骨形成蛋白话导成骨信号转导机制研究进展

骨形成蛋白具有明确的诱导成骨能力，对其诱导成骨作用的细胞和分子机制也有了深入的研究。骨形成蛋白信号首先通过靶细胞表面的受体，经Smads蛋白介导，传导至细胞核内，在Cbfal等辅助调节因子的作用下，启动成骨基因的表达。本文就骨形成蛋白诱导成骨信号转导机制的研究进展作一综述。     

中草药黔岭藿对大鼠成骨肉瘤细胞（UMR106）增殖的影响

本研究采用Ｈ－ＴＤＲ掺入法观察中草药黔岭藿对大鼠成骨肉瘤细胞（ＵＭＲ１０６）增殖的影响。结果表明，当大鼠成骨肉瘤细胞ＵＭＲ１０６经黔岭藿处理２４ｈ后，其３Ｈ－ＴＤＲ的掺入，与未用药的对照组比降低４０．５％至６９．９％，且呈剂量效应关系。提示黔岭藿能明显抑制ＵＭＲ１０６细胞的增殖，具有抑制成骨样细胞的作用。     

氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8的影响

目的探讨稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤雏细胞分泌白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法组织块法培养人牙龈成纤维细胞，用脂多糖对其进行诱导，ELISA法检测IL-8分泌量。结果经氯化镧处理的成纤维细胞虽有脂多糖诱导但细胞分泌IL-8量明显低于对照组（P〈0．01）。结论氯化镧具有抑制脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-8的作用，据此推测氯化镧的抗炎作用机理可能与其抑制脂多糖介导的炎症因子释放有关。     

骨形成蛋白和（或）甲状旁腺激素对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响

利用对硝基苯酚法，在体外ＢＭＰ作用的牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞进行碱性磷酸酶活性的测定。结果表明，牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性明显高于牙龈成纤维细胞。经骨形成蛋白作用后，牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性有所升高；在甲状旁腺素的作用下，经ＢＭＰ作用过的牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性有较大幅度地下降，而牙龈成纤维细胞无明显变化，提示牙周膜细胞中可能存在有骨形成蛋白的靶细胞。     

LPS调控人牙龈成纤维细胞表达uPA的研究

目的：观察LPS对牙龈成纤维细胞表达尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)的影响。方法：采用Western blotting和Northern blotting分别观察LPS对牙龈成纤维细胞内uPA蛋白质表达水平和mRNA表达水平的影响。结果：经1.0μg/mL LPS处理8h后，牙龈成纤维细胞内uPA蛋白表达量明显增强，且这一增强作用可持续24h；经1.0μg/mL LPS处理4h后，牙龈成纤维细胞内uPA mRNA表达量明显增强。结论：LPS能够促进牙龈成纤维细胞表达uPA，参与牙周组织的破坏。     

骨形成蛋白和（或）甲状旁腺激素对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性…

利用对硝基苯酚法，在体外ＢＭＰ作用的牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞进行碱性磷酸酶活性的测定。结果表明，牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性明显高于牙龈成纤维细胞。经骨形成蛋白作用后，牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性有所升高，在甲状腺素的作用下，经ＢＭＰ作用过的牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性有较大幅度地下降，而牙龈成纤维细胞无明显变化，提示牙周膜细胞中可能存在有骨形成蛋白的靶。     

骨形成蛋白和（或）甲状旁腺素作用下牙周膜细胞环磷酸腺苷含量的变化

本实验利用放射免疫测定法，对经骨形成蛋白作用的牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞进行环磷酸腺苷含量的测定。结果表明，在甲状＞腺素（５×１０）１０ｍｏ１／Ｌ）的作用下，牙周膜细胞的环磷酸腺苷含量有较大幅度的升高，但经过骨形成蛋白作用后的牙周膜细胞环磷酸腺苷含量的升高更为显著，牙龈成纤维细胞基本保持不变。提示牙周膜细胞本身具有骨样细胞的表现型，而骨形成蛋白可促使牙周膜细胞这种表现的进一步表达。     

人重组骨形成蛋白—2生物学活性及其载体的实验研究

人重组骨形成蛋白—２（ｒｈＢＭＰ－２）主要生物学作用是诱导新骨形成和促进骨缺损的修复。采用小鼠肌袋模型，观察了大肠杆菌表达的ｒｈＢＭＰ－２在不同剂量下的异位成骨活性。实验结果表明，ｒｈＢＭＰ－２具有较强的骨诱导活性，其生物学作用具有时间依赖性和剂量依赖性。另外还首次报道了将经综合化学处理的小羊骨松质作为ｒｈＢＭＰ－２的载体，使两者有机结合，研制成一种新型复合异种骨，并经小鼠异位诱导实验证实，经综合化学处理的骨松质是ｒｈＢＭＰ－２的良好载体，能够显著提高ｒｈＢＭＰ－２的骨诱导活性。     

骨形成蛋白诱导成骨信号转导机制研究进展

骨形成蛋白具有明确的诱导成骨能力,对其诱导成骨作用的细胞和分子机制也有了深入的研究。骨形成蛋白信号首先通过靶细胞表面的受体,经Smads蛋白介导,传导至细胞核内,在Cbfal等辅助调节因子的作用下,启动成骨基因的表达。本文就骨形成蛋白诱导成骨信号转导机制的研究进展作一综述。     

Beagle犬脂肪基质干细胞的培养及分化研究

目的：体外培养Beagle犬脂肪基质干细胞（dog adipose-derived stromal cells，dADSCs），定向诱导分化为脂肪、成骨细胞，为口腔组织工程提供种子细胞。方法：取Beagle犬皮下脂肪组织，剪碎，经Ⅰ型胶原酶消化培养犬脂肪基质干细胞，取第3代细胞鉴定其来源及干细胞标记并向脂肪、成骨细胞诱导分化。结果：该细胞波形丝蛋白表达阳性，角蛋白表达阴性，CD44表达阳性；成脂诱导后，经油红O染色可见细胞内脂滴的积累；成骨诱导后，ALP、钙结节、骨钙素、Ⅰ型胶原均阳性表达。结论：Beagle犬脂肪组织中存在着具有能分化为脂肪、成骨细胞的脂肪基质干细胞，此脂肪基质干细胞可作为口腔组织工程种子细胞来源。     

雌激素对牙周膜细胞生物学性质的影响

目的：明确雌激素对体外牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和碱性磷酸酶的影响，以探讨雌激素对牙周组织改建的影响。方法：SD大鼠来源的牙周膜成纤维细胞经传代培养至第四代，建立体外创伤模型，分别在普通培养基和含雌激素的培养基中培养，观察测量细胞迁移情况，运用MTT、酶联检测仪测定细胞的增殖速度，对细胞的ALP进行提取和测定。结果：MTT结果硅示加入雌激素对该细胞的增殖无明显影响；在含雌激素的培养基中成纤维细胞的迁移速度加快；同时牙周膜成纤维细胞的ALP表达娃著提高。结论：雌激素能明显促进牙周膜成纤维细胞的迁移，促进其分化。     

人重组骨形成蛋白2与异种骨复合移植的实验研究

为检验新型复合异种骨的骨修复能力，作者将人重组骨形成蛋白２与经综合化学处理的小羊骨松质结合，制备成复合异种骨。小鼠肌袋生物活性分析表明：复合异种骨具有活跃诱导成骨活性。将其植入兔下颌骨缺损内，复合异种骨术后４周显示明显骨诱导现象，１２周时大部分移植骨已被新骨代替；单纯异种松质骨组骨缺损仅有部分修复。结论为复合异种骨是一种较理想的植骨材料。     

异种烧结骨／自体红骨髓复合移植修复骨缺损的实验研究

本研究将异种烧结骨与自体红骨髓复合，移植于家兔的颅骨实验性骨缺损区，经Ｘ线、组织学、扫描电镜、透射电镜等观察，结果表明：异种烧结骨组织相容性好，无免疫排斥反应，具有良好的骨亲合性，能引导新骨形成，与宿主骨为直接骨性结合。应用计算机图像分析技术对夏合异种烧结骨和单纯异种烧结骨的新骨形成王进行对比，前者明显多于后者，本研究从定量角度证实了红骨髓的成合作用。烧结骨利于红骨髓的依附生长，发挥红骨髓的成骨与诱骨作用，加速了成骨速度，是一种有望用于临床的较理想的植骨材料。     

实时荧光定量PCR法测定成釉细胞瘤中肿瘤坏死因子基因的表达

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）基因mRNA在成釉细胞瘤（AM）中的表达水平及其与AM的相关关系。方法用10对临床配对AM和正常牙囊组织．提取和纯化mRNA，逆转录成cDNA，在测定最佳反应条件后，采用实时荧光定量PCR技术验证TNF基因的表达情况，结合内参照3-磷酸甘油醛脱氢酶fGAPDH）管家基因进行相对定量分析。结果采用实时荧光定量PCR技术完成10对配对组织中TNF基因的检测．得到TNF基因mRNA在AM和牙囊组织的相对定量表达值分别（1．709±0．655）、（0．873±0．039），经检验其表达水平的差异具有统计学意义（P=0．001），TNF在9对临床配对标本中呈高表达。结论TNF可能是与AM密切相关的基因。     

牛牙骨质来源细胞的分离、培养和鉴定

目的 探索体外分离培养牙骨质来源细胞（cementum-derived cells,CDC)的方法，并研究其生物学特性。方法 用组织法联合酶消化法，分离培养新生牛牙根表面的细胞；免疫细胞化学方法检测CDC中与骨相关的标志物如骨钙素、碱性磷酸酶和特异性牙骨质附着蛋白的表达；改良钙钴法检测碱性磷酸酶的活性。结果 培养增殖的细胞具有成牙骨质细胞的形态特征，经5次传代后细胞形态无明显改变；该细胞骨钙素、碱性磷酸酶免疫细胞化学染色均为阳性，并有碱性磷酸酶活性表达；牙骨质附着蛋白呈阳性着色。结论 初步确定本实验首次成功分离培养了牛牙骨质来源的、具成牙骨质细胞特性的成牙骨质细胞。为进一步研究成牙骨质细胞的生物学特性及牙骨质生成和修复提供了条件。     

γ-干扰素抑制人类口腔黏膜成纤维细胞生长的实验研究

目的 检测γ－干扰素是否具有直接抑制人类口腔黏膜成纤维细胞生长的作用。方法 将γ－干扰素作用于体外培养的口腔黏膜成纤维细胞，并用MTT比色法检测其对成纤维细胞增殖的影响。结果 γ－干扰素对成纤维细胞有明显的抑制作用。结论 γ－干扰素可能是创伤愈合等纤维反应的生理调节因子，对终止纤维化过程有一定意义。     

烟碱抑制人牙周膜干细胞成骨能力的研究

目的：研究烟碱对人牙周膜干细胞（periodontalligamentstemcell，PDLSC）成骨能力的影响。方法运用流式细胞仪检测有限稀释法培养的 PDLSC 的表面抗原标志物，采用细胞增殖检测试剂盒检测分别经10－3 mol／L、10－5 mol／L、10－7 mol／L浓度烟碱刺激后PDLSC增殖能力变化。运用碱性磷酸酶定性染色和实时定量PCR检测不同浓度烟碱刺激及烟碱联合拮抗剂α－银环蛇毒素（α-bungarotoxin，α-BTX）刺激后，PDLSC成骨能力的改变。结果经过有限稀释法所得的细胞阳性表达间充质干细胞的标志物，不同浓度的烟碱可抑制PDLSC的增殖及成骨能力，加入拮抗剂α-BTX后，烟碱抑制PDLSC成骨的作用降低。结论烟碱能够抑制PDLSC的成骨能力。     

基质细胞衍生因子-1对炎症和正常来源的人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞（iPDLSCs）和正常来源的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）,比较基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法 采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs 和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流式细胞仪对干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成骨诱导;MTT法检测并比较SDF-1对两种来源的细胞增殖能力的影响;茜素红染色检测SDF-1作用于两种来源的细胞后钙化骨量的表达;碱性磷酸酶法比较SDF-1作用于两者的成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测SDF-1作用于两种牙周膜干细胞前后成骨相关基因表达水平的变化。结果 两种来源的牙周膜细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物。hPDLSCs较iPDLSCs增殖能力高;两种细胞经SDF-1成骨诱导培养后,成骨相关基因的表达水平均较诱导前明显上调（P<0.05）,SDF-1在50、200 ng·mL ^-1时分别对iPDLSCs和hPDLSCs细胞成骨分化作用最明显（P<0.05）。结论 正常来源和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成骨分化能力,SDF-1可增强两种来源的牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

基质细胞衍生因子-1对炎症和正常来源的 人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 通过体外培养炎症来源的人牙周膜干细胞（iPDLSCs）和正常来源的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）,比较基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对于两种来源细胞的成骨分化作用。方法 采用组织块酶消化法原代培养iPDLSCs 和hPDLSCs,经有限稀释法纯化,通过流式细胞仪对干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成骨诱导;MTT法检测并比较SDF-1对两种来源的细胞增殖能力的影响;茜素红染色检测SDF-1作用于两种来源的细胞后钙化骨量的表达;碱性磷酸酶法比较SDF-1作用于两者的成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测SDF-1作用于两种牙周膜干细胞前后成骨相关基因表达水平的变化。结果 两种来源的牙周膜细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物。hPDLSCs较iPDLSCs增殖能力高;两种细胞经SDF-1成骨诱导培养后,成骨相关基因的表达水平均较诱导前明显上调（P<0.05）,SDF-1在50、200 ng·mL ^-1时分别对iPDLSCs和hPDLSCs细胞成骨分化作用最明显（P<0.05）。结论 正常来源和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成骨分化能力,SDF-1可增强两种来源的牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

激素因子对原代成骨细胞骨形成作用的研究

采用可能对成骨细胞成骨作用有不同影响的激素因子如地塞米松阳（Dex）、17β-雌二醇（E2）和可的松（COR），加入到体外培养的取自成熟大鼠头盖骨的原代成骨细胞（AOB）中，经WuKossa染色，被染色成茶褐色的骨结节量通过公式：孔底面积XB／A（mm2（A为孔底部分，B为骨结节部分）进行定量，并作为骨形成指标，与空白比较观察骨形成作用。