LncRNA在调控结直肠癌上皮间质转化中的机制研究

长链非编码RNA(LncRNA)主要由RNA聚合酶Ⅱ转录,其长度超过200个核苷酸.由于LncRNA具备RNA的所有特征,其在基因表达调控等生物学过程起重要作用.LncRNA的过度表达、缺失或突变可通过多种机制参与结直肠癌的恶性生物学行为,而上皮间质转化(EMT)是肿瘤细胞具备转移及侵袭能力的必要条件之一.大量研究发现...     

长链非编码RNA BX357664对肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程的影响

目的：探讨长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）BX357664在肾癌组织中的表达并研究其对Caki?1和Caki?2细胞上皮间质转化过程的影响。方法：以前期芯片检测结果经标准化分析确认在肾癌组织中表达明显低于癌旁正常组织的lncRNA BX357664为目标,采用逆转录-聚合酶链反应（qRT?PCR）检测其在24对肾癌组织和Caki?1以及Caki?2细胞中的表达情况;lncRNA BX357664慢病毒载体感染Caki?1和Caki?2细胞后,Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变;Western blot检测Caki?1和Caki?2细胞处理组和对照组中上皮间质转化相关蛋白的表达情况。结果：lncRNA BX357664在24对肾癌组织和Caki?1、Caki?2细胞中表达水平降低（P < 0.05）;lncRNA BX357664慢病毒过表达载体感染Caki?1和Caki?2细胞后能够显著抑制细胞迁移（P < 0.01）和侵袭能力（P < 0.01）,显著改变上皮间质转化相关蛋白的表达,抑制上皮间质转化的进程（P < 0.05）。结论：lncRNA BX357664在肾癌中显著低表达,在Caki?1和Caki?2细胞中上调lncRNA BX357664能够通过抑制上皮间质转化过程,从而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭。     

干扰长链编码RNA FOXCUT能抑制鼻咽癌细胞上皮间质转化及诱导线粒体损伤

目的 探讨干扰长链编码RNA FOXCUT对鼻咽癌细胞上皮间质转化及线粒体功能的影响。方法 RT-PCR检测50例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织和NP69、CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞株中FOXCUT表达水平;将shRNA FOXCUT转染至CNE1细胞,随机分组为Control组、shRNA-NC组和FOXCUT-shRNA3组。采用CCK8法和克隆形成实验检测细胞增殖;显微镜观察细胞形态;免疫荧光检测Vimentin+含量;试剂盒检测氧化应激标记物SOD、MDA、LDH的水平;流式检测线粒体膜电位的变化;Western blot法检测E-cad、N-cad、Vimentin、Bax、Bcl-2、caspase-3和c-Myc蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与NP69细胞相比,CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与Control组相比较,FOXCUT-shRNA3组细胞增殖倍数及克隆形成率降低（P<0.001）,细胞形态呈短梭形、扁平型或圆形,细胞间的连接较为紧密,具有铺路石样特征;N-cad、Vimentin的表达水平降低,E-cad的表达水平升高（P<0.05）,Vimentin+含量降低（P<0.001）,MDA、LDH的含量明显升高（P<0.05）,SOD的活性明显降低（P<0.05）,红色荧光细胞向绿色荧光细胞转变较明显,绿色荧光细胞百分比增加,Bax/Bcl2、Cleaved cas3/cas3表达显著上升,c-Myc表达显著降低（P<0.001）。结论 干扰长链非编码RNA FOXCUT能够抑制鼻咽癌细胞增殖,减少上皮间质转化,增强氧化应激、降低膜电位,诱导CNE1细胞线粒体功能损伤,促进凋亡;干扰长链非编码RNA FOXCUT对CNE1细胞抑制效果显著,具有靶向治疗鼻咽癌的潜力。     

过表达KLF4抑制非小细胞肺癌增殖及上皮间质转化的作用机制

目的探究KLF4 调控非小细胞肺癌（NSCLC）增殖及上皮间质转化（EMT）发生的作用机制,为NSCLC 的临床研究提供理论依据。方法收集临床病理资料进行统计学分析,免疫组织化学检测KLF4 在癌旁及癌组织中的表达,细胞水平检测KLF4 在癌细胞和正常细胞中的表达差异,过表达KLF4 检测对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT 相关标志物的影响。结果KLF4 在癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达,并且与患者的临床分期及远处转移密切相关,细胞水平检测也得到了相同的结果,上调KLF4 的表达抑制了细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制EMT 相关的间充质标志物的表达,促进上皮标志物的表达。结论过表达KLF4能够抑制NSCLC 增殖及EMT 的发生。     

LncRNA-ATB 在肿瘤中的表达及调控作用研究

长链非编码RNA（lncRNA）是长度>200 nt 非编码RNA 家族中的重要成员。随着研究的不断深入, 人体恶性肿瘤内异常表达的lncRNA 对肿瘤发生、发展所起到的调控作用正逐渐被认知。被转化生长因子b 激活的长链非编码RNA（lncRNA-ATB）在诸多肿瘤中呈现异常表达,并能够调控肿瘤增殖、侵袭转移、抗 凋亡及耐药等恶性生物学行为。     

IL-8诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化初探

目的 初步探讨白细胞介素-8（Interleukin-8,IL-8)在诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化（EMT）中的作用,为进一步深入研究卵巢癌恶性转移的分子机理奠定基础。方法 实时无标记细胞技术（RTCA）定量分析外源性人重组IL-8诱导卵巢癌细胞株SKOV3的动态迁移情况; Western blot检测IL-8（100 ng/mL）诱导处理SKOV3细胞48 h后EMT相关蛋白的表达变化情况;采用Transwell分析经IL-8诱导处理后的SKOV3细胞侵袭情况。结果 RTCA定量结果显示,IL-8处理SKOV3细胞48 h后细胞的迁移达到平台期;IL-8可使SKOV3细胞的上皮细胞标志物E-cadherin下调,而间质细胞标志物Vimentin和snail的表达上调,促进卵巢癌细胞发生EMT,SKOV3细胞的侵袭能力明显增强（P<0.05）。结论 IL-8可促使卵巢癌细胞获得EMT特性,从而增强其侵袭、迁移能力。     

上皮-间质转化在组织纤维化中的作用及机制

组织纤维化持续进展可致器官结构破坏和功能减退,乃至衰竭。研究发现,上皮-间质转化（EMT）是组织纤维化的一个新的重要发病机制,充分研究EMT在组织纤维化过程中的作用及机制,有利于寻找治疗组织纤维化的新手段。本文就EMT在组织纤维化中的作用及机制作一综述。     

上皮间质转化相关长链非编码RNA与胃癌的关系

胃癌是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一,其发生涉及多步骤、多基因的相互作用过程。上皮间质转化（EMT）是上皮细胞通过特定程序转化为有间质表型细胞的过程。研究表明长链非编码RNA（lncRNA）可以通过与靶蛋白结合、作为竞争性内源RNA竞争微RNA等方式促进或抑制EMT过程,且许多特异表达的EMT相关lncRNA与胃癌的侵袭、转移密切相关。本文主要就EMT相关lncRNA在胃癌侵袭和转移中的调控机制作一综述。     

小RNA在器官纤维化上皮-间质转化(EMT)中的作用

 小RNA是一类长度约22~28个核苷酸的非编码小分子RNA,近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小RNA在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小RNA在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述,以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。     

上皮-间质转化在肿瘤侵袭转移中的作用研究进展

上皮-间质转化（EMT）是指上皮细胞获得间质细胞的生物学特性的过程,表现为细胞极性丧失、上皮细胞标志物（如细胞黏附分子）表达减少及间质细胞标志物（如波形蛋白）表达的增高.EMT在胚胎发育等生理过程及创伤修复等病理生理过程中起重要作用.近年来研究发现,EMT可促进肿瘤细胞侵袭转移,并与肿瘤干细胞生物学功能关系密切.EMT的发生与肿瘤微环境中多种信号通路、诱导因子、转录因子以及microRNA相关.     

CircPCSK5在胃癌中高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化

目的 探讨circPCSK5在胃癌中的表达情况和对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响。方法 通过高通量测序构建胃癌组织和癌旁正常胃粘膜组织的circRNA差异表达谱。选取在皖南医学院第一附属医院行胃癌根治术的患者共62例作为研究对象,利用RT-qPCR检测circPCSK5在胃癌组织和细胞系中的表达情况。采用χ2检验分析circPCSK5表达水平与胃癌临床病理资料相关性,利用Kaplan-Meier法绘制患者的总生存和无病生存曲线,Cox比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。通过RNase R和actinomycin D实验检测circPCSK5的稳定性。利用荧光原位杂交和细胞核质分离实验检测circPCSK5的亚细胞定位。通过CCK-8和EdU实验检测circPCSK5对胃癌细胞增殖能力的影响,通过transwell实验检测circPCSK5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。利用Western blot和RT-qPCR检测敲低或过表达circPCSK5后胃癌细胞上皮-间质转化标记物的表达变化。结果 在胃癌组织和细胞中,circPCSK5的表达明显升高（P<0.0...     

微RNA在肿瘤上皮间质转化中的作用及机制研究进展

随着肿瘤学研究的不断深入,上皮间质转化(epitheliamesenchymal transition,EMT)在肿瘤侵袭和转移中发挥的用逐渐被人们认识和关注。近年来微RNA(microRNA,miRNA)的研究取得了极大进展,但其在肿瘤EMT过程中的作机制仍有待进一步研究。大量研究显示,miRNAs通过多种号通路参与肿瘤EMT的各个环节的调控过程[1]。本文主就miRNAs在肿瘤EMT中发挥的作用及目前研究的最新展进行综述。     

组织因子途径抑制物-2抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化

目的 探讨组织因子途径抑制物-2 ( TFPI-2 )对人前列腺癌细胞上皮间质转化的影响. 方法 将人前列腺癌细胞株PC3M进行培养,并分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体、空载体及不转染,细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验检测3组细胞的迁移能力和侵袭能力,用转化生长因子-β1(TGF-β1)处理细胞,倒置相差显微镜下观察3组细胞形态,Western blot法和逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)法分别检测转染组、转染空载体组及未转染组上皮间质转化标志物-E钙黏素( E-cadherin )、波形蛋白( vimentin )和 snail在蛋白和mRNA水平上的表达量. 结果 细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验结果显示,转染TFPI-2 基因真核表达载体的PC3M细胞迁移率较低(P<0. 05),侵袭细胞数较少(P<0. 05);显微镜下观察显示转染组细胞大多呈上皮型, 转染空载体组及未转染组细胞大多呈间叶型;Western blot法和RT-PCR法检测结果显示,无论在蛋白水平还是mRNA水平,转染组较转染空载体组及未转染组E-cadherin表达产物较多,vimentin和snail蛋白表达产物较少,差异有统计学意义(P<0. 05),转染空载体组及未转染组差异无统计学意义. 结论 TFPI-2可以抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化,这是其抑制前列腺癌细胞侵袭与转移的可能机制之一,为基因及生物靶向治疗前列腺癌提供新的思路和方向.     

二甲双胍抑制IL-6诱导的LNCaP增殖及上皮-间质转化

目的 初步探讨二甲双胍抑制前列腺癌发展的作用.方法 使用慢病毒感染构建IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6(IL-6过表达病毒转染)和LNCaP-ctr(空病毒转染),运用激光共聚焦扫描确定转染效果,ELISA检测LNCaP、LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr细胞IL-6分泌水平,倒置显微镜观察细胞形态.实验分为LNCaP-ctr组、LNCaP-IL-6组、LNCaP-ctr+二甲双胍组和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,MTT技术检测相对细胞数量,流式细胞技术检测二甲双胍对细胞周期的影响.实验分为LNCaP-IL-6和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,运用细胞迁移实验检测两组细胞迁移速度,Western blot技术检测两组细胞TWIST和E-Cadherin表达水平.结果 激光共聚焦扫描和ELISA检测证明IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6构建成功,LNCaP-IL-6细胞IL-6分泌水平约为LNCaP-ctr的5 000倍.MTT实验显示第5天LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.4倍,处理组的LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.6倍;流式细胞仪检测显示二甲双胍阻滞LNCaP的细胞周期为S期.细胞形态学观察和Western blot检测证实IL-6诱导LNCaP发生上皮-间质转化,细胞迁移实验显示二甲双胍可抑制LNCaP-IL-6细胞的迁移,Western blot进一步证实二甲双胍降低LNCaP-IL-6 TWIST表达及升高E-Cadherin表达.结论 二甲双胍能够抑制IL-6诱导的LNCaP细胞的上皮-间质转化.     

过表达miR-4328抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-4328在前列腺癌中的作用及分子机制.方法 采用CCK-8方法检测过表达miR-4328对前列腺癌细胞增殖能力的影响, 采用Transwell方法检测对迁移能力的影响, 采用Real-time PCR和Western blotting方法检测上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin以及上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平.结果 miR-4328在前列腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 转染miR-4328 mimics后, 肿瘤细胞的增殖能力显著降低 (P<0.001) .同时过表达miR-4328可以显著降低前列腺癌细胞的迁移能力 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 过表达miR-4328后, 上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平显著上升 (P<0.001) , 而间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin的含量显著降低 (P<0.001) .进一步研究发现过表达miR-4328可以下调上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平 (P<0.001) .结论 过表达miR-4328显著抑制前列腺癌细胞的增殖能力、迁移能力和上皮间质转化过程.     

RNAi沉默N-cadherin通过MEK-ERK信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

目的 探讨沉默神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法 收集2021年3月～2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子(E-cadherin)mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果 与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达(P<0.05)。与空白对照组和空载体组比较,沉...     

沉默PRKCD通过调控上皮-间质转化抑制肝癌Huh-7细胞的增殖和侵袭

目的 探讨蛋白激酶Cδ(protein kinase Cδ,PRKCD)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达水平、临床意义及其潜在的作用机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库中下载HCC的表达数据和临床数据,分析PRKCD在HCC中的表达水平及其临床意义。收集25例HCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组化染色检测患者样本中的PRKCD蛋白表达水平。采用Western Blot及qRT-PCR法检测PRKCD在正常肝上皮细胞和肝癌细胞系中的表达水平。通过构建si-PRKCD慢病毒转染到Huh-7肝癌细胞中,采用CCK-8实验评估沉默PRKCD对肝癌细胞增殖活性的影响。采用划痕实验、Transwell侵袭实验明确PRKCD对细胞迁移和侵袭的影响。最后,通过Western Blot法检测PRKCD对上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition, EMT)关键蛋白(Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Slug)的内在调控...     

上皮-间质转化在肿瘤多药耐药性发生中的作用

化学治疗是肿瘤综合治疗的重要方法之一,而多药耐药一直是导致肿瘤化学治疗失败的主要原因。上皮-间质转化(EMT)是正常发育、伤口愈合的基础,同时也在肿瘤发生、侵袭及转移过程中发挥着重要作用,近年来越来越多的研究证实EMT也参与了肿瘤多药耐药的发生。该文主要就EMT的概念、发生机制及其在肿瘤多药耐药过程中机制的研究进展进行综述。     

西奥骨化醇抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化

目的 研究西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)对TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用.方法 用不同浓度维生素D类似物EB1089(1、10、100、1 000 nmol/L)作用于肝癌细胞SMMC-7721 6、12、24、48 h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间.将肝癌细胞SMMC-7721分为4组(EB1089组、TGF-β1组、EB1089+TGF-β1组和空白对照组),分别干预48 h.用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过实时RT-PCR和Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达情况;迁移实验和侵袭实验检测EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和迁移能力的影响.结果 TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721呈现长梭形,并伸出较多触角,EB1089能明显改善这种形态变化;EB1089可有效升高TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白低表达(P＜0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达(P＜0.05);EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移具有抑制作用(P＜0.05).结论 维生素D类似物EB1089能有效抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化现象和侵袭、迁移能力.     

缺氧诱导因子对肿瘤细胞上皮-间质转化的诱导机制

实体瘤组织内普遍存在低氧现象,缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)是缺氧条件下传递缺氧信号、介导缺氧效应的关键转录因子;上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)是一个多步骤有序可高度调节的过程,EMT的发生与多种蛋白分子、微环境及Micro RNA等有关,涉及多个信号转导通路和复杂的分子机制,在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中扮演重要的角色。研究证实,低氧可通过转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路、Notch信号通路、Wnt信号通路、刺猬信号通路(hedgehog signaling pathway,Hedgehog)、肝细胞生长因子/肝细胞生长因子(HGF/Met)信号通路及多种转录因子等途径参与肿瘤EMT调控,目前通过抑制HIF来达到阻断EMT过程的研究日益增多且初见成效,揭示低氧诱导的EMT途径可能成为日后肿瘤治疗的新靶点,对于预防和治疗癌症具有重要意义。