Smac和Survivin基因在肝癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的探讨Smac和Survivin在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及两者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系。方法免疫组织化学法检测50例肝癌组织、20例癌旁组织和15例正常肝组织中Smac和Survivin蛋白表达情况。逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测Smac和SurvivinmRNA表达情况。结果50例HCC标本中表达Smac有21例(42.0%),而除2例癌旁组织外,其他癌旁组织和正常肝组织中均见Smac表达;Survivin在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中分别有46例、2例和0例表达;50例肝癌组织中Smac阳性率为40.0%(20/50),肝癌组织和非肝癌组织中Smac的表达差异具有统计学意义,Survivin在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中阳性率分别为90.0%(45/50)、10.0%(2/20)和0%(0/15),肝癌组织和非肝癌组织中Survivin的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Smac在肝癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。     

Caspase-8、caspase-3在5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的　研究 5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil,5 Fu)诱导HepG2细胞凋亡中caspase 8和cas pase 3活性的变化及其作用。 方法　用 0 .0 1mol/L的 5 Fu处理HepG2细胞 ,分别作用 1、2、4、8、16、2 4h ,通过caspase 8、caspase 3荧光检测试剂盒检测HepG2细胞凋亡过程中caspase 8、caspase 3活性变化。流式细胞仪检测加入caspase 8或caspase 3抑制剂及不加抑制剂的 5 Fu诱导HepG2细胞凋亡百分率。结果　HepG2细胞caspase 3、caspase 8活性随 5 Fu作用时间延长而逐步升高 ,分别于 4h(733± 19.0 )和 16h(313.9± 6 .9)后达到高峰 ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 .0 1)。阻断cas pase 8活化后 ,caspase 3活性下降 ,而阻断caspase 3活化后 ,caspase 8活性无变化。caspase 8、caspase 3抑制剂能阻断caspase 8和caspase 3活化而抑制 5 Fu诱导HepG2细胞凋亡 ,实验组与抑制剂组比较差异有显著意义 (P <0 .0 1)。结论　 5 Fu诱导HepG2细胞凋亡中caspase 8介导caspase 3的活化。5 Fu通过caspase级联反应诱导HepG2细胞凋亡 ,阻断此反应能抑制凋亡。     

肝癌中caspase-3、caspase-9和Smac的表达及其意义

原发性肝癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来死亡率增加了41.7%,已成为我国死亡率第2位的肿瘤[1]。研究表明细胞凋亡与原发性肝癌的发生、发展及治疗密切相关。细胞内固有的caspase-3和caspase-9在细胞的凋亡过程中起着重要的作用;     

Genistein调节肝癌细胞PTEN和survivin蛋白表达的实验研究

目的探讨genistein对肝癌HepG2细胞株PTEN和survivin蛋白表达的影响及在诱导凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照组,实验各组以60μmol／L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Western-blotting分析细胞PTEN和survivin蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果对照组IP3含量为(29．2±0．6)pmol／106 cells,PTEN蛋白与内参Actin蛋白灰度和面积之积的比值V-PTEN／V-actin为0．12±0．001, survivin蛋白与内参actin蛋白灰度和面积之积的比值V-survivin／V-actin为0．63±0．06,细胞凋亡率为2．6％±0．1％。Genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后IP3分别为(12．0±1．4) pmol／106cells、(7．5±0．8)pmol／106cells、(5．6±0．5)pmol／106cells、(3．3±0．6)pmol／106cells; V-PTEN／V-actin分别为13．13±0．20、19．17±1．09、28．51±2．18、41．12±3．80;V-survivin／V-actin分别为0．36±0．13、0．33±0．03、0．23±0．04、0．18±0．04;细胞凋亡率分别为2．7％±0．2％、7．4％±0．5％、20．5％±2．0％、30．7％±1．6％。与对照组相比,genistein作用于肝癌Hep G2细胞12 h后各时相IP3和survivin蛋白显著降低,24 h后各时相细胞凋亡率显著增高。结论Genistein能减少IP3生成,上调PTEN基因表达,下调survivin基因表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

Caspase-8在5氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的探讨 5氟尿嘧啶 (5 Fu)诱导肝癌细胞凋亡与caspase 8活性变化的关系。方法采用caspase 8荧光检测试剂盒检测HepG2细胞凋亡过程中caspase 8活性变化。流式细胞仪检测加入caspase 8抑制剂IETD FMK后 5 Fu诱导的HepG2细胞凋亡百分率的变化。结果不同浓度的 5 Fu均可诱导HepG2细胞caspase 8活性升高 ,高浓度与低浓度比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1)。肝癌细胞的caspase 8活性随 5 Fu作用时间延长而逐步升高 ,至 16h后达到高峰。IETD FMK能阻断caspase 8活化而抑制 5 Fu诱导的HepG2细胞凋亡。结论 5 Fu通过caspase 8信号传导通路诱导肝癌细胞凋亡 ;5 Fu诱导caspase 8活性升高有浓度与时间依赖性     

维生素K3促肝癌细胞凋亡的实验研究

目的观察维生素K3(VitK3)对肝癌细胞系HEPG2、Caspase3、BCL2基因的凋亡诱导作用。方法将不同浓度的VitK3作用于HEPG2细胞观察其作用的时间效应及剂量效应,应用细胞形态学,流式细胞术,DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法检测凋亡相关基因Caspase3,Bcl2mRNA表达的变化。结果VitK3对HEPG2细胞的生长有明显的抑制作用,并诱导肿瘤细胞发生凋亡;细胞体积缩小,核固缩,折光性加强;DNA凝胶电泳显示DNALadder在G1期之前出现SubG1峰。凋亡相关基因Caspase3转录水平比用药前增强。结论VitK促HEPG2细胞凋亡,且与Caspase3基因表达有关。     

重离子与X射线辐射人肝癌细胞后细胞凋亡及STAT-3基因表达的研究

目的 探讨重离子辐射对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖及细胞凋亡的影响,以及STAT-3基因表达的变化.方法 采用克隆存活及流式细胞技术,探讨体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞周期及细胞凋亡的变化,并采用RT-PCR法及Western blotting法检测肝癌细胞系SMMC-7721 STAT-3基因的表达.结果 人肝癌细胞系SMMC-7721经不同剂量重离子辐射后,随辐射剂量增加,细胞存活率(SF)明显降低(分别t=0.89、0.76、0.41、0.23,均P＜0.05).流式细胞仪检测显示细胞周期G2/M期阻滞增强,重离子较X射线作用更明显(分别t=1.31、8.26,P＜0.05),重离子辐射较X射线对细胞凋亡率影响更大(x2=48.46,P＜0.01).Western blotting和RT-PCR法均显示随着辐射剂量的增加STAT-3基因的表达逐渐增强.结论 重离子较X射线可更明显地诱导癌细胞凋亡,降低细胞存活率,人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞凋亡与STAT-3基因的表达相关.     

COX-2在肝细胞肝癌中的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨肝细胞癌(HCC)中环氧化酶-2(COX-2)的表达与细胞凋亡的关系及其可能的机制.方法 选用44例HCC组织制作组织芯片,应用免疫组织化学S-P法检测癌组织COX-2、caspase-3和survivin的表达情况.应用末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数(AJ).结果 HCC中COX-2蛋白阳性率为52.3%,其表达与AJ呈显著负相关r=-0.354,P＜0.05),与caspase-3蛋白表达也呈显著负相关(r=-0.447,P＜0.01),但与survivin蛋白的表达呈显著正相关(r=0.394,P＜0.01).AI与caspase-3呈显著正相关(r=0.381,P＜0.05),但与survivin呈显著负相关(r=-0.458,P＜0.01).结论 本研究证实了HCC中COX-2的抗肿瘤细胞凋亡作用;其机制可能是通过上调肿瘤细胞survivin表达,同时下调caspase-3表达途径实现的.     

NF-κB、Caspase-3在腺苷诱导人HepG2细胞凋亡中的作用

目的 研究NF-κB、Caspase-3在腺苷(ADO)体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡中的作用.方法 将不同浓度的ADO(0.1～5 mmol/L)作用于HepG2细胞,采用MTT法测定ADO抑制细胞增殖的时间效应和剂量效应.2.0 mmol/L ADO单用或联合NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC,100 μmol/L)作用HepG2细胞12 h、24 h,采用Hoechst 33342荧光染色法及流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡及细胞周期,Western blot技术检测NF-κB蛋白表达;荧光比色法测定Caspase-3酶活性.结果 ADO对HepG2细胞生长具有显著抑制作用,并呈一定的量效和时效关系.药物作用24 h、48 h的IC50分别为2.52 mmol/L和1.89 mmol/L.ADO单独处理HepG2细胞12 h和24 h或联合PDTC处理后,细胞凋亡率分别为8.30%、22.32%;20.18%、30.89%,均显著高于对照组(0.81%,P<0.001);ADO作用HepG2细胞后荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变,FCM分析药物处理组显示典型特征性的亚二倍体凋亡峰(sub-G1),细胞生长周期阻滞于G0/G1期;同时伴有Caspase-3活性显著升高(P<0.05).ADO处理后显著增加了NF-κB蛋白表达(P<0.05);PDTC有效抑制了NF-κB表达,同时增加了 Caspase-3活性及ADO的细胞毒作用(P<0.05).结论 ADO诱导了HepG2细胞凋亡并活化Caspase-3.抑制NF-κB活性可通过Caspase-3途径增强ADO的细胞毒作用.     

生存素和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3在肝癌中的表达及其关系

目的　探讨生存素 (Survivin)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3 (Caspase 3 )在原发性肝细胞癌 (HCC)组织中的表达及两者在肝癌细胞凋亡中的作用和关系。方法　采用蛋白印迹和免疫组织化学法检测 43例肝癌组织、2 0例癌旁组织和 11例正常肝组织中Survivin和Caspase 3蛋白表达情况。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测Survivin和Caspase 3表达情况。 结果　肝癌组织中Survivin表达率为 69.8% (3 0 /4 3 ) ,而除 1例癌旁组织外 ,其他癌旁组织和正常肝组织中未见表达 ;Caspase 3在癌组织、癌旁组织和正常肝组织中表达率分别为 2 9.4% (18/4 3 )、75 .0 % (15 /2 0 )和 81.8% (9/11)。结论　Survivin在肝癌组织中高表达 ,并通过抑制Caspase 3而抑制肝癌细胞凋亡 ,两者可能是肝癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环。     

诱骗受体3在肝细胞癌组织中的表达及其与凋亡的关系

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中诱骗受体3(DcR3)表达和意义及与细胞凋亡的关系.方法 应用免疫组织化学Envision二步法和TUNEL技术对62例HCC组织和配对癌旁组织、15例正常肝组织进行DcR3和细胞凋亡检测.结果 44例HCC中DcR3表达、阳性表达率为70.97%,配对癌旁组织为20.96%,正常肝组织无阳性表达,HCC中DcR3表达明显高于其他组(P<0.01),门静脉癌栓形成组中DcR3表达高于阴性组(P<0.01).HCC、癌旁和正常肝组织凋亡指数(AI)分别为3.52±1.65、6.08±1.71和6.87±1.78,HCC与后两者比较差异有统计学意义(P<0.01).DcR3阳性表达组中AI明显低于阴性组(P<0.01).结论 DcR3在HCC呈稳定高表达,与癌细胞凋亡相关,可能参与HCC的发生和影响肿瘤的预后.     

原发性肝细胞癌中错配修复基因hMLH1的表达及其意义

目的　探讨错配修复基因hMLH1在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织中hMLH1蛋白和mRNA的表达情况,同时采用原位末端标记法测定癌组织的细胞凋亡指数。结果　48例肝癌组织、2 3例癌旁组织和2 5例正常肝组织的hMLH1mRNA表达分别为62 .5 % (3 0 /4 8)、10 0 .0 % (2 3 /2 3 )和10 0 .0 % (2 5 /2 5 ) ,蛋白表达分别为60 .41% (2 9/4 8)、91.3 0 % (2 1/2 3 )和10 0 .0 0 % (2 5 /2 5 )。hMLH 1表达与肝癌组织的临床分期有明显相关,hMLH1表达阳性的肝癌组织的细胞凋亡指数升高为(3 .5 62±0 .2 3 3 ) %。结论　hMLH1在肝癌组织中低表达,提示错配修复基因hMLH1功能缺陷在肝癌的发生、发展过程中起重要作用     

Caspase-8和Fas抗原调控化疗诱导的人肝癌细胞凋亡

目的　探讨Fas抗原和Caspase 8在化疗诱导人肝癌细胞凋亡中的调控作用。方法　用 1× 10 -2 mol/L浓度的氟尿嘧啶处理HepG2细胞 ,分别作用 4、8、16、2 4h。免疫细胞化学法检测Fas抗原的表达。用荧光试剂盒检测Caspase 8的活性。流式细胞仪检测氟尿嘧啶或抗 Fas 抗体诱导的肝癌细胞凋亡百分率 ,以及加入Caspase 8活性抑制剂IETD FMK后凋亡百分率的变化。 结果　氟尿嘧啶诱导HepG2细胞凋亡后 ,与对照组比较 ,Fas抗原表达强度增加 (P <0 0 1) ,Caspase 8活性升高 (P <0 0 1)。Fas抗原表达和Caspase 8活性随着氟尿嘧啶作用时间的延长而逐步升高 ,至 16h后达到高峰 ,然后下降 ,但仍显著高于对照组 (P <0 0 1)。Fas抗原的表达与Caspase 8活性变化呈显著正相关 (r =0 96 9,P <0 0 1)。表达增强的Fas抗原具有转导凋亡信号的功能 ,借此抗 Fas 抗体增强了氟尿嘧啶诱导的HepG2细胞凋亡。Caspase 8活性抑制剂IETD FMK能阻断Caspase 8活化而抑制氟尿嘧啶或抗 Fas 抗体诱导的HepG2细胞凋亡 ,实验组和抑制剂组比较 ,细胞凋亡百分率有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　氟尿嘧啶诱导HepG2细胞经Fas依赖途径凋亡。Caspase 8活性上调在该凋亡过程中发挥重要作用。     

肝细胞癌中SEMA3B基因的表达及其意义

目的 通过对SEMA3B基因在原发性肝细胞癌（HCC）组织中表达的检测，探讨该基因与HCC发生机制的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测35例HCC组织及癌旁肝组织SEMA3BmRNA表达水平。结果 （1）在所有受检的癌旁肝组织中，SEMA3BmRNA表达率为85．7％（30／35），明显高于癌组织的表达率20．0％（7／35），差异有统计学意义（P〈0．01）；（2）合并有肝硬化（20／28）或者乙肝（19／28）的患者，其癌组织中SEMA3B基因的表达缺失率显著高于无肝硬化（8／28）或乙肝阴性（9／28）患者（P〈0．05）；（3）SEMA3B基因的异常表达情况与年龄、性别的差异无统计学意义（P〉0．05），与HCC患者术前肝功能Child—Pugh分级评价和血清AFP的检测值高低无相关（P〉0．05）；（4）SEMA3B的表达缺失率与TNM分期关系无统计学差异，低分化型癌组织中SEMA3B基因缺失率高于中、高分化型，但差异无统计学意义（P〉0．05）。此外，该基因的缺失与肿瘤大小无关（P〉0．05）。结论 SEMA3B基因在HCC组织中的高频表达缺失说明该基因的失活与HCC的发生密切相关。SEMA3B基因是定位于染色体3p21．3区域的与HCC相关的抑癌基因，并且可能在HCC的发生发展方面起重要作用。     

瘢痕组织中Caspase-3/8的表达与细胞凋亡

目的：观察天冬酰胺特异性酶切的半胱氨酸蛋白酶成员caspase-3/8在瘢痕组织中的表达,了解caspase-3/8在瘢痕形成过程中诱导修复细胞凋亡的变化规律。方法：瘢痕标本来自烧伤后来我院进行整形手术的病人,同时取病人手术供皮区的正常皮肤作为对照。8例瘢痕组织标本(含2例愈合较为平坦的瘢痕和6例增生性瘢痕组织)被分成增殖期和成熟期两组。运用原位杂交和免疫组化法检测瘢痕及正常皮肤真皮内caspase- 3/8 mRNA及其蛋白的表达,并以TUNEL方法检测瘢痕及正常组织中的凋亡细胞。结果：瘢痕组织内caspase- 3/8mRNA及其蛋白的表达明显高于正常组织,增生性瘢痕组织的表达又强于较为平坦的瘢痕。同时组织中细胞凋亡的数目明显不同。瘢痕内的TUNEL标记阳性细胞数多于正常组织;增殖期瘢痕内的细胞凋亡的数目多于成熟期。增生性瘢痕与较平坦的瘢痕相比,增殖期TUNEL标记阳性的细胞多于平坦瘢痕,而成熟期两者无显著性差别。结论：伤口愈合过程中,caspase-3/8参与了修复细胞的凋亡括动,病理性的愈合结局与caspase-3/8表达密切相关。     

凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的 研究部分凋亡及血管生成因子在肝细胞肝癌（肝癌）中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测90例肝癌标本中p53、Survivin、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况,并分析其与肝癌术后复发的关系。结果 p53、Survivin、MMP-2、MMP-9及VEGF的阳性率分别为33．3％、51．1％、60．0％、37．8％及76．7％。经相关性分析,VEGF与MMP-2、VEGF与MMP-9的表达呈正相关;MMP-2、MMP-9及VEGF与术后复发呈正相关（P〈0．05）。MMP-2阴性组的1、2、3年无瘤生存率分别显著高于MMP-2阳性组中的相应指标（P〈0．05）,MMP-9和VEGF中亦发现类似结果。多因素分析发现术前播散结节、镜下微转移灶、血清甲胎蛋白水平以及VEGF和MMP-9的表达水平是肝癌术后复发的独立危险因素。结论 p53和Survivin与肝癌术后复发无关;MMPs和VEGF与肝癌术后复发相关,可用于评价术后复发风险。     

高转移潜能肝癌细胞株中凋亡相关蛋白的表达及意义

目的 探讨肝癌细胞转移潜能与凋亡敏感性之间的关系.方法 观察不同转移潜能的肝癌细胞株在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及依托泊苷(Etoposide)的作用下的凋亡发生率及Caspase3的活化,Western blot检测bcl-2及IAP家族蛋白在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达.结果 TNF-α(10μg/L)作用后48 h,高转移潜能肝癌细胞株HCCLM3及转移能力最弱的肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡率分别为(91.3±6.5)%及(58.8±2.3)%,MHCC97L细胞的凋亡率则位于两者之间(P≤0.01).Etoposide(250 μmol/L)作用后48 h,HCCLM3、MHCC97L及SMMC-772的凋亡发生率分别为(27.0±4.0)%、(34.6±3.8)%及(84.5±1.1)%(P≤0.01).3种细胞株中Caspase3的活性也有明显差异.bcl-2及IAP家族蛋白表达研究中发现XIAP的表达与肝癌细胞的转移潜能成梯度相关.结论 高转移潜能肝癌细胞株耐受多种凋亡刺激,可能与XIAP的过度表达相关.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓中的表达及意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓中的表达及意义.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测20例人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓和20例未发生转移的原发性肝癌组织中TRAIL受体mRNA的表达水平.结果 死亡受体DR4、DB5在无转移的肝癌组织分别为(3.59±0.87)、(1.98±0.54),伴有门脉癌栓的肝癌原发灶组织(分别设定为1)及其门脉癌栓组织中的表达量分别为(0.62±0.28)、(0.31±0.12),呈递减趋势(P<0.05).诱捕受体DcR1、DcR2在伴有门脉癌栓的肝癌组织中的表达量分别为(0.29±0.04)、(0.54±0.08),显著低于无转移的肝癌组织(分别设定为1)(P<0.05).而在伴发PVTT的HCC中,门脉癌栓组织与其肝癌原发灶组织中DcR的表达量差异无统计学意义(P>0.05).DR的表达水平与肿瘤的分化程度(r=0.461,P<0.05)及门静脉浸润情况(r=0.587,P<0.05)呈显著正相关.DR的表达水平与肿瘤的大小及血清甲胎蛋白(AFP)浓度无明显相关(P>0.05).结论 TRAIL死亡受体DR的表达下调可能与肝癌的恶性进展密切相关.TRAIL 途径诱导凋亡在肝癌转移过程中可能起到重要的作用.