IL-24增强细胞因子诱导的杀伤细胞对HepG2的细胞毒活性

目的 寻求增强CIK细胞毒活性的有效方法,以满足临床过继免疫治疗的需要.方法 从健康人外周血中提取出单个核细胞,第1天加入IFN-γ,第2天加入IL-1、CD3mAb、IL-2诱导CIK细胞;另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24.细胞计数法测定细胞的增殖,MTT法测定细胞杀伤活性,比较两者有无差别.透射电镜下观察CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤和肿瘤细胞的改变.结果 未加IL-24培养组增殖率高于加IL-24培养组,两者比较有明显差异(P＜0.05).加IL-24培养组细胞各个效靶比杀伤活性均达到90%以上,明显高于其它各组.透射电镜下可见加IL-24培养组凋亡和坏死的肿瘤细胞比未加IL-24培养组明显增多.结论 CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强它的杀伤活性.     

细胞因子诱导的杀伤细胞的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokineinducedkiller ,CIK)是一种非MHC限制性的新型免疫活性细胞 ,其增殖能力强、杀瘤活性高、副作用小 ,优于淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK) ,对于提高患者自身抗肿瘤免疫能力有重要作用。本文就近年来有关CIK的基础研究和临床应用的进展作一综述     

细胞因子诱导的杀伤细胞研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)是将人外周血单个核细胞在体外用多种刺激因子,如抗cD3一McAb、IL．2、血清干扰素-γ(IFN-γ)、IL-1等共同培养一段时间后获得的一群异质性细胞。它兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点,比淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、CTL、TIL的增殖能力和细胞毒性强,因而成为近10年肿瘤生物治疗的热点。现就CIK细胞的特点、诱导、杀瘤机制及应用前景等综述如下。     

细胞因子诱导的杀伤细胞在胃癌治疗中的作用及临床应用

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)被称为自然杀伤T细胞,其杀伤肿瘤的作用不受主要组织相容性复合体的限制,是过继细胞免疫治疗的代表类型。CIK细胞通过分泌细胞毒颗粒及细胞因子、调节癌基因表达、活化NKG2D受体等发挥抗肿瘤作用。CIK细胞联合化疗,不仅可以延长胃癌患者的无病生存期和总生存期,改善生活质量,而且不良反应少,治疗耐受性较好。虽然CIK细胞治疗已经广泛应用于临床,但仍有很多问题需要进一步探讨。     

CIK细胞对肺腺癌细胞株A549体内外杀瘤活性的实验研究

目的探讨正常人细胞因子激活的杀伤(cytokine induced-killer,CIK)细胞的表型变化、增殖活性及对人肺腺癌细胞株A549细胞的体内外杀伤作用。方法取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经IFNγ-、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,观察CIK细胞增殖活性,流式细胞仪测其细胞表型变化及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其体外的细胞毒活性,用肺腺癌细胞株A549建立裸鼠肺癌模型观察其体内的抗肿瘤效果。结果培养21 d内,CIK细胞增殖(19.7±4.2)倍;CD3+CD56+表达水平明显上调,第14天时达(26.3±3.6)%;体外实验表明CIK细胞对A549细胞有明显细胞毒活性,效靶比为20:1时杀伤率为(55.4±6.2)%。体内实验表明,CIK细胞可有效抑制裸鼠皮下肺癌移植瘤的生长(P<0.01)。结论CIK细胞是一种高效的免疫效应细胞,能够显著抑制体内外肺腺癌细胞株A549的生长,为肺癌免疫治疗提供了一种新的治疗手段。     

鼻咽癌患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞体外增殖及杀瘤活性

目的 研究鼻咽癌患者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的增殖能力、对鼻咽癌细胞株HONE1的细胞毒作用,寻求鼻咽癌过继免疫治疗的新途径。方法 提取24例鼻咽患者外周血单个核细胞,用IFN-γ、抗CD3mAb、IL-2和IL-1β共同培养诱导CIK细胞,计数不同时间点的细胞数,用MTT法检测细胞对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性,用ELISA法测定CIK细胞分泌种细胞因子的水平,同时培养CD3AK细胞和LAK细胞,与CIK细胞在增殖和杀瘤活性上进行比较。资料用SPSS13.0软件进行分析,P＜0.05为统计有差异性。结果 鼻咽癌患者CIK细胞表现出很强的体外增值活性及杀瘤活性,与CD3AK细胞和LAK细胞相比,其增殖活性和对鼻咽癌细胞株HONE1的杀伤活性均明显提高（P＜0.05）,且与正常人自体CIK细胞相比无明显差别（P＞0.1）。结论 鼻咽癌患者CIK细胞体外增殖能力和杀瘤活性明显优于CD3AK和LAK细胞,为鼻咽癌患者的临床过继免疫治疗提供了一种新的有效地治疗手段。     

细胞因子诱导的杀伤细胞制备的研究进展

随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展,细胞介导的过继免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一。细胞因子诱导的杀伤细胞治疗是近年来具有代表性的过继免疫治疗方法,研究和应用进展迅速。CIK细胞在体外可以快速扩增,具有高效的非主要组织相容性复合物限制性杀瘤活性,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。随着细胞操作及基因修饰技术的日益精进,人们正逐渐改进CIK细胞的体外培养和处理方法,以便进一步提高CIK细胞的增殖率及特异杀伤力,使其更好地应用于临床。     

抗原负载的树突细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的影响

目的：研究树突细胞(DC)负载不同形式的抗原对其成熟和功能的影响,及DC对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖和功能的影响。方法：外周血单个核细胞(PBMC)经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,将Bel 7402细胞制备成肿瘤细胞冻融物、坏死肿瘤细胞及正常生长的肿瘤细胞,并作为不同状态的肿瘤抗原刺激DC,以流式细胞仪检测DC表面分子的表达。应用MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激的CIK对肿瘤细胞的杀伤力。结果：负载肿瘤细胞冻融物的Dc其表面cDla、CD80、CD83、HLA-DR高表达,促进CIK增殖和杀伤力的功能最强;与正常肿瘤细胞共培养的DC细胞成熟程度受到抑制;负载Bel 7402抗原的DC刺激的CIK对Bel 7402有较强杀伤力,而对HerpG2杀伤力弱。结论：肿瘤细胞冻融物预刺激的DC成熟程度最高,诱导抗原特异性CIK细胞的功能最强,为临床DC瘤苗和CIK的应用提供了实验依据。     

免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的比较

目的探讨免疫编辑前后细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)分泌细胞因子水平及细胞杀伤活性的变化。方法采用Ficoll密度梯度法提取脐血单个核细胞,定向诱导成CIK细胞,即免疫编辑前CIK细胞。Transwell小室共培养CIK细胞与人肺癌A549细胞,分离纯化CIK细胞即免疫编辑后CIK细胞。通过ELISA和MTT法分别检测免疫编辑前后CIK细胞分泌细胞因子水平及细胞毒活性的变化。结果CIK细胞与A549细胞共培养后,其分泌细胞因子IFN-γ和TNF-α的含量较共培养前CIK细胞显著下降(P<0.05),IL-2则略有降低。共培养后CIK细胞杀伤活性明显减弱(P<0.05)。结论CIK细胞与人肺癌A549细胞间存在免疫编辑作用,编辑后的CIK细胞分泌细胞因子水平及杀伤活性均下降。     

大体系冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响

目的探讨大体系(50 mL)冻存对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响。方法采集6例健康志愿者的外周血,采用Ficoll法分离得到单个核细胞,用细胞因子诱导培养CIK细胞。收集冻存1个月后复苏的CIK细胞,采用流式细胞术检测其冻存前后的细胞活率和免疫表型;通过与乳腺癌细胞共培养(效靶比10∶1和40∶1)的方法测定其杀伤活性,与新鲜未冻存的细胞杀伤活性进行比较,同时并对不同效靶比冻存前后的细胞杀伤活性进行比较。结果 CIK细胞大体系冻存前平均细胞活率(97.79±1.92)%,显著高于复苏后的(83.61±3.42)%(P<0.05)。复苏后CIK细胞中CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+表型CIK细胞所占比例虽较冻存前稍有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。效靶比10∶1、40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率比较差异均无统计学意义(P>0.05);效靶比40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率均显著高于效靶比10∶1时(P<0.05)。结论大体系(50 mL)冻存对于CIK细胞活率虽有影响,但对免疫表型和细胞活性均未影响。     

Antitumour activities of cytokine-induced killer cells and dendritic cells in vitro and in vivo

Solidtumourcellsshowaresistancetoimmunologicaleffectorcellsinvitro.1Theresistancemaybeonereasonwhythesetumours withstandimmunotherapeuticapproachesin humans.Dendriticcells(DC)playanimportant roleintheimmuneresponsetotumourassociated antigensinhumans.DCintheperipherycapture andprocessantigens,expresslymphocyte costimulatorymolecules,migratetolymphoid organsandsecretecytokinestoinitiateimmune response.Cytokine inducedkiller(CIK)cellsarethemajor histocompatibilitycomplex unrestrictedcytotoxic …     

CIK细胞的制作及对不同肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的:制备细胞因子激活杀伤(CIK)细胞并观察其生物学特性及对不同肿瘤细胞株的杀伤作用.方法:外周血单个核细胞用无血清培养基经干扰素γ(IFN-γ),CD3McAb,白介素2(IL-2),白介素1α(IL-1α)诱导,制作CIK细胞,以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀瘤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞相比增殖速度快、最终增殖倍数高.CIK细胞主要由CD3和CD56双阳性细胞构成.CIK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性.结论:CIK细胞过继免疫治疗是一种非常有前景的抗肿瘤治疗方法.     

A randomized controlled trial of postoperative tumor lysate-pulsed dendritic cells and cytokine-induced killer cells immunotherapy in patients with localized and locally advanced renal cell carcinoma

Background  It remains a challenge to inhibit the local recurrence or distant metastasis of localized or locally advanced renal cell carcinoma (RCC) after surgical resection. We investigated the feasibility, safety and efficacy of immunotherapy using autologous tumor lysate (TL)-pulsed dendritic cells (DCs) and cytokine-induced killer (CIK) cells in patients with localized or locally advanced RCC.

Methods  From January 2001 to July 2009, we collected 137 patients that met the selection criteria and randomly divided them into three groups. After surgery, immunotherapy with TL-pulsed DCs-CIK cells (DC-CIK group) and interferon (IFN)-α (IFN-α group) was performed in 46 patients, respectively. The other 45 patients received no postoperative adjuvant therapy (the control group). The changes in the numbers of T lymphocyte subsets, including CD4⁺CD25^high regulatory T cells (Treg), were determined before the operation and after immunotherapy. The overall survival was compared among the three groups.

Results  An increase of the CD4⁺/CD8⁺ ratio and a decrease of CD4⁺CD25^high cells were observed after TL-pulsed DC-CIK cells or IFN-α immunotherapy. All patients tolerated the TL-pulsed DC-CIK cells immunotherapy very well, and side effects in the DC-CIK group were less than in the IFN-α group. The metastasis and recurrence rates were significantly decreased after TL-pulsed DC-CIK cells or IFN-α immunotherapy compared with the control group (P <0.01). The Log-rank test showed that the overall survival rates were significantly higher in the DC-CIK group and IFN-α group than that in the control group (P <0.01), but there was no difference between the DC-CIK group and IFN-α group (P >0.05).

Conclusion  Postoperative immunotherapy with TL-pulsed DC-CIK cells may prevent recurrence/metastasis and increase the overall survival rate after surgery in localized or locally advanced RCC.

     

细胞因子诱导的杀伤细胞对食管癌EC9706细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对食管癌EC9706细胞的杀伤作用.方法:流式细胞仪检测EC9706细胞NKG2D配体的表达,乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,裸鼠体内实验验证CIK细胞对肿瘤的影响.结果:EC9706细胞表达MICA和ULBP2,不表达MICB,ULBP1和ULBP...     

两种培养基的培养体系对CIK细胞增殖和功能的影响

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖情况,检测CIK细胞的表面分子表型和体外对白血病细胞K562的杀伤作用.方法 通过用H3培养基培养的分别来源于脐带血和患者自体外周血分离的单个核细胞(PBMC),添加重组人γ干扰素(IFN-γ)与CD3单抗,体外诱导CIK细胞,在培养的第7天分别加入H3培养基和T551培养基继续诱导培养至14 d.计数观察CIK细胞增殖能力,流式检测细胞表面CD3、CD56的表达情况,CCK8法检测两组培养基条件下对白血病细胞K562的杀伤效果.结果 动态计数及表型分析结果表明,H3及H3+T551培养的CIK细胞扩增倍数(包括脐带血CIK总细胞数和自体CIK总细胞数)在第14天均分别达到76.9倍、62.3倍;两种培养条件下脐带血CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(16.70±2.72)％和(10.80±2.59)％,自体CIK细胞中CD3+ CD56+双阳性细胞含量分别是(11.23±6.64)％和(10.70±6.42)％;体外杀瘤实验表明,当效靶比为5∶1时,H3培养的脐带血CIK细胞杀伤率达到(33.50±9.99)％,显著高于H3+T551培养脐带血CIK细胞的(20.3±6.76)％,差异有统计学意义(P=0.011),而H3和H3+T551培养的自体CIK细胞杀伤率分别是(59.67±27.59)％和(42.13±19.47)％,差异无统计学意义(P=0.080).结论 H3培养的脐带血和自体CIK细胞具有较强的体外抗白血病癌细胞活性,可应用于临床上白血病的过继性免疫治疗.     

细胞因子诱导的自然杀伤细胞培养体系的评价

目的:评价采用γ-干扰素(IFN-7)、白介素-2(IL-2)、抗 CD3 单抗 3 因子对外周血来源的 CIK 细胞培养的效果.方珐:采集17例实体肿瘤患者的外周血,分离单个核细胞培养,于培养第 1 天加入重组人IFN-Y,第2天加入抗人 CD3 单抗、重组人IL-2,隔天半量换培养液并添加人重组IL-2以维持其浓度...     

不同培养条件对CIK细胞体外扩增和抗肿瘤特性的影响

目的观察不同类型、不同浓度的抗CD3单抗对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外增殖能力及其抗肿瘤特性的影响,优化扩增方案。方法取多名健康供血者血液用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞,加入不同类型（OKT3、UCHT1、HIT3a）、不同浓度、不同组合的抗CD3单抗及细胞因子（γ-IFN、rhIL-22）,诱导生成CIK细胞,体外培养12 d。观察CIK细胞的扩增情况,采用MTT法测定其杀瘤活性。结果 （1）等量混合3种不同类型的抗CD3单抗,CIK细胞增殖反应优于添加单一类型抗CD3单抗（P〈0.05）。（2）抗CD3单抗浓度增加,CIK细胞的增殖效应及细胞毒活性反而下降。（3）不同rhIL-2浓度对CIK细胞的增殖效应及细胞毒活性均无明显影响。结论培养CIK细胞时混合不同类型的抗CD3单抗有利于CIK细胞的体外扩增。     

TIGIT在CIK细胞上的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨TIGIT（T cell Ig and ITIM domain）在细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）上的表达及其对CIK细胞增殖、凋亡的影响.方法 分离肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMCs）,体外诱导为CIK细胞,分别检测培养前的PBMC和培养第7、14天的CIK细胞的TIGIT表达.同时培养2组CIK细胞,实验组在常规CIK培养体系中加入TIGIT单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）封闭TIGIT的功能,对照组在常规培养CIK体系中加入鼠IgG1同型对照抗体,CFSE染色检测2组CIK细胞的增殖活性,Annexin V/7-AAD凋亡试剂盒检测2组CIK细胞的凋亡率.结果 PBMC和CIK细胞均表达TIGIT,TIGIT表达的多少可能和细胞活化状态有关.实验组CIK细胞增殖指数较对照组升高7％,组间差异具有统计学意义（P＜0.05）,2组间细胞凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 封闭CIK细胞上的TIGIT可以扩大CIK细胞增殖,但不增加CIK细胞的凋亡.     

体外利用MGc80-3胃癌细胞诱导肿瘤杀伤细胞的实验研究

以健康人外周血单个核细胞作为肿瘤杀伤细胞的前体细胞，ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞作为刺激细胞，在体外进行同种异体淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养之后，单独加入重组白介素 ２和同时加入重组白介素 ２、抗ＣＤ３单克隆抗体，分别诱导出Ｌ 肿瘤杀伤细胞和ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞．用噻唑蓝比色法在体外检测其对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤活性，并与淋巴因子 激活杀伤细胞、ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞相比较结果显示，ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞的杀伤活性最高．在倒置显微镜下及透射电镜下观察ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞对ＭＧｃ８０ ３胃癌细胞的杀伤过程，发现ＣＤ３ 肿瘤杀伤细胞首先接触、粘附靶细胞，以细胞坏死和细胞凋谢的方式杀伤肿瘤细胞     

NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的 探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2/DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法 流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2/DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的阻断作用.结果 CNE2、CNE2/DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2/DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配.CNE2、CNE2/DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01).效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%.在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P＜0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性.结论 NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力.