分离兼屏蔽计数技术在放射免疫分析中应用

本文应用活性炭与氧化铋相结合,制备了一种新的放射免疫分析(RIA)分离兼屏蔽试剂,应用于胆酸、T4的RIA中。该方法与聚乙二醇(PEG)分离方法比较,其标准曲线相关系数(r)分别为0.997和0.990,差别无显著意义(P>0.5)。本方法限用小于分子抗原,非特异结合较高,有待进一步改进。     

832炭片的研制和应用

在放免分析中,如何选择优良的分离剂,将抗原抗体复合物(B)及游离抗原(F)分开,是建立完善的放免方法的重要环节。理想的分离剂应具有下列条件;(1)B和F分离快速而完全;(2)操作简便,试剂来源容易,价格低,便于推广;(3)不受其它试剂的干扰,重复性良好。常用的分离剂有离子交换树脂、硅镁吸附剂、活性炭、第二抗体、硫酸胺、聚乙二醇(PEG)等,其中最常用者为PEG及大分子包被活性炭,PEG法     

固相放射免疫测定血清甲状腺素的临床应用价值

<正> 用放射免疫分析法(RIA)测定血清甲状腺素(T_4)在诊断甲状腺疾病中有重要意义,但以往应用的双抗体法或聚乙二醇(PEG)法,操作比较复杂,流程较长,病人需等候几天才能获得结果。固相放射免疫法Solid—Phase Radioimmunoassay(SPRIA)是近十余年来放射免疫技术的一项新进展,它利用固相抗体(或抗原)作为免疫吸附剂,使其与相应的抗原(或     

胰岛素可磁化固相放射免疫分析

用胰岛素(INS)免疫豚鼠制得INS抗血清,通过氯胺T法碘化标记INS制备~(125)I-INS,结合本室研制的可磁化固相二抗分离试剂(DAMP),建立了血清INS可磁化固相放射免疫分析法(RIA)。本法灵敏度达0.1μU,回收率>95％,批内变异(CV)<2.3％,批间CV<7.4％。并具有不需离心,操作简便,分离迅速的特点。经临床初步应用,获得满意的结果。     

非放射性标记免疫法测定性激素水平

性激素测定法,国内外一般均采用放射免疫测定法(RIA),而用非放射性标记免疫法如磁分离酶联免疫测定法,目前国内已有 应用.磁分离酶联免疫技术是80年代中期瑞士Serono诊断中心发明的一种非同位素免疫检测先进技术,称为磁性抗体免疫技术 (MAIA).该技术在游离型标记抗体和标记抗原.抗体复合物分离中具有完全和快速的优点.我们采用Biochem Immunosystems公司的产品,P(孕酮)、T(睾酮)和PRL(催乳素)试剂盒,用 SEROZYME-Ⅱ酶联免疫测定仪,测定了50例标本性激素P、T、 PRL的值,同时用放射免疫法(RIA)测定,结果经统计学处理,对磁分离酶联免疫测定,即MAIA法进行探讨.     

用单克隆抗-HBe对HBeAg上新免疫结合位点的探讨

我们使用日本提供的单克隆抗-HBe(a)和(b)对RIA试剂盒研制过程中探讨了我国部分HBeAg阳性血清中存在新免疫结合位点问题。通过实验分析:该位点的特点为(1)RIA法双抗体夹心法用单抗-HBe(b)同时为包被/标记物时,有新位点的血清有较高计数。(2)该位点比b决定簇弱。(3)该位点与b决定簇有交叉免疫与a决定簇无明显交叉。该位点本质待深入研究。     

鼠降钙素基因相关肽两种不同检测方法比较

目的 对放射免疫分析法(RIA)和酶联免疫分析法(ELISA)检测鼠降钙素基因相关肽(CGRP)的效能进行评价.方法 分别采用RIA法和ELISA法检测CGRP标准品、质控品和100例正常MCAO模型大鼠血浆标本中CGRP浓度,作精密度和比对分析.结果 RIA法和ELISA法检测正常MCAO模型大鼠血浆中CGRP结果具有显著相关性(P＜0.01),相关系数r分别为0.986和0.962.结论 RIA法和ELISA法检测CGRP结果一致,符合科研检测的要求.     

ECLIA测定TPOAb与RIA测定TPOAb、TGAb结果的比较

目的:比较电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)和放射免疫分析法(RIA)检测TPOAb、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)水平,探讨其临床应用价值。方法:选取215例甲状腺病患者,行甲状腺细针抽吸(FNAB)检查,并采集空腹静脉血,用RIA法分别进行TPOAb、TGAb检测,其中59例自身免疫性甲状腺病(AITD)患者ECLIA法同步行TPOAb检测。结果:1RIA测定TPOAb和TGAb存在正相关。桥本甲状腺炎(HT)患者TPOAb和TGAb阳性率分别为86.5%和56.8%;Graves病(GD)患者为75.6%和56.1%;非AITD患者为16.3%和8.7%。2ECLIA与RIA法检测TPOAb具有相关性。结论:两种方法检测结果的相关性好,RIA法检测TPOAb较TGAb灵敏度高。     

放射免疫批间RIA50质控应用

我们设计了RIA50曲线,以试剂盒OCV(最佳条件质控)为基础,以竞争抑制曲线或结合曲线两变量值分别制作抑制曲线和直线回归线.正常血清或靶值血清,在同等环境条件下的放射性计数以纵坐标平行线与直线相交点,再引直线与横坐标相交,此中轴符合RIA50%结合率灵敏度最佳(RIA50)理论,Ag和Ag与Ab的竞争抑制可逆平衡,其剂量为B/(B+F)-B=1,为此,在实验室条件下RIA50曲线是批间质控校正正常值血清批漂移,同时也可作为RIA方法(试剂盒健全性)的质控曲线.本工作应用于临床RIA增加了报告结果的可比性,现将方法与结果报告如下.     

用双水相体系分离血红蛋白(HB)

利用聚乙二醇（PEG）／硫酸铵双水相系统分离纯化盐析得到了血红蛋白(HB)样品,考察了PEG相对分子质量、PEG质量分数、 （NH4)2SO4质量分数、pH、温度等因素对HB分离的影响。结果表明PEG双水相系统的最佳分离条件为：wPEG400=20％,w(NH4) 2SO4=20%,pH=7,温度为30 ℃。在此条件下HB分配系数可达到65,回收率可以达到89.5%,纯度达到80.5%。     

血栓素B_2酶免疫分析

本文介绍了血小板释放TXB_2的酶免疫分析法。用混合酸酐法交联β-半乳糖苷酶与TXB_2。通过双抗体沉淀法分离免疫复合物与游离TXB_2。以4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷作底物测定酶促反应产物的荧光强度。该方法TXB_2最低检测值<0.008pmol(<3.125pg),批内变异系数为5.9％,批间变异系数为5.4％。酶免疫分析法与放射免疫分析法测定血小板样品进行比较,直线相关系数r=0.955,回归方程Y=0.811x+1.397。     

应用"双质控法"、加强"即刻法"室内质控

目的应用“双质控法”,加强、完善“即刻法”室内质控,并用于抗-HIV抗体检测的质量监控.方法采用ELISA法进行HIV抗体检测.每次更换试剂时,使用原试剂和新批号试剂同板检测3次,并采用同一质控血清.原试剂的质控结果参与原数据组按“即刻法”分析,新试剂的质控结果参与原试剂数据组按“即刻法”分析,3次均不向负值偏移至告警或失控时,从第3次开始新数据组用“即刻法”分析.更换质控血清时,两种质控血清同板检测3次,即在同一试剂板中分别加入原质控血清和新质控血清;原质控血清的检测结果参与原数据组按“即刻法”分析,新质控血清的检测结果从第3次开始新数据组用“即刻法”分析.结果采用“双质控法”较好地解决了“即刻法”开始几次检测结果无法控制的状况.结论 “双质控法”进一步加强、完善了“即刻法”在ELISA检测中的质量监控作用.     

碱性成纤维细胞生长因子的放射免疫分析

目的：建立及评价碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）的１２５Ⅰ标记及放射免疫分析（ Ｒ Ｉ Ａ）方法。方法：采用氯胺 Ｔ 氧化法进行 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ １２５Ⅰ标记,并以双抗体 Ｐ Ｅ Ｇ 的 Ｒ Ｉ Ａ 测定家兔血清 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ水平。结果：１２５Ⅰ标记ｂ Ｆ Ｇ Ｆ的碘利用率为８１９８％ ,比放射性为３０３ Ｍ Ｂｑ／μｇ,放化纯度达 ９５０％以上;ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 放免分析灵敏度可达 ０４ ｎｇ。结论：本研究为 ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 的１２５Ⅰ标记及定量测定提供了简便可靠的方法。     

Establishment and preliminary application of spermidine radioimmunoassay with 125I-labelled monoclonal antibody and solid phase antigen.

Purified anti-spermidine monoclonal antibody was labelled with radioactive iodine by the Iodogen method and spermidine-bovine serum albumin (SPD-BSA) conjugate was used to coat polystyrene beads as solid phase antigen. The new solid phase 125I-labelled spermidine radioimmunoassay (RIA) depends on the competition between spermidine in the sample and the solid phase antigen for the limited amount of 125I-labelled monoclonal antibody. The sensitivity of this assay was 10 ng/ml higher than that of liquid RIA for spermidine with 14C-labelled spermidine. The coefficients of variation (CV) within and among batches were 4% and 13% respectively. The sample-batch capacity was increased from 20 (liquid RIA with 14C-labelled spermidine) to 150-200 by using this method. Because of its simplicity, the solid phase RIA kit is very convenient for population survey. This RIA could be used to determine spermidine in saliva for the diagnosis of precancerous lesions. In a preliminary study saliva spermidine levels in different populations were measured among 130 normal subjects, 202 esophageal epithelial hyperplasia cases treated with anti-tumor B for 5 years, 207 esophageal epithelial hyperplasia cases as control, and 55 esophageal cancer patients. The levels were 1,795 +/- 1,481, 3,470 +/- 6,981, 9,753 +/- 17,641 and 18,090 +/- 21,509 ng/ml, respectively, with the saliva spermidine levels in precancerous and cancer patients being significantly higher than that of normal subjects (P less than 0.001); the level in patients treated with anti-tumor B was significantly lower than that of controls (P less than 0.001). This decreased saliva spermidine content was coincident with the 47.3% reduction of canceration rate seen in precancerous patients after a 5-year treatment with anti-tumor B.     

Ⅳ型胶原放射免疫分析方法的建立及临床应用

采用单克隆技术制备鼠抗人Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）单克隆抗体,用氯胺-T方法标记,应用免疫竞争法建立Ⅳ-C放射免疫分析方法,其检测范围20μmg/L～500μmg/L。其方法通过特异性、精密度、准确性、亲和常数等实验方法学检验,表明Ⅳ-C放射免疫分析方法符合临床应用要求。应用该方法检测30例肝炎患者、15例肝硬化患者、35例Ⅱ型糖尿病（NIDDM）患者、25例甲亢患者,除NIDDM、甲亢患者外,其余患者血清浓度明显高于正常人（P<0.01）;NIDDM、甲亢患者Ⅳ-C血清浓度高于正常人（P<0.05）。结论Ⅳ-C血清浓度检测在肝病、肾病及相关疾病的研究中有一定的临床价值。     

重症肌无力患者血清MuSK抗体水平检测及其临床意义

目的探讨肌肉特异性酪氨酸激酶抗体（muscle specific tyrosine kinase antibody, MuSKAb）与血清抗体阴性重症肌无力x（ seronegative myasthenia gravis, SNMG ）的关系。方法应用基因工程方法获得MuSK蛋白,建立MuSKAb的放射免疫法（IPA）检测体系。IPA法测定MG患者156例、健康对照组30例和非MG患者30例血清乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）水平．测定34例SNMG患者血清及对照组血清MuSKAb水平。结果①在156例MG患者中,血清AChRAb阳性率为78．2％（122／156例）,其AChRAb水平为（1．2703±0．8728）nmol／L,明显高于对照组的（0．2410±0．1098）nmoL／L．P〈0．01。②SPMG组病情严重程度、血清AChRAb水平明显高于SNMG组（P〈0．01）,SNMG组与SPMG组性别、发病年龄差异无统计学意义（P〉0．05）;③34例SNMG患者血清MuSKAb阳性率为0％（0／34例）,但其血清MuSK—Ab水平（0．0283±0．0133）nmol／L明显高于对照组的（0．0141±0．0098）nmol／L,P〈0．05。结论血清MuSKAb在中国人MG中较低。     

百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法的建立及应用

目的建立铕(Eu3+)标记检测百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法。方法利用原核重组表达系统表达百日咳毒素S1亚基蛋白,并鉴定,采用双抗体夹心法建立检测S1 TRFIA分析方法。结果自制S1试剂盒检测灵敏度2.5 ng/ml,与其他抗原无交叉反应,并初步可应用于百日咳疫苗中免疫原的监测。结论自制百日咳毒素S1亚基蛋白时间分辨免疫荧光分析法能够较为可靠的监控百日咳疫苗质量。     

放射免疫分析操作技术综合评价指标的探讨

以统一仪器设备、放射免疫分析试剂盒以及操作方法为前提，在同一个实验室内，对各层次人员放射免疫操作后所测定的结果采用质量控制指标：有效剂量（ＥＤ２５、ＥＤ５０、ＥＤ７５）、质量控制样品实测值与靶值的偏差以及平均批变异系数，对放射免疫操作技术进行综合评价。以达到提高工作质量的目的。     

双抗体夹心法检测冠心病患者血清中肺炎衣原体循环免疫复合物的方法学建立

目的 建立一种敏感而特异的双抗体夹心法检测血液中循环免疫复合物(CIC),并探讨血液中肺炎衣原体(Cpn)CIC与冠心病的关系。方法 包被已知特异性鼠抗人CpnTW183IgG,加入用7％PEG6000,从冠心病患者血清中提取的CpnCIC,再加入酶标二抗与CIC中的抗体结合,通过底物显色检测患者CpnCIC阳性率。结果 冠心病组CpnCIC的阳性率(63.8％)高于对照组(40.0％),差异有显著性意义(X~2=7.78,P<0.05)。结论 建立的双抗体夹心法检测CpnCIC有较高的敏感性和特异性,可用于批量临床标本的检测,血清中中分子量CpnCIC的存在与冠心病之间有密切关系。     

抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体放射免疫测定方法的建立

目的 建立以125I -抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）一硫氧还融合蛋白（MOG融合蛋白）介导的放射免疫分析技术（RIA）作为测定实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠血清抗MOG抗体的新方法.方法 Na125I标记MOG融合蛋白,以MOG融合蛋白免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,将125I -MOG融合蛋白与小鼠血清标本结合,孵育后与兔抗鼠IgG结合,收集沉淀,用γ放射性检测仪测定抗MOG抗体水平.结果 成功制备纯度较高的125I-MOG融合蛋白,当实验条件为Na125I 投料量1mCi,MOG融合蛋白量60μg时,获得较好的标记率48.3631%,最高的比放射性320 043.7 Bq/μg.应用新型放射免疫法测定小鼠血清抗MOG抗体,MOG组血清抗MOG抗体水平与其他组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 成功建立了一种较为敏感的测定血清抗MOG抗体的放射免疫方法.