红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞细胞损伤的影响

目的:研究红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞分泌炎症因子及氧化损伤得的影响。方法:分离培养大鼠皮质星形胶质细胞,构建缺氧复氧星形胶质细胞损伤模型,在缺氧复氧前给予红景天苷预处理,CCK8测定细胞活力,二硝基苯肼法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,改良二硫双硝基苯甲酸定量法检测还原型谷胱甘肽(GSH)活性,代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)和活化型Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白表达水平,用罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位变化。结果:缺氧复氧处理星形胶质细胞后细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞SOD活性、GSH活性降低,MDA含量升高,细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6增多,细胞凋亡率升高,Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,线粒体膜电位降低。红景天苷处理后的缺氧复氧星形胶质细胞,细胞活力升高,细胞LDH漏出率降低,细胞SOD活性、GSH活性升高,MDA含量降低,细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6减少,细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平降低,线粒体膜电位升高。结论:红景天苷对缺氧复氧星形胶质细胞氧化损伤、炎症因子分泌及细胞凋亡均有抑制作用,红景天苷具有减轻缺氧复氧星形胶质细胞损伤作用。     

沉默信息调节因子1对缺氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:分析沉默信息调节因子1(Sirt1)对缺氧条件下心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:将心肌H9c2细胞分为Control组、Hypoxia组(缺氧处理24h)、NC+Hypoxia组(转染阴性对照并缺氧处理24h)和Sirt1+Hypoxia组(转染Sirt1过表达载体并缺氧处理24h)。以qRT-PCR和Western blot测定心肌细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平,MTT方法评估细胞存活率,流式细胞术测定细胞总凋亡水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3水平和自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平。结果:与Control组比较,Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平降低(P0.05)。与NC+Hypoxia组比较,Sirt1+Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:Sirt1可抑制缺氧心肌细胞凋亡并诱导细胞自噬。     

过表达SIRT1抑制脂多糖诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及NF-κB信号通路激活

目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对脂多糖(LPS)诱导的胰岛β细胞炎症因子表达及核因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响。方法用LPS处理胰岛β细胞,qRT-PCR和Western blot测定细胞中SIRT1表达变化。用pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染胰岛β细胞,qRT-PCR检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)mRNA和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、核因子-κBp65亚型(NF-κBp65)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果 LPS处理后的胰岛β细胞中SIRT1表达水平降低。pcDNA3.1-SIRT1慢病毒感染可以提高LPS条件下胰岛β细胞中SIRT1表达水平。LPS处理后的胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平升高,凋亡率升高,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达升高。过表达SIRT1可以降低LPS条件下胰岛β细胞中IL-6 mRNA和TNF-αmRNA表达水平,抑制细胞凋亡,减少细胞中Bax、cleaved Caspase-3、NF-κBp65、TLR4蛋白表达。结论 SIRT1减少LPS诱导的胰岛β细胞炎症因子表达并下调细胞中NF-κB信号激活水平。     

脯氨酰异构酶1 沉默抑制缺氧/ 复氧H9c2 心肌细胞凋亡

目的:肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)在心血管疾病发病过程中发挥重要作用,本研究检测RNA 干扰沉默Pin1 对缺氧/ 复氧诱导的大鼠胚胎心肌细胞H9c2 凋亡的影响及机制。方法:体外培养大鼠H9c2 细胞,建立缺氧/ 复氧损伤模型,模拟体内缺血再灌注损伤;RT-qPCR 和Western blot 法检测Pin1 的表达;将细胞分为空白对照组、缺氧/ 复氧组、缺氧/ 复氧组+转染Pin1 siRNA 组、缺氧/ 复氧组+转染scramble siRNA 组;MTT 法测H9c2 细胞存活率;用流式细胞术Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡率;用Western blot 法检测H9c2 细胞Bax 和Bcl-2 蛋白表达;生化法检测Caspase-3 的活性水平。结果:Pin1 在缺氧/ 复氧H9c2 细胞中呈现高表达;转染Pin1 siRNA 后,Pin1 的mRNA 和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与缺氧/ 复氧组比较,Pin1 siRNA 组的细胞存活率增加,凋亡率降低,Bcl-2 蛋白表达升高,Bax 蛋白表达降低,Bcl-2/ Bax 升高,Caspase-3 活性降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Pin1 下调可减少缺氧/ 复氧诱导的心肌细胞凋亡,可能是通过上调Bcl-2,下调Bax 蛋白表达,降低Caspase-3 活性而发挥作用。     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。     

PKM2对鼻咽癌细胞增殖凋亡糖酵解及ROS水平影响

目的探讨PKM2对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、糖酵解及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法检测鼻咽上皮细胞(NP69)和鼻咽癌细胞(CNE-1、5-8F、HONE-1)中PKM2的表达水平。HONE-1细胞转染PKM2 siRNA1、PKM2siRNA2,采用RT-qPCR和Western blot检测干扰效果。细胞增殖、凋亡及细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,同时检测细胞ROS水平、HK活性、ATP含量和培养液上清中乳酸含量。结果鼻咽癌细胞中PKM2表达水平高于NP69细胞,且HONE-1细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平最高,选用HONE-1细胞继续研究。转染PKM2 siRNA1、PKM2 siRNA2后均能够下调HONE-1细胞中PKM2水平,且PKM2 siRNA2下调效果较好。转染PKM2 siRNA2后的细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3水平、Cleaved Caspase-9水平、ROS水平明显升高,而细胞增殖活性、HK活性、ATP含量和上清液中乳酸含量明显降低(P 0. 05)。结论下调鼻咽癌细胞中PKM2表达可以抑制鼻咽癌细胞糖酵解和增殖,诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

敲降缺氧诱导因子的表达量对缺氧条件下肾癌细胞迁移能力的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)的表达对缺氧条件下的肾癌细胞活力、凋亡、迁移能力的影响及机制。方法实验分为5组:对照组(常氧条件)、缺氧组(未转染缺氧条件下细胞)、转染对照组(转染不含目的蛋白的siRNA)、siRNA-HIF1α组、siRNA-HIF2α组。应用MTT法观察细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell小室法分析细胞的迁移、侵袭能力变化,Western blot检测细胞中HIF1α/HIF2α、Cleaved Caspase-3、E-cadherin、Snail蛋白的表达量。结果缺氧显著降低细胞的凋亡率和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P 0. 05),显著增加迁移、侵袭细胞数(P 0. 05)。与缺氧组相比,siRNA-HIF1α组细胞的凋亡率以及迁移能力的差异无统计学意义;但siRNA-HIF2α组细胞的凋亡率、Cleaved Caspase-3蛋白水平显著增加(P 0. 05),其迁移、侵袭细胞数显著降低(P 0. 05)。与对照组相比,抑制HIF1α和HIF2α的表达显著降低E-cadherin的表达(P 0. 05)、升高Snail的表达(P 0. 05);与缺氧组相比,siRNA-HIF1α组细胞中的E-cadherin、Snail的表达水平差异无统计学意义,siRNA-HIF2α组显著增加E-cadherin的表达水平(P 0. 05)、显著降低Snail的表达水平(P 0. 05)。结论敲降HIF2α的表达量抑制缺氧环境下肾癌细胞的活力、诱导肾癌细胞凋亡、降低肾癌细胞迁移能力,其作用机制可能与E-cadherin、Snail的表达量变化有关。     

Wnt/β-catenin信号通路对哮喘大鼠气道平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响。方法建立哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMC),采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法分别检测正常大鼠平滑肌细胞和ASMC中β-catenin信号通路mRNA和蛋白表达水平;采用Transwell迁移实验检测ASMCs的迁移能力,并分析应用β-catenin siRNA对其迁移能力的干预作用。结果 RT-PCR和Western blot结果显示哮喘大鼠ASMCs中β-catenin的mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高;β-catenin特异性siRNA能够降低ASMCs中β-catenin mRNA和蛋白表达水平;沉默β-catenin能够显著降低ASMCs的迁移能力。结论哮喘大鼠模型ASMCs的迁移能力显著增强,β-catenin信号通路的异常激活可能参与了这一生物学事件。     

Wnt/β-catenin信号通路在低氧促进骨肉瘤细胞体外增殖和侵袭中的作用

目的探讨缺氧条件下,Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤细胞增殖和侵袭中的作用和机制。方法分别在常氧(21%O_2)和缺氧(1%O_2)环境下培养骨肉瘤SaOS-2细胞系24 h,采用CCK-8法检测细胞在缺氧环境下的增殖能力变化,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平,进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达并检测。结果缺氧可明显促进骨肉瘤SaOS-2细胞的增殖以及体外侵袭能力的增强,同时上调Wnt/β-catenin mRNA和蛋白表达水平。靶向沉默Wnt/β-catenin之后,缺氧失去了对骨肉瘤SaOS-2细胞增殖和侵袭的诱导作用。结论缺氧条件下,骨肉瘤SaOS-2细胞系中的Wnt/β-catenin信号通路显著激活,从而促进细胞的异常增殖与侵袭能力增强。     

靶向TLR4 的siRNA 慢病毒感染减少过氧化氢诱导的心肌H9C2 细胞凋亡及氧化损伤

目的:研究沉默TLR4对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤的影响。方法:用H_2O_2处理心肌H9C2细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中Toll样受体4(TLR4) mRNA和蛋白水平。用siRNA TLR4慢病毒感染心肌H9C2细胞,H_2O_2诱导以后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)和剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性,二硝基苯肼显色法检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,ELISA法检测培养液上清中TNF-α、IL-6水平。结果:H_2O_2诱导处理以后的心肌H9C2细胞中TLR4mRNA和蛋白水平均明显高于未经诱导的心肌H9C2细胞(P0. 05)。siRNA TLR4慢病毒感染后可以降低心肌H9C2细胞中TLR4 mRNA和蛋白水平。H_2O_2诱导后的心肌H9C2细胞凋亡率升高,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞中SOD活性降低,MDA水平升高,ROS水平也升高,同时细胞培养液中LDH水平升高,细胞分泌的TNF-α、IL-6增多,与未经诱导的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。敲低TLR4后的心肌H9C2细胞经H_2O_2诱导处理以后,细胞凋亡率降低,细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,细胞中SOD活性升高,MDA水平降低,ROS水平也降低,同时细胞培养液中LDH水平降低,细胞分泌的TNF-α、IL-6减少,与单纯经H_2O_2诱导处理的心肌H9C2细胞比较,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:沉默TLR4减弱H_2O_2诱导的心肌H9C2细胞凋亡及氧化损伤,减少细胞中ROS的聚集,减少心肌H9C2细胞分泌炎症因子。     

干扰Yes相关蛋白表达调控Wnt/β-catenin信号通路影响膀胱癌细胞凋亡

目的:探讨干扰Yes相关蛋白(YAP)的表达对膀胱癌细胞凋亡的影响及机制。方法:以膀胱癌细胞T-24为研究对象,分为正常对照(control)组、siRNA阴性对照(siRNA-NC)组和YAP siRNA组。分别以real-time PCR和Western blot实验检测转染后各组细胞中YAP的mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc表达水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理YAP siRNA组细胞,并用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:YAP siRNA组YAP的mRNA和蛋白水平均明显低于control组(P0.05)。YAP siRNA组的细胞活力及c-Myc和β-catenin水平均明显低于control组(P0.05),而细胞凋亡率明显高于control组(P0.05)。与未经FH535处理的YAP siRNA组细胞相比,YAP siRNA组的细胞经FH535处理后细胞活力明显下降,细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:干扰YAP表达能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活而抑制膀胱癌细胞活力,并促进膀胱癌细胞凋亡。     

PKM2 影响鼻咽癌细胞增殖凋亡及机制研究

目的：探讨PKM2对鼻咽癌细胞增殖凋亡的影响。方法：鼻咽癌细胞CNE-1转染PKM2小干扰RNA（PKM2-siRNA1和PKM2-siRNA2）和阴性对照（siRNA control）,荧光定量PCR和Western blot检测细胞中PKM2水平,筛选干扰效果好的PKM2 siRNA2继续研究。噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,细胞克隆试验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧（ROS）水平,Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）、C-myc、β-连环蛋白（β-catenin）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白水平。结果：细胞转染PKM2 siRNA1和PKM2 siRNA2后PKM2 mRNA和蛋白水平与没有转染的细胞相比均明显下降,并且转染PKM2 siRNA2后细胞中PKM2水平下降更多,而转染siRNA control的细胞中PKM2水平与没有转染的细胞相比没有明显变化。下调PKM2表达后的细胞凋亡率由（9.36±1.04）%升高至（48.42±5.28）%,细胞克隆形成率从（75.48±8.25）%降低至（46.15±3.47）%,细胞OD值从（0.86±0.11）下降至（0.52±0.04）,细胞中ROS水平升高,细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3蛋白水平也明显升高,细胞中C-myc、β-catenin水平明显下降。结论：PKM2表达下调抑制鼻咽癌细胞生长,促进鼻咽癌细胞凋亡,作用机制可能与p38MAPK和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4调控NOTCH信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响

探讨胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白4(cytoplasmic polyadenylation element binding protein 4,CPEB4)调控NOTCH信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。收集人脑胶质瘤组织及对应的瘤旁组织,Western blotting检测组织中CPEB4蛋白水平。以人脑胶质瘤细胞U87为研究对象,通过细胞转染的方法将CPEB4小干扰RNA(CPEB4siRNA)和对照小干扰RNA(siRNA control)转染至U87细胞中,同时设置对照组,对照组细胞中只加入转染试剂。Western blotting检测细胞中CPEB4水平。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blotting检测NOTCH1受体胞内段基因NICD1、NOTCH2受体胞内段基因NICD2、NOTCH通路下游靶基因HES1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Cleaved Caspase-3)蛋白水平。人脑胶质瘤细胞经20μmol/L的NOTCH信号通路抑制剂S2188作用48h后,检测细胞凋亡及NICD1、NICD2、HES1、Cleaved Caspase-3蛋白水平。人脑胶质瘤组织中CPEB4蛋白水平明显高于瘤旁组织(P<0.01)。siRNA control组细胞中CPEB4、NICD1、NICD2、HES1、Cleaved Caspase-3蛋白水平和细胞凋亡率与对照组相比没有明显变化(P>0.05)。CPEB4siRNA组细胞中CPEB4水平明显低于对照组(P<0.01)。CPEB4siRNA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。CPEB4siRNA组细胞中NICD1、NICD2、HES1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01)。NOTCH信号通路抑制剂作用后的人脑胶质瘤细胞凋亡情况同CPEB4siRNA组一样。由此可知CPEB4在人脑胶质瘤组织中表达上调,抑制CPEB4的表达能够促进人脑胶质瘤细胞凋亡,其作用机制与NOTCH信号通路有关。     

姜黄素对缺氧下大鼠星型胶质细胞的影响及机制研究

目的：探讨姜黄素对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：从大鼠大脑皮层分离培养星形胶质细胞,姜黄素干预缺氧条件星形胶质细胞,AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,细胞缺氧处理24 h后,通过MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、JAK2/STAT3信号通路磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）及磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：与对照组比较,缺氧组细胞活力显著升高,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著升高（P<0.05）;与缺氧组比较,缺氧+姜黄素组胞活力显著降低,凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）;与缺氧+姜黄素组比较,缺氧+姜黄素组+AG490组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：姜黄素可降低缺氧下大鼠星型胶质细胞活力,抑制细胞凋亡,其机制与JAK2/STAT3信号通路有关。     

miRlet7b在氧糖剥夺诱导原代大鼠增殖星形胶质细胞的表达

目的研究miRlet7b在氧糖剥夺诱导原代Wistar大鼠增殖星形胶质细胞的表达,探讨缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞增殖的分子机制。方法原代Wistar大鼠星形胶质细胞随机分为实验组(氧糖剥夺诱导的增殖组)和对照组(正常培养组)。EdU掺入法检测两组细胞的增殖,Western blot检测VEGF蛋白表达,real-time PCR方法检测两组细胞miRlet7b mRNA的表达。结果实验组EdU阳性细胞率,VEGF蛋白表达水平显著高于对照组(P0.01),而实验组miRlet7b mRNA的表达水平显著低于对照组(P0.01)。结论 MiRlet7b mRNA表达下调可能是缺氧缺血性脑损伤后星形胶质细胞增殖的分子机制之一,上调VEGF可能促进星形胶质细胞增殖。     

长链非编码RNA XIST 通过miR-186 调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡 的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)XIST通过miR-186调控宫颈癌细胞侵袭迁移及凋亡。方法:宫颈癌细胞中转染XIST shRNA,qRT-PCR检测XIST表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测Cleaved Caspase-3、MMP-2和MMP-9蛋白表达。生物信息学软件预测XIST和miR-186互补结合位点,荧光素酶报告载体鉴定。qRT-PCR检测XIST shRNA对miR-186表达影响。宫颈癌细胞中共转染XIST shRNA和miR-186 inhibitor,检测细胞凋亡、侵袭迁移和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,评估抑制miR-186对XIST shRNA影响宫颈癌细胞凋亡、侵袭和迁移的作用。结果:转染XIST shRNA可以下调宫颈癌细胞中XIST表达水平,促进细胞凋亡并抑制细胞侵袭和迁移,诱导Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少MMP-2和MMP-9蛋白表达。XIST可靶向调控miR-186表达,XIST shRNA可提高miR-186表达。miR-186 inhibitor可明显逆转XIST shRNA对宫颈癌细胞miR-186表达促进、凋亡促进、侵袭迁移抑制和Cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达影响。结论:下调XIST通过促进miR-186表达抑制宫颈癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

下调长链非编码RNA PVT1表达对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡、侵袭及转移的影响

目的研究下调长链非编码RNA PVT1的表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。方法体外转染PVT1干扰序列si PVT1-1和si PVT1-2降低胰腺癌细胞系Bx PC-3 PVT1表达,同时转染阴性对照si PVT1-NC作为对照组。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移;qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin和PVT1 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3)和上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin)表达。结果下调胰腺癌细胞Bx PC-3 PVT1表达能明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和减少细胞侵袭转移数目(P0.05);E-cadherin蛋白和分子水平升高,N-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白和分子水平降低(P0.05);Bax和caspase-3蛋白水平升高,而Bcl-2蛋白水平降低(P0.05)。结论下调长链非编码RNA PVT1表达能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移能力,促进胰腺癌细胞凋亡,且能够逆转胰腺癌细胞上皮间质转化。     

RNA干扰沉默Bax基因对线粒体途径软骨细胞凋亡的影响

 【摘要】 目的 利用体外培养的鼠软骨细胞,研究RNA干扰沉默Bax基因表达对经线粒体途径细胞凋亡的影响。方法 体外分离培养SD大鼠软骨细胞;Bax siRNA干扰沉默Bax基因表达。RT-PCR和Western blot检测mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Cytochrome C蛋白的表达。结果 Bax siRNA干扰24h后,Bax的mRNA和蛋白的表达水平均明显降低。细胞凋亡受到明显抑制,细胞存活率增高。并且,在Bax基因沉默的细胞中,Cytochrome C蛋白表达水平降低,同时Bcl-2蛋白表达水平升高。结论 RNA干扰沉默Bax基因可抑制鼠软骨细胞凋亡并且促进其存活,其机制可能与线粒体途径相关。     

Ghrelin抑制Aβ25-35诱导的BV-2细胞炎症反应及改善细胞线粒体功能的机制研究

目的探讨在小鼠小胶质细胞BV-2中过表达Ghrelin对Aβ诱导炎症反应及细胞线粒体功能的影响及相关机制。方法应用慢病毒介导Ghrelin过表达载体感染小鼠小胶质细胞BV-2,免疫荧光观察感染效率,应用RT-PCR及Western blot检测慢病毒感染后细胞中Ghrelin mRNA和蛋白的表达水平;Aβ25-35预处理过表达Ghrelin的BV-2后,利用ELISA、CCK-8、AnnexinV FITC/PI流式细胞术及JC-1法和免疫组化实验检测炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌水平及细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位及胞质中ROS及Cyt-C的表达;电子显微镜下观察过表达Ghrelin后,Aβ25-35对BV-2细胞中凋亡小体产生的影响;Western blot检测上述处理后BV-2细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表达。结果免疫荧光显示慢病毒介导Ghrelin过表达载体的感染效率可达85%以上,慢病毒感染的BV-2细胞中Ghrelin mRNA和蛋白的表达显著升高;ELISA及CCK-8、Annexin-V FITC/PI流式细胞术及JC-1法和免疫组化实验结果表明,过表达Ghrelin可明显抑制Aβ25-35对BV-2细胞所诱导的促进炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6分泌作用且细胞的增殖能力及凋亡率显著下降,细胞的膜电位明显下调,ROS及Cyt-C的表达显著减少;电子显微镜下观察发现,过表达Ghrelin后可明显抑制Aβ25-35对BV-2细胞中促进凋亡小体产生的作用;Western blot实验结果显示,处理后的BV-2细胞中促凋亡蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达显著下降,而凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达明显增加。结论过表达Ghrelin可抑制Aβ25-35对小胶质细胞BV-2所诱导的炎症反应,并通过线粒体凋亡途径抑制后者诱导的细胞凋亡的现象。     

NLRP2-caspase-1 炎性小体在脑缺血损伤中的表达量及作用

目的:探究NOD样受体家族蛋白2-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(NLRP2-caspase-1)炎性小体与脑缺血损伤的关系及作用机制。方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达;采用小RNA干扰(siRNA)技术沉默NLRP2的表达,将其分为对照组、模型组、空载体组、siRNA NLRP2组,RT-PCR和Western blot观察转染后细胞中NLRP2的表达量;流式细胞术检测细胞的凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、核转录因子k B(NF-κB) p65、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、caspase-1前体(Pro-caspase-1)、磷酸化p65(pp65)蛋白水平。结果:结果显示,氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中NLRP2基因的表达量显著增加(P0. 05),促进细胞凋亡(P0. 05),显著降低Bcl-2蛋白水平(P0. 05),显著增加Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05)。沉默NLRP2表达较模型组显著抑制细胞的凋亡(P0. 05),上调Bcl-2蛋白水平(P0. 05),下调Bax、caspase-3蛋白水平(P0. 05); siRNA NLRP2组细胞中caspase-1、IL-1β、P65、p-P65蛋白显著低于模型组(P0. 05)。结论:NLRP2在氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞中显著上调,可能通过调控细胞的炎症反应、凋亡信号通路以及NF-κB信号通路参与脑缺血损伤神经细胞的凋亡。