补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响

目的 :观察补阳还五汤对神经干细胞生长分化的影响。方法 :取孕 12d大鼠胚胎神经管上皮细胞 ,分别接种在灌服补阳还五汤的鼠血清和对照鼠血清的培养基内。不同培养时间内观察细胞的生长状况 ;用MTT法检测细胞活性 ;用免疫组化染色法检测神经元特异烯醇化酶 (NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 :药物血清组神经干细胞的生长明显好于对照组 ,OD值高于对照组 ;免疫组化染色显示 ,NSE、GFAP免疫阳性细胞药物血清组均多于对照组。结论 :补阳还五汤药物血清可促进神经干细胞的生长、存活和向神经元及神经胶质细胞的分化。     

多肽二维凝胶支架材料与鼠神经干细胞的细胞相容性

目的研究鼠神经干细胞在二维自组装多肽凝胶支架材料表面生长及分化情况，证明多肽凝胶可作为神经组织工程支架材料。方法取新生1周内乳鼠的大脑皮质，机械分离出神经干细胞，无血清培养液（DMEM／F12＋bFGF＋EGF＋B27）培养，免疫组化SABC法对神经干细胞进行鉴定；然后，将其接种到凝胶支架材料表面（实验组）及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面（对照组），倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况。结果免疫组化法鉴定：培养的细胞为神经干细胞，Nestin（＋）。神经干细胞可分化为神经元及星形胶质细胞，NSE（＋），GFAP（＋）。倒置相差显微镜观察：实验组中。接种的神经干细胞生长良好，7d后可分化为有突起神经细胞；对照组中，7d后未发现长出突起神经细胞。结论二维自组装多肽凝胶对神经干细胞有良好细胞相容性，可作为神经组织工程支架材料。     

bFGF与EGF诱导BMSCs向神经干细胞分化的观察

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）在体外条件下对骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经千细胞（NSCs）和神经样细胞分化的诱导作用。方法 采用出生4周左右大鼠的全骨髓细胞进行培养,传至第3代时,分为两组：实验组细胞加入bFGF和EGF,进行诱导分化;对照组不加因子继续培养。在倒置显微镜下每日观察,记录BMSCs的诱导分化情况,并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗巢蛋白（Nestin）单抗、兔抗神经元特异性烯醇化酶（NSE）单抗、兔抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）单抗鉴定。结果 实验组诱导7d后有部分细胞具备神经元样细胞形态,胞体锥形或圆形,有较长单极或多极的突起,均有Nestin、NSE、GFAP阳性细胞表达,且3种细胞数量差别有显著性（t=3．266～6．099,P〈0．05）。而对照组细胞仍为典型的成纤维细胞形态,无Nestin、NSE、GFAP阳性细胞。结论 bFGF、EGF可以诱导BMSCs向NSCs分化,并可调控神经元分化,促进神经元细胞成熟。     

表皮生长因子在新生大鼠神经干细胞培养中的作用

目的探讨表皮生长因子（EGF）在神经干细胞培养中的作用。方法取新生SD大鼠神经干细胞用无血清培养技术进行培养、传代和鉴定,在传代且培养基撤除EGF后观察细胞的变化,并进行神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）检测,以做细胞鉴定。结果成功培养出新生大鼠神经干细胞,并进行传代,培养的神经干细胞在培养基去除EGF后能分化为神经元细胞和神经胶质细胞,EGF反应性神经干细胞主要向神经胶质细胞分化。结论新生大鼠神经干细胞能在体外适宜条件下进行长期培养、传代,且具有多向分化潜能;EGF具有促进神经干细胞快速增殖、维持神经干细胞状态、抑制神经干细胞分化的功能;EGF反应性神经干细胞具有向星形胶质细胞分化的趋势。     

bFGF、EGF对新生大鼠海马神经干细胞分化的影响

目的　观察碱性成纤维生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)对新生大鼠海马神经干细胞生长和分化的影响。方法　从新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用免疫荧光法检测神经上皮干细胞蛋白 (Nestin)的表达 ,使用bFGF、EGF作为诱导因子 ,通过免疫荧光染色和流式细胞仪分选细胞的方法检测神经干细胞分化为 3种神经细胞的状况。结果　取材细胞大部分为Nestin免疫阳性细胞 ,各实验组均可促进培养细胞的生长和分化 ,bFGF能明显增加神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的表达 (P <0 .0 5 ) ,EGF能明显增加胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达(P <0 .0 5 )。结论　bFGF倾向于诱导干细胞增殖并向神经元方向分化 ,EGF则倾向于诱导干细胞向胶质细胞分化 (P <0 .0 5 )。     

大鼠胚胎神经干细胞的培养及分化的观察

目的探索大鼠胚胎神经干细胞的培养、传代和冻存、复苏的方法,以及观察胚胎神经干细胞在自然条件下分化为神经元细胞和神经胶质细胞的过程.方法从胚胎大鼠脑组织中分离得到神经干细胞,采用无血清培养技术进行培养、传代和鉴定.诱导分化后采用SABC法对分化的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)检测以作细胞鉴定.结果成功培养出大鼠胚胎神经干细胞,并对其进行传代、冻存及复苏,培养的细胞能分化为神经元细胞和神经胶质细胞.结论大鼠胚胎神经干细胞能在体外适宜的培养条件下进行长期的培养、传代及冻存、复苏,并具有多向分化潜能.     

胚胎大鼠神经干细胞的培养及鉴定

目的：探讨胚胎大鼠神经干细胞培养，传及鉴定方法。方法：从胚胎大鼠脑室下区（SVZ）组织分离得到神经干细胞，采用无血清培养技术进行培养，并诱导分化，采用SABC法对分化后后的细胞进行神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸蛋白（GFAP）检测及姬姆萨染色进行细胞鉴定。结果：成功培养出了胚胎大鼠神经干细胞，培养出的细胞具有自我更新能力的增殖能力，可分化为神经元，神经胶质细胞及少突胶质细胞，结论：胚胎大鼠神经干细胞在体外适宜的培养条件下具有自我更新，增殖和多向分化潜能。     

大鼠背根神经节源干细胞分离培养和鉴定

目的：探讨大鼠背根节（DRG）内是否存在神经干细胞。方法：取胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养,观察其增殖与分化情况,并行P75BrdU/Nestin,GFAP,NF200免疫荧光组织化学鉴定。结果：细胞培养获得大量能够分裂增殖且呈巢状悬浮生长的干细胞团,呈P75BrdU/Nestin免疫荧光组织化学阳性反应;培养第三代细胞加入胎牛血清10d后,相差显微镜下可见部分细胞伸出多个细长突起,且免疫组化呈NF200阳性;部分细胞具有扁平多突起的或双极细胞形态,免疫组化呈GFAP染色阳性。细胞球经NGF培养诱导1d左右有些神经元样的细胞开始迁出,随着时间增长迁出的细胞越来越多,并且细胞和细胞之间发生联系,形成交错的复杂网络,迁出的细胞经免疫组化鉴定几乎都是呈NF200免疫染色阳性。结论：大鼠DRG内存在有神经干细胞,这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞。     

BDNF对大鼠胚胎神经干细胞诱导分化的影响

【目的】脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠神经干细胞（NSCs）诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著（P〈0.05）。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组（13.1%）比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。     

羊膜上皮细胞促进共培养神经干细胞存活及分化

目的：探讨羊膜上皮细胞是否能在体外促进胚胎脑神经干细胞的存活及分化。 方法：Neurosphere法分离、克隆E12~14 d Wistar大鼠脑组织的神经干细胞,同时从羊膜中分离羊膜上皮细胞。将神经干细胞与羊膜上皮细胞在不同条件下共培养,通过免疫组织化学法对羊膜上皮细胞及神经干细胞的分化进行检测。 结果：羊膜上皮细胞表达神经干细胞及神经元、神经胶质细胞表面抗原;与羊膜上皮细胞共培养的神经干细胞克隆的分化细胞总数、分化为神经元的百分率及神经元初级突起长度明显高于对照组。 结论：羊膜上皮细胞与神经干细胞具有一定的同源性;羊膜上皮细胞能促进体外培养的神经干细胞的分化,且主要向神经元分化,并促进神经元初级突起的生长。提示羊膜上皮细胞为神经干细胞提供促进其分化及存活适宜的微环境。     

表皮生长因子对大鼠胚胎神经干细胞增殖分化的影响

目的：建立神经干细胞分离、培养的技术方法，探讨表皮生长因子(EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖、分化的影响。方法：从大鼠胚胎大脑组织中分离、培养神经干细胞，并用EGF和血清诱导其分化，采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞增殖和分化的神经样细胞。结果：大鼠胚胎神经干细胞在无细胞因子和血清的培养基中无新生细胞形成，但能在EGF和血清的诱导下产生nestin和BrdU阳性细胞，细胞贴壁后分化为神经元和星形胶质样细胞。结论：EGF和血清能促进神经干细胞增殖，并诱导其向神经元样和星形胶质样细胞分化。     

脑络欣通药物血清对大鼠胚胎神经干细胞生长分化的影响

目的研究不同浓度脑络欣通药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(NSC)生长分化的影响。方法采用细胞培养、血清药理学、免疫组化等方法,观察不同浓度脑络欣通药物血清对大鼠NSC生长分化的影响。结果不同浓度脑络欣通药物血清均可在一定程度上促进大鼠NSC生长,以10%的药物血清作用最明显。不同浓度药物血清均可诱导绝大多数NSC分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。10%药物血清诱导大鼠NSC向神经元方向分化的比例最高,且使分化的神经元在细胞形态学上更为接近发育成熟。结论脑络欣通有促进NSC生长分化的作用。不同浓度脑络欣通药物血清对离体培养大鼠NSC的生长和分化有不同影响,10%药物血清是最佳作用浓度。     

人胎脑神经干细胞的体外分离、培养与鉴定

目的探索人胎脑神经干细胞的体外分离培养条件,从而在体外大量增殖神经干细胞,并观察神经干细胞增殖和分化的特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮细胞生长因子（EGF）的无血清培养技术,从14周自愿水囊引产人胎脑海马皮质中分离出神经干细胞,并进行培养、传代、分化观察,应用免疫荧光细胞化学技术对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从14周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长,形成神经球,该细胞具有连续增殖能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原（Nestin）;在含血清培养时诱导神经干细胞分化,分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原。结论在含有EGF和bFGF的无血清培养液中,从人胎脑能分离培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞,并能在体外扩增,可进一步用于基础及临床研究。     

小鼠胚胎神经干细胞体外培养及鉴定的实验研究

目的:探讨小鼠胚胎神经干细胞体外分离培养增殖及分化,为进一步的实验研究提供基础。方法:分离孕13～15d的小鼠胚胎脑组织,在加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的B27无血清培养基中克隆培养,并用10%的胎牛血清诱导其贴壁分化,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白(Nestin),β-微管蛋白(β-tublin),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,对神经干细胞(NSCs)及其分化的细胞进行鉴定。结果:分离培养的细胞可形成典型的神经球,并传代。细胞表达神经巢蛋白,并可诱导分化为神经细胞和神经胶质细胞。结论:小鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下大量增殖,并且具有多向分化潜能。     

大鼠胚胎大脑皮层源性神经干细胞体外培养及增殖分化特点

目的 建立大鼠胚脑皮层神经干细胞体外培养及鉴定技术,探讨其增殖分化特性,为应用神经干细胞移植治疗神经疾病提供基础。方法 采用含有丝分裂源表皮生长因子(EGF)的无血清培养基培养SD大鼠孕14．5d的胚胎大脑皮层神经干细胞,应用免疫细胞化学方法了解其增殖分化特性;以单细胞克隆实验及BrdU免疫标记证实神经干细胞自我增殖能力。结果 培养细胞在EGF作用下可分裂增殖,并表达神经干细胞特异性抗原nestin,分化细胞MAP2及GFAP抗原表达阳性。结论 SD大鼠胚脑皮层可分离培养出神经干细胞;并具有增殖、自我更新能力和多向分化潜能特性。     

外源性一氧化氮对神经干细胞分化的促进作用

目的：探讨外源性一氧化氮(ectogenesis nitric oxide,NO)对培养状态下神经干细胞分化的影响．方法：用含EGF的条件培养基原代培养小鼠神经干细胞,在第5日时,实验组加入硝普钠(sodium nitroprussides NP)作为NO的体外供体,对照组不加SNP．24h后都换成含血清的培养基．比较两组细胞的分化情况．结果：在含血清培养基中培养24h后,两组细胞均发生分化,但实验组经SNP作用后,细胞分化速度较对照组明显加快,突起较长．结论：NO能促进神经干细胞的分化,并能促进细胞分化后轴突的发育．     

Biological effect of velvet antler polypeptides on neural stem cells from embryonic rat brain

Background Velvet antler polypeptides (VAPs), which are derived from the antler velvets, have been reported to maintain survival and promote growth and differentiation of neural cells and, especially the development of neural tissues. This study was designed to explore the influence of VAPs on neural stem cells in vitro derived from embryonic rat brain. Methods Neural stem cells derived from E12-14 rat brain were isolated, cultured, and expanded for 7 days until neural stem cell aggregations and neurospheres were generated. The neurospheres were cultured under the condition of different concentration of VAPs followed by immunocytochemistry to detect the differentiation of neural stem cells. Results VAPs could remarkablely promote differentiation of neural stem cells and most neural stem cells were induced to differentiate towards the direction of neurons under certain concentration of VAPs. Conclusion Neural stem cells can be successfully induced into neurons by VAPs in vitro, which could provide a basis for regeneration of the nervous system.     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养和分化

探索大鼠胚胎神经干细胞的分离、培养和传代等方法,并用血清促使分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少枝胶质细胞。方法从胚胎大鼠脑组织中分离得到神经干细胞;在无血清条件下,对神经干细胞进行培养、传代;用神经上皮干细胞蛋白（Nestin）对神经干细胞进行箍定;用免疫荧光方法对分化后神经干细胞进行神经纤维丝蛋白（NF68）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）和半乳糖脑苷脂（Gale）染色。结果成功得到神经干细胞,并且进行多次传代培养。血清能促使其分化成为神经元细胞、星形胶质细胞和少枝胶质细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下能大量增生,并且具有多向分化潜能。     

人胚胎脊髓神经干细胞生长及分化过程中BDNF的作用研究

目的研究脑源性神经营养因子对人胚胎脊髓神经干细胞生长和分化的影响。方法孕20周水囊引产胎儿标本经家属同意捐赠,分离培养脊髓神经干细胞,分为正常对照组、BDNF蛋白组、BDNF抗体封闭组,计数神经球数目并以MTT法检测细胞活力,免疫组织化学检测NeuN和GFAP的表达情况并进行计数。结果与对照组相比,BDNF蛋白组神经球数目或MTT值均无明显变化,BDNF抗体封闭组的神经球数目和MTT值有明显减少(P<0.05);BDNF蛋白组NeuN阳性细胞数明显多于对照组(P<0.05),GFAP阳性细胞数与对照组相比有明显减少(P<0.05),BDNF抗体封闭组NeuN或GFAP阳性细胞数均少于对照组(P<0.05)。结论外源性BDNF可促进人胚胎脊髓神经干细胞向神经元样细胞分化;内源性BDNF在人胚胎脊髓神经干细胞的增殖分化过程中发挥重要作用。