HBV血清学标记物与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义

目的探讨HBV血清学标记物（HBV-M）定量与HBV-DNA定量检测的相关性及其对肝病患者诊断、预后的意义。方法分别使用化学发光微粒子免疫分析技术（CMIA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）对186例患者的乙肝病毒DNA（HBV-DNA）和乙肝两对半进行定量检测。结果186例患者的血清学模型包括下列4种：组合IHBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）83例,血清HBV—DNA阳性率为95．18％,DNA平均含量为1．01×10^8拷贝／mL。组合ⅡHBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）93例,血清HBV-DNA阳性率为49．46％,DNA平均含量为8．11×10^5拷贝／mL。组合ⅢHBsAg（＋）HBcAb（＋）3例,血清HBV—DNA阳性率为33．3％,DNA平均含量为5．37×10^2拷贝／mL。组合ⅣHBsAb（＋）HBcAb（＋）7例,血清HBV-DNA阳性率为0％,DNA平均含量小于5．0×10^2拷贝／mL。在组合Ⅰ中HBeAg定量〉1000的e抗原均值为1287．77,血清HBV—DNA含量对数均值为7．480,HBeAg定量〈1000的e抗原均值为329．22,血清HBV—DNA含量对数均值为4．913。两小组的HBeAg含量与荧光定量PCR结果进行独立性检验、差异性检验P值〈0．05,4种组合DNA阳性率为组合Ⅰ〉组合Ⅱ〉组合Ⅲ〉组合Ⅳ。4种组合HBV的ELISA的阳性模式与荧光定量PCR结果进行独立性检验、差异性检验P值均小于0．05。结论HBV—DNA含量与e抗原具有显著相关性,选择乙肝两对半血清学标志和HBV—DNA定量检测,对于临床乙肝感染、复制及其传染性和抗病毒治疗效果的监测具有重要意义。     

VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA实时荧光定量检测方法的建立及初步应用

目的建立检测血管内皮生长因子-C（VEGF-C）mRNA和血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FO-RT-PCR）方法,并在食管癌组织中作初步应用。方法采用TaqMan荧光探针技术,分别以pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,应用循环阈值（Ct）定量起始模板,建立检测食管癌组织的VEGF-CmRNA和VEG—FR-3tuRNA的实时FQ-RT-PCR方法。结果所建方法的线性范围：VEGF-CmRNA和VEGFR-3mRNA均为10^3～10^8拷贝／μg总RNA;测定VEGF-C mRNA低值的批内、批间变异系数（CV）分别为7．07％和9．04％,测定VDGF-CmRNA高值的批内、批间CV分别为7．55％和10．28％;测定VEGFR-3mRNA低值的批内、批间CV分别为7．69％和12．49％,测定VEGFR-3mRNA高值的批内、批间CV分别为7．31％和9．17％。24例淋巴结转移食管癌患者癌组织VEGF-CmRNA和VEG—FR-3 mRNA的测定范围分别为3．69×10^4～9．44×10^6拷贝／μg总RNA和2．54×10^4～8．03×10^6拷贝／μg总RNA,均值分别为2．18×10^6拷贝／μg总RNA和2．27×10^6拷贝／μg总RNA。16例无淋巴结转移食管癌患者癌组织VEGF-CmRNA和VEGFR-3mRNA的测定范围分别为2．32×10^3～5．85×10^5拷贝／μg总RNA和7．31×10^2～8．21×10^4拷贝／μg总RNA,均值分别为1．08×10^5拷贝／μg总RNA和1．68×10^4拷贝／μg总RNA。提示有淋巴结转移的食管癌组织VEGF-C和VEG—FR-3基因表达水平上调。结论本组建立的检测VEGF-CmRNA和VEGFR-3mRNA的实时FQ-RT-PCR方法灵敏、准确、稳定、重复性好,可供VEGF-C、VEGFR-3基因表达的临床检测和研究应用。     

人工肝和肝移植术后的乙肝三系统定量观察

目的观察人工肝技术和肝移植手术对重症乙肝患者乙肝病毒标志物的影响。方法乙肝三系统定量采用时间分辨免疫荧光技术,乙肝病毒DNA定量采用实时荧光定量PCR法。结果28例实施人工肝技术的重型肝炎患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果为：HBsAg171．19±32．10ng／mL,HBeAg0．03±0．029NCU／mL,抗-HBe3．97±4．61NCU／mL,抗-HBc5．98±3．31NCU／mL,HBVDNA（1．1×10^7）±（6．81×10^6）copy／mL和HBsAg168．14±39．40ng／mL,HBeAg0．02±0．023NCU／mL,抗-HBe3．95±4．34NCU／mL,抗-HBc6．41±3．13NCU／mL,HBVDNA（1．1×10^7）±（6．23×10^6）copy／mL。P值均大于0．05,差异无统计学意义。26例施行肝移植手术的患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果分别为HBsAg144．65±77．00ng／mL,HBeAg0．02±0．028NCU／mL,抗-HBe4．32±6．43NCU／mL,抗-HBc6．04±4．88NCU／mL,HBV DNA（1．0×10^7）±（6．89×10^6）copy／mL和HBsAg6．54±3．32ng／mL,HBeAg0．02±0．016NCU／mL,抗-HBe4．79±6．44NCU／mL,抗-HBc5．97±4．64NCU／mL,HBV DNA（1．04×10^2）±（3．40×10^2）copy／mL。除抗-HBe和抗-HBc,P值大于0．05外,其他项目P值均小于0．05,差异有统计学意义。结论肝移植手术可有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,人工肝支持系统虽不能有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,但可改善重型肝炎患者体内严重紊乱的内环境,为肝移植手术创造合适的条件和机会,赢得宝贵时间。     

慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA定量与血清中γ干扰素、白细胞介素10、转化生长因子β1水平的关系

目的定量检测慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织中HBVcccDNA与血清中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）、转化生长因子β1（TGF—β1）水平,探讨CHB患者肝组织中HBVcccDNA定量与机体免疫的关系。方法应用荧光定量聚合酶链反应方法（FQ-PCR）检测CHB患者肝组织内HBV cccDNA水平,同时检测肝组织、血清HBV DNA,并用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）定量测定血清IFN-γ、IL-10、TGF-β1水平。结果①患者的血清中IFN-γ水平显著低于正常对照组：IL-10及TGF-β1水平均显著高于正常对照组,（546．29±208．68）pg／L vs（762．82±78．58）pg／L,（403．71±177．48）pg／L vs（228．86±61．39）pg／L,（608．57±142．88）pg／L vs（373．86±86．18）pg／L（均P〈0．05）。②肝组织HBVcccDNA定量与肝组织HBV DNA及血清中HBV DNA定量均呈正相关（r=0．856、0．602,均P〈0．01）,肝组织HBV DNA定量与血清中HBV DNA也呈正相关（r=0．745,P〈0．01）。③肝组织HBVcccDNA定量和肝组织HBV DNA定量均与血清中IFN-γ呈负相关（r=-0．679、-0．523,均P〈0．01）,血清HBV DNA定量与IFN-γ呈负相关,但差异无统计学意义（r=-0．198,P〉0．05）;肝组织HBVcccDNA定量、肝组织HBV DNA定量及血清HBV DNA定量与IL-10呈正相关（r=0．723、0．657、0．458,均P〈0．01）,与TGFβ1均无明显相关性（P〉0．05）。结论肝组织内HBVcccDNA、HBV DNA、血清中HBV DNA载量与血清中IFN-γ、IL-10水平有相关性,说明病毒活跃及持续感染,除了取决于病毒本身的生物学特性外,更重要的是与宿主的免疫功能状态有关。     

乳汁中检测HBV．DNA及其临床意义

[目的]建立乳汁中检测HBV．DNA的方法并探讨阳性乳汁的产妇喂养方式。[方法]从2006年1年内，在我院产科分娩的HBsAg阳性，ALT正常的产妇，分娩后24h内取初乳，应用罗氏公司PCR仪，深圳匹基公司试剂，采用荧光定量PCR法检测HBV．DNA。检测前乳汁处理选用低温（2℃～4℃），高速离心（13000r／min）10min，二次循环。[结果]血清HBsAg阳性孕妇12例，其中eAg^＋阳性3例（25％），eAb^＋ 9例（75％），配对检测血清，脐血和乳汁中的HBV．DNA，在eAb^＋的9例母血、脐血和乳汁中、HBV．DNA均〈5×10^2 cop／ml，而eAg^＋3例血清中HBV．DNA为4×10^7～5×10。^8 cop／m1，脐血中3．7—4．9×10^5 cop／ml，乳汁中4×10^5～8×10^3 cop／ml，ALT、AST全部正常。[结论]乳汁中检测HBV．DNA关键在于检测前处理，应力求简单、方便。血清中HBV双阳性高病毒载量的产妇，乳汁中病毒核酸全为阳性，不宜母乳喂养。     

基因芯片技术在乙型肝炎病毒耐药和分型检测中的价值

目的通过基因芯片技术快速检测临床血清样本中乙型肝炎病毒的基因亚型和耐药突变情况。方法同时用荧光定量PCR和基因芯片2种方法检测211例临床慢性HBV感染血清样本,并用DNA测序对基因芯片HBV分型和耐药结果进行验证。结果211例样本荧光PCR定量结果均大于或等于5．0×10^2IU／mL,基因芯片检出阳性210例,未检出的1例样本定量值小于1．0×10^3Iu／mL。210例基因芯片检测阳性的样本,基因芯片检测显示耐药突变病例67例,占31．9％;基因亚型2种,其中B型137例,占65．2％,c型69例,占32．9％,B、C混合感染4例,占1．9％。上述210例样本经DNA测序验证,基因亚型和耐药突变类型完全符合。结论基因芯片技术具有准确、灵敏、高通量的特点,适用于临床乙型肝炎病毒基因分型和耐药突变检测。     

人Toll样受体3基因表达水平的实时荧光定量PCR测定

目的建立检测人Toll样受体3（TLR3）mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-Pert）法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平。方法用Beacon Designer2．1软件设计TLR3基因特异性引物和荧光探针，逆转录扩增目的片段，构建重组体pMD18-T-TLR3作为定量标准品。在ABIPrism7000型荧光定量分析仪上，通过荧光强度达到一定阈值时的循环数来定量起始模板，建立标准曲线；并检测30名正常人及20例原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者，20例慢性乙型肝炎肝硬化患者外周血PBMCTLR3基因的荧光强度，根据标准曲线及循环阈值，由软件自动计算样本中TLR3mRNA的起始拷贝数。结果FQ-RT-PCR检测TLR3基因的线性范围为10^2～10^8拷贝数／μl RNA（r=0．9974），内参β-actin的线性范围为10^3～10^8拷贝数／μl RNA（r=-0．9984）；高浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为6．7％和8．7％，低浓度样本批内及批间CV分别为12．3％和14．0％，30名健康人，20例PBC及20例慢性乙型肝炎肝硬化患者PBMC中均有TLR3 mRNA的表达，分别为3．46×10^2～4．51×10^3拷贝／μg RNA、4．92×10^2～1．42×10^4拷贝／μg RNA和2．58×10^2～7．17×10^3拷贝／μg RNA。结论成功建立检测TLR3 mRNA的FQ-RT-PCR方法，可作为临床和基础研究TLR3基因表达的工具。     

慢性乙型肝炎患者外周血中共价闭合环状DNA的检测

目的 研究慢性乙型肝炎患者外周血中HBVcccDNA的存在状况.方法 采用荧光聚合酶链反应(PCR)法、PCR-微流芯片法对22例慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中HBVcccDNA进行平行检测,同时检测其血清HBV DNA含量、HBV M并进行相关性分析,以2例急性戊型肝炎、2例慢性丙型肝炎为对照.结果 22例慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中HBVcccDNA分别检出10例和7例,其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证;血清HBV DNA阳性者16例;HBVcccDNA阳性者血清HBV DNA均阳性;对照组上述指标均阴性.结论 慢性乙型肝炎患者外周血血清、白细胞中存在HBVcccDNA;外周血HBVcccDNA与血清HBV DNA存在一定关联.     

慢性乙型肝炎患者HBV DNA含量与血清生化指标的分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清中病毒血症水平与病情程度的相关性。方法采用FQ-PCR法检测252例慢性乙型肝炎轻、中、重度患者血清HBVDNA含量及相关生化指标。结果慢性乙型肝炎轻、中、重度组患者HBV DNA含量分别为（4.85±1.0）×10^8-10^7copy/ml、（3.82±0.8）×10^6-10^5copy/ml、（1.8±0.5）×10^5-104copy/ml;血清总胆红素含量分别为（12.64±4.25）μmol/L、（50.18±9.46）μmol/L、（262.96±30.16）μmol/L;白/球比值分别是1.51±0.23、1.61±0.26和0.97±0.25。结论慢性乙型肝炎轻、中、重度各组之间的HBV DNA含量有显著性差异;中、重度组病毒含量与总胆红素水平呈负相关,与白/球比值呈正相关。     

乙型肝炎病毒标志物定量检测及肝组织病理学检测应用于慢性乙型病毒性肝炎患者的临床意义

目的 探讨慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者肝组织HBVcccDNA、HBsAg和HBcAg,肝组织及血清HBV DNA,与肝组织病理学改变间的关系.方法 以65例CHB患者为研究对象,检测其血清HBV DNA含量,并行肝脏穿刺术取肝组织,免疫组织化学染色法检测肝组织HBsAg和HBcAg的表达、荧光定量聚合酶链反应检测...     

CCND1和myc的mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的临床研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）法检测细胞周期蛋白D1（CCND1）基因和核内原癌（myc）基因表达水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ—PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和151例乳腺癌患者外周血中CCND1和myc的表达量。结果CCND1和myc表达水平在健康女性体检者、良性乳腺疾病扣乳腺癌患者中分别为（1．45±0．12）×10^-3,（1．45±0．11）×10^-3,（4．15±1．02）×10^-3;（1．15±0．07）×10^-3,（1．15±0．08）×10^-3,（2．86±1．51）×10^-3,它们在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学显著性意义（P〉0．05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0．05）,β2-微球蛋白在三组间差异无统计学显著性意义（P〉O．05）。CCND1和myc联合检测的灵敏度高于单个基因的检测。结论FQ—PCR技术是高灵敏度、高特异度的快速定量检测CCND1和myc的方法,两者联合检测可有效提高乳腺癌的诊断灵敏度。     

慢性乙型肝炎的血清血小板衍生生长因子BB检测相关性分析

目的通过对慢性乙型肝炎（CHB）患者血清血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）与血清HBV DNA水平、肝功能损害程度和肝纤维化的相关性分析,以探讨血清PDGF-BB水平在CHB中的应用价值。方法对CHB血清PDGF-BB水平与血清HBV DNA水平、肝功能、血清肝纤维化指标进行相关性分析;并将CHB分为轻度、中度、重度3组,分析血清PDGF-BB水平与血清HBV DNA水平、肝功能分级和肝纤维化指标的相关性。结果 CHB患者血清PDGF-BB水平与肝功能、血清肝纤维化指标均显著相关（P〈0.01）;与肝功能分级和血清肝纤维化指标均呈正相关（P〈0.05）;与血清HBV DNA水平无相关性,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血清PDGF-BB水平与CHB病情发展密切相关,不但可反映CHB患者的肝功能损害程度,也可反映CHB肝纤维化程度,可应用于CHB的肝功能和肝纤维化程度的评估。     

慢性乙型肝病患者外周血单个核细胞以及血清中HBVcccDNA的对照检测

目的评价慢性乙型肝病患者外周血中HBVcccDNA存在状态及临床意义。方法采用微粒子酶免分析法（MEIA）、荧光聚合酶链反应（PCR）法、PCR-微流芯片法检测17例慢性乙型肝炎患者、12例终末期肝病肝移植术后患者血清HBVM、HBVDNA、HBVcccDNA、外周血单个核细胞（PBMC）中HBVcccDNA。结果17例慢性乙型肝病患者、12例肝移植患者外周血血清、白细胞中HBVcccDNA检出率分别为10／17、7／17和1／12、8／12,血清HBVDNA检出率分别为12／17、0／12。结论血清HBVcccDNA的来源可能不只是肝组织;慢性乙型肝病患者外周血PBMC中HBVcccDNA低于血清HBVcccDNA及HBV DNA,HBVcccDNA、HBV DNA二者联合检测更能准确判断病毒复制;肝移植术后血清病毒复制不活跃,外周血低滴度HBVcccDNA的存在可能为乙型肝炎的复发提供了基础。     

乙肝病毒相关终末期肝病患者肝移植术后外周血HBVcccDNA检测

目的通过外周血HBVcccDNA与HBVDNA及HBVM的相关性检测分析，探讨乙肝病毒相关终末期肝病患者原位肝移植术后外周血HBVcccDNA检测的临床价值。方法采用MEIA法、荧光PCR法、PCR-微流芯片法检测肝移植术后患者血清HBVM，HBVDNA，HBVcccDNA，白细胞中HBVcccDNA，部分患者进行动态监测，以3例非乙型肝炎、3例HBV携带者、3例急性乙肝（AHB）、51例慢性乙肝（CHB）、29例肝硬化（LC）、10例慢性重症肝炎（CSH）、9例原发性肝癌（PHC）为对照。结果34例乙肝病毒相关终末期肝病患者肝移植术后外周血白细胞中14例HBVcccDNA阳性、20例阴性，血清HBVDNA均阴性。对照组108例患者中44例白细胞HBVcccDNA阳性、68例血清HBVDNA阳性，其中37例HBVcccDNA阳性者HBVDNA亦阳性，7例HBVcccDNA阳性者HBVDNA阴性，该7例患者HBVcccDNA或HBVDNA动态检测发现，HBVcccDNA早于HBVDNA出现，晚于HBVDNA消失。对照组中17例HBV相关慢性肝病与12例肝移植患者血清、白细胞中HBVcccDNA对照检测阳性率比分别为10／17，6／17，1／12，5／12。肝移植患者白细胞中HBVcccDNA阳性率与对照组无显著差异（P〉0．05），但血清HBVDNA，HBVcccDNA显著低于对照组（P〈0．01）。结论乙肝病毒相关终末期肝病患者肝移植术后血清HBVDNA复制不活跃，外周血HBVcccDNA的存在可能为乙肝的复发提供了基础。     

慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV DNA载量相关因素分析

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织HBV DNA载量和血清及外周血单个核细胞（PBMC）内病毒载量、肝组织炎症活动度（G）、纤维化分期（S）、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）等的相关性。方法 50例CHB患者均接受肝活检。部分肝组织行常规病理检查,另应用荧光定量PCR定量检测部分肝组织、PBMC与血清中病毒载量。同时检测患者血清ALT水平。结果 直线相关分析显示,肝组织中与血清中病毒载量高度正相关（r=0．77977,P〈0．0001）;与PBMC中病毒载量中度正相关（r=0．53855,P〈0．0001）。另外与血清ALT水平呈低度正相关,与肝组织G、S无明显相关性。逐步回归分析方程为Y=0．54960X1＋0．83890X2-0．36643X3＋0.00174X4（Y：肝组织病毒载量;X1：血清病毒载量;X2：PBMC中病毒载量;X3：纤雏化分期;X4：血清ALT水平）。结论 CHB患者血清中和PBMC中病毒载量可用于推测肝组织中病毒载量水平。     

99例男性慢性乙型肝炎患者HBV DNA载量与肝功能水平的相关性分析

目的探讨99例男性慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)DNA载量与肝功能指标水平的相关性。方法收集99例CHB患者空腹血清标本;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定各组HBV DNA载量;采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;进行临床相关性分析。结果男性CHB患者HBV DNA载量与ALT和AST水平均呈正相关(r分别为0.278、0.300;P0.05);男性乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性CHB患者HBV DNA载量与ALT水平呈正相关(r=0.286,P0.05);男性HBeAg阳性CHB患者HBV DNA载量与AST水平也呈正相关(r=0.341,P0.05);男性HBeAg阴性CHB患者HBV DNA载量与ALT和AST水平均无明显相关性(P0.05)。结论 HBeAg阳性男性CHB患者的HBV DNA载量与肝损伤程度密切相关,对于评估CHB病情的严重程度有一定的临床意义。     

不同分期胃癌患者外周血淋巴细胞Foxp3 mRNA表达水平的研究

目的 采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,研究不同分期胃癌患者外周血淋巴细胞Foxp3 mRNA的表达水平.方法 普通RT-PCR结合胶回收制备Foxp3 mRNA-CDS标准品,利用标准品制备定量PCR标准曲线,对曲线进行灵敏度、精密度和特异性分析,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测40例胃癌和8例正常对照外周血Foxp3 mRNA.结果 获得Foxp3全长CDS标准品,标准曲线范围（2.8×10^2）～（2.8×10^8）拷贝/μl,最低检测值280拷贝/μl,批内和批间变异系数（CV）＜5%.Foxp3基因在胃癌患者外周血表达水平显著高于健康对照（P＜0.01）,表达水平与肿瘤分期显著相关（P＜0.05）.结论 Foxp3基因上调表达与胃癌的发生、发展和预后有关.     

自身淬灭荧光定量PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

目的利用自身淬灭探针技术建立一种能检测慢性粒细胞白血病（CML）bcr／abl融合基因mRNA的实时荧光定量PCR方法，为CML的诊断、疗效观察以及微量残留白血病（MRD）的监测提供有效手段。方法用逆转录PCR方法（RT—PCR）扩增K562细胞的bcr／abl融合基因，A-T克隆法构建定量标准模板；设计自身淬灭荧光引物（探针），建立自身淬灭荧光定量逆转录PCR方法（FQ—RT—PCR），并对该方法的线性检测范围、灵敏度、重复性、稳定性进行检测；然后检测临床白血病患者骨髓标本bcr／abl mRNA。结果建立的FQ—RT—PCR方法可检测10copies／μl的bcr／abl重组质粒，并能从10^5个正常细胞中检出1个白血病细胞，该方法的批内、批间变异系数（CV）分别为2．1％、6．1％，线性检测范围为10^2-10^9copies／μl。25例CML患者bcr／abl融合基因mRNA表达量中位数为4．50×10^4[（0．45—89．00）×10^4]copies／μg RNA，其中11例慢性期初诊患者bcr／abl mRNA表达量中位数为5．45×10^4[（2．95—19．30）×10^4]copies／μg RNA，6例急变期患者bcr／abl mRNA表达量中位数为13．00×10^4[（4．10～89．00）×10^4]copies／μg RNA，8例慢性期治疗后复查患者bcr／abl mRNA表达量中位数为2．35×10^4[（0．45—5．12）×10^4]copies／μg RNA，CML急变期患者bcr／abl融合基因表达水平与慢性期患者之间差异有统计学意义（q=3．41，P〈0．05）。PCR产物经电泳分析，其中21例CML患者为b3a2型，4例CML患者为b2a2型；3例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者中，1例有bcr／abl mRNA表达，为b2a2型。结论所建立的基于自身淬灭探针技术的实时荧光定量PCR检测方法灵敏、特异、重复性好，结果用拷贝数表示，准确可靠，利于标准统一。可广泛用于CML的诊断、疗效观察以及MRD的监测。     

HBV—DNA和HBV—M定量检测的相关性研究

目的探讨HBV—DNA和乙型肝炎五项（HBV—M）定量检测之间的相关性及其在乙型肝炎感染诊断中的应用价值。方法收集我院363例乙型肝炎和既往感染HBV患者血清,实时荧光定量PCR检测HBV—DNA,同时以时间分辨免疫荧光技术（TRFIA）定量检测HBV-M,用统计软件分析两者之间的关系。结果乙型肝炎大三阳（HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性）患者外周血HBV—DNA阳性率为92．9％（79／85）,平均DNA含量（4．31±1．64）×10^6Copies／ml。乙型肝炎小三阳患者（HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性）外周血HBV．DNA阳性率为47．7％（105／220）,平均DNA含量（2．47±2．21）×10^4Copies／ml。HBsAg、HBcAb阳性3例,HBV-DNA均阳性,HBV—DNA为（5．73±1．14）×10。Copies／ml。余人群外周血HBV—DNA均阴性。HBV—DNA拷贝量与HBeAg载量呈正相关（r=0．59,P=0．041）;HBV。DNA拷贝量与HBsAg含量相关一致性不明显（r=0．221,P=0．077）。结论HBV—M与HBV—DNA之间既有联系又有不同,临床上可以多项检测来估计病情,判断疗效。     

二维激光法和电阻法计数血小板的比较研究

目的对二维激光法和电阻法血小板计数进行比较研究。方法用德国拜耳ADVIA 2120（Bayer-2120，二维激光法）、美国雅培3700（CD-3700，电阻法）2台仪器及手工法分别对70份血液样本进行血小板计数，其中对照组30例、大血小板组（大血小板＋＋＋）20例、小红细胞组（平均红细胞容积〈60f1）20例。结果对照组检测结果为Bayer-2120：（172．9±89．2）×10^9／L，CD-3700：（165．8±82．7）×10^9／L，手工法：（169．8±78．7）×10^9／L；大血小板组检测结果为Bayer-2120：（70．0±31．8）×10^9／L，CD-3700：（30．9±17．4）×10^9／L，手工法：（65．2±30．1）×10^9／L。小红细胞组检测结果为Baye-2120：（150．6±100．6）×10^9／L，CD-3700：（194．8±124．3）×10^9／L，手工法：（144．6±91．3）×10^9／L。对照组3种计数方法差异无统计学意义（P〉0．05）；在病理情况下，大血小板组：二维激光法与手工法比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；而电阻法与二维激光法和手工法比较，其结果明显偏低，差异有统计学意义（P〈0．01）。小红细胞组：二维激光法与手工法结果接近，差异无统计学意义（P〉0．05）；而电阻法结果明显高于其他2种方法所得结果，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在正常情况下，3种计数方法呈高度相关，差异无统计学意义；在病理情况下的大血小板、小红细胞，特别是临界值的血小板计数，电阻法结果差异较大，而二维激光法更接近手工法所检测结果，计数结果比较准确、可靠。