首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到17条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
目的研究人脐静脉内皮细胞的体外培养方法,并进行细胞鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞,加入DMEM/F12混合培养基,37℃5%CO2培养箱中培养,观察细胞形态及生长状况,近融合时消化传代培养。采用形态学观察和CD34免疫组化法进行细胞鉴定。结果原代培养的人脐静脉内皮细胞约于24h完全贴壁,4~5d后融合成单层铺路石样结构。CD34染色证实培养的细胞是人脐静脉内皮细胞。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的人脐静脉内皮细胞。  相似文献   

2.
目的:体外进行人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)原代培养及鉴定.方法:用0.1%Ⅱ型胶原酶消化法收集HUVECs,加入含20%胎牛血清的M199培养基在37℃、5%CO2孵箱中培养,用Tryple express进行消化传代培养.采用细胞形态学观察、流式细胞仪测定CD34鉴定细胞.结果:原代培养的HUVECs在24 h完全贴壁,在3~5天融合成片,呈现单层铺路石样改变.流式细胞仪测定内皮细胞纯度为75.52%.结论:Ⅱ胶原酶及Tryple express的灵活使用可获得大量连续传代培养的HUVECs.  相似文献   

3.
人脐静脉内皮细胞的体外改良分离、培养及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立一种改良的血管内皮细胞培养方案,为体外培养血管内皮细胞提供稳定而有效的实验方法.方法 在无菌条件下,应用输液延长管置入脐带并注入2/3容积的0.1%Ⅱ型胶原酶消化、分离人脐静脉内皮细胞.用倒置相差显微镜观察细胞生长,免疫细胞化学法鉴定培养细胞.结果 原代培养的细胞30min开始贴壁生长,24-48h生长最快,3~5d呈铺路石样排列.免疫细胞化学可见培养细胞胞浆中人Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应,证实培养的细胞为血管内皮细胞,且纯度达97.5%.结论 用本实验中的方法消化、分离血管内皮细胞可获得高纯度的内皮细胞,细胞数量多、污染少且成活率高.  相似文献   

4.
人脐静脉内皮细胞体外培养及其相关研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
血管内皮损伤是许多疾病如动脉粥样硬化等发生的始动机制。血管内皮细胞在体外的成功培养为研究内皮细胞功能及其在各种疾病的发生发展中所起的作用提供了良好的基础。人脐静脉内皮细胞取材容易,操作方便,目前已成为血管内皮细胞体外实验的的重要材料。近年来,人脐静脉内皮细胞在妊娠高血压综合征、静脉血栓等方面的研究中有很高的应用价值。  相似文献   

5.
目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外培养模型,并对其进行鉴定,为体外血管内皮细胞及相关疾病的研究搭建桥梁。方法采用0.1%Ⅰ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含20%胎牛血清,80%M199不完全培养基,1%终浓度为50μg/mL内皮细胞生长复合物,1%终浓度为100μg/mL肝素钠,1%青-链霉素,1%L-谷氨酰胺)中培养,待细胞80%以上融合后,用0.25%的胰酶和0.25%的EDTA消化传代,并在倒置显微镜下观察细胞形态,用免疫荧光法对细胞进行鉴定。结果原代培养的HUVECs在24 h后完全贴壁,2~3 d可达80%的融合,倒置显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排布,免疫荧光显示细胞胞浆中Ⅷ因子相关抗原阳性。结论 0.1%Ⅰ型胶原酶消化HUVECs方法便于操作,细胞获得量多且生长状态良好。  相似文献   

6.
人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的:建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外分离、培养方法。方法:采用胶原酶对HUVEC进行消化,加入内皮细胞生长因子和肝素促其生长,以胰蛋白酶消化贴壁细胞,继续传代培养。细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法。结果:经相差显微镜观察及Ⅷ因子染色证实培养的细胞是内皮细胞。结论:实验建立的HUVEC培养方法简便,细胞获得量多。  相似文献   

7.
人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4~5 h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。  相似文献   

8.
人脐静脉内皮细胞的分离培养与鉴定*   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:建立体外培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的方法,并对培养的细胞进行鉴定,为人工血管立体环化打下基础。方法:胶原酶灌注法分离HUVEC,用含胎牛血清的RPMI-1640营养液培养。光镜、电镜、免疫荧光方法进行形态学鉴定,放射免疫法测定其细胞活性与分泌激素功能。结果:分离的HUVEC体外培养一周左右可长成单层,光镜下为多角形,呈铺路石子状排列。透射电镜可见W-P小体。荧光染色Ⅷ因子相关抗原阳性,培养上清中含高浓度6-keto-PGF1a与ET。结论:所培养的细胞为HUVEC,并具有其细胞生物学功能。  相似文献   

9.
人脐静脉内皮细胞体外培养与鉴定新方法探索   总被引:6,自引:1,他引:6  
目的:探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养与鉴定新方法。方法:Ⅰ型胶原酶消化、分离HUVEC,含内皮细胞生长添加物(12.5mg/L)、肝素(100mg/L)的体积分数20%胎牛血清-M199培养系统培养HUVEC。流式细胞术和免疫荧光法检测其endoglin(CD105)、血小板源内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达。结果:HUVEC均表达CD105和CD31;HUVEC CD105^ 百分率为96.56%,CD31^ 90.42%。结论:该培养系统简便、可行,CD105和CD31有助于鉴定HUVEC的分离纯度。  相似文献   

10.
于霞  郑磊  蔡贞  熊石龙  王前 《热带医学杂志》2011,11(1):8-10,114
目的研究不同培养基对人脐静脉内皮细胞体外培养生长的影响,探讨内皮细胞的最佳体外扩增培养条件。方法取健康产妇分娩后脐带,用胶原酶Ⅰ消化后得脐静脉内皮细胞,进行原代培养,并用免疫荧光染色的方法对细胞进行鉴定,传代培养时则分别采用RPMI-1640培养基和EGM-2培养基,倒置显微镜观察两种培养条件下细胞的生长状态,同时利用流式细胞仪检测其生长周期,对比培养效果。结果 EGM-2组内皮细胞生长良好,2d后贴壁生长的细胞可达90%。EGM-2组S期细胞比例为(29.07±1.48)%,RPMI-1640培养基组S期细胞为(17.58±3.49)%,二者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 EGM-2培养基更适合人脐静脉内皮细胞的体外传代扩增培养。  相似文献   

11.
人脐静脉内皮细胞的继代培养   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的:研究人血管内皮细胞在体外长期传代培养的方法,方法;采用0.125%胰酶EDTA液灌注冲洗法,从人脐静脉中分离在管内皮细胞(HUVEC);用0.02%EDTA消化传代EC,用新生小牛视网膜提取物(RDS)作为生长促进剂。应用光镜,电镜,免疫组化等方法对原代和继代内皮细胞进行鉴定和生长特性观察,结果:人脐静脉内皮细胞继代培养36代,原代和继代内皮细胞胞浆中含有W-P小体和Ⅷ因子相关抗原;传代EC  相似文献   

12.
人脐静脉内皮细胞的长期传代培养   总被引:1,自引:0,他引:1  
本实验在纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)预处理的塑料培养皿上,用199培养基(内含20%小牛血清)。成功地将人脐静脉内皮细胞以1:2-3比率传代培养两个月,传15代。培养细胞具有第Ⅷ因子相关抗原;胞质中存在Weible-Palade小体;细胞倍增时间为24h;培养4—6天,细胞单层融合,复苏成功率为70%左右;染色体检查2n=46。培养50天内,条件培养液中均检测到Von Willebrand因子和6-keto-PGF。  相似文献   

13.
人脐静脉内皮细胞体外培养方法的改进   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVECS)的体外培养方法,为血管内皮细胞的大规模体外实验研究奠定基础.方法 比较0.25%胰酶、0.1%Ⅰ型胶原酶、0.25%胰酶与0.1%Ⅰ型胶原酶(1∶1)3种消化方法分离HUVECs的细胞数量和活细胞率的差异.观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对细胞生长的影响.细胞鉴定采用形态学观察和免疫荧光法检测.结果 0.1%Ⅰ型胶原酶单独或混合0.25%胰酶消化分离细胞数量较多、活细胞率较高(P<0.05).VEGF能明显促进细胞增殖能力,延长细胞自然生长时间.细胞呈单层"铺路石"样排列,免疫荧光细胞化学法染色,激光买聚焦检测可见胞质中绿色荧光颗粒.结论 Ⅰ型胶原酶与胰酶混合消化HUVECs是获取血管内皮细胞的一种经济且效果较好的方法,添加VEGF能明显促进细胞增殖,可用于构建体外研究血管内皮细胞的模型.  相似文献   

14.
目的:观察混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcels,HUVEC)培养中的作用。方法:在含20%(体积分数)混合脐血浆的内皮细胞培养体系中进行HUVEC的原代和传代培养,并对培养细胞进行纯度鉴定。同时用噻唑蓝试验观察不同体积分数的混合脐血浆对HUVEC增殖活力的影响。结果:20%(体积分数)的混合脐血浆对HUVEC培养有明显支持作用,该体系培养的HUVEC经第Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ:Ag)和Ⅰ型荆豆凝集素(UEAⅠ)鉴定纯度可达93.1%。结论:20份混合的脐血浆可以代替内皮细胞生长因子成功地用于HUVEC的培养,以获得高纯度可传代的内皮细胞。  相似文献   

15.
目的:建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的人脐静脉内皮细胞的分离、培养方法。方法:采用0.1%IV型胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞,将其置于含有20%胎牛血清、内皮细胞生长因子及肝素的M199培养基内培养,倒置显微镜观察内皮细胞生长情况,免疫荧光方法鉴定内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原。结果:细胞呈梭形或椭圆形生长,单层铺路石状排列或呈漩涡状排列。免疫荧光检测结果显示细胞的胞浆内有大量绿色荧光颗粒,Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。结论:实验建立的人脐静脉内皮细胞分离和培养方法简单、可靠,且能获得足够数量和高纯度的血管内皮细胞,为进一步研究人体大血管内皮细胞的功能奠定了较好的基础。  相似文献   

16.
目的探讨成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在体外对内皮细胞的增殖和小管形成的影响。方法应用不同浓度FAP(0、300、600、1 200 pmol/L)处理人脐静脉内皮细胞EA.hy926,采用MTT检测内皮细胞增殖,划痕愈合实验分析细胞迁移并使用三维胶模型研究内皮细胞的小管形成。结果与正常对照组相比,FAP可以诱导内皮细胞迁移和增殖(P<0.05),并促进内皮细胞小管形成(P<0.01),其中600 pmol/L浓度的FAP处理组作用较其他组明显增强(P<0.01)。结论 FAP在体外可促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。此发现为进一步研究FAP在血管生成中的机制提供了理论基础。  相似文献   

17.
Ligustrizinipromotesprostacyclinreleasefromculturedhumanumbilicalcordveinendothelialcells¥HeHongbing(何红兵);ZhongJianping(仲剑平);...  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号