亲血栓性靶向超声造影剂的制备及体外实验初步研究

目的 制备亲血栓性靶向超声造影剂，探讨其体外寻靶的特点和规律。方法 在自制的白蛋白超声造影剂的基础上，采用交连法制备血栓靶向微泡造影剂。体外实验分3组：A组，将靶向造影剂滴加于健康人新鲜血凝块上，光镜下观察微泡与血凝块的粘附情况；B组对照，普通白蛋白造影剂；C组对照，6—肽阻断实验。结果 A组微泡在血凝块外围形成一条凝聚带，并顺着网格状的纤维素带延伸到血块内部，而两对照组均未见微泡与血凝块的结合。结论 采用交连法可制备亲血栓性靶向白蛋白超声造影剂；该造影剂微泡在体外能与人新鲜血凝块高效特异结合。     

靶向高分子造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的制备一种特异性靶向肝癌细胞的高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与抗体偶联制备出靶向高分子造影剂。检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力,并与普通高分子造影剂做比较。结果高分子造影剂的平均粒径600.5 nm,体外寻靶试验显示,该靶向高分子造影剂较多并牢固的聚集到肝癌细胞表面;普通高分子造影剂对照组末见造影剂和细胞的结合。结论成功制备出特异性结合人肝癌抗体的靶向高分子超声造影剂。该造影剂在体外对肝癌细胞具有较强的特异性亲合力。     

靶向血栓高分子超声造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的制备靶向血栓高分子超声造影剂,并对其理化性质及体外寻靶能力进行研究。方法以高分子材料端羧基聚乳酸/羟基乙酸(PLGA-COOH)为载体,采用双乳化法制备PLGA微球;并用碳二亚胺法将该微球与血栓靶向短肽片段精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(RGDS)共价结合制备靶向血栓高分子超声造影剂(RGDS-PL-GA);检测该造影剂的理化特性并通过体外寻靶实验,评价其对血栓的亲和性。结果采用本法成功制备了RGDS-PLGA,其形态规则,呈大小均匀的球形,平均粒径为(1.21±0.27)μm,RGDS携带率25.69%。体外实验显示RGDS-PLGA可以牢固结合到血栓表面。结论采用双乳化法及碳二亚胺法可以成功制备靶向血栓高分子超声造影剂,该造影剂粒径小,对血栓具有很强的靶向性及稳定性,有望在分子水平为血栓的诊断提供新方法。     

靶向纳米脂质超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究

目的 制备一种靶向乳腺癌的纳米脂质超声造影剂,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人乳腺癌细胞单克隆抗体Neu(F-11),并检测其生物素化程度和活性;通过生物素-亲和素系统制备靶向纳米脂质超声造影剂,用免疫荧光染色定性检测造影剂与抗体的连接情况,通过靶向造影剂与不同细胞的结合实验检测其寻靶能力.结果 每分子抗体可结合的生物素数目平均为7个,生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低;免疫荧光染色显示靶向纳米脂质超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光,细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固结合.结论 生物素-亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合,所制得的靶向纳米脂质超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力.     

携带cRGD肽的靶向纳米粒超声造影剂的制备以及体外寻靶实验研究

目的 制备携带精-甘-天冬氨酸（cRGD）肽的聚乳酸/羟基乙酸（PLGA）纳米粒超声造影剂,观察其在体外对大鼠肝星状细胞（HSC）的靶向能力。方法 以PLGA-COOH和全氟新溴烷（PFOB）为原料,采用双步乳化法制备PLGA-PFOB纳米粒,采用光学显微镜、扫描电镜以及透射电镜观察其表面以及内部结构;采用马尔文粒径分析仪测量其粒径大小、分布以及表面电位;通过碳二亚胺法连接cRGD肽制备靶向纳米粒超声造影剂（cRGD-NPs）,用激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪检测PLGA-PFOB纳米粒造影剂与cRGD肽的连接情况;在大鼠HSC中验证该造影剂的靶向性能。结果 所得样品为乳白色混悬液,纳米粒大小均匀,粒径分布较窄,平均粒径（255.3±66.8）nm,多分散指数为0.025,Zeta电位为（-16.4±5.1）mV;扫描电镜示纳米粒表面光滑规则、透射电镜示PLGA外壳里包裹液氮氟碳PFOB;共聚焦显微镜观察到连接FITC-cRGD显示为绿色,与显示红色的纳米粒共同融合成橙色,靶向纳米粒超声造影剂大量向大鼠HSC聚集并被其吞噬,红色荧光强度明显多于普通非靶向造影剂。结论 成功制备的携带cRGD肽的纳米粒超声造影剂,在体外实验中对大鼠HSC有较强的特异性亲和力。     

叶酸靶向超声造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的 制备偶联叶酸的靶向超声微泡造影剂,鉴定其基本性质,并探讨体外寻靶能力.方法 将DSPE-PEG(2000)Folate溶入微泡成膜材料中,制备叶酸靶向超声微泡造影剂.用DFY型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度.通过光镜和激光共聚焦显微仪观察该靶向造影剂对SKOV3细胞的体外寻靶情况,以普通超声微泡作对照.结果 靶向超声微泡的大小、粒径及分布与普通超声微泡相似.体外寻靶试验显示,该靶向微泡可以较多并牢固地聚集到SKOV3细胞表面,而普通微泡对照组未见特异性结合.结论 成功制备出偶联叶酸的靶向超声微泡造影剂.该造影剂在体外对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强的特异性亲合力,有望成为靶向显像卵巢癌的理想造影剂.     

载ICAM-1抗体的靶向脂质纳米超声造影剂体外寻靶实验研究

目的 制备一种载细胞间黏附因子-1 (ICAM-1)单克隆抗体的脂质纳米超声造影剂,研究其体外寻靶能力.方法 采用机械振荡法制得普通脂质纳米超声造影剂和生物素化的脂质纳米超声造影剂,利用生物素-亲和素桥接法将ICAM-1抗体连接于脂质纳米超声造影剂上,制成靶向造影剂,检测两种造影剂的物理性质.将上述两种造影剂分别作用于普通HepG2细胞和经TNF-α处理的HepG2细胞,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞上ICAM-1荧光表达强度,荧光显微镜观察造影剂与HepG2细胞靶向结合的情况.结果 普通造影剂粒径为(623.2±91.37) nm;靶向造影剂粒径为(760.6±145.0) nm.经TNF α刺激后HepG2细胞ICAM-1基因的表达量明显增高.普通造影剂组均未见造影剂与HepG2结合,而靶向造影剂组可见大量的造影剂聚集在经TNF-α刺激后的HepG2细胞周围.结论 本研究自制的载ICAM-1抗体的靶向脂质纳米超声造影剂,其粒径小,性质稳定,在体外能与高表达ICAM-1的HepG2细胞特异结合,可望成为一种良好的肝癌靶向造影剂.     

亲血栓性靶向超声造影剂增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的实验研究

目的探讨亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂体内增强兔腹主动脉新鲜血栓显像的效果.方法采用三氯化铁(FeCl3)溶液诱发20只健康新西兰大白兔腹主动脉非梗阻性新鲜血栓形成;经耳缘静脉团注0.04 ml/kg的白蛋白靶向超声造影剂进行声学造影;采用目测观察和视频灰阶分析技术,评价血栓显像的增强效果.结果造影后目测观察,亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂对腹主动脉新鲜血栓增强显影达10 min以上,灰阶值为(98.463±6.3)dB,与造影前0 s[灰阶值(18.741±2.86) dB]比较相差非常显著(P＜0.001);普通白蛋白造影剂造影后血栓超声显像效果改善不明显,但灰阶值升高,为(28.862±2.15)dB,与造影前0 s比较相差显著(P＜0.05),与靶向造影剂造影后灰阶值比较相差非常显著(P＜0.001).结论亲血栓性白蛋白靶向超声造影剂可显著增强兔腹主动脉内新鲜血栓超声显像效果.     

携IL-8单抗的靶向超声造影剂对损伤心肌细胞的体外寻靶实验研究

目的 通过体外寻靶实验评价携IL-8单克隆抗体(简称单抗)靶向超声造影剂的靶向粘附效能,探讨IL-8在心肌梗死早期的作用机制。方法 采用共价偶联法制备携IL-8单抗靶向超声造影剂,利用使细胞缺氧、缺糖的方法制备损伤心肌细胞,通过靶向超声造影剂与损伤心肌细胞的体外结合实验检测其寻靶能力。结果 携IL-8单抗靶向微泡与损伤及损伤初期心肌细胞的粘附作用明显高于SonoVue微泡(P<0.05),且随着损伤程度的加重,携IL-8单抗靶向微泡与心肌细胞的黏附作用逐渐加强(P<0.05)。结论 携IL-8单抗靶向超声造影剂对损伤心肌细胞具有较强的靶向性。     

靶向VEGFR-3超声造影剂的制备及其体外寻靶实验研究

目的 制备一种特异性靶向淋巴管内皮细胞的高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子造影剂羟基端乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-COOH);并用碳二亚胺法将造影剂与抗体偶联制备出靶向高分子造影剂.检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力,并与普通高分子造影剂做比较.结果 高分子造影剂平均粒径771.2 nm.体外寻靶试验显示,该靶向高分子造影剂较多并牢固的聚集到淋巴管内皮细胞表面;普通高分子造影剂对照组未见造影剂和细胞的结合.结论 成功制备出结合VEGFR-3抗体的高分子超声造影剂.该造影剂在体外对淋巴管内皮细胞有较强的特异性亲和力.     

自制高分子材料超声造影剂及初步实验研究

目的自制一种新型的高分子材料超声微泡造影剂,并观察其对新西兰大白兔的肾能量多普勒显像效果.方法采用水/油/水(water/oil/water,w/o/w)乳液-溶剂蒸发、冷冻干燥法制备聚乳酸/羟基乙酸(poly lacticcoglycolic acid,PLGA)超声微泡造影剂,用扫描电镜观察微泡大小、形态,用血细胞计数仪测定微泡浓度.用生理盐水稀释粉末样PLGA超声微泡造影剂至浓度为108/ml左右,然后按0.2 ml/kg的剂量经兔耳缘静脉注射至兔体内,用能量多普勒观察其对兔肾显影的增强效果,同时监测兔基本生命体征变化.结果 PLGA超声微泡造影剂均一度高,平均粒径3 μm左右,最大直径6 μm.与造影前相比,PLGA超声微泡造影剂能够明显增强兔肾能量多普勒显影效果,并且显像时间长.显像过程中未见兔基本生命体征有明显的变化.结论 PLGA超声微泡造影剂能够明显增强兔肾能量多普勒显影效果,显像时间长,尚未发现明显的副作用,是一类具有广泛应用前景的新型超声造影剂.     

机械振荡法制备脂膜超声造影剂的初步实验研究

目的探讨机械振荡法制备脂膜超声造影剂的可行性,初步评价其制备效果。方法机械振荡仪系胶囊式调合器改装而成,造影剂制备后,用光镜观察微泡大小、形态,血球计数板测定微泡浓度,激光粒度分析仪测定粒径及分布、表面电位、pH值,在体实验观察造影剂对兔正常肝脏的增强效果。结果造影剂微泡的粒径均小于8μm,平均粒径为(1.67±0.11)μm,平均浓度为(2.56±0.15)×1010/ml,表面电位为(-37.5±0.3)mV,pH值为6.46±0.21,其对肝实质的增强持续时间达60min,而且重复性好。结论机械振荡法是制备脂膜超声造影剂的一种很有效的方法。     

靶向超声造影剂促进反义基因转染的体外研究

目的 探讨超声破坏造影剂微泡联合半乳糖化多聚赖氨酸(G-PLL)对基因治疗肝癌的靶向促进作用.方法 将合成的超声造影剂微泡、G-PLL及c-myc反义寡核苷酸(ASODN)耦联物,结合超声辐照作用于表达c-myc基因的人肝癌及人肺癌细胞株进行体外效应研究.观察细胞形态学改变及耦合物与细胞结合情况并检测c-myc基因的表达情况.结果 镜下显示肝癌细胞较肺癌细胞更易于与耦联物结合,多数细胞呈凋亡改变.经超声辐照,耦联物作用后的人肝癌及肺癌细胞c-myc基因表达量均有降低,而G-PLL对肝癌细胞c-myc基因表达有明显抑制作用.结论 超声辐照下,造影剂结合G-PLL及反义基因耦联物可靶向性促进反义基因转染肝癌细胞.     

含氟碳气体的表面活性剂类声学造影剂的体外实验

目的　研究含氟碳气体的表面活性剂类声学造影剂的基本特性。方法　将具有表面活性作用的司班 -80 和吐温 -80 按一定的体积比配制 ,加入 6 %低分子右旋糖酐溶液至 10ml,并将混合液充分搅拌 ;用声振仪振荡混合液 40s ,同时从注射器的底部匀速注入 10ml全氟丙烷气体。光镜 40 0倍下动态观察微气泡的浓度和直径 ,并运用体外循环系统观察不同剂量的彩色多普勒信号增强效果。结果　造影剂中微气泡的峰值浓度为 3.8× 10 9/ml,其中 90 %微气泡直径≤ 4.5 μm。体外模拟循环系统的能量多普勒信号增强持续时间随剂量增加而增加。结论　表面活性剂类声学造影剂的微气泡直径小、浓度高 ,且具有价格低廉、制作简单和明显增强多普勒信号的特点 ,值得进一步深入研究     

High-Accuracy Ultrasound Contrast Agent Detection Method for Diagnostic Ultrasound Imaging Systems

An accurate method for detecting contrast agents using diagnostic ultrasound imaging systems is proposed. Contrast agents, such as microbubbles, passing through a blood vessel during ultrasound imaging are detected as blinking signals in the temporal axis, because their intensity value is constantly in motion. Ultrasound contrast agents are detected by evaluating the intensity variation of a pixel in the temporal axis. Conventional methods are based on simple subtraction of ultrasound images to detect ultrasound contrast agents. Even if the subject moves only slightly, a conventional detection method will introduce significant error. In contrast, the proposed technique employs spatiotemporal analysis of the pixel intensity variation over several frames. Experiments visualizing blood vessels in the mouse tail illustrated that the proposed method performs efficiently compared with conventional approaches. We also report that the new technique is useful for observing temporal changes in microvessel density in subiliac lymph nodes containing tumors. The results are compared with those of contrast-enhanced computed tomography.     

亚微米级超声微泡造影剂的制备及体外基因转染效率的实验研究

目的 探索制备亚微米级超声微泡造影剂的方法 ,以GFP作为目的 基因验证其作为一种新型基因载体的可行性.方法 以高剪切分散法制备超声微泡造影剂,透射电镜及激光粒度分析仪检测其形态及粒径;将超声微泡造影剂与不同剂量的绿色荧光蛋白质粒PShuttle-IRES-hrGFP-1结合后转染HepG2细胞,利用荧光显微镜观察并检测其基因转染效率.结果 自制超声微泡造影剂为均匀分散的圆泡,粒径分布在282.2～415.7 nm之间,平均值为(335±5)nm,达到亚微米级;该微泡能将GFP基因成功转运到HepG2细胞内并高效表达,转染效率达32.61%±3.42%.结论 自制亚微米级超声微泡造影剂粒径小、分散均匀,并能成功转运外源DNA进入细胞内,可作为一种新型基因载体.     

自制含氟碳气体表面活性造影剂低温保存基本特性研究

目的 研究含氟碳气体表面活性造影剂低温保存基本特性变化，观察其直径大小，浓度及二维超声回声强度。方法 将造影剂分别在室温、5℃、-5℃及-20℃的条件下保存，保存期为10d，用CoulterⅡ型颗粒计数仪测定平均直径和浓度。用GE LOGIQ9超声仪二维超声观察其血管内回声强度。结果 在室温条件下造影剂可保存24h，5℃冷藏条件下能稳定1～2d，在-5℃和-20℃的条件下可保存一个月。在-5℃和-20℃条件下保存，第一天造影剂的浓度和二维超声血管内回声强度就开始下降，然而在第四天，造影剂的浓度及二维血管内回声强度几乎达到冷冻前的水平。结论 造影剂须在低于-5℃的条件下保存。在融化过程中微气泡的热膨胀足以使微气泡破裂。造影剂在低温条件下保存稳定性仍不理想，需进一步研究提高造影剂在融化过程中保持稳定的技术，寻找更理想的保存方法。     

含氟烷人血白蛋白靶向超声造影剂的制备研究

目的为靶向超声造影剂的制备进行基础实验研究。方法将含氟烷人血白蛋白超声造影剂与ICAM-1抗体混合,加入0.1%戊二醛,4℃孵育2h,促使抗体与微泡外壳充分交联。普通光镜评估靶向微泡的大小、形态。免疫荧光法进行靶向微泡的鉴定。结果普通光镜下可见携ICAM-1抗体的靶向微泡大小、形态与普通白蛋白微泡对照无明显改变。荧光显微镜证实微泡与ICAM-1抗体整合成功。结论戊二醛交联法适用于白蛋白靶向超声造影剂的制备,方法简便,成本低,重复性好。