Pim-3基因抑制暴发性肝细胞凋亡的机制

目的 探讨Pim-3基因对暴发性肝细胞凋亡的抑制机制. 方法 32只大鼠随机分成4组(8只/组).A组为正常对照组,B、C组和D组采用流体力学注射方法,分别以林格氏液、空载体质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2/Pim-3溶液预处理大鼠;1 d后,予脂多糖(LPS) /D-半乳糖胺(D-GalN)腹腔注射诱导暴发性肝细胞凋亡.8h后处死大鼠,采集肝组织标本.用Caspase-3活性测定法检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、p53基因表达水平;Western blot检测肝组织Bcl-2、Bax蛋白表达水平.组间数据比较采用非参数Kruskal-Wallis检验.结果 LPS/D-GalN联合攻击造成了大鼠肝内Caspase-3活性显著增高,而D组Caspase-3活性较B组和C组均显著降低[(141.7±13.7)RFU比(508.1±32.0)、(493.5±33.1)RFU,P值均＜0.01].LPS/D-GalN的应用也诱导了肝组织iNOS mRNA、p53 mRNA、Bax蛋白表达,与B组和C组相比,D组iNOS mRNA和p53 mRNA的表达水平显著降低(0.06±0.01比0.42±0.08、0.35±0.06;0.73±0.11比1.17±0.25、1.23±0.31,P值均＜0.01),而Bax蛋白表达水平差异无统计学意义(1.19±0.09比1.13±0.08、1.25±0.11,P＞0.05);另外,D组肝内Bcl-2蛋白表达水平较A、B组和C组均显著升高(3.05±0.29比1.03±0.05、0.98±0.06、1.10±0.08,P值均＜0.01).结论 Pim-3基因通过对损伤基因和凋亡相关基因的影向抑制了暴发性肝细胞凋亡的发生.     

肿瘤坏死因子-α及一氧化氮对暴发性肝衰竭肝损伤的作用

目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)及一氧化氮(nitric oxide,NO)在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中对肝损伤的作用及相互关系. 方法:采用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)构建FHF小鼠模型,采用ELtSA方法和RT-PCR法检测血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达,采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOSmRNA,在小鼠用药后不同时期动态观察TNF-α、NO及肝损伤的变化,并对模型鼠分别给予TNF-α单抗和NO合成酶抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化.结果:在FHF小鼠中,用药后2～4h肝组织TNF-αmRNA表达显著增加(0.91±0.75→0.82±0.08,P＜O.01),伴血清TNF-α水平升高,给予TNF-α单抗后可阻断LPSD-GalN介导的肝损伤,用药后4～8 h肝组织iNOSmRNA表达及血清NO水平亦显著升高(0.87±0.08→0.85±0.08,P＜0.01),给予L-NMMA后使肝损伤反而加重.FHF小鼠用药后8～12 h血清总胆红素(TBiL)和ALT明显异常,肝组织切片可见肝组织大块状出血和坏死. 结论:在LPS/D-GalN所致的FHF中,TNF-α的产生与肝损伤成正相关,而NO在此模型中似有保肝和肝损伤的双重作用,TNF-α和NO在FHF模型鼠的肝损伤中起协同作用.     

肿瘤坏死因子-α介导凋亡肝细胞内胱门蛋白酶-3的表达

目的 研究小鼠暴发性肝衰竭（FHF）动物模型凋亡肝细胞中凋亡基因胱门蛋白酶（cas-pase-3)mRNA及蛋白的表达及意义。方法 尾静脉注射肿瘤坏死因子-α（TNF-α）于D-氨基半乳糖（GalN)致敏的BALB/c小鼠,造成暴发性肝衰竭模型。用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ISEL）技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNALadder观察肝细胞凋亡,分别用免疫组化和半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测凋亡基因caspase-3蛋白及mRNA表达情况。结果 肝细胞凋亡率分别为0.0%(1.5h),0.3%(3.5h),3.15%(6h)和3.19%(9h)。肝组织中caspase-3mRNA和蛋白表达与肝细胞凋亡率成正相关趋势,结论 在TNF-α介导的小鼠暴发性肝衰竭模型中,caspase-3蛋白和mRNA表达上调并激活肝细胞凋亡的级联过程,最终导致肝细胞凋亡和坏死。     

蒙药嘎日迪-13味丸对脑缺血大鼠海马组织白介素-1β、肿瘤坏死因子-α蛋白及神经细胞凋亡的影响

目的探讨蒙药嘎日迪-13味丸对脑缺血大鼠海马组织炎性细胞因子白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及神经细胞凋亡的影响。方法采用枕大池二次注血法至大鼠脑组织缺血损伤模型,在各时间段断头取脑,用ELISA法和流式细胞仪分别检测脑缺血海马组织中IL-1β和TNF-α的含量及细胞凋亡数量的百分比。结果与正常组比较,模型组海马组织中IL-1β和TNF-α升高,细胞凋亡百分比增多(P0.05);与模型组比较,嘎日迪-13味丸组大鼠海马组织中IL-1β和TNF-α含量降低,细胞凋亡百分比数减少(P0.05)。结论嘎日迪-13味丸能降低大鼠脑缺血组织神经细胞凋亡数量,减轻缺血损伤程度,其机制可能与降低脑组织内IL-1β和TNF-α含量有关。     

人白介素-10基因转染对大鼠脑缺血再灌注损伤半影区炎性因子基因和蛋白表达的影响

目的 观察人白介素(IL)-10基因转染对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)基因和蛋白表达的影响. 方法 建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用立体定向脑室内注射的方式进行转染,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其转染效果,氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,荧光实时定量PCR检测半影区TNF-α和IL-1β基因表达情况,ELISA法检测半影区TNF-α和IL-1β蛋白的含量.结果 正常对照组、缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-α蛋白含量分别为(0.66±0.04)、(1.16±0.26)、(1.15±0.26)ng/g和(0.84±0.05)ng/g,IL-1β蛋白含量分别为(0.37±0.05)、(1.25±0.39)、(1.21±0.58)ng/g和(0.62±0.05)ng/g.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1β蛋白含量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL一1β含量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01);正常对照组,缺血对照组、空质粒组和IL-10基因转染组半影区TNF-αmRNA的表达量分别为1.00±0.53、9.42±1.83、9.69±1.96和3.53±1.09;IL-1βmRNA的表达量分别为1.00±0.51、27.81±4.84、23.96±4.90和13.55±4.45.与正常对照组比较,其余各组TNF-α和IL-1βmRNA表达量明显升高(P＜0.01),而IL-10基因转染组TNF-α和IL-1βmRNA表达量则较缺血对照组和空质粒组显著降低(P＜0.01). 结论 人IL-10基因转染后能抑制大鼠局灶脑缺血再灌注损伤半影区TNF-α和IL-1β基因和蛋白的表达,可能是其发挥缺血脑保护作用的机制之一.     

血浆联合复方甘草酸苷注射液对LPS/D-GalN诱发的小鼠肝损伤的影响

目的:探讨血浆联合复方甘草酸苷注射液对肝损伤小鼠模型肝损伤的影响。方法:将40只清洁型ICR雄性小鼠随机分为4组(n=10):对照组:仅用生理盐水处理;LPS/D-galN组:仅用LPS/D-GalN处理(LPS50mg/ml,D-GalN 500mg/ml);LPS/DgalN+复方甘草酸苷(CG)组:在LPS/D-GalN诱导后2,4,8h腹腔注射5mg/ml的CG注射液3次;LPS/DgalN+复方苷草酸苷和血浆(CG和Plamsa)组:在LPS/D-GalN诱导后2,4,8h尾静脉注射150μl血浆3次,并腹腔注射CG注射液3次。12h后牺牲小鼠,收集血清和肝组织样本,利用AST和ALT检测试剂盒检测血清中AST和ALT的水平,ELISA法检测肝组织中IL-6、TNF-α和NF-κB的表达变化;肝组织进行HE染色,显微镜下观察肝组织病理学变化。结果:与LPS/D-GalN组对比,LPS/D-GalN+CG组和LPS/D-GalN+CG和Plasma组能够显著降低血清中AST和ALT水平(P0.05);炎症相关因子IL-6和TNF-α,转录因子NF-κB水平也明显降低(P0.05)。结论:血浆联合复方甘草酸苷注射液通过抑制炎症相关因子IL-6和TNF-α,并降低转录因子NF-κB的表达,改善LPS/D-GalN诱发的小鼠肝损伤。     

PI3K抑制剂对急性胰腺炎细胞因子和组织病理学评分的影响

目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylino-sitol 3-kinase,P13K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠细胞因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6]转录和表达以及胰腺组织病理评分的影响,探讨其对SAP大鼠的保护作用.方法:将60只SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎组(S组)、假手术组(C组)、生理盐水组(NS组)、溶剂(DMSO)对照组(R组)、PI3K/Akt抑制剂wortmannin组(W组).采用改良的Aho法制作SAP模型,分别在造模3、6h后抽血并处死大鼠,收集胰腺组织.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA转录水平变化,并常规HE染色进行胰腺组织病理评分,同时观察各组腹水量、血清及腹水淀粉酶的变化.结果:S组和R组大鼠术后3、6h的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较C组和NS组差异有统计学意义(P<0.05);W组的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较同时段的S组和R组有所降低,差异有统计学意义(P<0.05).与C组和NS组相比,S组和R组大鼠术后3、6h的血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平和胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA转录水平差异有统计学意义(P<0.05);W组的上述指标均低于S组和R组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:PI3K抑制剂wortmanin通过抑制PI3K/Akt信号转导通路下调SAP大鼠细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的转录和表达水平,减轻胰腺组织的病理损伤,对SAP大鼠具有保护作用.     

大鼠内毒素性急性肝损伤后肝细胞凋亡与炎性因子的表达

目的 探讨脂多糖诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠急性肝损伤肝细胞凋亡、炎性因子表达情况及其发生机制.方法 56只大鼠分为0 h对照组与1、2、4、6、24和48 h脂多糖+D-氨基半乳糖胺处理组.在相应时间点处死大鼠后收集肝组织及血清,肝组织苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察ELISA法检测血清细胞因子表达;反转录(RT)-PCR法检测TNF-α、IL-β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和p53基因表达;收集24 h肝组织用底物显色法检测Caspase-3、8、9,12活性.组间比较用方差分析.结果 经药物处理后,肝组织出现碎片状坏死、大量炎性细胞浸润等表现,从6 h开始,24 h和48 h显著加重.血清TNF-α浓度在1 h处理组为(727.8±261.3)ng/L,显著高于对照组及其他处理组(F=49.82,P<0.01),2 h处理组为(156.4±52.2)ng/L,显著低于1 h组,但高于对照组(F:30.23,P<0.01);血清IL-β浓度逐渐上升,24 h处理组最高,为(360.5±121.6)ng/L(F=18.61,P<0.01).24 h处理组肝组织Caspase-3、8、9、12活性明显高于对照组(F=84.96,P<0.01).iNOS基因在对照组无表达,药物作用后6 h达最高,24 h和48 h则显著下降(F=34.07,P<0.01);p53基因在24 h和48 h处理组表达明显增高(F=37.43,P<0.01);TNF-α和IL-1β基因表达均较对照组升高(F=2.94,P<0.05),其峰值均出现在1 h处理组.结论 小剂量脂多糖可诱导D-氨基半乳糖胺致敏大鼠发生急性肝损伤;Caspase-3、8、9、12活性明显增强是其特征性改变之一;肝损伤的发生与TNF-α、iNOS和p53基因早期高水平表达有密切关系.     

白细胞介素1β基因沉默对烟草烟雾提取物诱发血管平滑肌细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨白细胞介素(IL)-1β基因沉默和过表达对烟草烟雾提取物(CSE)诱导血管平滑肌细胞凋亡和炎性反应的影响。方法 根据IL-1βmRNA编码序列设计并合成小干扰RNA(siRNA)和过表达质粒,分别转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5,实验分为对照组、模型组(CSE干预)、沉默组(siRNA-IL-1β)、沉默空载组(siRNA-EV)、过表达组(OvExp-IL-1β)、过表达空载组(OvExp-EV)。采用CSE干预除对照组的其他5组细胞。qRT-PCR检测细胞中IL-1βmRNA表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bax、TNF-α、IL-6和IL-8表达。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显升高,Bcl-2表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,沉默组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显降低,Bcl-2表达明显升高(P<0.01);过表达组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF...     

雷帕霉素对急性肝功能衰竭大鼠Toll样受体-4表达的影响

目的 探讨雷帕霉素抑制Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路对急性肝功能衰竭大鼠Toll样受体(TLR)-4基因表达的影响.方法采用腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)800 mg/kg和脂多糖(LPS)8 μg/只,建立急性肝功能衰竭大鼠模型,分别在注射D-GalN和LPS后2、6、12、24、48 h 5个时间点留取大鼠血及肝脏标本.SD大鼠分为对照组(n=6)、急性肝功能衰竭模型组(n=30)、STAT抑制剂雷帕霉素(RPM)干预组(n=30),在各不同时间点检测ALT、AST.ELISA法检测血清TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测大鼠肝组织TLR-4 mRNA表达.数据行t检验.结果急性肝功能衰竭组大鼠在造模后2 h TNF-α、IL-6水平均显著升高,6 h达峰值,RPM可明显抑制TNF-α、IL-6水平.急性肝功能衰竭组大鼠6、12、24、48 h肝组织中TLR-4 mRNA分别为0.745±0.135、1.092±0.175、1.115±0.152和0.812±0.130,RPM干预后分别为0.545±0.118、0.798±0.124、0.857±0.109和0.595±0.152,各时间点两组比较,差异均有统计学意义(t值分别为2.726、3.349、3.382和2.567,均P＜0.05).TLR-4 mRNA表达与ALT、AST均呈正相关(r值分别为0.722、0.712,均P＜0.01).结论抑制JAK/STAT通路可明显下调急性肝功能衰竭大鼠肝组织TLR-4表达,JAK/STAT通路可能参与急性肝功能衰竭过程中TLR-4mRNA表达的调控.     

Toll样受体-4小干扰RNA预处理防治小鼠急性肝损伤

目的 观察Toll样受体(TLR)-4小干扰RNA(siRNA)对D-氨基半乳糖盐酸盐/月旨多糖(D-GalN/LPS)诱导的肝损伤小鼠的保护作用.方法 150只雄性C57BL/6小鼠均分为PBS预处理组、阴性对照质粒预处理组、TS4预处理组、TS6预处理组和TS7预处理组.腹腔内联合注射LPS(10 ng/g)及D-GalN(1 mg/g)诱导小鼠急性肝损伤.在D-GalN/LPS联合注射前24及48 h通过尾静脉高压水注射法导人siRNA质粒50 mg/L.末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记术(TUNEL)检测细胞凋亡水平,免疫组织化学法检测肝组织中TLR-4表达,RT-PCR检测TLR-4、TNF-α及巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2 mRNA水平,ELISA检测小鼠血清中MIP-2及TNF-α水平,标准自动分析仪检测血清中ALT及AST水平,苏木精-伊红染色观察肝脏组织学变化,Fisher确切概率法比较各组间小鼠存活率.结果 TLR-4 siRNA可减轻肝细胞坏死、减轻炎性反应,并可显著降低血清转氨酶水平.TS4预处理组(0.065±0.015)比PBS预处理组(0.346±0.062)的TUNEL标记指数(LI)明显降低(t=9.796,P<0.05).TLR-4 siRNA预处理下调TLR-4 mRNA及蛋白表达水平,显著降低TNF-α及MIP-2 mRNA表达及细胞因子水平,显著降低D-GalN/LPS联合诱导的急性肝损伤C57BL/6小鼠的死亡率和肝损伤.结论 TLR-4 siRNA抑制TLR-4表达在防治肝损伤方面可能具有潜在应用价值.     

高迁移率族蛋白B1在急性肝功能衰竭小鼠中的表达变化

目的 阐明高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在小鼠急性肝功能衰竭模型肝组织中的表达模式、动态变化及其与TNF-α、IL-1β的相互作用.方法 D-氨基半乳糖和脂多糖制备小鼠急性肝功能衰竭模型,免疫组织化学SABC法检测肝组织内HMGB1在6个时间点的表达变化,ELISA测定血清中TNF-α、IL-1β的含量.配对t检验分析数据差异.结果 造模后2 h肝内即可观察到HMGB1的表达,并随时间的延长而呈现出明显的增长趋势,直至24 h;血清中TNF-α、IL-1β造模后即出现上升,分别于8 h、2 h达到峰值,TNF-α 8 h为(473.42±22.99)pg/mL,IL-1β2 h为(724.49士34.24)pg/mL.后缓慢下降,其中IL-1β于24 h恢复正常为(51.49士36.87)pg/mL.结论 HMGB1是急性肝功能衰竭的重要参与因子,早期可促进TNF-α、IL-1β的分泌,中晚期则在炎性因子的作用下大量表达,加速肝脏损伤,并与肝功能衰竭的发展及严重程度存在正相关.     

微囊化肝细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠细胞因子的影响

目的 观察微囊化肝细胞移植对急性肝功能衰竭(ALF)大鼠脂多糖(LPS)、TNF-α、IL-1β和IL-6的影响.方法 用D-氨基半乳糖诱导大鼠ALF模型.造模后18 h,60只大鼠均分为模型组、裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组,72 h取血标本,检测血常规、Cr、肝功能、PT和血氨;鲎试剂检测LPS;ELISA法检测TNF-α、IL-1β和IL-6.多组比较采用单因素方差分析.结果 裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组大鼠Cr、肝功能、PT及血氨较模型组有明显改善(P<0.01),且微囊化肝细胞移植组较裸肝细胞移植组改善更明显,差异有统计学意义(P<0.01).裸肝细胞移植组和微囊化肝细胞移植组LPS为(1.2±0.3)和(0.5±0.1)ng/L,TNF-α为(27.7α4.2)和(21.7±3.2)μg/L,IL-1β为(298.7±13.9)和(247.7±14.1)ng/L,IL-6为(275.7±51.8)和(208.7±48.1)ng/L;模型组分别为(2.1±0.6)ng/L、(37.7±5.1)μg/L、(355.5±26.4)ng/L和(424.8±67.8)ng/L,裸肝细胞移植组LPS、TNF-α、IL-1β、IL-6与模型组比较,差异有统计学意义(F=6.24,F=67.3,F=8.38,F=7.59,均P<0.01);微囊化肝细胞移植组与模型组比较,差异亦有统计学意义(F=11.73,F=10.75,F=15.91,F=10.83,均P<0.01);微囊化肝细胞移植组与裸肝细胞移植组比较,差异亦有统计学意义(F=5.49,F=4.01,F=7.53,F=3.35,均P<0.01).结论 微囊化肝细胞移植可通过降低LPS、TNF-α、IL-1β及IL-6而发挥抗ALF的作用.     

Choline Deficiency Augments and Antibody to Tumor Necrosis Factor-α Attenuates endotoxin-Induced Hepatic Injury

Alcoholic liver disease can be associated with hepatic choline deficiency and hepatic steatosis, abnormalities also observed in rats administered choline-deficient (CD) diets. Bacterial lipopolysaccharides (LPS) have been postulated to play a key role in this choline deficiency model of liver injury, and LPS hepatotoxicity is mediated to a major extent by the inflammatory cytokine tumor necrosis factor-α (TNF-α). This study addressed the following questions: Does LPS administration exacerbate an in vivo liver injury induced by choline deficiency? If so, do CD rats have increased serum TNF-α concentrations and does pretreatment anti-TNF-α IgG attenuate this injury? Rats administered choline-sufficient (CS) or CD diets for 16 days were intravenously administered either saline or LPS. One group of CD rats also received a single dose of anti-TNF-α IgG before LPS administration. Changes in histology and serum transaminase levels were determined. Both liver histology and serum transaminases were unchanged in the CS group treated with LPS, compared with the CS group treated with saline (control group). However, compared with this control group, transaminases were 5- to 7-fold higher in saline-treated CD rats and 30- to 50-fold higher in LPS-treated CD rats. Livers of saline-treated CD rats had massive fatty infiltration, and no necrosis but livers of LPS-treated CD rats showed both extensive fatty infiltration and large areas of necrosis. Serum TNF-α concentrations in CD rats (saline or LPS treated) were significantly elevated, compared with levels in corresponding CS rats. Pretreatment with the anti-TNF-α IgG prevented hepatonecrosis in LPS-treated CD rats and lowered their serum transaminases by one-third. Thus, LPS administration exacerbated liver injury induced by choline deficiency, and this injury was probably partially mediated by TNF-α and attenuated by anti-TNF-α IgG.     

微小RNA在肿瘤坏死因子α介导的急性肝功能衰竭小鼠体内的表达谱及其作用

目的 了解微小RNA(miRNA)在急性肝功能衰竭小鼠模型中的表达谱及对其发病机制的调控作用.方法 将BALB/c小鼠85只分为4组,模型组40只用D-氨基半乳糖(D-GalN)联合脂多糖(LPS)腹腔注射建立肝功能衰竭模型,D-GalN单药组20只、LPS单药组20只和对照组5只分别予D-GalN、LPS和0.9%NaCl溶液腹腔注射.在给药后0、5和7 h观察小鼠肝脏组织学变化,0、1、3、5、7和9 h留取小鼠血清和肝脏组织标本.采用实时定量PCR方法检测小鼠血清及肝组织中炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)表达水平;采用miRNA微阵列(microarray)检测小鼠肝脏中miRNA的表达谱,实时定量PCR验证其表达.体外LPS诱导小鼠巨噬细胞Raw264.7活化,诱导不同时间点收集细胞检测细胞miRNA的表达情况.组间均数比较用单因素方差分析,相关性分析采用Pearson和Spearman相关分析.结果 miRNA微阵列发现小鼠急性肝功能衰竭发病过程中miRNA的表达谱发生了明显变化,与对照组相比,模型组有97个miRNA表达变化显著(P＜0.01),其中21个miRNA在给药后5 h和7 h均表达上调,27个miRNA均表达下调,进一步PCR验证得到miR-146a和miR-155随给药时间延长表现为持续性上调,且miR-155表达与TNF-α和IL-6表达均具有良好的相关性.体外实验进一步发现miR-146a和miR-155在活化的巨噬细胞中表达上调.结论 在小鼠急性肝功能衰竭发病过程中,伴随着miRNA表达谱的变化,炎性反应相关miR-146a和miR-155明显上调,可能在急性肝功能衰竭的免疫发病机制中发挥重要的调控作用.