Toll样受体信号途径负性调节因子在川崎病免疫发病机制中的作用

目的探讨Toll样受体(TLRs)信号途径负性调控因子在川崎病(KD)免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿32例,正常同年龄对照组16名,未加任何体外丝裂原刺激培养。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测外周血单核/巨噬细胞(MC)TLR4,MD-2,MyD88,IRAK-4,TRAF6,T1/ST2,IRAK-M,Triad3A及前炎症细胞因子mRNA的表达；流式细胞术检测MC TLR4的表达。结果①急性期KD患儿TLR4,MD-2,MyD88,IRAK-4及TRAF6基因mRNA水平均显著高于正常同年龄对照组．流式细胞术检测从蛋白水平证实急性期KD患儿MC高表达TLR4,KD合并冠状动脉(KD-CAL~ )组TLR4蛋白表达水平显著高于KD无冠状动脉(KD-CAL~-)组[(6．5±1．7)%vs(11．9±2．4)%,P＜0．01]。②急性期KD患儿MC细胞TLR信号途径负性调节因子IRAK-M和Triad3A mRNA表达水平明显升高,但KD-CAL~ 组升高水平显著低于KD-CAL~-组(P＜0．01)；T1/ST2 mRNA表达水平在各组之间差异无统计学意义(P＞0．05)。③急性期KD患儿CD14~ 细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α等前炎症细胞因子表达明显升高,其中KD-CAL~ 组前炎症细胞因子mRNA水平显著高于KD- CAL~-组(P＜0．01)。结论急性期KD患儿TLRs信号途径负性调节因子IRAK-M和Triad3A相对表达不足可能与KD的免疫发病机制有关。     

川崎病急性期Th1/Th2细胞功能状态的初步研究

目的：探讨川崎病（KD）患儿急性期Th1/Th2细胞的功能状态及其在KD免疫发病机制中的作用。方法：急性期KD患儿32例,健康对照组16名,KD患儿分别于静脉滴注丙种球蛋白（IVIG）治疗前后直接取血备检,未经任何体外丝裂原刺激培养。采用流式细胞术胞内标记法检测外周血CD4＋T细胞白细胞介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ阳性表达率;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光定量PCR检测外周血CD4＋T细胞中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、T-bet、GATA-3、SOCS-1和SOCS-3等Th相关的细胞因子及转录因子基因mRNA的表达。结果：①急性期KD患儿Th2细胞比例明显高于健康对照组[（3.40±1.13）%vs（0.48±0.15）%,P〈0.01],Th1细胞比例无明显变化[（11.9±2.0）%vs（12.6±2.3）%,P〉0.05],Th1/Th2比值显著低于健康对照组（6.5±1.4vs33.8±6.2,P〈0.01）;②急性期KD患儿外周血CD4＋T细胞中Th1细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-6和IL-10）基因mRNA表达水平均明显高于健康对照组（P〈0.01）,IVIG治疗后部分基因有不同程度的恢复（P〈0.01）;③急性期KD患儿CD4＋T细胞明显过度表达Th细胞相关的转录因子（T-bet/GATA-3）和调节因子（SOCS-3/SOCS-5）（P〈0.01）。结论：急性期KD患儿Th细胞普遍活化,可能与KD免疫功能紊乱有关。     

静脉注射丙种球蛋白无反应型川崎病Th17细胞的变化及意义

目的 探讨Th17细胞在静脉注射丙种球蛋白(IVIG)无反应型川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 选取KD患儿45例,其中IVIG敏感型KD 35例,IVIG无反应型KD 10例,同年龄健康对照组30名.KD患儿分别于IVIG治疗前后直接取血备检,IVIG无反应型KD分别在病程第8、9、11天取血备检.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CD4~+T细胞白细胞介素(IL)-17A/F、转录因子ROR-γt mRNA表达;采用流式细胞术检测外周血Th17细胞占CD4~+T细胞比例.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th17细胞相关的细胞因子IL-17A和IL-6的表达.结果 ①急性期KD患儿CD4~+T细胞IL-17A/F表达明显高于对照组(P<0.01);②急性期IVIG无反应型KD患儿CD4~+T细胞内IL-17蛋白、IL-17A/F mRNA、Th17细胞转录因子ROR-γt的基因表达明显高于IVIG敏感型KD,经IVIG治疗后敏感型KDTh17细胞相关因子表达明显降低(P<0.01),无反应型KD Th17细胞相关因子仍持续高表达(P>0.05);③急性期KD患儿治疗前IL-17A和IL-6血浓度明显高于对照组(P<0.01),其中IVIG无反应型KD活化细胞因子水平明显高于1VIG敏感型KD组(P<0.01).经治疗后均有下降趋势,但IVIG无反应型KD仍高于敏感型KD(P<0.01);④甲泼尼龙冲击治疗IVIG无反应型KD当天退热.血浆IL-6,IL-17A较前明显降低,C反应蛋白(CRP)恢复快,能够迅速控制血管炎性反应.结论 Th17细胞过度活化可能是导致IVIG无反应型KD的原因之一.     

手足口病患儿血清细胞因子水平变化及意义

目的探讨手足口病患儿血清细胞因子的变化及临床意义。方法采用ELISA法测定42例手足口病患儿急性期（重症23例、轻症19例）、恢复期血清IL-1B、IL-6、IL-12及TNF．d水平,并与同期35例健康儿童作比较。结果手足口病患儿发病急性期IL-1β、IL-6、IL-12以及TNF-α均明显高于对照组,P均〈0．01;而在恢复期,上述细胞因子与对照组比较P〉0．05。急性期各细胞因子水平均明显高于恢复期及对照组,重症患儿各细胞因子水平均明显低于轻症患儿,P均〈0．01;恢复期各细胞因子水平与对照组比较无统计学差异。结论手足口病患儿感染病毒后细胞免疫功能受到影响,急性期各细胞因子水平升高有助于机体早期启动特异性和非特异性免疫,加速疾病自限恢复。     

静滴免疫球蛋白对川崎病患儿红细胞免疫功能的影响

采用刘景田法测定30例川崎病（KD）患儿急性期及恢复期细胞免疫功能的变化。结果患儿急性期红细胞C3b受体花环率（RC，bRR）下降，免疫复合物花环率（ICRR）升高，促进因子（E）活性降低，抑制因子（I）升高，与对照组比较有显著差异（P〈0．01）。经静脉滴注免疫球蛋白（IVIG）治疗后Rc拍R、E回升；ICRR、I下降，临床症状明显改善。认为红细胞免疫功能改变参与了KD的发病，IVIG能改善KD病急性期炎症及预防冠状动脉损害，可能与提供抗体抑制免疫反应、减少血管炎症反应有关。     

软肝冲剂对肝硬化患者外周血单核细胞TGF—β1 IFN-γ和IL-8 mRNA表达的影响

目的：观察软肝冲剂治疗前后肝硬化（LC）患者外周血单核细胞（PBMC）中转化生长因子（TGF-β1）、干扰素-γ（IFN-γ）和白介素18（IL-18）的mRNA表达及分泌水平的变化。探讨软肝冲剂对肝硬化治疗的作用机制。方法：RT—PCR检测20例正常对照组和25例肝硬化患者软肝冲剂治疗前、治疗2、4、6月后PBMC中TGF-β1、IFN-γ和IL-8的mRNA表达水平；ELISA法检测PHA体外诱生PBMC培养上清中TGF-β1、IFN-γ和IL-18分泌水平。结果：肝硬化患者PBMC中的TGF-β1 mRNA表达水平及TGF-β1分泌水平显著高于对照组（P〈O．01）。而IFN-β1和IL-18的mRNA表达水平及IFN-γ和IL-18分泌水平显著低于对照组（P〈0．01）。经软肝冲剂治疗后，TGF-β1 mRNA表达水平及分泌水平逐渐下降，6个月后与治疗前相比有显著差异（P〈0．01），但仍高于对照组；IFN-γ和IL-18的mRNA表达水平及IFN-γ和IL-18分泌水平逐渐上升，6个月后与治疗前相比有显著差异（P〈0．01），但仍低于对照组。结论：软肝冲剂能通过下调PBMC中TGF-β1 mRNA和上调IFN-γ和IL-8 mRNA表达，对肝硬化有较好的疗效。     

IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系

目的探讨IL-1β调控大鼠HSCsTIMP-1mRNA表达与JNK、p38 MAPK通路的关系。方法RT-PCR用于检测大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达；Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度。结果IL-1β（10ng／mL）作用培养的HSCs 24h后，TIMP-1 mRNA表达（1．191±0．079）明显高于对照组（0．545±0．091），有统计学意义（P〈0．01）；IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路。用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后，IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制，分别为10μmol／L，1．022±0．113;20μmol／L，0．8694±0．070；40μmol／L，0．666±0．123，与对照组相比（1．163±0．107），各浓度组均有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）。用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后，HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多，分别为10μmol／L，1．507±0．099；20μmol／L，1．698±0．107；40μmol／L，1．857±0．054。与对照组相比（1．027±0．061），各浓度组均有显著性差异（P均〈0．01）。结论IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展，JNK和p38信号蛋白参与了此过程，HSCs中两条通路均可被IL-1激活，但所起作用完全不同，它们相互作用相互调节，共同调控TIMP-1 mRNA的表达。     

左归丸与右归丸对EAE大鼠血浆Th1/Th2平衡的影响

目的探讨左归丸、右归丸对实验性自身免疫性脑考髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠病程及其血浆Th1／Th2（IFN-γ／IL-4）的影响。方法用MBP免疫Lewis大鼠诱导EAE模型，随机分为模型组、激素组、左归丸组、右归丸组及正常对照组，研究各组间发病率、死亡率、神经功能评分的差异，并分别在急性期（免疫后第15天）和缓解期（免疫后第27天）采集血样，检测血浆细胞因子水平。结果右归丸组发病率低于其他各处理组（P％0．05）；急性期神经功能评分左归丸组和右归丸组均低于模型组和激素组（P〈0．05）；急性期左归丸组血浆Th1／Th2水平低于模型组（P〈0．05）；缓解期模型组、激素组Th1／Th2水平均低于对照组（P〈0．05），左归丸组、右归丸组Th1／Th2水平均高于模型组和激素组（P〈0．05），右归丸组Th1／Th2水平高于对照组（P〈0．05）；模型组Th1/Th2水平在缓解期下降（P〈0．01），左归丸组和右归丸组Th1／Th2水平均在缓解期升高（P〈0．01）。结论右归丸可降低EAE发病率；左归丸和右归丸均能减轻EAE疾病严重程度，治疗效果优于醋酸泼尼松；左归丸可下调EAE急性期血浆Th1／Th2水平；左归丸和右归丸均能上调EAE缓解期血浆Th1／Th2水平。     

慢性乙型肝炎患者干扰素应答与外周血单核细胞IFN—α和IL-18表达的关系

目的分析慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单核细胞（PBMC）干扰素-α（IFN—α）及白细胞介素18（IL-18）mRNA的诱导表达差异，评价慢性乙型肝炎患者PBMC细胞免疫功能。方法对2004年6月至2005年5月华中科技大学同济医学院附属协和医院52例门诊和住院CHB患者，聚肌胞苷酸（PolyIC）体外刺激正常对照组和CHB组患者PBMC，取培养上清利用病毒保护试验测定IFN—α2b治疗前后PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时用脂多糖（LPS）体外刺激不同组PBMC，RT—PCR检测PBMCIL-18 mRNA水平的变化。结果治疗前干扰素治疗应答组（n=13）和无应答组（n=27）PBMC分泌的干扰素生物学活性均显著低于对照组（n=20）（均P〈0．01）。应答组干扰素活性随治疗时间延长而增加，1个月时已显著高于无应答组（P〈0．01）；无应答组干扰素活性始终处于低下水平。治疗前，应答组和无应答组PBMC IL-18 mRNA水平也显著低于对照组（均P〈0．01）；治疗后，应答组IL-18 mRNA水平随治疗时间延长而升高，1个月时也著显高于无应答组（P〈0．01），无应答组IL-18 mRNA水平始终较低。PBMC IFN—α活性和IL-18 mRNA水平有良好的正相关性（r=0．922，P〈0．01）。结论慢性HBV感染患者的细胞免疫功能受损，不能正常表达IFN—α和IL-18，但应答组患者经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。     

干扰素治疗对慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答的影响

目的探讨Th1／Th2类细胞因子在CHB患者PBMC表达,及干扰素治疗慢性乙型肝炎（CHB）对患者Thl／Th2类细胞因子的影响。方法30例CHB患者给予干扰素治疗,治疗前后采用双抗体夹心法检测外周血单个核细胞IL-4、IL-10和IFN-γ的水平,同时选择15例健康人群作对照组。结果CHB组PBMC培养上清分泌IL-4水平显著高于健康对照组（P〈0．05）,而IFN-1水平则显著低于健康对照组（P〈0．01）;HBVDNA水平与IL-4水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关。治疗结束后IL-4、IL-10水平较治疗前显著降低（P〈0．01,P〈0．05）,IFN-γ水平较治疗前显著升高（P〈0．01）。结论CHB存在异常细胞免疫应答,干扰素治疗CHB可提高患者Th1型细胞因子水平、降低Th2型细胞因子的水平。