松萝酸抗弓形虫速殖子作用的体外实验和电镜观察

目的：了解松萝酸在试管内杀弓形虫速殖子的效果及其机制。方法：将松萝酸（终浓度５－５０μｇ／ｍｌ）加入小鼠腹水中（含虫１×１０６个／ｍｌ），以螺旋霉素作对照。用光镜和透射电镜观察，并将药物作用４ｈ的速殖子接种于小鼠以观察虫体能否复苏。结果：经１０μｇ／ｍｌ松萝酸作用３０ｍｉｎ，即可见速殖子的棒状体后段中央部分被溶解，细胞膜相结构和子虫的细胞膜断裂。经５０μｇ／ｍｌ松萝酸作用４ｈ的虫体在小鼠体内未能复苏。螺旋霉素的杀虫效果不及相同浓度的松萝酸。结论：松萝酸在体外对弓形虫速殖子有杀灭作用，可以抑制速殖子的侵袭力和繁殖。该药的杀虫力与药物的浓度和作用时间呈正相关趋势。松萝酸的杀虫效果优于螺旋霉素。     

弓形虫速殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展

弓形虫在中间宿主内以速殖子和缓殖子两种滋养体形式存在。其机会性致病与速殖子和缓殖子之间的互相转换密切相关,揭示此转换机制将有助于寻找更有效的途径以控制弓形虫的急性和慢性感染。本文刈近年来有关这种转换机制的研究进展加以综述。     

弓形虫速虫殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展

弓形虫在中间宿主内以速 殖子和缓殖子两种滋养体形式存在克勤克俭 机会致病与速 殖子和缓殖子之间的互相转换密切相关,揭示此转换机制将有助于寻找更有效的途径以控制弓形虫的急性和慢性感染,本对近年来有关这种转换机制的研究进展加以综述。     

扁桃酸对感染小鼠腹水中弓形虫速殖子超微结构的影响

为探讨扁桃酸的杀虫机制,应用透射电镜观察扁桃酸对感染弓形虫小鼠治疗２４ｈ、７２ｈ和死亡后弓形虫速殖子的超微结构变化,扁桃酸２０ｍｇ／ｍｌ,０．２５ｍｌ／只,２次／ｄ经口灌服和经尾静脉注射途径给药,同时用乙胺嘧啶５ｍｇ／ｍｌ,０．２５ｍｌ／只,１次／ｄ作为药物对照。结果显示,扁桃酸在不同时期对弓形虫的超微结构均有破坏作用,且随药物作用时间延长,其杀虫作用增强。扁桃酸主要破坏虫体的细胞膜、细胞质中的线粒体、棒状体和内质网等,致密颗粒减少或消失。虽然乙胺嘧啶较扁桃酸对虫全的破坏程度稍强,但乙胺嘧啶在杀灭虫体的同时也破坏了腹水中正常细胞,而扁桃酸对正常细胞几乎无损伤。结果表明,扁桃酸的杀虫机制主要是破坏虫体细胞膜、细胞器和染色质,从而破坏了虫体赖以生存的理化环境和物质能量的代谢,破坏了虫体的遗传物质和遗传信息,抑制虫体     

抗弓形虫速殖子单克隆抗体的制备与特性研究

目的 制备抗弓形虫速殖子单克隆抗体（Ｍａｂ）,并对其特性进行分析,探讨其在弓形虫病诊断中的作用。方法 利用杂交瘤技术制备抗弓形虫速殖子Ｍａｂ。用间接ＥＬＩＳＡ法测定活性,以琼脂糖免疫双扩散鉴定亚类,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析该Ｍａｂ所识别的抗原分子量,以ＩＦＡ确定抗原位点在虫体的定位,并对其保护性及特异性进行分析。通过Ｍａｂ－ＥＬＩＳＡ法检测弓形虫抗原,以研究其在弓形虫病血     

激光对弓形虫速殖子的作用研究

本实验采用激光致弱弓形虫速殖子接种ICR小鼠腹腔,以期提高小鼠抗弓形虫感染的免疫保护力。结果表明：激光照射能够抑制虫体的繁殖和分裂能力。照射虫体免疫小且能诱导产生持续升高的IgG抗体。免疫民经弓形虫RH株攻击后,其发病和死亡时间延长,表现出部分的保护性免疫力。提示：激光对弓形虫速殖子的作用明显,可望在弓形虫病的治疗和预防中得到应用。     

弓形虫RH株体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系的建立

目的建立弓形虫RH株体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系。方法纯化弓形虫RH株速殖子,接种于NIH3T3细胞单层,进行体外培养。接种4h后,换用pH8.1的碱性培养基进行速殖子向缓殖子的诱导转化培养,RT-PCR检测缓殖子蛋白1(BAG1)基因的表达。将诱导的缓殖子重新用pH7.2的培养基在常规环境下培养,诱导缓殖子向速殖子转化。为探索温度对速殖子向缓殖子转化的影响,将接种RH株速殖子的NIH3T3细胞分别放在37℃、39℃、41℃、43℃中诱导转化培养,RT-RCR检测BAG1基因的表达。结果弓形虫RH株能在NIH3T3细胞单层中生长增殖,更换高pH值碱性培养环境后,能诱导弓形虫速殖子转化为缓殖子,RT-PCR检测出缓殖子期特异蛋白BAG1基因的表达,并且随着诱导时间的延长,BAG1基因mRNA的转录水平逐渐提高,表明有更多的速殖子转化为缓殖子。恢复pH7.2的常规培养条件,碱性诱导的缓殖子能转化为速殖子。在41℃诱导条件下,能诱导RH株速殖子转化为缓殖子。结论成功构建弓形虫体外培养及速殖子与缓殖子相互转化体系,为转化机制的研究奠定基础。     

核孔膜过滤法纯化弓形虫速殖子的研究

本文以核孔膜过滤法纯化刚地弓形虫接种小鼠腹腔后所获腹水及其洗涤液中的速殖子。共纯化6批,约70ml含虫悬液。原虫回收率为65.8％,原虫纯度达98.87％。对宿主白细胞的清除率为98.4％,红细胞85.2％。宿主细胞占纯化后的原虫悬被中有形成份的比例均低于1％。过滤操作对速殖子的生命力、毒力和感染力等无影响。且一张滤膜可滤获10~8原虫。核孔膜具有孔形稳定、孔径均匀、分辨力高、低吸附和表面阻留等优点。该法是纯化弓形虫速殖子的稳定高效、省时简便的无损新方法。     

弓形虫速殖子和缓殖子相互转换机制的研究进展

弓形虫是广泛分布的机会性致病原虫 ,速殖子和缓殖子之间的相互转换是其致病的中心环节。速殖子引起的急性感染可被宿主正常的免疫系统所抑制 ,从而转变为代谢、增殖缓慢的缓殖子 ,并以包囊的形式继续存在于脑、肌肉和视网膜等细胞中 ,形成隐性感染。当宿主免疫功能下降时 ,包囊中的缓殖子则可变为代谢旺盛、增殖迅速的速殖子 ,引起组织破坏 ,形成局部炎症 ,如慢性脑炎和视网膜脉络膜炎等 ,如不及时治疗 ,可直接导致这类免疫功能受累患者 (如爱滋病患者及器官移植患者 )的死亡[1,2 ] 。1　速殖子和缓殖子　作为弓形虫生活史中滋养体阶段的两…     

刚地弓形虫速殖子表面抗原研究进展

刚地弓形虫是猫科动物的肠道球虫，由法国学者Nicolle及Manceaux在刚地梳趾鼠单核细胞内发现，虫体呈弓形。该虫呈世界性分布，人和许多动物均可感染，引起人畜共患弓形虫病。弓形虫属机会致病原虫，孕妇和免疫功能低下者感染弓形虫可造成严重危害。与其它原虫一样，弓形虫的表膜具有十分重要的作用，虫体能通过表膜与外界进行物质交换，宿主免疫系统对弓形虫的识别也主要在表膜蛋白。     

刚地弓形虫RH株速殖子在HeLa细胞系体外培养的实验观察

目的 建立稳定高效的刚地弓形虫RH株速殖子(以下简称弓形虫速殖子)体外培养模型。 方法 ①将HeLa细胞（1×10⁴个）接种置于细胞培养皿内底部的盖玻片,12 h后将纯化的弓形虫速殖子接种于细胞培养皿（1×10⁴个/皿）,继续培养0.5～96 h,观察弓形虫速殖子在HeLa细胞内增殖情况;②将纯化的弓形虫速殖子接种于HeLa细胞后分为2组,一组于37 ℃分别培养24～120 h后,移入25 ℃培养120 h;另组于37 ℃培养48 h后,移入25 ℃分别培养72～168 h,观察不同温度和时间对弓形虫速殖子产率和活虫率的影响;③当培养的HeLa细胞80%发生细胞融合时更换速殖子培养液,同上法12 h后接种纯化的弓形虫速殖子进行培养,当80% HeLa细胞被感染增殖的弓形虫速殖子涨破时,收集、计数弓形虫速殖子,并用其感染（3×10⁶个/瓶）新的HeLa细胞,观察其连续传代情况;④每隔5代取弓形虫速殖子,腹腔接种昆明小鼠（3×10⁶个/只）,观察小鼠存活时间、评价该体外培养条件对弓形虫速殖子毒力的影响。 结果 接种弓形虫速殖子96 h后HeLa细胞均被感染及涨破,培养弓形虫速殖子30代（3～4 d为1代）增殖稳定,每代获得弓形虫速殖子1×10⁷～5×10⁷个,增殖5～20倍。各代弓形虫速殖子对昆明小鼠的平均致死时间为5.80～6.40 d, 毒力未见减弱(P>0.05)。HeLa细胞接种弓形虫速殖子,于37 ℃培养72 h后,移至25 ℃培养120 h,其产率高达40倍以上,活虫率为90%以上,仅残留极少量Hela细胞。 结论 刚地弓形虫RH株速殖子可在HeLa细胞中增殖并长期稳定传代。     

双氢青蒿素和阿奇霉素对小鼠体内弓形虫速殖子超微结构的影响

将30只昆明小鼠随机均分为3组,即双氢青蒿素治疗组（A组）、双氢青蒿素和阿奇霉素联合治疗组（B组）, 以及感染对照组（C组）。每鼠腹腔注射感染2×10³个弓形虫速殖子。感染8 h后,A组灌服双氢青蒿素75 mg/（kg·d）, 间隔12 h再给药1次;B组同A组,另于感染24 h后灌服阿奇霉素200 mg/(kg·d)1次。A、B两组均连续给药4 d,双氢青蒿素间隔12 h给药1次,阿奇霉素间隔24 h给药1次。C组不给药。治疗后（即于感染96 h后）,分别随机从各组取 1只小鼠解剖,抽取腹水,分离弓形虫速殖子。常规制备透射电镜标本,观察其超微结构变化。结果显示,A、B两组弓形虫速殖子均出现水肿,细胞膜结构模糊,局部断裂或破损。细胞质脂滴增多、形成空泡。而感染对照组未出现上述变化。     

刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察

原代培养星形胶质细胞,待其长至培养皿的80%时,将星形胶质细胞与弓形虫速殖子(细胞与虫体的比例为1∶10)共培养0～72h,吉氏染色观察星形胶质细胞和弓形虫速殖子的变化。共培养1h,此时定为0点,再培养0～48h,单磺酰戊二胺染色在荧光显微镜下观察星形胶质细胞内自噬囊泡的变化。结果发现共培养1h时,弓形虫速殖子开始进入星形胶质细胞,并出现荧光颗粒;8h星形胶质细胞内荧光颗粒最多;12h后显著减少,星形胶质细胞开始被破坏;48h星形胶质细胞内荧光颗粒消失;72h大部分星形胶质细胞已被涨破,留下大量增殖的弓形虫速殖子。说明自噬在弓形虫速殖子体外感染星形胶质细胞的过程中是受到抑制的。     

RH株弓形虫速殖子体外入侵大鼠肠上皮细胞与增殖的动态观察

目的 动态观察弓形虫RH株速殖子（简称速殖子）体外入侵大鼠肠上皮细胞（IEC-6细胞）及其增殖过程。 方法 取24孔培养板,设实验组及对照组各3孔,每孔放置经预处理的盖玻片。将常规传代培养的IEC-6细胞接种于各培养孔,于37 ℃ 5% CO2培养箱培养24 h,吸弃培养液,实验组每孔加入1 ml速殖子悬液（含1×106个速殖子）,对照组每孔加入1 ml无抗生素培养液,共培养。用倒置显微镜连续观察速殖子粘附、入侵IEC-6细胞及其增殖过程,并分别于共培养5～30 min、1～48 h后取出盖玻片,经吉氏-瑞氏染色后光镜观察其入侵和增殖情况,计算入侵率。 结果 共培养5 min,速殖子即可入侵IEC-6细胞,随着共培养时间的延长入侵的速殖子逐渐增多,1 h为1～5个,入侵率为（55.0±6.6）%。2 h入侵率高达（81.8±10.2）%,有假包囊形成,速殖子可入侵细胞核并在核内增殖。4 h入侵率降为（80.8±9.2）%,假包囊破裂释出成簇排列的速殖子。6 h入侵率为（75.1±8.2）%,成簇排列的速殖子显著增多。12 h成簇排列的速殖子减少,多数速殖子游离细胞外,完整的IEC-6细胞明显减少。24 h只见部分IEC-6细胞和假包囊存在,有大量游离的速殖子。48 h见大量游离速殖子,未见贴壁细胞。 结论 体外培养的弓形虫速殖子可迅速入侵IEC-6细胞,并可在细胞质及细胞核内增殖。增殖周期为6～12 h。     

人包皮成纤维细胞和人子宫颈癌细胞体外培养弓形虫速殖子

目的 比较弓形虫RH株速殖子在人包皮成纤维细胞（human foreskin fibroblast, HFF）和人子宫颈癌（HeLa）细胞的感染和细胞内增殖情况。 方法 分别于含一盖玻片的细胞培养皿（35 mm）内培养HFF细胞和HeLa细胞。待形成单细胞层后各加入经3 μm滤膜纯化的弓形虫RH株速殖子共培养, 分别于0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72和96 h取出盖玻片, 经吉氏染色镜下观察速殖子在两种细胞内的增殖情况。 结果 与HFF细胞共培养4 h后, 速殖子即可侵入HFF细胞, 1个细胞内可见数十个速殖子;24 h可见明显的假包囊, 72 h细胞被胀破。而与HeLa细胞共培养8 h后速殖子才侵入细胞, 每个细胞内可见3～5个速殖子, 48 h形成假包囊, 96 h大部分细胞被胀破。 结论 弓形虫RH株速殖子可在HFF细胞和HeLa细胞内增殖, 在HFF细胞内的增殖速度快于HeLa细胞。     

应用双向电泳及蛋白质印迹分析弓形虫特异性抗原

将感染弓形虫速殖子的SD大鼠血清和健康大鼠血清作为一抗进行蛋白质印迹（Western blotting）分析,比较杂交蛋白点的差异,分析弓形虫速殖子特异性抗原。弓形虫速殖子总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱（7 cm×8 cm, pH 3～10）共检测到209个蛋白质斑点。Western blotting显示实验组抗原抗体反应点17个,对照组仅2个非特异性的蛋白结合点。     

大蒜素体外对卡氏棘阿米巴超微结构的影响

用不同浓度大蒜素处理处于对数生长期的卡氏棘阿米巴（Acanthamoeba castellanii,T4型）,24 h后在透射电镜下观察其超微结构损伤情况。结果表明,大蒜素浓度为50 μg/ml时,卡氏棘阿米巴的超微结构轻度破坏,浓度为500 μg/ml时,其结构严重破坏,虫体坏死。大蒜素对体外培养的卡氏棘阿米巴（T4型）超微结构有破坏作用。     

常青胶囊抗弓形虫速殖子实验研究

目的 观察常青胶囊体外抗弓形虫速殖子的效果。方法 常青胶囊设高、中、低3个剂量组。用生理盐水浸泡不同剂量的常青胶囊,各取上清液1.5 ml,加入2.5×10⁴弓形虫速殖子,作用8h后,将速殖子腹腔接种及灌胃接种正常小鼠,观察发病情况。如不发病,同法接种传代观察发病情况,至第3代。抗弓形虫药物螺旋霉素、乙胺嘧啶及阿奇霉素3药同样各设高、中、低3个剂量组。另设生理盐水对照组。腹腔接种各药物作用的速殖子后观察小鼠发病情况。结果 常青胶囊腹腔接种组发病数(60只小鼠中2只发病),显著低于上述3药对照组及生理盐水对照组(60只小鼠发病数依次为16、10、10及60只)(P值均<0.05)。常青胶囊高、中剂量组(每组20只小鼠,发病数均为0)与低剂量组(20只小鼠,发病2只)之间差异显著(P<0.05)。传代观察,常青胶囊低剂量组腹腔及灌胃接种传第1代,20只小鼠分别有2只及1只发病。螺旋霉素低剂量组传第2代,20只小鼠中2只发病,乙胺嘧啶低剂量组传第3代,20只小鼠有1只发病。结论 常青胶囊体外抗弓形虫作用优于传统临床抗弓形虫药物,杀虫效果与剂量呈正相关。     

应用环介导等温扩增技术检测弓形虫

目的 用环介导等温扩增（LAMP）技术检测弓形虫。 方法　 用酚-氯仿法提取弓形虫速殖子基因组 DNA,设计两对扩增弓形虫 B1基因的 LAMP 引物。以间日疟原虫、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、日本血吸虫及小鼠白细胞作对照,进行LAMP反应,产物经 SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性。将弓形虫速殖子经倍比稀释为（2～3）×106个/ml至（2～3）×10-1个/ml 等8个浓度,进行LAMP反应,验证该方法的敏感性。 结果 LAMP反应结果显示,弓形虫速殖子检测管经显色后呈绿色,对照组均呈棕色。弓形虫的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP技术可检测到的弓形虫速殖子最低浓度为2～3个/ml。 结论 LAMP技术在弓形虫检测中显示出较好的特异性与敏感性。     

弓形虫病大鼠T淋巴细胞和脾微量元素的测定

目的　观察感染弓形虫大鼠外周血T淋巴细胞及其亚型以及脾组织中 5种微量元素 (Fe2 + 、Cu2 + 、Zn2 + 、Ca2 + 、Mg2 + )含量的变化。方法　 2 0只大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每鼠经腹腔注入 2ml含 1.5× 10 6弓形虫速殖子的生理盐水悬液 ,对照组每鼠腹腔注射 2ml生理盐水。 6 4d后将 2组大鼠处死 ,取外周血及脾组织。用细胞内α 醋酸萘酯酶标记T淋巴细胞的方法观察弓形虫病大鼠外周血T淋巴细胞 (TL)及其亚型辅助性T淋巴细胞 (Th)和抑制性T淋巴细胞 (Ts)的变化 ,同时用原子吸收分光光度仪测定其微量元素的变化。结果　实验组外周血TL和Th均低于正常对照组 (P <0 .0 1、P <0 .0 1) ,两组间Th/Ts比值差异显著 (P <0 .0 1) ;实验组脾Fe2 + 、Cu2 + 含量明显减少 (P <0 .0 1,P <0 .0 1) ,而Mg2 + 含量明显增加 (P <0 .0 1)。结论　弓形虫感染能引起大鼠外周血TL、Th和Ts改变及脾内微量元素的变化