强直l生脊柱炎患者外周血T细胞凋亡及亚群极化分析

目的探讨外周血T细胞凋亡以及T细胞亚群极化在强直性脊柱炎患者免疫发病机制中的作用。方法CT检查患者骶髂关节并分为I、Ⅱ和Ⅲ级。尼龙棉枉法分离患者外周血T细胞,PI染色结合流式细胞术检测T细胞凋亡率,流式细胞术测定CD4＋CD30CF、CD4＋CD30-T、CD8＋CD30Cr、CD8＋CD30_1r细胞百分率。结果与健康对照者相比。AS患者外周血T细胞凋亡率明显降低（p〈0．05）。Ⅰ和Ⅱ级患者外周血CD4CF细胞和CD4＋T／CD8CF比值均明显降低（P〈0．05）,CD8＋T细胞百分率明显升高（P〈0．05）。AS患者外周血CD4＋CD30＋T无明显变化;而CD8＋CD30CF均明显高于健康对照者（P〈0．05）。Ⅰ、Ⅱ级患者CD4＋CD30-／CD4＋CD30＋比值明显低于健康对照者（P〈0．05）;Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者CD8＊CD30-／CD8＋CD30＋比值明显低于健康对照者（P〈0．05）。结论AS患者外周血T细胞凋亡不足和T细胞亚群极化失衡与AS患者免疫学发病机制有关。     

喘可治注射液增强细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤活性的初步研究

目的通过喘可治注射液对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的表型及细胞因子分泌情况的影响,探讨喘可治注射液对CIK免疫活性的免疫调节作用。方法分离健康志愿者的外周血单个核细胞,在细胞因子的作用下,体外培养成细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）,在培养过程中同时加入喘可治注射液。LDH法检测不同浓度喘可治注射液培养条件下的CIK细胞的抗肿瘤活性。流式细胞术检测CIK细胞表型及细胞内因子的分泌情况变化。Annexin V/PI凋亡试剂盒检测CIK细胞的凋亡情况。结果喘可治注射液能提高CD3＋CD56＋双阳性的CIK细胞的比例,增强其杀伤肿瘤细胞的活性,促进具有抗肿瘤效应的Th1型的细胞内因子IFN-γ、TNF-α的分泌,而对CD4＋CD25＋抑制性细胞和Th2型的细胞因子IL-4的分泌影响不大。喘可治注射液对CIK细胞的凋亡没有明显作用。结论喘可治注射液可上调CIK细胞分泌Th1型的细胞因子,增强CIK细胞的抗肿瘤活性。     

Graves病患者外周血CD4+CD28-T淋巴细胞的检测和分选

目的 分析CD4^＋CD28ˉT淋巴细胞Graves病（毒性弥漫性甲状腺肿）患者外周血的表达及探索纯化该T细胞的有效方法。方法 运用常规密度梯度法分离Graves病患者外周血单个核细胞,用CD4、CD28单克隆抗体进行免疫荧光双标记后进行流式细胞术检测和分选。结果 Grave病患者外周血T细胞亚群中,CD4^＋CD28ˉ的表达率明显高于正常人（P〈0．01）,采用流式细胞术和单克隆抗体双标记对CD4^＋CD28ˉT淋巴细胞进行快速无菌分选是可行的。结论 流式细胞术可用于Graves病患者外周血CD4^＋CD28ˉT淋巴细胞的检测和分选。     

脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义

目的对♀、♂狼疮性BXSB小鼠外周血T、B淋巴细胞分布及脾脏T、B淋巴细胞凋亡进行比较探讨脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B淋巴细胞凋亡在狼疮性BXSB小鼠发病机制中的意义。方法运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测外周血CD4^＋T、CD8^＋T、CDl9^＋B细胞分布及脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B细胞凋亡;直接免疫荧光法观察♀、♂狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化。结果与早BXSB小鼠比较,6BXSB小鼠外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞分布明显降低（P〈0．01）,外周血CDl9^＋B细胞分布及脾脏CD4^＋T、CDl9^＋B凋亡率明显升高（P〈0．01）;6BXSB小鼠绝大多数肾小球毛细血管襻上可见大量IgG呈片状沉积,而早BXSB小鼠肾脏几乎无IgG沉积。结论6BXSB小鼠发病较早BXSB小鼠重,细胞凋亡在BXSB小鼠发病机制中具有重要意义。     

人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4~＋T细胞增殖活性的影响

目的观察人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4＋T淋巴细胞增殖活性的影响。方法体外分离、纯化BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞,流式细胞技术检测CD4＋T细胞BAFF-R表达,MTT法观察不同剂量BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的CD4＋T细胞增殖活性的影响。结果台盼蓝染色分离后的BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞活性率为（93.6±3.2）%;流式细胞技术检测BXSB狼疮鼠脾脏CD4＋T细胞表达BAFF-R;100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml BAFF-R-IgG4mut蛋白作用于BAFF和CD3抗体刺激的CD4＋T细胞后,CD4＋T细胞增殖抑制率分别是56.24%、67.07%和75.45%,较单纯BAFF＋CD3抗体组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可体外抑制BXSB狼疮鼠CD4＋T细胞增殖活性。     

慢性湿疹患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的检测

目的 研究外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Treg细胞）数量改变所致的细胞免疫抑制效应在慢性湿疹发病机制中的作用.方法 采用免疫荧光标染技术,经流式细胞仪检测30例慢性湿疹患者和33例正常人外周血CD4^＋CD25^＋T细胞数量及胞内转录因子Foxp3（forkhead box p3）表达水平.结果 慢性湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg细胞数量比正常人对照组明显下降（P＜0.001）.结论 慢性湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞数量下降导致参与IV型变态反应的效应性T细胞功能活性增强,这可能是湿疹发病机制之一.     

新生儿脐带血T细胞亚群的流式细胞仪检测

目的：检测我国新生儿脐带血T细胞亚群的变化.方法：使用全自动血液分析仪进行血常规检测;荧光素标记的抗CD4/抗CD8/抗CD3和抗CD4/抗CD25/抗CD3单克隆抗体对血液细胞表面分子进行免疫荧光染色,用流式细胞术进行各细胞亚群计数和分析.结果：新生儿脐带血中红细胞（RBC）计数、血红蛋白（Hb）含量、白细胞（WBC）计数、淋巴细胞百分比与成人外周血有显著性差异.新生儿脐带血组中CD3^＋T细胞、CD3＇CD4^＋T细胞、CD3^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋CD8^＋T细胞、CD4^＋CD25^high调节性T细胞、CD4^＋CD25^intT细胞、CD4^＋CD25^-T细胞绝对计数及其在各自细胞亚群中的百分比均存在显著性差异.结论：中国正常新生儿脐带血与成人外周血的RBC、Hb、WBC及T细胞亚群检测结果存在显著性差异,这与新生儿免疫机制发育不完全是相符合的.     

中药喘可治对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用机理研究

目的研究中药喘可治(Chuankezhi,CKZ)对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用的机理。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,分别加入巴戟天(Bajitian,BJT)提取物(50μg·mL-1)、淫羊藿(Yinyanghuo,YYH)提取物(100μg·mL-1)和喘可治(50μg·mL-1BJT+100μg·mL-1YYH),预孵育4h后,加入刺激剂,12h后,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果与对照组相比,巴戟天提取物处理组中CD3+T淋巴细胞CD69的表达水平明显升高;与刺激组相比,巴戟天提取物可以协同刺激CD69的表达。淫羊藿提取物对静息状态下的CD+3T淋巴细胞CD69的表达作用不明显,但可以抑制刺激剂引起的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。与前两者相比,喘可治则呈现明显的双向免疫调节作用,即上调静息状态的CD+3T淋巴细胞CD69的表达,下调刺激状态的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。结论喘可治对T淋巴细胞活化的双向调节作用是巴戟天和淫羊藿共同作用的结果,其中巴戟天具有促进免疫应答的作用,而淫羊藿具有抑制免疫应答的作用。     

二期梅毒患者外周血Th1分化偏态性分析

目的探讨二期梅毒患者外周辅助性T淋巴细胞（Th）亚群的分化取向及其在梅毒发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测经三色荧光抗体染色的二期梅毒患者外周血CD4^＋／IFN-γ^＋（Th1）、CD4^＋ 1／IL-4^＋（Th2）、CD4^＋／IFN-γ^＋／IL-4^＋（Tho）细胞含量。结果梅毒组Thl细胞含量、Thl／Th2比值均明显低于正常对照组（P〈0．05），梅毒组存在Thl细胞分化偏态性。结论二期梅毒患者Th细胞亚群分化失衡，可能是机体不能完全清除T．p，造成T．p潜伏体内形成长期感染的关键因素。     

T淋巴细胞亚群异常与特发性血小板减少性紫癜的关系

目的 通过检测T淋巴细胞亚群及其凋亡，初步探讨T淋巴细胞亚群异常在特发性减少性紫癜（ITP）发病机制中的作用。方法 采用流式细胞术对ITP患者及正常对照组的外周血淋巴细胞亚群进行检测；DNA琼脂糖凝胶电泳检测T淋巴细胞的凋亡。结栗ITP患者CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋CD25^＋T细胞比例均显著低于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），而CD8^＋T细胞和CD4^＋T细胞表面Fas表达均较正常组增加（P〈0．01）；T淋巴细胞凋亡敏感性增加。结论 ITP患者外周血T淋巴细胞亚群异常，T细胞免疫调控亚群（CD4^＋CD25^＋）凋亡增多，对自身反应性T细胞亚群免疫下调作用降低，破坏自身免疫耐受，在ITP的发病中起重要作用。     

青蒿琥酯联合阿霉素对人舌鳞癌Tca8113细胞抑制作用的实验研究

目的研究青蒿琥酯(Art)与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响。方法通过MTT法测定Art和ADM对Tca8113细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术分析细胞周期变化;利用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色观察经Art作用前后Tca8113细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果 Art和ADM对Tca8113有显著地抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈明显的时间-剂量效应(P0.05);Art(25μg.mL-1)和ADM(0.39～1.56μg.mL-1)联合给药可对Tca8113产生增强的联合杀伤效果(P0.01);流式细胞术检测Art可使细胞周期阻滞于G2/M期和S期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集呈新月形。结论 Art对Tca8113细胞有显著地抑制作用,其机制可能为阻滞细胞周期于G2/M期和S期以及诱导细胞凋亡。Art与ADM合用具有较好联合效应,可增强Tca8113对ADM的敏感性。     

乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响

目的：研究乌贼墨对小鼠T细胞亚群和T细胞活化的影响。方法：实验组小鼠每天灌胃5%的乌贼墨0.5ml,连续7d。对照组小鼠给予等量生理盐水。流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达。结果：实验组小鼠外周血CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达较对照组小鼠均有明显升高,而CD8^＋T细胞却无显著性变化。结论：乌贼墨通过增高CD4^＋T细胞百分比、CD4^＋/CD8^＋比值及IL-2αR（CD25）表达对小鼠免疫功能进行调节。     

中晚期宫颈癌患者放化疗前后HPV感染与T细胞变化的相关性

目的：本研究旨在检测宫颈癌患者放化疗前后外周血和宫颈组织中T细胞亚群的变化规律,研究放化疗前后患者机体免疫功能状态的改变,并探讨对中晚期宫颈癌患者进行适时、合理免疫治疗的临床意义。方法：采用流式细胞仪检测（flow cytometry,FCM）分析2010年1月～2011年9月我院收治的60例维吾尔族宫颈癌患者放化疗前后外周血中CD3＋、CD4＋、CD8＋和CD4＋CD25＋T细胞百分数;免疫组织化学SP法检测宫颈组织中CD3＋TILs、CD4＋TILs、CD8＋TILs、Treg细胞的分布情况;HPV检测。结果：宫颈癌患者外周血中放化疗前组CD3＋、CD4＋、CD8＋和CD4＋CD25＋T细胞百分数及Foxp3mRNA（相对量）比值分别为（67.23±5.21）%、（31.30±4.11）%、（34.77±6.41）%、（10.81±1.60）%、0.318±0.027;放化疗后组各指标分别为：（70.89±5.52）%、（35.42±4.72）%、（29.85±6.02）%、（6.96±0.94）%、0.266±0.028;宫颈组织中放化疗前组CD3＋、CD4＋、CD8＋和CD25＋T细胞百分数及Foxp3：（49.22±4.32）%、（30.02±4.93）%、（38.13±2.21）%、（12.66±1.78）%、60.18±5.02;放化疗后各指标分别为：（53.11±4.49）%、（36.12±4.21）%、（31.65±1.93）%、（7.87±1.14）%、40.26±4.88;HPV半定量放化疗前（581±22%）,放化疗后（154±19%）。结论：中晚期维吾尔族宫颈癌患者放化疗后免疫功能有好转趋势,但均未能恢复到正常水平,且免疫功能与HPV感染呈正相关。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

口疡清方对复发性口腔溃疡模型大鼠免疫功能的研究

目的研究口疡清方对复发性口腔溃疡（recurrent oral ulcer，ROU）模型大鼠免疫功能的影响，探讨该方对ROU的预防和治疗作用。方法①用免疫法建立大鼠ROU模型，并用口疡清方行早期预防和模型成功后治疗；②用流式细胞术（{lowcytometry，FCM）检测各组大鼠外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞比例。结果模型大鼠CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞均下降，而口疡清方的早期预防和后期治疗均可以明显提高相应的比例，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论口疡清方可以解除ROU的免疫抑制状态，增强模型大鼠的免疫功能，对R0u具有防治作用。     

难治性血小板减少性紫癜靶向干预治疗及免疫功能分析

目的 探讨重组人血小板生成素（rhTPO）联合达那唑对难治性特发性血小板减少性紫癜（ITP）的疗效及免疫功能变化的临床意义.方法 收集难治性血小板减少性紫癜56例采集患者治疗前和治疗1月后外周血,用流式细胞术分别检测外周血淋巴细胞亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4/CD8、CD19＋、及CD4＋CD25＋调节性T细胞比例.结果 rhTPO联合达那唑治疗难治性ITP总有效率为69.2%.与正常对照组相比患病组CD8＋细胞比例增高（P＜0.01）,CD4＋细胞比例减少,CD4/CD8比值降低（P＜0.05）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例下降明显,B细胞比例无明显变化.与治疗前相比治疗后ITP患者CD8＋细胞比例减少（P＜0.001）,CD4＋细胞比例增高（P＜0.001）,CD4＋CD25＋调节性T细胞比例降低（P＜0.001）,CD4/CD8比值和B细胞比例无明显变化（P＞0.05）.结论 难治性ITP患者存在明显的T细胞免疫紊乱,rhTPO联合达那唑治疗ITP可以明显提升血小板,并且血小板的升高与CD4＋细胞比例和CD4＋CD25＋调节性T细胞比例与呈正相关.     

ESRD患者细胞免疫功能与氧化应激关联的研究

目的观察终末期肾脏病（ESRD）患者T淋巴细胞亚群的变化及与氧化应激的关联。方法选择住院和门诊ESRD患者40例,其中20例接受血液透析治疗,为I组;另20例未接受血液透析治疗,为Ⅱ组;选择同期健康体检者20例为Ⅲ组。检测3组血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和T淋巴细胞亚群、凋亡。结果①与Ⅲ组比较,ESRD患者CD3＋、CD4＋T细胞数及CD4＋／CD8＋比值均显著下降（P〈0．05）;而CD3＋、CD4＋T细胞凋亡率显著升高（P〈0．01）;两者呈负相关（r=-0．79,P〈0．01;r=-0．87,P〈0．01）。②与Ⅲ组比较,ESRD患者血清MDA明显升高（P〈0．05）,SOD明显下降（P〈0．05）;并且CD3＋、CD4＋T细胞凋亡率与MDA呈正相关（r=0．41,P〈0．05;r=0．58,P〈0．01）。结论ESRD患者T淋巴细胞亚群数量减少与其凋亡率相关,后者又与氧化应激状态关联。因此推测氧化应激可能诱导淋巴细胞过度凋亡,促使细胞数减少。加重ESRD患者免疫功能紊乱。     

鼻咽非角化鳞状细胞癌组织内T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的观察T淋巴细胞亚群在鼻咽非角化鳞状细胞癌中的表达情况,探讨免疫细胞的变化在鼻咽癌发生发展中的意义。方法通过免疫组化SP法和免疫组化双染法检测CD3、CD4、CD8、CD4FoxP3和CD8FoxP3在101例鼻咽癌和21例鼻咽黏膜慢性炎中的表达。结果 CD3、CD4、CD8、CD4FoxP3、CD8FoxP3在鼻咽癌组与黏膜慢性炎组之间的表达差异均有统计学意义,P〈0.05。CD3^＋、CD4^＋FoxP3^＋、CD8^＋FoxP3^＋T细胞在分化型非角化鳞状细胞癌和未分化型鳞状细胞癌中的表达差异有统计学意义,P〈0.05。结论鼻咽非角化鳞状细胞癌中,T淋巴细胞亚群数量变化提示了机体免疫功能低下,为鼻咽癌的发生发展提供了良好的条件。不同分化程度的鼻咽癌肿瘤微环境内的免疫状态不同。