应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.     

2000年秋冬至 2002年夏北京地区急性呼吸道感染病毒病原学研究

为了解北京地区婴幼儿急性呼吸道感染的病毒病原。对2000年秋冬至2002年夏收集的1402份临床标本进行了病原分析。所有标本接种Hep-2和MDCK细胞进行病毒分离；鼻咽洗液脱落细胞涂片后经间接免疫荧光检测7种呼吸道病毒。RT-PCR鉴定RSV亚型；血凝及血凝抑制试验鉴定流感病毒型别；nested-PCR检测肠道病毒。1402份标本中672份咽拭子标本取自门诊患儿，730份鼻咽洗液标本取自住院患儿，结果：共有614份标本为病毒阳性，阳性率为43.8%。病毒阳性标本中呼吸道合胞病毒（RSV）占66.1%。并以A亚型为主；RSV阳性标本中91.4%来自诊断为毛细支气管炎的住院患儿。2001-2002年冬春季RSV感染比2000-2001年同期高25.1%。流感病毒阳性标本占总阳性标本的24.4%，其中89.3%来自门诊患儿；2000-2001年以乙型流感病毒为主，2001-2002年以甲3型为主，在冬春季还可检测到腺病毒和副流感病毒，夏季检测不到以上几种呼吸道病毒，利用nested-PCR方法检测2002年夏季收集的标本，发现7月份肠道病毒感染率相当高。提示RSV是北京地区冬春季婴幼儿急性下呼吸道感染首要病毒病原。流感病毒是婴幼儿急性上呼吸道感染首要病毒病原，肠道病毒是夏季婴幼儿呼吸道感染主要病毒病原，病毒分离，免疫荧光和PCR等方法的并用提高了病毒检出率，病毒病原的诊断可为临床诊断和治疗提供可靠依据。     

2000年冬-2006年春北京地区急性呼吸道感染患儿中呼吸道合胞病毒的监测

目的 对北京急性呼吸道感染患儿进行呼吸道合胞病毒（RSV）的监测并进行亚型分析,探讨其流行规律。方法 2000年11月-2006年3月,于首都儿科研究所附属儿童医院采集因急性呼吸道感染就诊的门诊及住院的患儿咽拭子或鼻咽分泌物标本10048份,接种于Hep-2细胞进行病毒分离,同时用免疫荧光法对鼻咽分泌物标本进行呼吸道病毒抗原的快速检测,对部分RSV阳性的标本用RT-PCR进行了亚型鉴定。结果 （1）在10048份标本中,有2286份为RSV阳性,阳性检出率为22．8％。其中病房标本7176份,RSV阳性2153份,阳性检出率为30．0％;门诊标本2872份,RSV阳性133份,阳性检出率为4．6％。（2）2000～2001年冬春、2002-2003年冬春、2004-2005年冬春RSV的阳性检出率分别为14．0％、18．2％和20．4％,而2001—2002年冬春、2003—2004年冬春和2005-2006年冬春RSV的阳性检出率分别为42．3％、41．0％和40．5％。（3）对938份RSV阳性标本的亚型监测结果：A亚型691份,占73．7％,B亚型247份,占26．3％,2000-2001、2004-2005年冬春季RSV感染以B亚型为主;而2001-2002、2002-2003、2003-2004年冬春季以A亚型为主;2005—2006年为A、B亚型同时流行。结论 RSV是冬春季婴幼儿下呼吸道感染的主要病毒病原,RSV呈现出隔年高峰的流行趋势,RSVA、B亚型是交替出现的,并且有时以相近的比例同时出现。     

2004～2005年冬春季急性下呼吸道感染患儿RSV亚型的检测及分析

目的分析2004～2005年冬春季呼吸道合胞病毒(RSV)流行季节的亚型分布情况。方法采用直接免疫荧光法检测2004年10月～2005年4月间因急性下呼吸道感染住院儿童1040例鼻咽部分泌物中的常见病毒病原,随机选择RSV阳性标本174例,采用间接免疫荧光检测RSVA、B亚型,分析检测结果。结果1040例中,RSV阳性497例(47.8%),其中174例标本中,检测出RSVA亚型23例(13.2%),B亚型105型(60.4%),A、B亚型混合感染36例(20.7%),无法确定亚型的10例(5.7%)。检测期间各月份间、不同的年龄组间和临床诊断间的RSV亚型分布差异均无显著性意义(P>0.05),都以B亚型为主。结论2004～2005年冬春季RSV仍是儿童急性下呼吸道感染的主要病原,以B亚型为主;并有两种亚型同时感染的情况。     

几种呼吸道合胞病毒检测方法的比较

目的比较不同从临床样本中快速、敏感特异的检测呼吸道合胞病毒（RSV）的方法,以便早期诊断RSV感染。方法应用不同方法对45例急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物RSV进行检测,包括病毒分离、直接涂片间接免疫荧光法（IFA）、快速细胞培养法、双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）及链亲和素-生物素法（LSAB）。结果鼻咽分泌物45例中,病毒分离阳性12例（26.7%）,直接涂片间接免疫荧光法检测出阳性14例（31.1%）,快速细胞培养法阳性20例（44.4%）。双抗体夹心ELISA及LSAB法均仅检出4例阳性,阳性率均为8.9%。结论将直接涂片间接免疫荧光法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是最适合于RSV感染早期诊断的方法。     

急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物中呼吸道合胞病毒亚型的检出分析

目的探讨急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒(RSV)亚型的流行规律。方法应用直接免疫荧光法筛检2006年1月至2012年12月苏州地区42 208份来自急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本的RSV病毒抗原;随机抽取不同年份RSV流行季节的RSV阳性标本,采用实时荧光PCR鉴定亚型。结果 RSV流行呈季节性,当年11月至次年3月为高峰期,而当年5至9月为RSV检出低谷期;从2006年至2012年,不同年份间高峰期的RSV阳性检出率差异有统计学意义(χ2=280.09,P0.01)。在398份不同年份高峰期的RSV抗原阳性标本中,检出A亚型319份(80.15%),B亚型63份(15.83%),未检出16份(4.02%),不同年份高峰期之间RSV亚型分布的差异有统计学意义(P0.01)。多数年份RSV流行以A亚型为主,在高峰期RSV检出率最低的2008—2009年A、B亚型同时流行,随后的2009—2010年以B亚型为主。结论苏州地区2006年至2012年,前四个流行季RSV检出率呈现周期性隔年增高趋势,之后两个流行季RSV感染呈持续高发趋势,急性呼吸道感染住院患儿RSV以A亚型为主。     

原发性免疫缺陷患儿呼吸道合胞病毒感染情况分析

目的 了解原发性免疫缺陷（primary immunodeficiency,PID）患儿呼吸道合胞病毒（RSV）感染情况及临床特征。方法 收集2009年4月至2010年9月于重庆医科大学附属儿童医院就诊的PID患儿鼻咽吸取物30份,采用荧光定量PCR（ real-time RT-PCR ）方法检测RSV,对阳性标本进行病毒分离;并收集临床资料,分析其临床特征。结果 30份标本中检测出11份RSV,阳性率为36.7%。其中无感染症状2例（18.2%）,支气管炎3例（27.3%）,肺炎6例（54.5%）。2例无症状患儿近期均静脉滴注丙种球蛋白（IVIG）。结论 PID患儿更易感染RSV;IVIG应用于免疫缺陷患儿能够降低RSV肺炎的发生率。     

重庆地区冬季小儿下呼吸道感染病毒病原学研究

目的了解重庆地区冬季小儿急性下呼吸道感染(ALRI)中病毒病原学构成,探讨其鼻咽分泌物病毒抗原与血清ELISA病毒抗体检测对ALRI的临床诊断价值。方法对2813例ALRI住院患儿中875例取鼻咽分泌物标本免疫荧光检测7种呼吸道病毒抗原(RSV、ADV、IA、IB、PIV1、PIV2、PIV3),1938例用ELISA方法检测3种病毒(RSV、ADV、CMV)血清IgM或IgG抗体。结果875例病毒抗原检测阳性358份(40.91%),其中RSV阳性318份(36.34%),PIV3阳性32份(3.66%),ADV为6份(0.69%),IA为2份(0.23%),IB、PIV1、PIV2均为0份;1938例血清ELISA病毒抗体检测阳性824份(42.52%),RSV_IgM阳性139份(7.17%),ADV_IgM阳性82份(4.23%),CMV_IgM阳性289份(14.91%),CMV_IgG阳性679份(35.04%)。结论重庆地区冬季小儿ALRI中病毒感染率高,抗原与抗体阳性检出率分别为40.91%与42.52%,抗原检测显示RSV感染居第1位。病毒抗原免疫荧光检测与临床诊断符合率高,对临床病原诊断更有意义。     

2009~2014年度浙江南部呼吸道合胞病毒分子流行病学研究

目的 了解浙江南部呼吸道合胞病毒（RSV）基因型流行趋势,并研究A亚型G蛋白基因特征。方法 采集2009年7月至2014年6月浙江南部3家医院因肺炎和毛细支气管炎住院的5岁以下儿童下呼吸道分泌物,应用直接免疫荧光法检测RSV抗原。在每个流行年度（7月至次年6月）RSV阳性标本中随机抽取200份,应用RT-PCR方法检测RSV亚型,扩增A亚型G蛋白近全基因序列并测序,鉴定其基因型。结果 2009~20145个年度共采集25 449份下呼吸道分泌物标本,其中6 416份（25.21%）RSV阳性。随机抽样的1 000份RSV阳性标本中检出A亚型462株（46.2%）,B亚型538株（53.8%）,A亚型依次占各年度的22.5%、74.5%、84.5%、19.0%、30.5%。每年度随机抽样25株RSV A亚型病毒株外送双向测序,结果获得A亚型阳性52株,其中得到4种A亚型基因型,包括NA1（39株）、NA4（1株）、ON1（10株）、GA2（2株）基因型,其中NA1是2009~2012年度的优势基因型,ON1是2013~2014年度A亚型的唯一基因型。A亚型G蛋白基因与原型株A2的核苷酸同源性为80.7%~89.3%,氨基酸同源性为74.4%~82.6%;分离株之间的核苷酸及氨基酸同源性分别为81.5%~100%和80.2%~100%。结论 2009~2014年度浙江南部地区出现RSV A、B亚型共循环,A亚型有多个不同的基因型共循环,其G蛋白基因变异明显。     

北京地区急性呼吸道感染婴幼儿中人副流感病毒感染状况的研究

目的了解北京地区急性呼吸道感染患儿中人副流感病毒（HPIV）的感染状况。方法（1）根据HPIV血凝素蛋白（HA）的基因保守区序列,合成能够区分HPIV 1～4型的多重巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定多重PCR方法的特异性;（2）收集2003年8月-2006年4月急性呼吸道感染患儿的临床标本3519例,应用逆转录多重PCR方法,对标本同时进行HPIV 1～4的检测。（3）随机选取不同型别的HPIV基因检测阳性标本共10例,对其PCR扩增产物直接进行核苷酸序列测定,并将所测到的序列与GenBank中的基因序列进行比较。结果（1）多重PCR方法的特异性检测显示,HPIV的分离株cDNA有预期大小的扩增片段,与其他常见呼吸道病毒无交叉反应性。（2）3519例标本中多重PCR检测阳性的为349例,占本组检测标本的9．9％（349／3519）,明显高于间接免疫荧光方法和（或）病毒分离4．8％的阳性率（170／3519）;应用多重PCR方法还检测到HPIV1与HPIV3以及HPIV3与HPIV4的混合感染;在上呼吸道及下呼吸道感染的患儿中均有较高的HPIV阳性检出率;季节性分布分析显示,HPIV感染无明显的规律性,以HPIV1、3为主,HPIV2、4仅散发存在。（3）序列分析结果提示,所选取的多重PCR方法检测阳性的10例标本确实是HPIV阳性,其中有两份分别属于HPIV4A、4B亚型。结论HPIV在儿童感染中除了单．亚型感染外还可存在混合型感染。未发现其感染的季节性特点。所应用的逆转录多重RT-PCR方法不仅检出率高于常用的方法（间接免疫荧光方法和病毒分离）,而且能够直接进行亚型分析。除了检出常见的1、2、3型外,还检出了较少见的4型,属国内首次报道。     

Determination of resonance frequency of the respiratory system in respiratory distress syndrome

AIM: To measure tidal volume delivery produced by high frequency oscillation (HFO) at a range of frequencies including the resonance frequency. METHODS: Eighteen infants with respiratory distress syndrome were recruited (median gestation 28.7 weeks). Each was ventilated at frequencies between 8 and 30 Hertz. Phase analysis was performed at various points of the respiratory cycle. HFO was provided by a variable speed piston device. Resonance frequency was determined from the phase relation between the cyclical movements of the piston and pressure changes at the airway opening. Tidal volume was measured using a jacket plethysmograph. RESULTS: The results were most reproducible when analysis was performed at the end of inspiration (within 1 Hz in nine out of 10 cases). Comparison between tidal volume delivery at 10 Hz and resonance frequency was made in 10 subjects. Delivery was significantly higher at resonance than at 10 Hertz (mean percentage increase 92%, range 9-222%). CONCLUSIONS: These preliminary findings suggest that there is improved volume delivery at resonance frequency.     

呼吸道感染呼吸道合胞病毒检测的临床研究

目的探讨小儿呼吸道合胞病毒(RSV)感染和临床特征.方法用生物素-链霉亲和素-过氧化物酶法检测113例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽部脱落细胞中RSV抗原,并对47例RSV阳性病例的临床特征进行分析.结果 RSV抗原阳性率为41.6%,临床典型和可疑病例抗原检出率分别为47.9%和44.9%,临床不典型者阳性率12.5%,x2=7.9 P＜0.05.下呼吸道感染的喘息型组RSV阳性率51.9%,非喘息型组RSV阳性率32.2%,x2=4.48,P＜0.05.47例RSV阳性中3 a内喘息率67.6%(25/37例),明显高于3 a以上组30.0%(3/10例),x2=5.17 P＜0.05.不同年龄、病期、临床诊断组RSV抗原阳性率差异无统计学意义.结论小儿下呼吸道感染约40%可有RSV引起,各年龄组小儿均对RSV易感,在喘息型下呼吸道感染中RSV所致多见,年龄越小发生喘息越多.     

Chronic respiratory insufficiency in the child

Chronic respiratory failure in childhood is a common occurrence, defined as permanent hypoxemia below two standard deviations under the mean for the child's age. In infants, this definition is less clear than in adolescents and adults. Etiologies are numerous, with the most prevalent being chronic obstructive lung disease. Chronic respiratory failure requires etiologic investigations, assessment of lesions and respiratory function, and treatment that can usually be carried out at home. Long-term oxygen therapy is indicated in severe respiratory failure. Oxygen is supplied by an extractor for at least 15 hours per day, and flows are adjusted and monitored using non-invasive measurements of oxygen saturation throughout the 24-hour cycle. The outcome of chronic respiratory failure depends on the cause, the quality of care, and the initial lesions. Chronic respiratory failure should not be considered as necessarily a permanent condition, particularly in infants.     

新生儿呼吸窘迫综合征呼吸治疗的选择

目的 针对近期收治的1例生后即气管插管内导入PS治疗后出现双侧肺通气不均的NRDS患者，检索当前最佳证据, 并对其进行评价，以指导临床正确合理地使用。方法 首先提出临床问题，然后对MEDLINE (1993～2008年)、tripdatabase(1993～2008)、Cochrane Lib(2008 Issue 2)进行检索，并对检索到的证据进行评价。检索词为preterm infant、respiratory distress syndrome、pulmonary surfactant and ventilation。结果 共检索到系统评价8篇，临床指南3篇，随机对照试验9篇。结论 临床指南、系统评价和随机对照试验为我们选择和运用最佳治疗方案提供了有力证据。     

The eosinophilic granulocyte count in the respiratory secretions of children with chronic nonspecific respiratory diseases

We performed cytologic evaluations of 6116 nasal and/or bronchial smears from 4510 patients (average age: 7.6 years; 3 months--17 years) suffering from different kinds of chronic nonspecific respiratory diseases (CNSRD); in 137 children (average age: 4.8 years) undergoing bronchologic examinations under general anesthesia we compared the findings with those for bronchoalveolar lavage (BAL). Nasal smears of 77 healthy children at a day care center (control group) were analysed four times per year for "significant secretory eosinophilia" (SEE; i.e. more than 13% eosinophils). We found: 1. Healthy children do not have such "SSE" in contrast to children with CNSRD who show different frequencies of "SSE" depending on the age of the child and the specific kind (diagnosis) of CNSRD. 2. 4.6% of infants (first year of life) were found to have SSE with a statistically significant correlation to increase in the following 10 years up to 50% of all children (p less than 0.001). 3. We found SSE in 4.41% of cases with relapsing bronchitis, in 7.14% (8.3% resp.) with chronic bronchitis, in 6.49% (9.2% resp.) with relapsing or chronic obstructive bronchitis and in 46.05% (55.3% resp.) with bronchial asthma (p less than 0.001). 4. The intensity of obstructive symptoms (nose: rhinitis; bronchus: dyspnoea) did not correlate with the number of eosinophils in the secretions. 5. Only the smear cytograms (nose/bronchus) enabled us to detect "SSE" whereas BAL cytograms were too insensitive (p less than 0.001).(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

降钙素原在儿童呼吸道感染中的应用

呼吸道感染是儿童最常见的感染性疾病,引起呼吸道感染的病原菌多种多样,因此明确病原针对性治疗就显得尤为重要.血清降钙素原(PCT)由于其细菌感染时浓度会升高,而病毒感染和非特异性感染时保持相当低的水平,使其在儿童呼吸道感染中的应用越来越受到重视.