关于CD34-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34-造血干细胞的存在,改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点.近来大量资料对其功能、与CD34+细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道,现对此做一综述.     

关于CD34^-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34^-造血干细胞的存在，改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点。近来大量资料对其功能、与CD34^ 细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道，现对此做一综述。     

三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析

CD34抗原的相对分子质量为105000～120000，选择性表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面，该抗原在原始造血中表达最强，随着细胸分化、其表达水平逐渐减弱直至消失，因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床。脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞，被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源。     

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。     

CD_(34)~+造血祖细胞的研究进展

CD_(34)抗原是造血祖细胞表面的一个较为特异的抗原;CD_(34)抗原在造血祖细胞的分化过程中起着某种调节作用;CD_(34)细胞可以重建并维持机体的正常造血,利用CD_(34)抗原的一些单克隆抗体可以富集造血祖细胞,用于造血干细胞移植和基因治疗。本文对CD_(34)抗原的生物学特性、CD_(34)~+细胞的特性及分离检测方法、临床应用进行了综述。     

粒系集落刺激因子对健康供者单核细胞及NK细胞表型的影响

目的探讨粒系集落刺激因子(G-CSF)作为造血干细胞动员剂对健康供者外周血单核细胞及NK细胞表型的影响。方法对25名自愿捐献的健康供者应用G-CSF作造血干细胞动员,分别于动员前、动员后(干细胞采集当日)、干细胞采集后7d及采集后1个月收集健康供者的外周血标本,用流式细胞仪检测细胞数量及细胞免疫表型。结果动员后外周血单核细胞和NK细胞的绝对数量分别动员前增高4.96和2.02倍,采集后7d二者都恢复到动员前水平。动员前后单核细胞表面CD14的抗原表达的差异无统计学意义(P>0.05),但HLA-DR抗原表达强度明显减弱(P<0.05),于采集后7d恢复到动员前水平;动员前后NK细胞表面CD16抗原表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论G-CSF作为造血干细胞动员剂可以使健康供者外周血的单核细胞和NK细胞数量在短期内增加;使单核细胞表面HLA-DR抗原表达在短期内减弱,但不影响单核细胞表面CD14抗原及NK细胞表面CD16抗原的表达。     

脂肪干细胞的免疫学性质分析

目的分析脂肪干细胞的免疫学性质分析。方法选取5名符合抽脂要求的健康志愿者,抽取25g脂肪组织并培养,以流式细胞术查看目标细胞分化群表面抗原与人体组织相容性抗原表达特点,并观察淋巴细胞、异体脂肪干细胞共同培养下增殖情况。结果脂肪干细胞表面CA29、CD40、CD90与组织相容性抗原Ⅰ均可阳性表达,CD31、CD34、CD45与组织相容性抗原Ⅱ均阴性表达;对照组平均CPM值为1805±152,研究组平均CPM水平为1811±164,两组平均CPM对比无统计学差异,P0.05。结论脂肪干细胞无内皮细胞、造血系统污染问题,异体脂肪干细胞并未诱发淋巴细胞增殖,表明脂肪干细胞排斥反应小,可尝试应用于组织工程、细胞治疗工作的主要同种异体细胞应用。     

CD34+造血干细胞在"心肌样"微环境中转化为心肌样细胞的可能性

目的一般认为CD34+细胞只能向血细胞分化,观察CD34+造血干细胞在"心肌样"微环境中转化为心肌样细胞的可能性.方法实验于2004-01/12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成.①选用成年健康SD大鼠30只及出生1～3 d SD大鼠乳鼠.在体外分离、培养CD34+造血干细胞,并将CD34+造血干细胞与分离出的新生乳鼠心肌细胞共培养.②将新生乳鼠心肌细胞的培养环境模拟为在体心肌细胞的生活环境即心肌样微环境.③在细胞培养瓶内加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记CD34+细胞.在倒置显微镜下观察CD34+造血干细胞形态学变化,用免疫细胞化学法检测心肌特异性肌钙蛋白T.结果①CD34+造血干细胞与心肌细胞共培养3 d,CD34+细胞变成长杆状,即呈现较为一致的极性排列,靠近心肌细胞的CD34+细胞形态学改变更早、更明显.②共培养的细胞经免疫细胞化学染色,发现部分5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的CD34+细胞核在荧光显微镜下呈现红色,同时其细胞浆心肌特异性肌钙蛋白T表现阳性,说明确实有部分CD34+造血干细胞转化成幼稚心肌细胞.结论将CD34+造血干细胞与心肌细胞共培养,CD34+造血干细胞可以分化为心肌样细胞,从而验证了体外"心肌样"微环境可以促使CD34+造血干细胞向心肌样细胞转化的潜能.     

小鼠造血干细胞表型及其分离纯化的研究进展

无论在纯化标记方面还是生物功能方面,造血干细胞都是目前研究最深入的成体干细胞,具有很大的临床应用价值。但是由于造血干细胞以极低比例存在于小鼠骨髓中,这给其分离纯化及功能研究带来了一定的难度。利用细胞表型和功能染料,通过免疫磁珠和流式细胞术可分离纯化骨髓和外周血中的造血干细胞。40年来,已有很多表面免疫表型确定可以富集小鼠造血干细胞,并且不断有新的免疫表型被发现,CD34-c-Kit+Sca-1+lineage marker-(CD34-LSK)是最常用的小鼠造血干细胞表型。本文就小鼠造血干细胞表型及分离纯化的研究做一综述。     

脐血造血干/祖细胞部分归巢受体功能缺陷的研究

本研究旨在了解来源于脐血造血干细胞表面部分归巢受体(homing receptor)的功能缺陷并探讨体外干预的效果和可行性。用流式细胞术对来源于脐血的CD34+造血干/祖细胞表面的P、E选择蛋白配体活性基团表达、CD26的表达及活性进行检测,同时检测骨髓和外周血作为对照。采用岩藻糖基转移酶体外处理脐血CD34+造血干/祖细胞并检测其表面选择蛋白配体活性基团的表达水平。结果表明,CD26在脐血、骨髓及外周血的CD34+造血干/祖细胞表面的表达率分别为:(7.62±0.63)%,(6.35±0.89)%和(6.18±0.91)%(p0.05),其活性分别为:67.15U/1 000个细胞(1U=1pmol/min),26.85U/1 000个细胞和20.95U/1 000个细胞,脐血CD34+造血干/祖细胞表面CD26的活性明显高于其它两者(p0.001)。P选择蛋白配体活性基团在脐血、骨髓和外周血CD34+造血干/祖细胞表面的表达率分别为:(83.46±6.33)%,(15.65±0.89)%和(80.17±6.85)%;E选择蛋白配体活性基团的表达率为:(25.31±1.03)%,(26.34±0.89)%和(29.79±1.78)%(p0.05)。脐血CD34+细胞体外行岩藻糖基化工程后,E选择蛋白配体活性基团表达率由(25.31±1.03)%提高至(63.23±1.08)%。结论:3种不同来源CD34+造血干/祖细胞表面的CD26分子表达无明显差别,但其活性不一,脐血的CD34+造血干/祖细胞CD26活性最高,骨髓的次之,外周血的最低。P选择蛋白配体活性基团在脐血及外周血CD34+造血干/祖细胞表面的表达无明显差别,但在骨髓干细胞表面表达偏低。体外经岩藻糖基化工程处理的脐血CD34+造血干/祖细胞可明显上调其表面E选择蛋白配体活性基团的表达。     

CD34^＋造血干细胞在“心肌样”微环境中转化为心肌样细胞的可能性

目的：一般认为CD34^＋细胞只能向血细胞分化，观察CD34^＋造血干细胞在“心肌样”微环境中转化为心肌样细胞的可能性。方法：实验于2004-01／12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成。①选用成年健康SD大鼠30只及出生l-3dSD大鼠乳鼠。在体外分离、培养CD34^＋造血干细胞，并将CD34^＋造血干细胞与分离出的新生乳鼠心肌细胞共培养。②将新生乳鼠心肌细胞的培养环境模拟为在体心肌细胞的生活环境即心肌样微环境。③在细胞培养瓶内加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记CD34^＋细胞。在倒置显微镜下观察CD34^＋造血干细胞形态学变化，用免疫细胞化学法检测心肌特异性肌钙蛋白T。结果：①CD34^＋造血干细胞与心肌细胞共培养3d，CD34^＋细胞变成长杆状，即呈现较为一致的极性排列，靠近心肌细胞的CD34’细胞形态学改变更早、更明显。②共培养的细胞经免疫细胞化学染色，发现部分5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的CD34^＋细胞核在荧光显微镜下呈现红色，同时其细胞浆心肌特异性肌钙蛋白T表现阳性，说明确实有部分CD34^＋造血干细胞转化成幼稚心肌细胞。结论：将CD34^＋造血干细胞与心肌细胞共培养，CD34^＋造血干细胞可以分化为心肌样细胞，从而验证了体外“心肌样”微环境可以促使CD34^＋造血干细胞向心肌样细胞转化的潜能。     

当前造血干细胞研究面临的挑战

在新千年到来的时刻 ,综观一下造血干 /祖细胞基础和临床研究当前面临的众多难题 ,会有益于探讨我国实验和临床血液学如何赶上国际先进水平的。造血干细胞究竟是CD3 4阳性还是阴性 ?近年来国际文献中有些报告发现CD34/Lin阴性细胞具有长期重建造血的活性 ,引起了广泛的注意。从发育生物学观点来看 ,CD34 Lin- 细胞来自CD34- Lin- 的论点是合理可信的。已定向发育为造血系统的干细胞 (即造血干细胞 )都来自尚未定向的胚胎中胚层干细胞 ,所以CD34 Lin- 细胞起源于CD34- Lin- 细胞。当干细胞分化为各系的祖细胞 ,出现髓 /淋巴各系的专一…     

外周血干细胞移植

造血干细胞是各系造血细胞的祖细胞,通过增殖分化和自我更新维持长期造血。由于干细胞的含量甚少,难以鉴定,目前主要采用功能检测和免疫学表型分析的研究方法。造血干细胞的免疫表型用半固体培养方法检测干细胞所需的时间长,影响因素较多,难以标准化和重复性差。这就促使人们应用免疫表型和流式细胞仪进行干细胞的鉴定。CD34抗原主要在人     

人胚胎骨髓间充质干细胞的初步培养及鉴定

目的分离培养并鉴定人胚胎骨髓间充质干细胞。方法抽取流产胎儿股骨骨髓,梯度离心,取含有骨髓间充质干细胞的低密度血小板层进行培养;免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原;酶细胞化学法测定细胞碱性磷酸酶活性。结果培养的细胞呈现纺锤形外观;细胞膜抗原CD29、CD44有阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达;碱性磷酸酶检测呈阴性反应。结论培养的细胞不是骨髓中的造血干细胞,是处于未分化阶段的骨髓间充质干细胞。     

造血干细胞的表面标志和临床应用

目的:探讨造血干细胞的来源、细胞表面标志及其临床应用前景。资料来源:应用计算机检索Medline1989-01/2006-12和Embase1986-01/2006-12期间有关造血干细胞、干细胞移植的文献,检索词“hematopoietic stem cells,stem transplantation”,并限定文章语言种类为English。检索万方数据库1990-01/2006-04期间相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“造血干细胞,干细胞移植”。资料选择:对资料进行初审,选取实验包括造血干细胞来源、细胞表面标志及造血干细胞的移植相关文献,删除明显不随机临床实验研究。资料提炼:共检索32篇关于研究造血干细胞的来源、细胞表面标志及造血干细胞的移植的随机和未随机实验研究,27篇符合纳入标准。排除的5篇实验是重复的同一研究。资料综合:干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞。造血干细胞是干细胞的一种。成年人血液造血干细胞主要存在于骨髓,约占骨髓细胞的0.05%。其主要功能是通过不断分化产生各系造血祖细胞,终生为造血系统提供新细胞来源。造血干细胞群体存在着不同发育阶段的细胞,但血液干/祖细胞与其后续阶段的血细胞相比缺乏直接的形态学特征,所以对造血干细胞表面抗原的表达规律的研究,将为造血干细胞的进一步研究打下重要的基础。造血干细胞的应用包括造血干细胞移植和作为基因治疗的靶细胞。结论:人体内可能存在CD34 和CD34-两种造血干细胞,造血干细胞可以促进造血功能的重建,并可作为基因治疗的靶细胞。     

CD34~-造血干细胞的研究进展

造血干细胞(HSCs)的表型一直是研究的重要课题。一般认为:CD34~ 是骨髓HSCs的标志之一。但近年研究发现:存在一CD34~- HSCs群,它能长期重建造血并可分化为CD34~ 细胞,可能是CD34~ 细胞的前身细胞。本文对CD34~- HSCs从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

人造血干细胞的研究进展

造血干细胞具有自我更新和向各系分化的潜能。本文综述了近几年人造血干细胞的研究进展,人造血干细胞是CD34~+HLA-DR~-和系相关抗原阴性;在流武细胞仪上表现为低度或中度前角光散射和低度垂直光散射,形态上类似于小到中等大小的淋巴细胞;处于休止期;不表达SBA 受体;在体外能形成母细胞集落和高增殖潜能集落并能进行长期培养,在体内能重建造血。     

造血干细胞的研究进展

造血干细胞具有自我更新和多向性分化潜能,尤其神经干细胞移植后能产生各种血细胞类型以及CD34^-Lin^-细胞群体,经HESS－5基质细胞滋养并补充生长因子,转移得到CD34^ ,SRC检测人－鼠造血干细胞异体移植重建造血,为进一步认识和研究干细胞创建新开端。     

造血干细胞的研究进展

造血干细胞具有自我更新和多向性分化潜能,尤其神经干细胞移植后能产生各种血细胞类型以及CD34~-Lin~-细胞群体,经HESS-5基质细胞滋养并补充生长因子,转换得到CD34~+,SRC检测人-鼠造血干细胞异体移植重建造血,为进一步认识和研究干细胞创建新开端。     

AC133(CD133)与急性白血病

AC133(CD133)抗原是继CD34之后新发现的又一重要的造血干/祖细胞表面标志。近年发现部分造血系统恶性疾病尤其是急性白血病存在AC133表达异常,而且白血病细胞上AC133的表达可能与急性白血病的FAB分型、细胞或分子遗传学异常的发生、CD34等相关抗原表达、治疗疗效及临床预后等相关。本文对此进行综述。