重组人白细胞介素2对骨髓造血祖细胞体外增殖的影响

重组人白细胞介素２对骨髓造血祖细胞体外增殖的影响郝思国邹正辉①杨吉成②虞斐①盛伟华②王苏③沈美凤①（安徽医科大学附一院，合肥２３００２２）①苏州医学院附二院，苏州２１５００４②苏州医学院，苏州２１５００７③辽宁省人民医院血液科，沈阳１１０００３作者简...     

白藜芦醇对于外周血内皮祖细胞体外增殖分化的影响

目的:观察白藜芦醇对内皮祖细胞体外扩增分化过程中内皮系基因的表达及粘附、迁移功能的影响。方法:密度梯度离心法获得人外周血单个核细胞,在向内皮祖细胞诱导分化的同时,加入不同浓度的白藜芦醇(1、5、15、60μM)干预7天,随后采用流式细胞术观察CD34、CD31、KDR基因的表达;用RT-PCR和ELISA方法检测干预后内皮型一氧化氮合成酶的表达;同时测定干预后细胞的粘附和迁移功能。结果:低浓度白藜芦醇(5μM)不同程度促进内皮祖细胞增殖分化中CD34、CD31、KDR的表达,上调eNOS的mRNA和蛋白水平表达,并促进内皮祖细胞粘附和迁移功能;而高浓度白藜芦醇(60μM)则不同程度下调CD34、CD31、KDR、eNOS的表达和抑制粘附、迁移功能。结论:低浓度白藜芦醇可促进外周血内皮祖细胞内皮系基因的表达,并且促进其粘附和迁移,而高浓度则产生相反的作用。     

大鼠胚胎视网膜祖细胞分离培养及其分化特性

目的：建立大鼠胚胎视网膜祖细胞体外培养方法并观察其分化特性。方法：取孕18d大鼠胚胎,用无血清培养技术扩增视网膜祖细胞;用免疫细胞化学、扫描电镜与透射电镜技术对祖细胞的特性及诱导分化的细胞类型进行鉴定。结果：从胚胎大鼠视网膜神经部分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞球能表达Nestin并具有掺入BrdU的能力。诱导分化后的细胞表达,其中,Thy1．1^ 细胞最多,Opsin^ 细胞次之,GS^ 细胞较少,PKC^ 细胞少,Syntaxin^ 及Peripherin^ 细胞极少,不表达Calbindin D-28K。结论：从胚胎大鼠分离的细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,属于视网膜祖细胞;诱导分化产生5种视网膜细胞,以节细胞最多,未见水平细胞。     

大鼠外周血内皮祖细胞体外分离鉴定及内皮细胞的分化

目的：建立一种稳定的体外分离培养及诱导分化大鼠外周血内皮祖细胞(EPC)的方法。方法：抽取SD大鼠外周血，应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞，同时应用VEGF和bFGF诱导，使之向内皮细胞分化，以免疫细胞化学鉴定贴壁细胞的内皮标志CD31，CD34，Flk-1和vWF。结果：经VEGF和bFGF诱导后的EPC的内皮标志CD31，CD34，Flk-1和vWF在不同时段呈阳性表达。结论：大鼠外周血中含有EPC，在体外特殊诱导环境下，可定向分化为内皮样细胞，     

NGF和GDNF对大鼠嗅鞘细胞体外增殖和分化的影响

本研究旨在比较神经生长因子(NGF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠嗅鞘细胞(OECs)体外增殖和分化的影响。在体外分离培养大鼠OECs的培养液中不加神经营养因子(对照组)或加入不同的神经营养因子(NGF组和GDNF组),倒置显微镜下进行观察,并通过S-100免疫荧光组织化学染色检测各组大鼠OECs体外增殖和分化情况。结果显示:NGF组和GDNF组OECs增殖和分化明显好于对照组(P<0.01),NGF组又明显好于GDNF组(P<0.01)。这些结果提示NGF能促进大鼠OECs体外增殖和分化。     

固本生血丸对人骨髓造血祖细胞体外增殖的影响

应用造血祖细胞体外培养法研究了中药复方制剂——固本生血丸对人骨髓造血祖细胞体外集落形成的影响。结果表明：该制剂在０．０１～１０μｇ／ｍｌ浓度范围内与细胞因子（ＧＭ－ＣＳＦ或ＥＰＯ）协同促进正常骨髓和再障骨髓ＣＦＵ－ＧＭ、ＨＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ的集落形成；作用高峰在１０μｇ／ｍｌ浓度上；当超过该浓度时，集落数量增加不明显（Ｐ＞０．０５），而单独应用该制剂时无集落形成。     

造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展

造血干/祖细胞体外扩增方法的快速发展为造血于/祖细胞广泛应用于临床开辟了广阔的前景,就造血干/祖细胞体外扩增的方法和培养系统的最新进展做一综述.     

造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展

造血干/祖细胞体外扩增方法的快速发展为造血干/祖细胞广泛应用于临床开辟了广阔的前景,就造血干/祖细胞体外扩增的方法和培养系统的最新进展做一综述。     

大鼠视网膜干细胞体外培养、增殖及分化

目的： 大鼠视网膜干细胞的培养及鉴定。方法： 用神经干细胞无血清培养方法从出生10 d的大鼠睫状体部分离出具有单细胞克隆能力的细胞球，用MTT法检测单克隆细胞增殖能力，应用免疫组织化学的方法检测干细胞分化特性。结果： 所获得的细胞球具有连续克隆的能力，nestin抗原阳性，分化后的细胞表达星形胶质细胞、神经元、感光细胞和双极细胞特异性抗原。结论： 成功培养出大鼠视网膜干细胞。     

大鼠视网膜干细胞的增殖和多向分化**

背景：国内对视网膜干细胞的体外分离培养及鉴定仍处于初步探索阶段。 目的：体外分离、培养及鉴定新生大鼠视网膜干细胞,探讨其多向分化潜能。 方法：用神经干细胞无血清培养方法分离和培养新生24 h的SD大鼠睫状体细胞,第6代视网膜干细胞经胎牛血清诱导分化,应用免疫细胞化学方法检测视网膜干细胞的分化特性。 结果与结论：体外培养的细胞球具有连续克隆能力,Nestin抗原阳性,BrdU 标记结果显示悬浮细胞团主要由分裂增殖的细胞组成,并表达胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10;诱导分化后的细胞表达星形胶质细胞特异性标志物GFAP、神经元特异性标志物NSE、感光细胞标志物Opsin、双极细胞特异性抗原PKC和节细胞特异性抗原β-tubulin,实验初步证实培养的视网膜干细胞具有神经干细胞特性,能自我更新和增殖分化成为感光细胞类型的细胞。 关键词：视网膜干细胞;细胞培养;无血清;细胞分化;大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.015     

Analysis of methylprednisolone-induced inhibition on the proliferation of neural progenitor cells in vitro by gene expression profiling

Recently, it has been proved that methylprednisolone has inhibition effect on the proliferation of endogenous neural progenitor cells (NPCs) after spinal cord injury (SCI). Similar effect has also been found on NPCs cultured in vitro. However, the mechanism remains to be fully delineated. The purpose of this study is to investigate the potential molecular mechanism of this effect in NPCs cultured in vitro by gene expression profiling. Fetal mouse brain-derived NPCs were divided into 2 groups: NPCs incubated with methylprednisolone as a model of the methylprednisolone treatment after SCI, and without methylprednisolone as the control group. After the cell quantitative analysis and CCK-8 assay, the microarray analysis was carried out. Genes differentially expressed between NPCs treated with and without methylprednisolone were extracted. It was observed that the expression of 143 genes, including many members of distinct families, such as hypoxia inducible factors and neurotransmitter receptors, were significantly changed in response to the methylprednisolone treatment. Our results provide global molecular insights into the mechanisms of methylprednisolone-induced proliferation inhibition effect and suggest that EdnrB may play an important role in this effect.     

小鼠胚胎肝祖细胞的分离和扩增培养

目的从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞(m HPCs),并将其诱导分化为胆管细胞。方法用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4和6 d的DLK1~+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。结果体外共培养时,大部分DLK1~+细胞分裂增殖明显,呈葡萄状聚集生长。第4天,部分细胞开始贴壁增殖,形态开始变成梭形。结果显示,分选的DLK1~+细胞表达AFP和少量ALB,但不表达CK19;在共培养的第4天其开始表达CK19,和微弱表达ALB;第6天,其高表达CK19,而几乎不表达的ALB。结论应用FACS技术成功从E14.5胎肝细胞中分选出DLK1~+细胞并鉴定其大部分为mHPCs,并可在体外与MEFs Transwell共培养的条件下,诱导培养其分化为胆管细胞。     

Quantitative analysis of proliferation and cell cycle length during development of the rat retina

The rat retina has been a useful model system for the study of the development of the central nervous system (CNS). In order to facilitate future studies on the mechanisms that control retinal growth, we have quantified the proliferation of retinal cells and the length of the cell cycle throughout development. For each day during development, the number of mitotic and postmitotic cells per retina, the proportion of cycling cells, S phase length, and cell cycle length were determined through quantification of cell numbers and ³H-thymidine labeling. As retinal development proceeds, the proportion of cycling cells decreases, and cell cycle length increases, in part due to an increase in S phase length. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

吡格列酮促进大鼠骨髓内皮祖细胞的增殖

背景：内皮祖细胞具有增殖、迁移和分化为内皮细胞的特征,对冠状动脉硬化性心脏病及糖尿病心血管并发症的发生、发展可能起着重要作用。 目的：探讨选择性过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂吡格列酮对大鼠骨髓内皮祖细胞增殖的影响及相关机制。 方法：①采用密度梯度离心法和差速贴壁法培养大鼠骨髓内皮祖细胞,置于含0,1,10,50,100,200 μmol/L吡格列酮的培养基中培养,观察吡格列酮促进内皮祖细胞增殖的最佳浓度。②将培养7 d的内皮祖细胞随机分5组：对照组加含二甲基亚砜的培养液;吡格列酮组加入50 μmol/L吡格列酮;PPAR-γ拮抗剂组加入50 μmol/L吡格列酮及10 μmol/L过氧化物酶体增殖物激活受体γ拮抗剂GW9662;PI3K/Akt阻滞剂组加入50 μmol/L吡格列酮及50 μmol/L磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通道阻滞剂Wortmannin;ERK阻滞剂组加入50 μmol/L吡格列酮及20 μmol/L细胞外调节蛋白激酶通道阻滞剂PD98059,观察不同组内皮祖细胞的增殖情况。 结果与结论：倒置显微镜下见培养前4 d细胞增殖不明显,第5-10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成,第10天可达80%融合。培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1的功能。10-200 μmol/L的吡格列酮均可明显促进内皮祖细胞的增殖(P < 0.01),以50 μmol/L吡格列酮的作用最明显。进一步阻断相关信号通路发现,Wortmannin和GW9662可明显拮抗吡格列酮的促细胞增殖作用,而PD98059对吡格列酮的作用无影响。说明吡格列酮促进大鼠骨髓内皮祖细胞增殖的作用是通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路介导的。     

皮肤来源间充质干细胞对内皮祖细胞募集效应的体外观察

目的细胞的募集趋化与归巢被认为是间充质干细胞（MSCs）修复重建受损组织的重要机制,本研究拟通过体外实验观察皮肤来源间充质干细胞对在血管化中发挥重要作用的内皮祖细胞（EPCs）的募集效应。方法分离与培养胎鼠皮肤MSCs和大鼠EPCs,利用免疫组织化学法,分别检测二者的SDF-1与CXCR4表达;并利用体外迁移实验,观察MSCs是否影响EPCs的迁移。结果利用免疫组织化学检测,MSCs和EPCs可以分别表达SDF-1与CXCR4;利用双室培养系统发现,MSCs可明显促进EPCs的迁移,且阻断SDF-1表达后,这种促进效应得到抑制（P〈0.05）。结论体外实验证实了MSCs可以促进EPCs的募集趋化。     

Transplant of embryonal nervous tissue preserves the responses of rat retinal ganglion cells after section of the optic nerve

Summary We have investigated the effectiveness of embryonal tectal tissue transplants in preserving the physiological activity of lesioned ganglion cells by recording the visual responses from the adult rat retina after section of the optic nerve, with or without transplants of embryonal nervous tissue on the stump. We have found that transplant of embryonal nervous tissue at the level of the optic nerve section has dramatic effects in preserving visual retinal responses to patterned stimuli for times as long as five months after surgery. By this time retinal responses to patterned stimuli have almost completely disappeared in control animals with optic nerve section alone.     

Pluripotent and committed haemopoietic progenitor cells in rat peripheral blood

The assay system for determination of haemopoietic progenitors in peripheral blood of rats is essen tial for potential studies on mobilisation and transplantation of circulating progenitor cells in a rat experimental model. This paper demonstrates the possibility of detection and quantification of pluripotent progenitors (Colony Forming Units-Spleen day 8-CFU-Sd8) and committed progenitors (Colony Forming Units Granulocyte Macrophage-CFU-GM and Burst Forming Units-Erythroid-BFU-E) in peripheral blood of rats in a steady state. For determination of CFU-Sd8 the rat to mouse in vivo assay was used, and for committed progenitors in vitro assays on methylcellulose were employed. The CFU-Sd8 incidence ranged from 7.3 to 11.6/ml of rat blood, similar to that reported in literature for mice. The incidence of CFU-GM was found to be 59.7 ± 9.4/ml which is in the range of the literature data for mice, rabbits, dogs and humans. The incidence of BFU-E in rat peripheral blood was 4.3 ± 1/ml, which was relatively low, but could be also considered as comparable with some literature data for dogs and humans. The CFU-E were not detected by the technique used. These results confirmed the existence of circulatory blood pluripotent progenitors (CFU-Sd8) and committed (CFU-GM and BFU-E) progenitors in rat, as has been established for some other mammalian species.     

雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞动员作用的体外研究

目的探讨雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞（EPC）的动员作用。方法取孕期为10、20、30周的健康、单胎孕妇外周静脉血，采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞并进行体外培养。采用免疫荧光细胞化学染色方法进行EPC鉴定，取培养4d的细胞，加入DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）和FITC标记的荆豆凝集素（UEA—I），用激光共聚焦扫描显微镜观察和记录图像。取培养7d的细胞，在相差显微镜下计数不同孕期孕妇外周血EPC集落（≥50个细胞）形成数（CFU）。分别通过跨膜迁移和增殖实验观察雌激素对EPC的动员和促增殖作用，随机选取培养7d的细胞，分别加入浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L的雌二醇（雌二醇作用组），在相差显微镜下分别计数培养24h后EPC的跨膜迁移数和培养48h后EPC的增殖数，以加入PBS作为对照组，实验均重复3次。结果免疫荧光细胞化学染色显示，平均85％以上的细胞摄取DiI-acLDL并结合FITC—UEA—I，可以鉴定为EPC。孕期为10、20、30周孕妇外周血EPC的CFU分别为1．67±0．33、4．83±0．60、7．50±0．67，组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L雌二醇作用组EPC跨膜迁移数（×10 ^3个／膜）分别为1．50±0，09、1．61±0．06、1．90±0．07，均明显高于对照组（1．03±0．06，P〈0．01）：EPC增殖数（×10^5个）分别为1．07±0．05、1．33±0．05、1．19±0．03，均明显高于对照组（1．00±0．03，P〈0．01）。结论孕妇外周血EPC的功能状态可能与雌激素水平有关，雌激素对EPC的动员具有重要作用。