HLA分型工作中的错误原因分析

造血干细胞移植,是挽救白血病患者的生命及治疗重型再生障碍性贫血、免疫缺陷综合征、地中海贫血等疾病的有效手段~[1].中华骨髓库的建立为数以百万计的患者带来福音.骨髓(造血干细胞)移植过程中,HLA是影响移植存活率的主要因素之一,因此,人类白细胞抗原(HLA)分型数据入库结果的准确性是骨髓库工作的重要内容.     

HLA位点的PCR-SSP和PCR-SSO分型亲子鉴定1例分析

1　案例资料受检者为我室接收的案例中的一份 :母亲、孩子、可疑父亲。当事人要求证明孩子与可疑父亲的亲子关系。在对 2名当事人进行ABO、Rh、MN、P等血型及HLA Ⅰ类DNA分型 ,因总亲子关系指数为86 6 0 % ,指数偏低 ,仍不能作出肯定结论 ,在补加HLA -Ⅱ类DNA分型得到DR位点后 ,亲子关系指数提高到 99 5 6 % ,此时 ,可作出肯定亲子关系的结论。2　材料与方法2 1　材料抗A、抗B单克隆血型试剂 ,A、B、O标准细胞 ,Rh、MN、P血型的单克隆定型试剂均购自上海血液中心国家血型参比室。HLA DNA分型试剂、PCR -SSO试剂均购自美…     

中华骨髓库HLA分型质控工作中分型结果错误原因的分析及探讨

目的对中国造血干细胞捐献者资料库（简称中华骨髓库）中人类白细胞抗原（HIA）分型数据质控抽枪中发现的错误分型情况进行归纳总结，探讨其产生的原因及解决策略，以提高造血干细胞捐献者HLA分型的准确性。方法采用聚合酶链反应（PCR）-序列特异件引物（sequence specific primers, SSP） 、PCR-序列特异性寡核苷酸探针（sequence specific oligonucleotide probes, SSOP）及基因测序（ sequence based typing,SBT）分型方法，对中华骨髓库按比例随机抽取的7313份已完成HLA-A、B、DRB1基因分型的标本进行复检，使用与所抽检标本原始分型试剂小同的试剂盲检，对结果不符者，采用第3种试剂及其原始分型试剂复检；对于难以确定的结果，采用SBT方法确认。采用直接计数法进行HLA差错统计。结果质控抽检6期共7313份标本，发现HLA分型结果错误标本数183份，平均错误率为2．50％。HLA基因分型错误率逐年降低，6期错误率分别为8．18％、3．84％、2．85％、1．70％、1．10％、0．84％。HLA-A位点错误率为0．49％，其中漏检现象占A位点错误的61．11％；HLA-B位点错误率为0．85％，其中以同一宽特异性组之间的业型判断错误者居多，占B位点错误的41．94％；HLA-DRB1位点错误率为0．66％；另外，可能由于标本搞错导致的HLA-A、B、DRB1 3个位点分型全错有41例，错误率为0．56％。结论错误产生的原因有实验人员的技术操作水平及工作责任心上的原因，也有分型方法及试剂本身的原因。采用DNA分型技术，使用特异性、重复性好的合格试剂及加强质控监督，有助于提高HLA分型的准确性，并将有助于提高骨髓库造血干细胞捐献者HLA分型的质量。     

供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型的无关供者外周血造血干细胞移植32例回顾分析

目的探讨供、患者的人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因高分辨相合及亚型相合,无关供者外周血造血干细胞移植后效果的情况,为临床造血干细胞移植治疗选择适配供者提供理论依据。方法采用PCR-SSP或SBT技术对供、患者HLA-A、B、DRB1的基因进行高分辨分型,定期随访患者在造血干细胞移植后状况,统计分析移植后效果。结果32例患者与供者的HLA低分辨分型结果完全相合,HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型全相合的患者与HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型不相合的患者,造血干细胞植活和两年半内的移植存活率比较,无统计学差异。结论HLA低分辨分型结果完全相合是临床医生选择造血干细胞移植的重要条件之一,供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型是外周血造血干细胞移植治疗前组织配型不可少的实验之一,但HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型错配对无关供者外周血造血干细胞移植的造血干细胞植活和两年半内的移植存活率影响较小,HLA基因高分辨分型可以帮助临床医生选择合适的供者。     

中国人HLA-A和B位点血清学分型错误的分析

对27例HLA—A和—B位点血清学分型错误进行分析。结果表明，HLA—A和—B位点的误检型错误均高于漏检型错误(P＜0．05)，A和B位点分型间别无显差别。中国人分型错误频率高的有A1(66．7％)，A3(50.0％)，A11(13．5％)，A9(11．8％)和A19(7．1％)及B16(50．0％)，B48(43．9％)，B15(16．7％)，B40(11．1％)，B13(10．0％)和B17(9．1％)等抗原。结论：血清学分型方法应与基因分型技术互为补充。     

PCR—SBT法HLA基因分型模棱两可结果的判读及解决对策

目的研究PCR—SBT法HLA基因分型结果判读中出现的模棱两可问题并提出解决策略。方法对306名随机抽取的组织配型患者的DNA采用PCR-序列特异性引物（Sequence Specific Primer,SSP）低分辨方法检测,同时采用PCR—SBT法进行HLA—A,B,DRB1高分辨基因分型。PCR—SBT法模棱两可结果用PCR—SSP高分辨方法复核确认。结果所有306例检测标本的高低分辨血清学抗原一致,经PCR—SBT基因测序方法检测有111份模棱两可结果,占36．3％（111／306）。其中HLA—A座位有30对等位基因存在模棱两可结果,占所有检测标本等位基因总数的3．3％;HLA—B座位有66对,占7．2％;HLA—DRB1座位有36对,占3．9％。所有模棱两可标本经PCR—SSP HLA基因高分辨分型试剂PCR—SSP等方法复核确认。结论针对PCR—SBT法进行HLA—A,B,DRB1高分辨基因分型模棱两可结果所建立的解决策略,对于提高HLA数据分型的速度和分型准确性有重要意义。     

五种HLA低分辨率基因分型试剂的对比分析

目的：比较五种HLA低分辨率分型试剂的检测效果。方法：用五种HLA分型试剂分别检测7份标准品，分析比较各种试剂的检测结果。结果：五种分型试剂基因检出率均为100％，无漏检。分辨率较好，均能达到低分辨率的要求。但试剂A和D特异性略低于其它试剂。结论：储备两种分型试剂以弥补彼此的不足。     

HLA半相合造血干细胞移植的研究进展

异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病最有效的手段之一，但人类白细胞抗原(HLA)屏障限制了其广泛应用。随着免疫学、分子生物学、细胞生物学理论和技术的不断发展，HLA半相合造血干细胞移植日益受到关注。本文就其研究进展作一综述。     

流式磁珠反向SSO法HLA分型结果判读影响因素及解决对策的研究

目的研究流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1分型结果判读中出现的常见问题,并提出相应的解决策略。方法对3 219名随机抽取的深圳市无关造血干细胞供者及组织配型患者的DNA采用流式磁珠反向SSO法进行HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,模棱两可结果用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)法及PCR-SBT测序方法等方法复核确认。结果3 219份样本中发现有95份(95/3 219)28种类型的模棱两可结果,其中HLA-A位点有3(3/28)种,HLA-B位点有25(25/28)种,91.6%的模棱两可结果其样本的荧光值在阳性控制线上,本研究观察到的模棱两可结果通过基因频率分析、PCR-SSP法及PCR-SBT基因测序等方法得以定型。结论建立流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1基因分型模棱两可结果解决策略,对提高HLA数据分析的速度和分型的准确性有重要的意义。     

应用PCR—SSP进行HLA—AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAⅠ类基因分型技术并应用于骨髓七配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应（PCR－SSP）进行HLA－AB基因分型，并与HLAⅠ类血清学分型（微量淋巴细胞毒试验）进行比较。结果 运用PCR－SSP技术共对22例需骨髓移植的病人和48例供者进行基因分型，2例病人确认了HLA 新缘骨髓供者，其中1 已成功进行了骨髓移植；基因分型和血清分型比较，43例结果完全一致（61.4%），血清分型错误率高达38.6%(27/70)。结论 PCR－SSP分型技术具有准确性高，简便快速等优点，将取代传统的血清学方法。     

中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原的高分辨分型

目的：通过对异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原A．B．DRB1基因的序列分析，探讨中国汉族群体中异基因造血干细胞移植前人类白细胞抗原高分辨分型的必要性。方法：实验于2000—08／2004—03在深圳市血液中心完成。供者和受者114对的血样分别来源中华骨髓库和各移植医院，供者和受者均签署知情同意书。采用聚合酶链式反应-测序分型技术对114对中国汉族无关供受者间的人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因进行序列分析，观察中国汉族无关供受者对间等位基因水平的配合率、各等位基因家族的配对分布和错配分布规律。某些位点的模棱两可结果，则通过相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物分型试剂进行分离并确认最后结果。结果：①高分辨与低分辨分型结果比较：114对无关供受者对中，110对人类白细胞抗原-A，B，DRB1的聚合酶链式反应-测序分型结果与低分辨（等位基因星号后两位数）DNA分型结果相吻合，4对聚合酶链式反应．测序分型结果与低分辨结果不相符。②供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1高分辨配对分类结果：39％的中国汉族供受者对完全配合，但61％的供受者间存在至少一个等位基因的错配。③供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1等位基因家族配对分布结果：3个座位的错配率分别为A（23％），B（10％），DRB1（17％）；A和DRB1座位的错配比较集中，A座位仅见于A＊02，A＊11和A＊24家族，DRB1座位见于DRB1＊04，DRB1＊08，DRB1＊12，DRB1＊14和DRB1＊15家族；而B座位的错配则比较分散，比较高的是B＊35，B＊48，B＊61和B＊62。④供受者间人类白细胞抗原-A，B，DRB1错配等位基因组合结果：3个座位的错配等位基因组合呈现较高的多样性，比较常见的几种组合为A＊0201／0207，A＊1101／1102．A＊0201／0206，A＊0203／0207，B＊4002／4006，DRB1＊1201／1202和DRB1＊1501／1502。结论：中国汉族异基因造血干细胞移植无关供受者对的人类白细胞抗原等位基因配合率低且其分布具有一定规律和特殊性，在移植前有必要对无关供受者对进行人类白细胞抗原高分辨分型。     

PCR-SSP在HLA低分辨中判型困难或无法判型的常见原因及解决策略

目的分析PCR SSP在HLA低分辨中判型困难或无法判型的常见原因,提出解决办法。方法采用计数统计法、PCR SSP高分辨和基因测序法。对10000名无关供者HLA A、B、DR位点PCR SSP低分辨结果中出现判型困难或无法判型的结果2380份,随机抽取800份进行统计。结果由PCR SSP方法造成的占91.88%;技术操作造成的约占8.12%。PCR SSP在HLA低分辨中判型困难或无法判型的结果中,63.50%模棱两可的结果可通过HLA词典基因频率分析得出结果;3.75%的结果需要高分辨方法;2.50%的结果需要基因测序;27.50%的结果需要用特殊引物鉴别;2.75%的结果需要重做。结论PCR SSP在HLA低分辨中判型困难或无法判型的样本97.25%可通过其他方法进一步得出准确结果。     

多核苷酸多态性分析在异基因造血干细胞移植后嵌合体检测的策略优化及临床分析

目的:探讨基于高通量测序的多核苷酸多态性嵌合体检测法的标本选取、结果校正,以及其临床应用价值。方法:收集2018年11月-2020年6月本院嵌合体标本,采用皮尔森相关系数(r)对MNPseq法检测的骨髓和外周血结果进行一致性分析;根据移植前信息完整性的不同构建校正模型,分析各模型的微小嵌合结果校正值;对临床结果进行回顾分析,验证嵌合体结果校正的可靠性和实用性,并进一步探讨MNPseq法的临床价值。结果:MNPseq法检测骨髓和外周血嵌合体结果差异无统计学意义(Z=-1.075,P=0.282),且相关性显著(r=0.985,P<0.01)。通过移植前信息不同构建3组校正模型,无供者和移植前患者信息组校正值为1%;有移植前患者、无供者信息组嵌合率校正值为0.61%和13个差异位点;有移植前患者和供者信息组嵌合率校正值为0.26%和差异位点比例校正值21.57%。对372位患者嵌合体结果进行校正,校正后不完全嵌合患者由276人(74.19%)下降至141人(37.91%),且有统计学意义(P<0.01)。结合临床对18例(18/141,12.77%)复发患者的MNPseq、ST...     

供者来源CAR-T细胞治疗异基因造血干细胞移植后复发急性B淋巴细胞白血病的疗效及安全性

目的探索供者来源靶向CD19或联合靶向CD22嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗异基因造血干细胞移植后复发急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的有效性及安全性。方法回顾性分析2015年9月至2022年12月在南方医科大学珠江医院及解放军联勤保障部队第九二〇医院血液科22例接受供者来源CAR-T细胞治疗的异基因造血干细胞移植后复发的B-ALL患者的有效性和安全性。主要研究终点是总生存(OS), 次要研究终点是无事件生存(EFS)、完全缓解(CR)率、3～4级不良事件。结果 CAR-T细胞输注后, 18例(81.82%)患者获得CR且微小残留病(MRD)均为阴性。中位随访1037(95%CI 546～1509)d, 中位OS期为287(95%CI 132～441)d, 中位EFS期为212(95%CI 120～303)d, 6个月OS率为67.90%(95%CI 48.30%～84.50%), 6个月EFS率为58.70%(95%CI 37.92%～79.48%), 1年OS率为41.10%(95%CI 19.15%～63.05%), 1年EFS率为34.30%(95%CI 13.92...     

CD7+复发难治急性髓系白血病患者的临床特征及异基因造血干细胞移植预后分析

目的探讨CD7+复发难治急性髓系白血病(r/r AML)患者的临床及分子学特征以及异基因造血干细胞移植术(allo-HSCT)的预后。方法回顾性分析2017年1月1日到2020年12月31日入航天中心医院血液科行allo-HSCT的172例r/r AML 患者, 根据初发免疫表型是否表达CD7分为CD7+组75例, CD7-组97例。采用Mann-Whitney U和卡方检验对比两组患者的临床资料、分子学及细胞遗传学特征, Kaplan-Meier分析两组患者的中位无进展生存时间(PFS)和中位总生存时间(OS), Cox回归筛选影响患者预后因素。结果中位随访19个月, CD7-组复发率23.71%, CD7+组复发率50.67%(χ2=13.428, P<0.001)。复发患者中CD7-组86.96%不表达CD7, CD7+组86.84%表达CD7。CD7-组和CD7+组的中位无进展生存时间(PFS)分别为25个月和5个月, 差异有统计学意义(χ2=13.428, P=0.003);中位总生存时间(OS)分别为34个月和15个月, 差异有统计学意义(χ2=2.579, P=0....