阿魏酸川芎醇酯对氧化损伤内皮细胞ICAM-1表达的影响

观察川芎嗪衍生物阿魏酸川芎醇酯(TMPF)对H2O2引起的脐静脉内皮细胞(ECV304)氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法以H2O2损伤ECV304细胞建立氧化损伤模型,以川芎嗪(TMP)作为阳性对照药物,观察TMPF对氧化损伤的ECV304细胞的保护作用[按试剂盒说明测量微量丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Real-Time PCR测定ICAM-1mRNA含量;采用Elisa检测ICAM-1蛋白表达]。结果与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的MDA含量明显升高(P<0.01),TMP与TMPF各浓度保护组MDA含量明显低于H2O2损伤组(P<0.05或P<0.01),且TMPF保护组MDA含量均低于同剂量TMP保护组(P<0.05);与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的SOD水平明显降低(P<0.05或P<0.01),在12.5μmol.L-1 TMP保护组和TMPF保护组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P>0.05),在TMP和TMPF的其他浓度上与H2O2损伤组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。H2O2可上调ICAM-1mRNA的含量,正常对照组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.245倍,25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.454倍,25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.376倍。H2O2损伤组细胞ICAM-1蛋白的表达量显著高于正常对照组(P<0.01),25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1蛋白的表达量低于H2O2损伤组(P<0.05),而25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1蛋白的表达量显著低于H2O2损伤组(P<0.01)。结论 TMPF对H2O2引起内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物MDA的生成,提高SOD活性,TMPF能降低损伤细胞ICAM-1mRNA的含量及其蛋白表达。TMPF对氧化损伤内皮细胞中ICAM-1表达上调有较强的抑制作用,这可能是TMPF对内皮细胞氧化损伤保护作用的重要机制。     

川芎嗪肉桂酰类双酯衍生物对内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的观察2,5-二（2,5-二甲氧基肉桂酰氧甲基）-3,6-二甲基吡嗪（TMPC）对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤,观察TMPC对内皮细胞氧化损伤的保护作用。结果TMPC对H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物丙二醛（Malondialdehyde,MDA）的生成,提高超氧化物歧化酶（SOD）活性,减轻H2O2诱导的内皮细胞内游离钙离子升高引起的钙超载。结论TMPC可有效保护H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤,维持或恢复细胞正常的生理功能,其机制可能与TMPC能有效抑制细胞内钙超载,减少脂质过氧化物的生成,提高抗氧化物质的活性有关。     

川芎嗪酯类衍生物在内皮细胞氧化损伤中的保护作用

目的 观察川芎嗪酯类衍生物对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤的保护作用,并初步探讨川芎嗪双酯衍生物在家兔动脉内皮氧化损伤中的保护作用.方法 H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞及家兔动脉内皮氧化性损伤,观察川芎嗪双酯衍生物对内皮细胞氧化损伤的保护作用.结果 在各试验浓度,大多数川芎嗪双酯衍生物对H2O2引起体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显的保护及促增殖作用,A6在较高浓度对家兔动脉内皮的氧化损伤有保护作用.结论 川芎嗪酯类衍生物对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化性损伤有明显保护作用,其中以A15效价最高,在其作用机制进一步研究中值得注意.     

阿魏酸川芎醇酯对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨阿魏酸川芎醇酯对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用.方法 采用H2O2诱导体对培养的人脐静脉内皮细胞进入氧化应激状态,造成氧化损伤模型,观察阿魏酸川芎醇酯对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用,结果 阿魏酸川芎醇酯能减少内皮细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性,具有良好的抗氧化能力,从而对内皮细胞损伤起到很好的保护作用.     

甘糖酯对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的作用

①目的　探讨甘糖酯对氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)损伤的血管内皮细胞的作用。②方法　将VEC 30 4内皮细胞株培养后 ,分为两组 :治疗组先给予oxLDL ,再加入不同浓度的甘糖酯 (2 5、5 0、10 0mg/L) ;保护组先给予不同浓度 (2 5、5 0、10 0mg/L)甘糖酯 ,再与oxLDL作用。培养一定时间后 ,取上清液测定丙二醛 (MDA)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量。③结果　治疗组 3种浓度甘糖酯均可以降低oxLDL造成的MDA升高 ,而且随着浓度的增高其作用也有增加的趋势 (F =6 6 .12 ,q =6 .5～ 18.3,P <0 .0 5 ) ;浓度较高 (10 0mg/L)甘糖酯可降低oxLDL造成的LDH升高 (F =15 .99,q=8.9,P <0 .0 5 )。保护组 3种浓度甘糖酯均可使MDA含量降低 ,与对照组比较差异有显著性 (F =5 6 .98,q=16 .7～ 5 5 .2 ,P <0 .0 5 ) ;且不同浓度组间差异有显著性 (q =18.9～ 38.6 ,P <0 .0 5 ) ;较大浓度(10 0mg/L)甘糖酯可使LDH含量降低 ,与对照组比较 ,差异有显著性 (F =19.13,q =9.8,P <0 .0 5 )。 ④结论　甘糖酯对oxLDL造成的血管内皮细胞的过氧化损伤有修复和保护作用     

丹参注射液对血管内皮细胞氧化损伤保护作用的实验研究

目的：探讨中药复方丹参注射液对内皮细胞氧化损伤的保护作用,方法：以培养的人脐静脉内皮细胞为模型,使细胞在与氧化低密度脂蛋白（O－LDL）接触前后分别与丹参孵育48h,然后检测培养液及细胞匀浆中MDA（丙二醛）,SOD（超氧化物歧化酶（,GSH－Px)谷光甘肽过氧化物酶（）的变化及细胞的增殖情况,结论：内皮细胞与丹参孵育后,再受到氧化损伤时,其SOD,GSH－Px的值均高于直接接触O－LDL的细胞,而MDA的值却明显降低,细胞增殖率也显著降低,结论：复方丹参注射液以在一定程度上保护内皮保护内皮细胞免于或减轻氧化损伤。     

川芎醇对血管内皮细胞增殖与损伤保护作用的研究

目的:研究川芎醇促血管内皮细胞增殖与对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法:用过氧化氢致人胎儿脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)损伤,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活数量。结果:川芎醇在浓度0.1～1.5mmol·L-1具有促进正常HUVECs增殖的作用,并且浓度依赖性地拮抗过氧化氢抑制血管内皮细胞的增殖,其活性较川芎嗪强。结论:川芎醇具有促血管内皮细胞增殖及保护血管内皮细胞损伤的作用。     

原花青素对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨原花青素对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用。方法:体外培养内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组(Control组)、氧化损伤组(H2O2组)、氧化损伤加入VitC对照组(VC+H2O2组)、氧化损伤加入原花青素5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度组(procyanidin-L+H2O2组、procyanidin-M+H2O2组、procyanidin-H+H2O2组)。将750μmol/LH2O2作用于加入VitC及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,以细胞毒四唑盐(MTT)比色试验、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)作为检测指标。结果:原花青素呈剂量依赖性降低H2O2对内皮细胞的生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO2-/NO3-含量,各指标比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:原花青素可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、促进NO释放有关。     

当归对氧化低密度脂蛋白所致血管内皮细胞损伤的保护作用

通过培养人脐静脉内皮细胞,观察当归对氧化低密度脂蛋白损伤的内皮细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的漏出量及扫描电镜下ＥＣ形态结构的影响,并观察当归在体外对Ｃｕ＾２＋诱导的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰的作用。结果显示;在作用２４ｈ后,ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出明显增加,超微结构明显受损。当归＋ｏｘ－ＬＤＬ组ＬＤＨ漏出显著减少,超微结构基本正常。     

体外血管内皮细胞氧化损伤模型的建立

目的：建立体外血管内皮细胞氧化损伤模型。方法：用Cu^2 引发脂质过氧化过程，制备氧化低密度脂蛋白（ox-LDL)，应用含不同浓度丙二醛（MDA）的ox-LDL，分别作用于对数生长期的内皮细胞，采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，并测定内皮细胞MDA含量。结果：当内皮细胞暴露于含MDA浓度分别为0.2,0.5,0.8,1.0,1.2,1.5nmol/ml的ox-LDL24h后，含MDA1.0,1.2,1.5nmol/ml浓度组与空白对照组比较，MTT降低，差别有显著性（P＜0．01），MDA含量增加，差别有统计学意义（P＜0．01）。结论：通过细胞活力，MDA的检测以及形态学观察，认为ox-LDL的MDA浓度为1.0nmol/ml时为最适宜氧化损伤浓度。     

人脐静脉内皮细胞的培养和连续传代

本实验用新生小牛视网膜提取物作血管内皮细胞生长促进剂,成功地使人脐静脉内皮细胞在体外连续培养23代以上。细胞倍增时间平均为16.6h,细胞传代时间平均为5 d,传代比率为1:2～1:3。用ABC法证明细胞内存在Ⅷ因子相关抗原(FⅧr-Ag),透射电镜下可见胞浆内含WP(Weibe1-Palade)小体,证实所培养的细胞为血管内皮细胞。     

齐墩果酸对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨齐墩果酸对氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法体外培养HUVEC,以维生素E（200μmol/L）或齐墩果酸（5-40μmol/L）预处理细胞24h,再加入200mg/L oxLDL继续培养24h造成细胞损伤。采用MTT法检测各组细胞存活率,同时检测细胞丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原型谷胱甘肽（GSH）含量,采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧（ROS）含量。结果与正常组比较,200mg/L oxLDL组细胞存活率、SOD活性、GSH含量明显降低,MDA、ROS含量明显增加,差异均有统计学意义（F=67.72-173.25,q=11.46-30.86,P〈0.01）;与200mg/L oxLDL组比较,齐墩果酸在5-20μmol/L浓度范围内,可剂量依赖性提高细胞存活率、减少MDA含量及ROS形成、增加GSH含量及SOD活性（q=4.26-22.35,P〈0.05）。结论齐墩果酸能抑制ox-LDL诱导的HUVEC氧化损伤,其机制可能与维持SOD活性,减少ROS释放、MDA生成及GSH消耗有关。     

人脐带静脉内皮细胞的继代培养

人脐带静脉内皮细胞继代培养25代。应用光镜、电镜及Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光方法进行鉴定与观察。在RPMI-1640培养液中加入20%人血清,内皮细胞生长因子200μg/ml,肝素100μg/ml及培养皿的明胶覆膜是人内皮细胞长期培养的重要条件。     

茶色素对人血管内皮细胞一氧化氮合酶表达的影响

目的：研究茶色素对人血管内皮细胞一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因表达的影响。方法：应用ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＲＴ－ＰＣＲ等分子生物学方法分别从ｅＮＯＳ蛋白水平和ＲＮＡ水平研究茶色素对ｅＮＯＳ表达的影响。结果：８０、４０、ｍｇ／Ｌ的茶色素明显诱导人血管内皮细胞ｅＮＯＳ表达，并有剂量反应关系。结论：茶色素诱导人血管内皮细胞ｅＮＯＳ表达是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

肝素对HL-60细胞与人脐静脉内皮细胞粘附作用的影响

目的：研究肝素对HL-60细胞与脐静脉内皮细胞粘附作用的影响。方法：通过原代培养人脐静脉内皮细胞,在静止及动态条件下观察肝素对HL-60细胞与脐静脉内皮细胞的粘附作用的影响。结果：TNF-α处理脐静脉内皮细胞能明显增加HL-60细胞与脐静脉内皮细胞粘附;肝素处理脐静脉内皮细胞及HL-60细胞能明显抑制两者之间的粘附作用。讨论：肝素可抑制体外条件下HL-60细胞与人脐静脉内皮细胞粘附,该结果为进一步研究白细胞粘附机制及筛选抗炎药物提供了条件。     

体外人脐静脉内皮细胞分泌GM-CSF的研究

目的 :内皮细胞是一个非造血细胞 ,表达和 (或 )产生大多数已知的造血受体和细胞因子。这些因子和受体的生物学作用仍不十分清楚。本研究旨在探求内皮细胞产生的与造血有关的细胞因子GM -CSF及其生物学功能。同时对GM -CSF在造血调控中的作用及意义进行讨论。方法 :在建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型的基础上 ,收集原代培养内皮细胞 1～ 9d培养上清液 ,离心 ,- 2 0℃保存备用。采用双抗夹心ELISA法对上清液中GM -CSF进行定性和定量测定。结果 :在未加任何刺激因素的条件下 ,从培养的人脐静脉内皮细胞培养上清液中可测及GM -CSF(35 0 794± 12 .10 95 pg/ml)。随着内皮细胞培养天数的增加 ,GM -CSF的释放量也随之增加。在第 6天时接近释放峰值GM -CSF(6 3 0 19pg/ml)。 结论 :体外培养的人脐静脉内皮细胞具有自发分泌GM -CSF的功能。GM -CSF能够促进粒系、红系和巨核系克隆形成。本研究为内皮细胞支持各系造血干、祖细胞的增殖和分化提供了理论依据。     

ICAM-1和VCAM-1单抗影响活化淋巴细胞粘附HUVEC的机理研究

目的研究细胞粘着分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘着分子-1(VCAM-1)单抗对rIL-2活化的脐血淋巴细胞粘附人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的机理。方法①利用24孔板培养HUVEC,在相应孔中分别加入ICAM-1和VCAM-1单抗,30min后测定活化的脐血淋巴细胞和未活化的淋巴细胞粘附百分率;②采用桥联酶标法(APAAP)测定粘附细胞的表型。结果①ICAM-1和VCAM-1单抗(20mg／L)均可明显降低rIL-2活化的淋巴细胞的粘附,前者使粘附率由56．54％降至41．60％(P<0．05);后者使粘附率降至30．30％(P<0．05);②粘附细胞的表型分析结果表明,ICAM-1单抗可降低CD8     

人主动脉内皮细胞的培养及免疫细胞化学研究

人主动脉内皮细胞体外长期培养在国内首次成功。内皮细胞培养10～15代,细胞倍增时间20h～25h,累积倍增数25～30。应用相差显微镜,扫描、透射电镜,Ⅷ因子相关表面抗原的免疫荧光抗体及血管紧张素转换酶的单克隆抗体,对培养的人主动脉内皮细胞进行形态学及免疫细胞化学的观察与研究。证明,长期培养后的多核内皮细胞是具有内皮细胞特点的变形内皮细胞。     

川芎嗪对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

目的：研究川芎嗪（（tetramethylpyrazine,TMP））对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道宏观电流（large-conductance Ca^2＋-activated potassium channels,BKCa）的作用,探讨TMP对BKCa的作用机制。方法：用急性酶分离法分离人体肠系膜动脉平滑肌细胞,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录该细胞上的大电导钙激活钾通道宏观电流,并测试TMP对该电流的作用。结果：TMP在0.73、3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,在0.73mmol/L浓度时,测试电压从-50～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-50mV时,电流密度从0.25±0.03pA/pF增加到0.34±0.039pA/pF（P〈0.01,n=12）,测试电压在＋60mV时,电流密度从8.37±1.75pA/pF增加到14.12±2.66pA/pF（P〈0.01,n=12）;TMP在3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从0～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在0mV时,电流密度从1.25±0.23pA/pF增加到1.90±0.31pA/pF（P〈0.05,n=7）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.57±3.61pA/pF增加到20.32±4.68pA/pF（P〈0.05,n=7）。但TMP在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从-60～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-60mV时,电流密度从0.28±0.02pA/pF降低到0.15±0.04pA/pF（P〈0.01,n=6）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.49±0.44pA/pF降低到1.83±0.68pA/pF（P〈0.01,n=6）。结论：TMP在0.73、3.67mmol/L下,可激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道,而在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa。在低浓度和较高浓度下TMP对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa有不同效应的实验结果,为TMP应用于临床提供了实验依据     

UVA对人角质形成细胞的氧化损伤作用

①目的　探讨紫外线A(UVA)对人角质形成细胞氧化损伤的机制。②方法　用 5J/cm2 UVA照射角质形成细胞 ,酶生化法检测活性氧 (ROS)的含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)活性的变化 ,流式细胞仪测定紫外线对角质形成细胞凋亡的影响 ,原位杂交技术观察 p2 1mRNA的变化 ,并与非照射组比较。③结果　与对照组比较 ,UVA照射组ROS含量升高 (t =113.6 8,P <0 .0 0 1) ,SOD、GSH PX活性下降 (t =5 7.2 3、19.0 4 ,P <0 .0 0 1) ,细胞凋亡率升高 (t=5 3.2 8,P <0 .0 0 1) ,p2 1mRNA表达增强。④结论　UVA对人角质形成细胞的损伤与氧自由基生成增多及细胞抗氧化能力抑制有关