三氧化二砷联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用机制研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合化疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞株,分别给予As2O3和顺铂单独或联合处理,用细胞免疫组化酶法检测Bax、Bcl-2、Fas蛋白的表达情况;采用流式细胞仪观察人肝癌HepG2细胞株的细胞周期变化,细胞DNA含量的分布,测定不同作用时间后端粒酶活性的变化情况。结果As2O3组肝癌HepG2细胞的Bax和Fas基因的表达明显增加,Bcl-2基因的表达明显降低;在DNA直方图上可见在G1期细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰,使S期细胞减少,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,联合用药组比单独用药组作用明显增强。结论As2O3及联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡,其主要机制与增强Bax、Fas的表达,下调Bcl-2的表达,将细胞生长周期阻滞于G2/M期,阻止细胞的有丝分裂,抑制端粒酶活性有关。     

氧化砷对结肠癌细胞凋亡的诱导及机制的探讨

目的 探讨氧化砷(As2O3)对人结肠癌细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法应用显微镜和流式细胞仪观察As2o3对SW480细胞株的形态学改变和诱发凋亡率；免疫组化技术检测bcl-2、Fas、二种基因编码蛋白的表达。结果 As2O3作用于细胞后，可看到较典型的细胞凋亡形态学改变。AO／EB荧光染色法显示，细胞凋亡率为2．1％～10．6％。As2O3诱导SW480细胞凋亡作用呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。经As2O3作用的SW480细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，Fas基因编码蛋白表达增加。结论 As2O3有诱导SW480细胞凋亡作用，其诱导细胞凋亡的分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强Fas基因编码蛋白表达。     

重复加热致肝癌HepG2细胞对化疗药耐受性与细胞凋亡的变化

目的探讨多次加热肝癌HepG2细胞后，残存细胞对化疗药耐受性与细胞凋亡变化的关系。方法HepG2细胞43℃加热，每次80min，每天2次，10个循环后，MTT法分析其对阿霉素的敏感性，试剂盒检测细胞的凋亡，免疫组化法检测细胞Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表达，RT-PCR法检测细胞Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表达，结果热处理后的HepG2细胞对阿霉素的化疗耐受性升高，细胞凋亡率减低，Bcl-2基因／蛋白的表达增强，Bcl-2／Bax值增大。结论热处理后HepG2细胞对化疗药物耐受性增高可能与其凋亡率降低、Bcl-2基因／蛋白的表达增强及Bcl-2／Bax值增大有关。     

三氧化二砷诱导人横纹肌肉瘤RD细胞株凋亡的实验研究

[目的]研究三氧化二砷(As2O3)体外抑制人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD(RD细胞株)增殖及诱导凋亡的作用. [方法]以不同浓度的As2O3处理RD细胞株,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡率. [结果]4～8 μmol/L hs2O3能以时间剂量依赖的方式抑制RD细胞株的增殖,并诱导其凋亡,在流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少;低浓度As2O3(＜2μmol/L)则有轻微促增殖作用,细胞周期向S期和G2/M期集中,G0/G1期细胞减少. [结论]As2O3浓度≥4μmol/L时,可明显抑制RD细胞株的生长并促进细胞凋亡,其临床应用还需进一步研究.     

PPARγ的配体罗格列酮诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

[目的] 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体罗格列酮(RSG)对肝癌细胞凋亡的影响.[方法] 体外培养人肝癌HepG2细胞,将HepG2细胞分为对照组和RSG不同浓度(25、50.100、200 μmol·L-1)加药组.应用流式细胞仪检测RSG不同浓度对肝癌细胞ItepG2凋亡率的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;实时荧光定量PCR方法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达变化;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax、PPARγ的蛋白表达. [结果] 流式细胞仪和荧光染色法显示RSG诱导肝癌HepG2细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;RSG干预后,Bcl-2的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达下调,Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达均上调. [结论] .RSG依赖激活PPARy能在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是通过下调抗凋亡基因Bcl-2表达以及上调促凋亡基因Bax而实现的,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点.     

铜绿假单胞菌制剂经由甘露糖依赖方式影响人宫颈癌Hela细胞株的生长研究

目的 研究铜绿假单胞菌制剂(pseudomonas aeruginosa with mannose sensitive hemagglutination pili,PAMSHA)由甘露糖依赖方式影响Bad、Bax及Bcl-2的表达进而影响癌细胞的增殖和细胞周期进程,为治疗宫颈癌的新的生物制剂提供依据. 方法 采用单独处理PA-MSHA或甘露糖与PA-MSHA联合处理宫颈癌Hela细胞,随后采用MTT法检测细胞增殖,流式检测细胞周期,荧光定量PCR和western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bad、Bax的表达变化. 结果 PA-MSHA单独处理宫颈癌Hela后细胞增殖减慢,细胞周期阻滞在G0/G1期,同时荧光定量PCR和western blot检测显示促凋亡蛋白Bad、Bax的表达增加而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减少.而甘露糖与PAMSHA共培育组与空白组对比在细胞增殖、细胞周期及凋亡蛋白表达上差异无统计学意义. 结论 PA-MSHA可以影响Bad、Bax及Bcl-2的表达进而影响癌细胞的增殖和细胞周期进程,且这种作用为甘露糖敏感型,该结果为其成为治疗宫颈癌的新的生物制剂提供了可靠依据.     

5-氟尿嘧啶缓释剂对荷U14宫颈癌小鼠抑瘤效果的研究

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)缓释剂对荷U14宫颈癌小鼠的抑瘤效果以及相关细胞凋亡机制。方法:清洁级小鼠ICR接种U14,随机分为对照组、化疗组、缓释组和联合组,观察小鼠生存周期;收集第7天、第13天腹水瘤,观察细胞凋亡、细胞周期以及Bcl-2/Bax蛋白和基因RNA水平表达的变化。结果:与对照组比较,化疗组、缓释组和联合组的平均生存期明显延长;第7天与第13天,化疗组、缓释组和联合组中晚期凋亡和总凋亡均显著高于对照组,其中联合组中晚期凋亡和总凋亡也显著高于缓释组;化疗组、缓释组、联合组的G1期细胞较对照组明显增加,增殖指数明显降低。第7天、第13天,化疗组、缓释组和联合组Bcl-2蛋白或RNA表达均低于对照组,Bax表达均高于对照组;其中联合组Bcl-2低于缓释组,Bax高于缓释组。结论:5-FU延长荷瘤小鼠的生存期,对宫颈癌腹水瘤有较好的抑瘤作用,作用机制很可能通过介导下调Bcl-2、上调Bax的表达。     

四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能调控的实验研究

目的观察四物汤配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血功能的影响。方法50只小鼠随机分成5组，正常组、照射处理组及3个不同剂量组。应用流式细胞术（FCM）检测小鼠骨髓细胞周期，采用原位杂交技术测定骨髓细胞凋亡基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达。结果四物汤配方颗粒各组均能明显促进骨髓G0／G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2／M期细胞的转化，增殖指数（PI）明显升高。提高骨髓细胞中Bcl-2 mRNA的表达，降低Bax mRNA的表达。结论四物汤配方颗粒通过促进骨髓抑制小鼠细胞周期的转化及抑制骨髓细胞凋亡，而达到促进造血功能的目的。     

苹果提取物对食管癌细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响

目的通过苹果提取物对食管癌EC9706细胞的增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响。方法加入受试物前,将EC9706细胞接种于1640培养液中,实验设溶剂对照组及苹果提取物7个剂量组,应用MTT、流式细胞术和扫描电镜技术,观察苹果提取物对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期各时相DNA分布以及凋亡的影响;采用免疫组织化学技术,检测Bax及Bcl-2蛋白表达情况。结果各剂量组苹果提取物对食管癌EC9706细胞分别处理72h和96h后,均抑制了食管癌EC9706细胞的增殖,使细胞停滞于G2/M期,并伴随着对凋亡的诱导和Bax、Bcl-2蛋白表达的改变。经统计学分析差异具有显著意义。结论苹果提取物可阻止细胞DNA合成,降低S期百分率,减少分裂期细胞从而抑制EC9706增殖,并通过调节Bax和Bcl-2蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

新辅助动脉化疗对宫颈癌细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的检测宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡及Bcl-2、Bax的变化,探讨其意义。方法选取宫颈癌Ib2—1Ib期患者46例,动脉化疗前后宫颈活检,采用DNA片段末端标记法检测凋亡细胞,免疫组化法检测Bcl-2及Bax蛋白。结果动脉化疗后,细胞凋亡指数（％）由0．67±0．21升高至3．57±1．29,P〈0．05;Bcl-2表达阳性率（％）化疗前为19．23±4．17,化疗后为8．15±5．03,化疗后较化疗前降低,P〈0．05;Bax表达阳性率（％）化疗前7．46±5．43,化疗后22．34±6．58,化疗后较化疗前明显升高,P〈0．05。结论宫颈癌行新辅助动脉化疗后细胞凋亡增加,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,Bcl-2／Bax比值降低,提示动脉化疗可通过提高Bax的表达,降低Bcl-2／Bax的比值,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养维生素D3受体(VDR)阳性和阴性的肝癌细胞株HepG2和HCCT细胞,培养时添加100、10和1nmol/LEB1089,分别作用2、4和6d后,用四唑蓝比色实验(MTT)、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;用反转录PCR(RTPCR)检测VDRmRNA的表达;用流式细胞仪和电子显微镜检测细胞凋亡。结果EB1089对VDRmRNA表达阳性的HepG2细胞的抑制率为175%～721%,对VDRmRNA表达阴性的HCCT细胞没有抑制作用;电镜结果显示EB1089可诱导HepG2细胞凋亡,流式细胞仪结果显示凋亡细胞的百分比为214%,并可阻滞细胞周期于G1期。结论EB1089对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用,可通过VDR受体抑制人肝癌细胞的增殖,并可诱导HepG2细胞凋亡。     

As2O3对NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对急性粒细胞白血病细胞株NB4（APLM3）凋亡及细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测As2O3对NB4的细胞毒活性，流式细胞仪AnnexinVFITC-PI检测细胞凋亡率，溴化丙碇（PI）染色法检测细胞周期。结果1～8μmol／LAs2O3能显著抑制NB4细胞增殖，且这些变化呈明显的时间和浓度依赖关系（时间一剂量效应）。2～8μmol／LAs2O3能显著诱导NIM细胞凋亡，处理时间为12h，其早期凋亡率和总凋亡率均与剂量呈线性正相关；处理时间为24h，其早期凋亡率、中晚期凋亡率和总凋亡率与剂量呈线性正相关；As2O3处理时间为36h和48hNB4细胞以中晚期调亡为主。流式细胞检测表明，不同浓度的As2O3均使NB4细胞周期阻滞在G2／M期。结论As2O3能抑制人白血病NB4细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖使细胞受阻于G2／M期。其诱导凋亡作用具有时间和浓度依赖关系。     

砷和香烟烟气溶液对基因Bcl/2和Bax表达影响

目的 研究亚砷酸钠和香烟烟气溶液联合作用对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响,并探讨它们对这2种基因表达的影响是否存在交互作用.方法 按照2×2析因设计将大鼠淋巴细胞分为4组:亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组、两者联合作用组和对照组.利用免疫印迹法检测细胞的Bcl-2和Bax表达,利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测各组细胞凋亡,同时采用2×2析因设计的方差分析研究两者的交互作用.结果 亚砷酸钠和香烟烟气溶液单独作用或者联合作用都能够使细胞Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加、凋亡细胞数增加.析因设计的方差分析结果表明,2种毒物对Bcl-2蛋白表达、Bax蛋白表达、凋亡细胞数均存在交互作用,交互作用方式为协同作用.结论 亚砷酸钠和香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞的Bcl-2蛋白表达、Bax蛋白表达的影响存在交互作用,交互作用方式为协同作用.     

体外培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP并探讨卵巢癌顺铂耐药机制

目的:通过对人卵巢癌细胞株SKOV-3、SKOV-3/DDP体外培养,探讨卵巢癌顺铂耐药机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪测定SKOV-3、SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数及细胞周期变化,并分析细胞内Bcl-2蛋白及细胞膜上Fas、Fas-L表达情况。结果:相对于SKOV-3细胞;SKOV-3/DDP细胞顺铂耐药指数约为4倍,其细胞周期主要分布于G0/G1期、S期,细胞内Bcl-2蛋白表达及细胞膜Fas、Fas-L水平明显升高。结论:细胞主要分布于潜伏期、细胞内凋亡抑制蛋白Bcl-2水平升高及细胞膜Fas、Fas-L表达增加,可能是卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP顺铂耐药的部分机理。     

白藜芦醇对绒癌细胞JEG-3的杀伤效应

目的:研究白藜芦醇(RES)对绒癌细胞JEG-3的凋亡作用及其机制.方法:不同浓度RES药物作用于JEG-3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Western blot法,检测RES对细胞增殖、周期分布、凋亡、及相关蛋白表达的影响.结果:RES以时间和浓度依赖方式抑制JEG-3细胞的增殖(P<0.01),同时诱导JEG-3细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞(P<0.01).Western blot法检测显示在RES作用之后,Caspase-3蛋白、Bax表达明显上调,Bcl-2表达明显下调.结论:RES可抑制人绒癌JEG-3细胞增殖、诱导其凋亡、阻滞细胞G0/G1期、伴随Caspase-3活性上调,其机制可能与上调凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关.     

吡柔比星联合二烯丙三硫抑制膀胱癌细胞生长的协同作用研究

目的探讨吡柔比星(THP)联合二烯丙三硫(DATS)对膀胱癌细胞T24的协同杀伤效应及其机制。方法 MTT法、TUNEL法、流式细胞仪分别检测THP、DATS及二者联合对T24细胞生长、细胞周期及凋亡的影响;western-blot测定Bcl-2、Bax的表达变化;比色法测定caspase-3活性。结果 THP、DATS均能抑制T24细胞生长,DATS可明显提高THP的杀伤效应;THP(0.25mg/L)联合DATS(3mg/L)作用48h的细胞生存率为(32.3±2.6)%,低于单独应用THP(63.2±1.4)%和DATS(61.9±4.2)%,二者具有协同抑瘤作用;联合药物组可明显提高细胞凋亡率及G2/M期细胞比率,并更能显著抑制Bcl-2的表达,促进caspase-3的活性增加。结论 THP联合DATS可通过共同诱导肿瘤细胞凋亡发挥协同作用,抑制膀胱癌细胞生长,该机制可能与细胞周期阻滞、Bcl-2的表达及caspase-3的活性变化有关。     

蛇床子素体外对人肝癌细胞的杀伤效应及机制

目的探讨蛇床子素体外对人肝癌细胞的杀伤效应及机制。方法将人肝癌细胞系Hep G2和Huh7用蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对这2种肝癌细胞系的抑制率,采用流式细胞术检测蛇床子素对Hep G2细胞凋亡的影响,采用Western blot法检测蛇床子素对Hep G2细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的表达。结果 MTT试验结果表明,不同浓度的蛇床子素均能抑制Hep G2细胞的细胞活力;流式细胞实验结果表明,高、低剂量的蛇床子素均能诱导Hep G2细胞发生凋亡,且高、低剂量蛇床子素组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05);与相同剂量蛇床子素组比较,z VAD-fmk可有效抑制蛇床子素对Hep G2细胞的凋亡诱导效应,差异有统计学意义(P0.05);蛇床子素能显著降低Hep G2细胞Bcl-2的表达水平,差异有统计学意义(P0.05),但对Bax表达无影响。结论蛇床子素诱导肝癌细胞进入Cleaved caspase-3依赖的凋亡过程,其机制可能为蛇床子素可显著降低Bcl-2表达,从而降低Bcl-2/Bax比例。     

大蒜油和白藜芦醇联合应用诱导胃癌细胞凋亡及对Fas、bcl-2和bax基因表达的影响

目的观察大蒜油和白藜芦醇联合用药对人胃癌MGC-803细胞凋亡及对Fas抗原表达、bcl-2基因、bax基因mRNA表达的影响。方法实验设大蒜油和白藜芦醇联合用药组1（各25μg／ml）、联合用药组2（各50μg／ml）和空白对照组,应用DNA梯度电泳及流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡情况及Fas抗原表达情况;应用RT-PCR方法检测用药24h和48h后胃癌细胞bcl-2、bax基因mRNA表达水平。结果DNA梯度电泳可见联合用药组出现明显的“Ladder”带;流式细胞术显示各用药组annexin v阳性细胞数比对照组明显增多;联合用药组1和联合用药组2细胞Fas抗原表达阳性率分别为10．59％和14．16％,比对照组（5．27％）明显增高并有显著的统计学意义;各联合用药组Bcl-2基因mRNA表达水平比对照组下降而Bax基因mRNA表达升高。结论大蒜油和白藜芦醇联合用药诱导胃癌细胞凋亡可能与其促进胃癌细胞Fas抗原Bax基因表达增加并抑制bcl-2基因的表达有关。     

Wortmannin与ABT-737诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用研究

目的:探讨磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin单用以及与Bcl-2蛋白抑制剂ABT-737联合应用对人卵巢癌细胞系存活率和凋亡率的影响。方法:①CCK-8法分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO-3生长的抑制率,并计算其IC50。②Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率以及对细胞周期的影响,Western blot法检测相关蛋白的表达水平,分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO3凋亡的影响。结果:①Wortmannin和ABT-737单独作用对ES-2细胞株的IC50分别为14.12μM和31.31μM,两药联合应用的IC50为8.15μM;Wortmannin和ABT-737单独作用对SKVO-3细胞的IC50分别为16.72μM和37.56μM,联合用药的IC50为9.25μM。②0.2μM的Wortmannin作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞的凋亡率分别为9.9%和8.7%,5μM的ABT-737作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞凋亡率分别为10.2%和9.1%,两者联合应用对两种细胞的凋亡率分别为45.0%和53.0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。③Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的增加cleaved-caspase-3、细胞色素C以cleaved-PARP的表达量,Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的对人卵巢癌ES-2和SKVO-3细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:Wortmannin和ABT-737能够通过线粒体途径抑制卵巢癌细胞株的生长并诱导其凋亡,且Wortmannin和ABT-737联合应用具有协同作用。     

蜈蚣提取液体外抗肝癌Bel-7404细胞作用机制的研究

目的研究蜈蚣提取液（ECP）对肝癌Bel-7404细胞株的作用机制。方法采用不同浓度ECP作用于体外培养的肝癌细胞Bel-7404，流式细胞仪检测治疗组与对照组的细胞周期及其凋亡率；免疫组化法检测两组细胞内凋亡相关基因X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）及Bax的表达情况。结果ECP在不同浓度下，Bel-7404细胞内G0／G1期所占的比例、细胞增殖指数（PI）和细胞凋亡率是不同的，且差异有统计学意义（P〈0．05）。在相同浓度组下，24h的细胞凋亡率明显低于48h的，差异有统计学意义（P〈0．01）；随ECP浓度加大，XIAP在Bel-7404细胞中表达逐步减少，Bax表达逐步增多。结论ECP作用Bel-7404细胞的G1／G0期，抑制其增殖。通过上调Bax和抑制XIAP的表达，诱导并促进肝癌细胞凋亡，其作用呈剂量和时间依赖效应。