幽门螺杆菌依赖蛋白酪氨酸激酶途径诱导胃上皮细胞分泌IL-8

目的 分析中国临床分离的幽门螺杆菌的cag致病岛的差异和不同激酶抑制剂对幽门螺杆菌诱导中国人胃上皮细胞IL-8分泌的影响。方法 在体外分别用中国临床分离的cagA^ cagE^ ,cagA^ cagE^-0、cagA^-cagE^ 、cagA^-cagE^-的幽门螺杆菌与中国人胃上皮细胞MGC-803共培养,分泌的IL-8用ELISA进行检测,比较蛋白激酶A、C、G和蛋白酪氨酸激酶的抑制剂对幽门螺杆菌诱导分泌的IL-8用ELISA进行检测,比较蛋白激酶A、C、G和蛋白酪氨酸激酶的抑制剂对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞IL-8分泌的影响。结果 cagA^ cagE^ 幽门螺杆菌显著增加了胃上皮细胞IL-8的分泌,cagA^ cagE^-,cagA^-cagE^ 幽门螺杆菌作用次之,而cagA^-cagE^-幽门螺杆菌不能增加胃上皮细胞IL-8的分泌,蛋白激酶A、C、G的抑制剂不能阻断幽门螺杆菌增加胃上皮细胞IL-8的分泌,而蛋白酪氨酸激酶的抑制剂阻断了幽门螺杆菌增加胃上皮细胞IL-8的分泌。结论 cagA^ cagE^ 幽门螺杆菌显著增加了胃上皮细胞IL-8的分泌并且依赖于蛋白酪氨酸激酶的活性。     

幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化

目的通过优化复性液的组成、pH值、稀释度等,建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法。方法以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5mL/LTritonX-100进行初步纯化,使其纯度达到约90%;再用含8mol/L脲的变性剂溶解包涵体,用复性液[0.1mol/LTris-HCl、2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及50mmol/L精氨酸(Arg),pH8.0]稀释复性后,用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化。结果用稀释法复性及液相色谱法纯化,一次可得到100~140mg的cagA。ELISA检测其抗原活性为1∶16000;SDS-PAGE检测纯度为98%。结论用制备级复性、纯化制备的cagA,可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片,效果良好,并已获得国家新药批文。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白调控胃癌细胞上皮-间质转化的研究进展

目的探讨幽门螺杆菌(H. pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白调控胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)的作用机制。方法以“幽门螺杆菌”、“细胞毒素相关基因A蛋白”、“胃癌细胞”、“上皮-间质转化”为关键词,在中国知网、万方数据库、Pubmed、 Web of Science 检索1990年1月—2015年1月国内外关于CagA及EMT的文献,进行归纳总结。结果 CagA蛋白通过Ⅳ型分泌系统(T4SS)进入宿主细胞后,除了既往认为的可能参与胃黏膜上皮早期癌变的发生,还可与多种信号分子结合,通过调控基因转录水平(如上调Twist、Snail等与EMT相关的信号通路分子)、上调相关miRNA(如miRNA-584、miRNA-1290等)来降解或阻遏目标mRNA等不同途径来调控细胞的生长和运动相关的信号通路,导致胃癌细胞EMT的发生。结论 CagA可通过不同的途径调控胃黏膜上皮细胞发生EMT。对这些途径及其机制的全面且进一步的研究将有助于对胃癌浸润和转移的机理的了解。     

CagA对幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平的影响

目的：利用小分子干扰RNA（siRNA）探讨CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中的作用。 方法： 设计5条siRNA，采用电穿孔法转入CagA+幽门螺杆菌 NCTC11637,与胃黏膜上皮细胞共培养后测定IL-8水平，并以 RT-PCR、Western blotting法检测穿孔前、后不同时点细菌的CagA表达。采用CagA-株NCTC11639作对照。 结果： CagA+NCTC11637诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8水平明显高于CagA-NCTC11639［（1 200.00±32.51) ng/L vs (100.00±8.58） ng/L］（P<0.01）。siRNAⅢ转化的幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8 水平显著低于转化前［(400.00±17.35)ng/L vs （1 200.00±32.51 )ng/L］(P<0.05)；siRNA Ⅲ转化的幽门螺杆菌CagA mRNA水平显著低于转化前, 穿孔后6 h mRNA水平最低为31.3%(0.270/0.861), 抑制率为68.7%。Western blotting显示siRNA Ⅲ组CagA蛋白水平低于穿孔前（P<0.01）；其余4条siRNA未见显著变化。 结论： CagA在幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞分泌IL-8中起重要作用，小分子干扰RNA可能通过抑制CagA基因表达而减少幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞IL-8的分泌。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A的分离纯化

在对Ｈｐ毒力因子进行的研究中 ,发现ＣａｇＡ基因是Ｈｐ高毒力株的标志基因。其编码产物 细胞毒素相关蛋白Ａ(ＣａｇＡ)是引起人类严重胃部疾患的主要因素之一 ,ＣａｇＡ基因并不存在于所有的Ｈｐ菌株中 ,在中国人中约有 90 %感染者含有此基因。该基因已被克隆和测序 ,含有ＣａｇＡ基因与不含ＣａｇＡ基因的菌株在致病能力上存在显著的差异。目前一致认为含ＣａｇＡ基因的Ｈｐ菌株为高毒株 ,与消化性溃疡 ,萎缩性胃炎及胃癌的发生密切相关。ＣａｇＡ蛋白位于细胞表面 ,是一种亲水性免疫显性蛋白 ,可刺激患者机体产生相应的ＩｇＧ和ＩｇＡ抗…     

IL-1基因多态性、幽门螺杆菌感染与胃癌易感性的研究进展

幽门螺杆菌(helicobacter pylori HP)感染胃部后会引起两种不同类型的胃炎：以胃窦部为主的胃炎和以胃体部为主的胃炎。前者胃酸分泌不变或增多，易诱发十二指肠溃疡；后者易引起胃酸分泌减少，从而导致胃萎缩，诱发胃癌。白细胞介素-1(Interleukin-1，IL-1)是一种重要的炎症介质，其家族成员IL-1β是一种很强的酸抑制剂，而IL-1ra则是IL-1受体拮抗剂。IL-1基因多态性的存在使个体在幽门螺杆菌感染后产生的IL-1β和IL-1ra量不同，从而影响胃酸的分泌，最终导致不同的临床结局。     

IL-1β、IL-6、p53与胃癌组织幽门螺杆菌感染的相关性分析

目的 探讨IL-1β、IL-6、p53与胃癌组织幽门螺杆菌(Hp)感染的相关性.方法 选取2016年6月至2017年10月期间我院收治的100例胃癌患者,根据检查结果Hp阳性有89例,Hp阴性有11例.选取同期体检健康者50例作为对照组.比较各组间血清IL-1β、IL-6、p53水平以及相关性.结果 胃癌组血清IL-1β、IL-6、p53水平显著高于对照组(P＜0.05).胃癌组Hp阳性率(89.0％)显著高于对照组(22.0％)(P＜0.05).Hp(+)胃癌组血清IL-1β、IL-6、p53水平显著高于Hp(-)胃癌组(P＜0.05).胃癌Hp感染密度3级患者血清IL-1β、IL-6、p53水平显著高于1级和2级(P＜0.05).经过Spearson相关性分析,IL-1β、IL-6、p53水平与胃癌Hp感染密度均呈正相关关系.结论 胃癌组织Hp感染可引起血清IL-1β、IL-6水平等炎性因子提高和抑癌基因p53的激活,并通过联合作用机制共同促进胃癌的发生、发展.     

中国幽门螺杆菌cagA基因敲除突变株生物学特性分析

细胞毒素相关基因A蛋白（cytotoxin-associatedgeneA，CagA）是幽门螺杆菌（Hp）最重要的毒力因子之一。流行病学研究认为，CagA阳性肋感染与消化性溃疡和胃癌发生的关系比CagA阴性菌株更为密切，提示CagA可能是一种重要的疾病相关蛋白，在坳致病过程中发挥作用。由于却菌株自身的变异，CagA阳性株与CagA阴性株间除CagA基因外存在许多差异之处，因此，在自然状态下很难对CagA基因功能做出真实判断。     

桥本氏甲状腺炎组织中IL-8的表达

目的 研究ＩＬ－８的表达在桥本氏甲状腺炎发病机制中的作用及意义。方法 采用免疫组织化学方法和图像分析,检测１２例桥本氏甲状腺炎组织中ＩＬ－８的表达及分布。结果 桥本氏甲状腺炎组织中甲状腺滤泡细胞ＩＬ－８表达的阳性率为１００％,显著高于非毒性甲状腺组（６２．５％,Ｐ〈０．０１）;免疫组化染色的强度亦显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）。桥本氏甲状腺炎组织中病理改变越严重,甲状腺滤泡细胞中ＩＬ－８免疫染色呈     

幽门螺杆菌全长cagA基因和霍乱毒素B亚单位基因的克隆与表达

目的：构建表达幽门螺杆菌（Hp)细胞毒素相关蛋白（CagA)及粘膜免疫佐剂量霍乱毒素B亚单位（CTB）的重组质粒，并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法：用PCR方法从幽门螺杆菌扩增CagA基因片段，从霍乱弧菌扩增CTB基因片段，将它们转入原核载体质粒pGEMEX-1，在大肠杆菌DH5α中克隆，并在JM109DE3中表达。结果：重组质粒pEGEMEX-CTB的全长序列经分析与GenBank公布的序列相符；各表达蛋白经SDS－PAGE分析，相对分子量与文献相符；重组蛋白经Westem blot检测有较强的抗原性。结论：基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于幽门螺杆菌疫苗的研制及检测试剂盒的制备。     

残胃黏膜幽门螺旋杆菌感染与IL-8 mRNA表达的关系

目的:探讨不同部位残胃黏膜幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染与IL8mRNA表达的关系。方法:对58例残胃患者进行胃镜检查,于吻合口和胃体大弯处,采用两点取材法取材进行胃镜活检。活检标本Hp的感染采用HE和Giemsa染色法检查。活检标本中IL8mRNA表达水平采用实时半定量PCR法检测。结果:58例残胃患者中,38例感染Hp(65.5%)。34例以BI式吻合者中,残胃体部Hp感染阳性者IL8mRNA表达的水平,明显高于Hp感染阴性者的表达水平,分别为0.11±0.07和0.02±0.01(P<0.05);24例BII式吻合者,无论是残胃体部还是吻合口处,Hp感染阳性者IL8mRNA表达的水平,均明显高于Hp感染阴性者的表达水平(吻合口处IL8mRNA表达为:0.32±0.24和0.02±0.01;残胃体部为:0.18±0.08和0.01±0.01)(P<0.05)。结论:残胃黏膜Hp的感染可诱导IL8mRNA表达。残胃体部IL8mRNA的表达主要与Hp感染有关;吻合口处IL8mRNA表达,除与Hp感染有关外,也受胆汁反流影响。     

白介素32在胃癌细胞中的表达及意义

目的观察白介素32（IL-32）在胃癌细胞株中的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法采用逆转录PCR、real-time PCR及Western blot法分别从基因和蛋白水平上检测IL-32在正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞株MKN-45、KATO中的表达情况。结果逆转录PCR及real-time PCR结果均显示胃癌细胞IL-32 mRNA表达水平明显高于正常胃上皮细胞,逆转录PCR灰度比值（目的 /内参）为：GES-1（0.34±0.09）、MKN-45（0.79±0.11）、KATO（0.90±0.17）,差异有统计学意义（P〈0.05）。real-time PCR Ct值显示：MKN-45的IL-32基因表达量是GES-1的（5.34±1.09）倍,KATO是GES-1的（4.07±1.69）倍,差异均有统计学意义（P〈0.05）。Western blot结果显示IL-32在蛋白表达水平的结果与前一致,灰度比值（目的 /内参）为：GES-1（0.30±0.10）、MKN-45（0.92±0.32）、KATO（0.86±0.15）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论IL-32在胃癌细胞株中呈高表达,推测其可能在胃癌的发生、发展中起一定作用。     

血清IL-32、IL-33、IL-35在不同亚型Hp感染者及胃癌患者中的水平及意义

目的 观察血清白细胞介素-32(interleukin-32,IL-32)、白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)、白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)水平与不同亚型幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染之间的关系,并探讨胃癌患者血清IL-32、IL...     

幽门螺杆菌感染与胃癌关系的系统评价

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌的关系.方法:纳入22篇关于Hp感染与胃癌关系的文献,应用Review Manager 4.2软件进行Meta分析,计算合并优势比(odd ratio,OR)及OR值95%可信区间(confidence interval,CI),倒漏斗图法定性评价发表性偏倚.结果:Meta分析得出Hp感染与胃癌发病合并OR值为2.47(95 %CI为1.74～3.52,χ2 =144.18,P<0.01).本研究倒漏斗分析图形不对称,但经敏感性分析和计算失安全系数证明发表性偏倚的影响较小.结论:Hp感染是胃癌发生的危险因素.     

Detection of Helicobacter pylori cagA gene in gastric biopsies, clinical isolates and faeces

Purpose: Helicobacter pylori infection is common in the developing countries. The cagA gene is a marker of pathogenicity island (PAI) in H. pylori. The aim of this study was to determine the prevalence of cagA among dyspeptic patients in Bahrain directly from gastric biopsy and stool specimen. Methods: A total of 100 gastric biopsy samples, 16 clinical isolates and 44 faecal specimens were collected from Bahraini adult dyspeptic patients. cagA gene of H. pylori was assessed using polymerase chain reaction (PCR). Results: The cagA gene was detected in 59 (59%) from biopsy specimens, 10 (62%) clinical isolates and in 10 (22.7%) faecal specimens. The detection of cagA positive H. pylori was significantly higher in patients with duodenal ulcer (80%) compared to those with other endoscopic finding (42%) (P<0.05). Conclusions: Using PCR to detect cagA gene directly from biopsy is a rapid and reliable technique. However, using stool specimen for genotyping in our patients showed reduced sensitivity.     

Role of abnormal microRNA expression in Helicobacter pylori associated gastric cancer

Epidemiological studies have shown that Helicobacter pylori (HP) infection is a risk factor for gastric cancer (GC). HP infection may induce the release of pro-inflammatory mediators, and abnormally increase the level of reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO), and cytokines in mucosal epithelial cells of the stomach. However, the specific mechanism underlying the pathogenesis of HP-associated GC is still poorly understood. Recent studies have revealed that abnormal microRNA expression may affect the proliferation, differentiation, and apoptosis of mucosal epithelial cells of the stomach to further influence GC occurrence, development, and metastasis. Herein, we summarize the role of abnormal microRNAs in the regulation of HP-associated GC progression. Abnormal microRNA expression in HP-positive GC may be a biomarker for GC diagnosis, occurrence, and development as well as its targeted treatment and prognosis.     

CARD18在凋亡素基因转染的胃癌细胞的表达及其在临床样本中的检测和意义

目的 探讨caspase募集结构域家族成员18(CARD18)在凋亡素诱导胃癌细胞凋亡的机制及在胃癌发生发展中的作用.方法 运用二维凝胶电泳法分离凋亡素作用胃癌细胞后表达的差异蛋白质,通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法确定其中部分差异蛋白质,RT-PCR和Western blot法检测CARD 18的表达,采用免疫组化检测56例胃癌组织及癌旁组织中CARD 18的表达,并分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果 凋亡素处理后的胃癌细胞CARD18表达下调最明显,CARD18蛋白在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),且与胃癌的分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 CARD18可作为一个潜在的预后标志物和靶向标志物.     

胃大部切除术后残胃幽门螺杆菌感染的临床研究

目的探讨胃大部切除术后残胃病变与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法采用快速尿素酶试验、组织切片W arth in-Starry银染及尿素呼气试验检测682例残胃病患者Hp感染情况,并进行流行病学分析。结果682例残胃病患者Hp感染检出率为27.42%,与年龄、性别以及术后时间无关;B illroth I式术后残胃Hp检出率(40.07%)明显高于B illroth II式术后残胃Hp检出率(17.37%),而伴有胆汁返流的残胃Hp感染阳性率(7.98%)明显低于不伴胆汁返流的残胃阳性率(33.53%)。同时,因溃疡、穿孔、出血行手术的残胃Hp检出率(47.88%)高于因胃癌手术的检出率(22.66%);不同病理学残胃中,残胃溃疡和残胃癌的Hp感染率明显高于慢性残胃炎及吻合口炎的Hp感染率。结论胃大部切除术后残胃病变与Hp感染密切相关,尤其是残胃癌,应及早进行Hp治疗,可减轻残胃病变,减少残胃癌的发生。     

幽门螺旋杆菌提取液体外诱导胃上皮细胞线粒体DNA变异的研究

目的 探讨幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,HP)感染与线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)碱基突变之间的关系.方法 HP11638(CagA+,VacA+)和HP11638突变株(HP11638M,CagA+,VacA-)的提取液与人胃腺癌上皮细胞(human gastric adenocarcinoma epithelial cell,AGS)共同孵育后,收集细胞.提取mtDNA,PCR扩增mtDNA Cox-Ⅰ、Cox-Ⅱ、Cox-Ⅲ、ATPase6、ATPase8、Cytb基因和D-Loop区后测序.结果 AGS细胞mtDNA突变率与两株HP提取液呈浓度及时间依赖关系,经HP11638提取液刺激的AGS细胞mtDNA突变率高于经HP11638M提取液的刺激.在所有616个mtDNA D-Loop区的突变中,489个为点突变,81个为插入,46个为缺失.70.9%(437/616)的突变属于GC→AT和AT→GC的转换.85%(17/20)受刺激的AGS细胞的mtDNA D-Loop区的303PolyC、16184PolyC和514CA等位点发生突变.Cox-Ⅰ、Cox-Ⅱ、Cox-Ⅲ、ATPase6和ATPase8基因未发现突变位点,Cytb基因序列发现3个异质性突变.结论 HP能引起mtDNA特别是D-Loop区的突变积累,VacA蛋白参与了这一过程.