白虎追风丸对佐剂关节炎大鼠滑膜细胞分泌TNF—α的影响

目的：研究白虎追风丸对佐剂性关节炎（AA）大鼠滑膜细胞分泌肿瘤坏死因子－α（TNF-α）的影响。方法：采用消化分离的方法获得滑膜细胞,放免法检测原代大鼠滑膜细胞培养上清液中TNF－α的水平。结果：白虎追风丸可明显下调AA大鼠滑膜细胞分泌TNF－α的水平。     

白虎追风丸对大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞分泌IL—1β的影响

目的：研究白虎追风丸对佐剂性关节炎（AA）大鼠滑膜细胞分泌白细胞介素1－β（IL-1β）的影响。方法：采用消化分离的方法获得滑膜细胞,采用放射免疫分析法检测原代大鼠滑膜细胞培养上清液中IL－1β的水平。结果：白虎追风丸可以明显下降AA大鼠滑膜细胞分泌IL－1β的水平。结论：提示白虎追风丸是通过下调IL－1β分泌水平素抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖。     

白虎追风丸对佐剂性关节炎大鼠血液中氧自由基的影响

目的：探讨白虎追风丸对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其作用机理。方法：随机对照观察白虎追风丸组、对照组大鼠关节肿胀情况及血液中脂质过氧化物(LPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量和活性。结果：白虎追风丸不仅抑制足跖肿胀，而且降低从大鼠过高的LPO水平，同时还使其过低SOD和GSH-PX活性增高或恢复正常。结论：白虎追风丸对从大鼠有抗炎和抗氧化作用。     

麝香乌龙丸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织病理形态及TNF-α,IL-6表达的影响

目的:观察麝香乌龙丸对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织病理形态及滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(A)10只,造模组30只.造模组大鼠于右后足跖皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)0.1 mL造成AA模型.将造模成功的造模组随机分为模型组(B)、麝香乌龙丸低、高剂量组(C,D,n=10),ig给予1.0,2.0 g·kg-1的麝香乌龙丸,每日1次;A,B组每日ig生理盐水2 mL/只.30 d后,取跖趾关节,HE染色观察滑膜组织病理形态,免疫组化法检测滑膜组织中TNF-α,IL-6的表达.结果:麝香乌龙丸低、高剂量组滑膜组织破坏程度较模型组明显减轻;TNF-α,IL-6在麝香乌龙丸低、高剂量组中表达均较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05),麝香乌龙丸低、高剂量组比较无统计学意义.结论:麝香乌龙丸能改善AA大鼠滑膜组织病理损害,下调TNF-α,IL-6的表达.     

调督通脉针灸法对佐剂性关节炎大鼠滑膜TNF-α、IL-10表达的影响

目的:研究调督通脉针灸法对佐剂性关节炎(AA)大鼠膝关节滑膜中TNF-α、IL-10表达的影响,以探讨类风湿关节炎(RA)发病机制,为针灸治疗RA提供理论依据。方法:完全弗氏佐剂诱导Wistar大鼠AA,观察AA大鼠多发性关节炎指数的变化,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测膝关节滑膜中TNF-α、IL-10的表达水平。结果:针灸第7天和第14天,针灸能明显抑制大鼠多发性关节炎指数(P0.05,P0.01),且调督通脉针灸法优于普通针灸法(P0.05);针灸第14天采集标本,RT-PCR法观察到针灸能降低AA大鼠膝关节滑膜中TNF-α的表达水平,提升IL-10的表达水平,且调督通脉针灸法优于普通针灸法(P0.05)。结论:调督通脉针灸法能够降低AA大鼠膝关节滑膜中TNF-α的表达,提升IL-10的表达水平,具有双向调节作用,为针灸临床治疗RA提供理论依据。     

类风关Ⅰ号对佐剂性关节炎大鼠抗炎镇痛作用的研究

目的：观察清热化湿、通络止痛方类风关Ⅰ号对佐剂性关节炎（AA）大鼠的炎症干预及镇痛作用,并探讨其可能的作用机理。方法：采用AA大鼠为模型,将实验动物随机分为5组：正常组,模型组,阳性对照组,类风关I号高、低剂量组,分别给予蒸馏水、不同剂量的中药液、雷公藤多甙片混悬液灌胃治疗30天,用放射免疫法分别测定各组大鼠血液、滑膜中的TNF-α、IL-1β、SP以及脊髓后角中的SP水平。结果：与正常组比较,模型组大鼠血液和滑膜中的SP、TNF-α、IL-1β和脊髓后角中的SP水平明显增高（P〈0.05）;与模型组比较,各给药组大鼠血液、滑膜中TNF-α、SP及滑膜中IL-1β水平均显著降低（P〈0.05）;与阳性对照组比较,中药高剂量组能显著降低脊髓后角的SP水平（P〈0.05）。结论：类风关Ⅰ号在佐剂性关节炎大鼠具有抗炎镇痛作用,其作用机理可能与降低血清及滑膜中的TNF-α、IL-1β、SP及中枢SP水平有关。     

痹证1号对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用及踝关节病理学变化的影响

目的:观察痹证1号对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用及对踝关节病理学变化的影响。方法:通过AA大鼠模型,观察痹证1号对AA大鼠足肿胀的影响,酶联免疫吸附法检测血清IL-1β、TNF-α水平,光镜观察大鼠关节滑膜病理组织形态学变化。结果:痹证1号具有明显减轻大鼠足肿胀作用,明显降低血清IL-1β、TNF-α水平,对大鼠关节滑膜病理组织形态学变化有明显改善作用。结论:痹症1号对大鼠佐剂性关节炎有明显的抗炎作用,其作用机制与降低炎性因子TNF-α及IL-1β水平有关。     

三妙丸类方及川牛膝对急性痛风性关节炎大鼠炎症反应的作用机制研究

目的：从NF-κB信号传导通路角度探讨三妙丸类方及引经药川牛膝对急性痛风性关节炎大鼠炎症反应的作用及机制。方法：70只大鼠随机取10只作为正常组,其余60只大鼠制备急性痛风性关节炎大鼠模型,随机分为模型组、二妙丸组、三妙丸低剂量组、三妙丸高剂量组、川牛膝低剂量组、川牛膝高剂量组。观察各组大鼠踝关节周径的变化;药物干预3天后,取大鼠滑膜组织,运用ELISA法、Westernblot法测定细胞因子水平及NF-κBP65蛋白表达水平;对滑膜组织进行HE染色,观察其病理学变化。结果：各药物干预组大鼠滑膜组织NF-κBP65、TNF-α、IL-6、IL-8、滑膜组织病理学积分低于模型组（P〈0.01,P〈0.05）。结论：三妙丸类方及川牛膝通过下调NF-κBP65蛋白表达,抑制TNF-α、IL-6、IL-8的水平,减轻急性痛风性关节炎大鼠踝关节的炎症反应,以三妙丸高剂量组疗效尤为显著;三妙丸抗炎作用优于二妙丸,机制在于引经药川牛膝对二妙丸的药效协同作用。     

豨莶醇对佐剂性关节炎大鼠血清细胞因子及滑膜细胞凋亡蛋白的影响

目的探讨豨醇(奇任醇)对佐剂性关节炎(AA)大鼠血清细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及滑膜细胞Bcl-2、Fas-L蛋白表达的影响。方法采用弗氏完全佐剂建立SD大鼠AA模型,分别给予奇任醇、氢化可的松、阿司匹林 环磷酰胺治疗;ILISA法测定实验大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平;踝关节滑膜细胞进行Bcl-2、Fas-L免疫组化染色,运用计算机图像分析系统对染色结果进行分析。结果与正常组相比,模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01),滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),Fas-L表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,奇任醇组大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.01、0.05);滑膜细胞Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05),Fas-L蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论奇任醇可降低AA大鼠血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平,下调滑膜细胞Bcl-2蛋白表达、促进Fas-L蛋白表达。     

血府逐瘀提取物对佐剂关节炎大鼠治疗作用的研究

目的:探讨活血化瘀药物治疗类风湿性关节炎(RA)的机制。方法:以佐剂性关节炎(AA)大鼠为模型,观察血府逐瘀提取物对其血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)及滑膜组织血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。结果:AA大鼠血清TNF-α和NO及滑膜组织中VEGF的表达均高于正常对照组;高、中剂量血府逐瘀提取物组的TNF-α和NO及滑膜组织中VEGF的表达低于模型组。结论:血府逐瘀提取物可改善AA大鼠足趾肿胀程度,降低病理评分,降低异常升高的TNF-α、NO及抑制滑膜组织中VEGF的过度表达,得出瘀血闭阻可能是RA的发病机制之一。     

舒筋活络胶囊对佐剂关节炎大鼠的作用及部分机制研究

目的：观察舒筋活络胶囊对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis AA）大鼠的作用,并探讨其作用机制。方法：设正常对照组、模型对照组、阳性对照组（正清风痛宁40mg/kg）、舒筋活络胶囊3.32g/kg、1.66 g/kg、0.83g/kg组,除正常对照组外,其余各组用弗氏完全佐剂造模,于致炎前3天灌胃给药,观察药物对AA大鼠原发性和继发性足肿胀、体重变化的影响;采用硝酸还原法测各组血清中NO含量;放射免疫法测各组滑膜组织中TNF-α、PGE2含量。结果：舒筋活络胶囊对AA大鼠原发性和继发性关节肿胀均有显著抑制作用;舒筋活络胶囊3.32g/kg组在第21天左右对AA大鼠体重有明显增加作用;同时其3.32g/kg组对AA模型大鼠血清中升高的NO含量表现出显著的抑制作用;显著抑制AA模型大鼠滑膜组织中TNF-α、PGE2含量。结论：舒筋活络胶囊对佐剂性关节炎模型大鼠的原发性炎症及继发性关节炎有显著的抑制作用,此作用可能与减少AA大鼠血清NO含量,降低滑膜组织中TNF-α、PGE2含量有关。     

清络通痹颗粒对胶原关节炎大鼠滑膜炎的影响

目的：探讨清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞的影响及机理。方法：建立胶原性关节炎大鼠（CIA）模型，同时设正常对照组。给药自第7天始，持续21天。取滑膜，检测滑膜细胞增殖能力和滑膜细胞分泌TNF-α的量。结论：一定剂量的清络通痹颗粒可抑制CIA大鼠滑膜细胞的过度增生，这与其调节与滑膜增生相关的细胞因子有关。     

关节炎丸对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的实验研究

目的：探讨关节炎丸治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法：制作实验性关节炎（Adjuvant Arthritis,AA）大鼠动物模型,观察关节炎丸对大鼠血浆TNF-α及IL-1β影响,并与雷公藤阳性对照组进行比较。结果：关节炎丸组抑制炎症组织中TNF-α及IL-1β优于雷公藤组。结论：关节炎丸提高免疫通过影响炎症介质的释放而产生抗炎镇痛和抗风湿作用。     

类风湿关节炎大鼠模型的构建及昆明山海棠对大鼠佐剂性关节炎的干预研究

目的:制作和比较佐剂性关节炎大鼠模型及胶原性关节炎大鼠模型,选择外观及病理变化更明显的模型来观察昆明山海棠制剂对其的干预作用.方法:构建AA和CIA大鼠模型,采用肿胀度评分法观察造模前后大鼠关节变化情况,造模后28 d分离关节滑膜、切片HE染色,观察滑膜炎症,ELISA方法检测血清中细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)水平;观察昆明山海棠对大鼠关节肿胀度、血清细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)及关节滑膜组织炎症的影响.结果:从造模后16 d开始AA组和CIA组的关节肿胀度升高(P＜0.01);AA组在出现肿胀的时间及程度上与CIA组比较有显著差异(P＜0.01);造模后28 d,两个模型组血清中IL-1β、TNF-α水平升高,TGF-β水平下降(P＜0.01),同时,两个模型组间也存在显著差异(P＜0.05);造模后,AA组滑膜组织有大量炎性细胞浸润、纤维素样渗出及出现丰富的血管翳;经过昆明山海棠的干预,高、中剂量组关节肿胀得到明显改善(P＜0.01);昆明山海棠高、中剂量能抑制血清中IL-1β、TNF-α水平及提高TGF-β水平(P＜0.01).结论:AA大鼠模型与CIA模型比较出模时间更早,症状更明显;昆明山海棠能改善AA大鼠关节肿胀度,抑制血清中细胞因子的水平,对AA大鼠有明显的治疗作用.     

乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用

目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPe Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用.方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平.结果:提取的CⅡ分子量约为118kD～120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P＜0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P＜0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P＜0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P＜0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P＜0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性.     

复方木防己汤对AA大鼠的治疗作用研究

目的：研究复方木防己汤对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其机制。方法：应用弗氏完全佐剂注射诱发大鼠产生踝关节佐剂性关节炎，18天开始给予复方木防己汤灌胃，39天测量AA大鼠体重，脾及胸腺指数，足肿胀度。HE染色观察大鼠踝关节组织病理学变化，ELISA法测定大鼠血清中IL—1β，TNF-α的生成量。结果：复方木防己汤能缓解AA病情，使足肿胀度下降，体重及脏器指数改善，关节水肿减轻，淋巴细胞浸润明显减少，滑膜增生受抑制。血清IL-1β，TNF-α的产生量明显下降。结论：复方木防己汤对AA大鼠的治疗作用，可能与其下调IL-1β，TNF-α的生成量有关。     

白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的影响

考察湿热环境下热痹模型大鼠特征性甲基化基因及白虎加桂枝汤对热痹特征性甲基化基因的调控作用。采用大鼠足底注射CFA并复合湿热环境制备热痹大鼠模型。造模后第15天给予白虎加桂枝汤干预治疗30 d。造模后每隔4 d检测足容积,第45天采用HE染色法检测大鼠踝关节组织病理学,Me DIP-Seq测序法检测大鼠膝关节滑膜甲基化水平并以取差集的方法筛选热痹模型特征性甲基化基因,悬浮芯片检测血清中IL-1β,IL-17,TNF-α,EGF,IL-12p70,IL-4,IL-6及IFN-γ含量水平,qRT-PCR检测大鼠滑膜特征性甲基化基因mRNA相对表达水平。实验发现,与完全弗氏佐剂性关节炎(AA)模型组比较,热痹模型组足肿胀度和病理严重程度仅轻微增加;与空白组比较,2个模型组全基因Cp G岛均呈低甲基化状态,热痹模型组甲基化水平最低,且AA模型组共705个差异性甲基化基因,热痹模型组共2 418个差异性甲基化基因;与AA模型组比较,热痹模型组存在1 287个差异性甲基化基因,其中共974个差异性基因甲基化下调,这些差异性基因显著分布于32个KEGG Pathway中(P0.05),此外启动子区上热痹特征性甲基化基因共52个,其中36个甲基化下调基因,16个甲基化上调基因;药物干预后,白虎加桂枝汤显著改善热痹模型组足肿胀度和病理损伤,且明显降低IL-1β,TNF-α,EGF,VEGF,IL-17,IL-12p70的含量水平(P0.05),还能抑制热痹特征性甲基化下调基因Ahcy及Rpl3 mRNA的表达,促进热痹特征性甲基化上调基因Agxt mRNA的表达水平。可见,热痹模型滑膜基因存在独特的甲基化水平变化,而白虎加桂枝汤可能针对性回调热痹特征性基因的甲基化水平,达到治疗热痹的作用。     

白虎追风胶囊对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用研究

白虎追风胶囊是白虎追风丸进行工艺改进而成的有效制剂,该方是由石膏、桂枝、知母、白芍、制川乌、黑老虎、细辛等药组成,具有清热祛湿,驱风通络止痛的功效,临床上治疗类风湿性关节炎(RA)有良效[1],实验研究表明该方水煎液有较好的抗炎、消肿、止痛作用[2].大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)是常用的RA实验模型之一,其组织病理及血液变化与人类相似,常用于抗风湿药物的筛选和研究[3].本文利用此模型以观察白虎追风胶囊对大鼠关节炎的治疗作用.现报道如下.     

不同浓度青藤碱对大鼠滑膜细胞因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的青藤碱(SIN)体外作用对佐剂性关节炎(从)大鼠滑膜细胞TNF-αmRNA、IL-1 β mRNA、IL-10 mRNA表达的影响。方法：以佐剂性关节炎大鼠为模型，收集滑膜细胞培养，随机分为5组：正常对照组，从组，AA SIN 30μg／mL，AA SIN 60μg／mL，AA SIN 120μg／mL，反转录PCR检测TNF-α mRNA、IL-1b mRNA、IL-10 mRNA的表达。结果：佐剂性关节炎后滑膜细胞内TNF-α mRNA、IL-1 β mRNA、IL-10 mRNA的表达均显著升高，青藤碱在一定的浓度范围内呈浓度依赖性抑制TNF-α mRNA、IL-1b mRNA的表达，而对IL-10 mRNA的抑制效应与浓度无关。结论：青藤碱可能通过降低滑膜细胞内TNF-α mRNA及IL-1 β mRNA的表达而发挥治疗AA的效应。     

龙胆苦苷对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用

目的:通过研究龙胆苦苷(GPS)对佐剂性关节炎大鼠(AA)的治疗作用,探讨其对于大鼠炎症反应的影响。方法:36只雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只,分别为正常组,模型组,GPS低、中、高剂量组、甲氨蝶呤(MTX)组。除正常组,其余大鼠建立AA模型,在大鼠右后趾足垫内皮内注射0. 1 m L完全弗氏佐剂(CFA)。造模成功后,各组连续给药7 d,1次/d,GPS低、中、高剂量组灌胃给药剂量为30,60,120 mg·kg~(-1),MTX组腹腔注射给药剂量为0. 2 mg·kg~(-1),正常组与模型组灌胃给予等量的生理盐水。开始给药后每天使用数字游标卡尺及足趾容积测量仪记录各组大鼠的足厚度、足体积,第7天使用小动物活体成像以及苏木素-伊红染色的方法对大鼠的踝关节进行X射线检查和病理组织学检查。实验结束后大鼠腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定血清中白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定滑膜组织中IL-6,TNF-αm RNA水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠大鼠足体积及足厚度,血清IL-6,TNF-α水平和滑膜组织中IL-6,TNF-αm RNA水平显著升高(P 0. 01)。与模型组比较,各给药组大鼠足体积及足厚度结果显著下降(P 0. 01);血清TNF-α水平显著下降(P 0. 01);滑膜组织中IL-6,TNF-αm RNA水平明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。此外,X射线检查及病理组织学检查结果发现GPS对于AA大鼠的踝关节也有保护作用。结论:龙胆苦苷通过抑制血清IL-6,TNF-α水平及滑膜组织中IL-6,TNF-αm RNA水平发挥对AA大鼠的保护作用。