未经任何处理的心肌细胞作为对照组。以不同浓度(0.25,0.50,1.00μmol)的Cur处理心肌细胞进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Cur对miR-21表达水平的影响;分别将anti-miR-con、anti-miR-21转染至心肌细胞后使用CVB3处理,分别将miR-con、miR-21 mimics转染至心肌细胞后使用Cur与CVB3处理,采用上述方法检测细胞凋亡率及炎性因子的含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,CVB3组心肌...     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-24-3 p靶向PDCD5减轻缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的作用机制

目的 研究miR-24-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及潜在的分子机制.方法 qRT-PCR检测miR-24-3p和程序化细胞死亡因子(PDCD)5 RNA表达,Western印迹测定PDCD5蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase-3的表达,测定心肌细胞H9c2 H/...     

miR-194-5p靶向MEX3A调控肝癌细胞活性和凋亡的机制

目的研究miR-194-5p对肝癌细胞活性和凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测肝癌细胞HepG2、正常肝细胞L02中miR-194-5p和MEX3A的表达;根据分组:miR-194-5p组(转染miR-194-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-MEX3A组(转染si-MEX3A)、si-con组(转染si-con)、miR-194-5p+pcDNA-MEX3A组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA-MEX3A)、miR-194-5p+pcDNA组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA),均用脂质体法将相关质粒转染至HepG2;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2中miR-194-5p表达明显降低,MEX3A表达明显升高(P0.05);过表达miR-194-5p、敲减MEX3A均可抑制HepG2细胞的活性,促进细胞凋亡;miR-194-5p可抑制野生型MEX3A细胞的荧光活性;过表达MEX3A能逆转miR-194-5p对HepG2细胞活性的抑制和凋亡的促进作用。结论 miR-194-5p可抑制肝癌细胞的活性,促进凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,将可为肝癌的治疗提供新靶点。     

miR-204-5p靶向JARID2调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖侵袭迁移的机制

目的研究miR-204-5p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR、Western印迹检测人葡萄膜黑色素瘤MUM-2B、正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19中miR-204-5p、JARID2的表达;将miR-204-5p组(转染miR-204-5p模拟物)、miR-con组(转染miR-con)、si-JARID2组(转染si-JARID2)、si-con组(转染si-con),miR-204-5p+pcDNA组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA)、miR-204-5p+pcDNA-JARID2组(共转染miR-204-5p模拟物和pcDNA-JARID2),均用脂质体法转染至MUM-2B细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19相比,葡萄膜黑色素瘤MUM-2B中miR-204-5p表达显著降低,JARID2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-204-5p、敲减JARID2均可明显抑制MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭;miR-204-5p可靶向负调控JARID2的表达;过表达JARID2可逆转过表达miR-204-5p对MUM-2B细胞的增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论miR-204-5p可抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向JARID2有关,将可为葡萄膜黑色素瘤的靶向治疗提供新靶点。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...