三氧化二砷对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的作用,探讨砷及其化合物治疗黑色素瘤的作用机制,为其治疗黑色素瘤提供新的理论和实验依据.方法:用TRAP-ELISA和TRAP-PAGE银染法检测黑色素瘤B16细胞(简称B16)端粒酶活性.结果:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的抑制有明显的浓度和时间依赖关系.结论:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性表达的抑制作用随药物浓度的增加或作用时间的延长而增强.     

骨肉瘤发生中p53蛋白表达对细胞凋亡的调节

目的研究骨肉瘤发生中p53蛋白表达对细胞调亡的调节。方法利用原位脱氧核糖核酸末端转移酶(In situ terminal deoxynucleotide transferase;ISTdT)标记技术和SP免疫组织化学方法分别检测骨肉瘤和良性骨肿瘤组织中凋亡细胞和p53蛋白的表达。结果骨肉瘤中p53蛋白的阳性率(76.9%,50/65)和阳性表达强度明显高于良性骨肿瘤组织(21.1%,4/19)(分别为P＜0.01和P＜0.05),但4种亚型之间差异无显著性(P＞0.05)。骨肉瘤组织中凋亡细胞密度均明显低于良性骨肿瘤组织(P＜0.01),但各亚型之间两者亦均无明显差异(P＞0.05);骨肉瘤和良性骨肿瘤组织中p53蛋白表达与凋亡细胞密度呈明显的线性负相关(r=-0.8954,P＜0.01),其表达增强则凋亡细胞密度逐渐降低。结论在骨肉瘤发生中p53基因突变可能是一种频发事件。突变型p53基因可能是通过其蛋白过度表达抑制肿瘤细胞凋亡,导致骨肉瘤的发生和发展。     

p16、p21、p53蛋白在肺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测30例肺癌组织中p16、p21、p53蛋白的表达情况。以上标本中有7例呼吸道合胞病毒(RSV)N基因片段扩增阳性。结果 30份肺癌标本中p16、p21、p53蛋白阳性表达率分别为36．7％(11／30)、43．3％(13／30)、53．3％(16／30)；各种蛋白阳性表达例数在鳞癌与腺癌组织间差异无显著性意义；不同临床分期的肺癌标本，其p16、p21阳性表达，差异具有显著性意义；晚期肿瘤组织较早期p53阳性表达增强。p16、p21在肿瘤Ⅲ Ⅳ期较Ⅱ期阳性表达率下降。p16、p21、p53蛋白在RSV N基因片段扩增阳性肺癌标本中的表达与扩增阴性的肺癌标本比较差异无显著性意义。结论 p16、p21可能作为判断肺癌分期及预后的参考指标。RSV感染对肺癌组织细胞癌基因无明显影响。     

乳腺癌p16和p53蛋白的表达及意义

目的：探讨p16蛋白和p53蛋白在乳腺癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化ABC法检测了74例乳腺癌p16蛋白和p53蛋白的表达情况。结果：74例乳腺癌p16蛋白阳性表达率43.2％;在不同组织学分级的乳腺癌中p16蛋白阳性率分别为I级11.1％,II级50％,III级44.8％,其各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。74例乳腺癌p53蛋白的阳性率为44.6％;p53蛋白阳性表达与乳腺癌组织学分级明显相关,其阳性率分别为I 级22.2％,II级30.6％,III级69.0％,III级明显高于I级（P＜0.01）和II级（P＜0.01）。乳腺癌p16蛋白与p53蛋白表达之间无明显相关。结论：p16蛋白的失表达,突变型p53蛋白的过表达均与乳腺癌发生展有关,它们通过不同途径发挥生物学作用,p53蛋白表达对评估乳腺癌的分化程度和判断预后具有一定价值。     

Bcl-2、bax、P53蛋白表达与老年妇女外阴营养不良细胞凋亡的相关性研究

目的 :探讨老年妇女外阴营养不良组织中细胞凋亡及相关基因的表达情况。方法 :采用原位末端标记及免疫组化S -P法检测 78例老年妇女外阴营养不良和 12例老年妇女外阴营养不良恶变石蜡包埋组织中的细胞凋亡及相关基因bcl- 2、bax、p5 3的表达情况。另取石蜡包埋的老年妇女正常外阴皮肤 10例作为对照。结果 :老年妇女正常外阴皮肤、外阴营养不良及外阴营养不良恶变中均存在细胞凋亡及bcl- 2、bax和p5 3的表达 ,细胞凋亡指数 (AI)及bcl- 2和bax的表达在营养不良组明显高于营养不良恶变组 (P >0 .0 1) ,而 p5 3的表达却相反 (P >0 .0 1)。在老年妇女正常外阴皮肤及外阴营养不良中凋亡细胞的分布区域与表达bcl- 2和bax蛋白的细胞分布区域一致 ,bcl- 2与bax表达呈正相关 (P >0 .0 5 ) ;在恶变部位凋亡细胞的分布区域与突变型 p5 3蛋白表达呈负相关 ,p5 3分别与bcl- 2和bax的表达呈负相关 (P >0 .0 5 )。结论 :老年妇女外阴营养不良的发生发展和恶变与细胞凋亡有关 ,bcl- 2、bax和p5 3起一定作用。     

p53、Bcl-2蛋白在人类肺癌组织中表达的研究

目的探讨63例人类肺癌中p53、Bcl-2的表达.方法采用免疫组织化学方法,以抗p53多抗标记p53蛋白,抗Bcl-2单抗标记Bc1-2蛋白.结果所有肺癌组织中,p53突变率54%(34/63),Bcl-2蛋白表达率44.4%(28/63).p53突变率与组织类型、临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关;Bcl-2表达在Ⅰ、Ⅱ期(55.3%)明显高于Ⅲ、Ⅳ期(28%)(P＜0.05),而与组织类型无关;Bcl-2蛋白表达与p53蛋白表达不相关.结论人类肺癌的发生发展与p53、Bcl-2蛋白过度表达有关;Bcl-2蛋白表达可能为肺癌早期事件,可作为评定预后的生物学指标;p53蛋白表达与组织类型、临床分期等参数无关.     

针刺对实验性乳腺增生大鼠乳腺组织p16、p53蛋白表达的影响

目的观察针刺治疗乳腺增生模型大鼠乳腺组织中p16、p53蛋白表达的干预作用,探讨针刺对乳腺增生病的疗效与作用机理。方法将48只健康雌性大白鼠随机分为空白对照组、模型组、针刺治疗甲乙两组共4组,每组12只。除空白对照组外,均采用改良贾氏造模方法建立乳腺增生模型。针刺治疗两组大鼠在造模第31 d开始行穴位针刺治疗。治疗30 d后处死大鼠,采集乳腺组织用免疫组化法测定乳腺组织的p16、p53表达水平。结果模型组细胞结构中p16、p53表达明显;而针刺治疗组乳腺组织中p16、p53明显低于模型组,两者比较有显著性差异。结论针刺对乳腺增生大鼠乳腺组织p16、p53表达有干预作用,说明针刺对乳腺增生病有治疗作用,对乳腺癌发生有预防作用。     

p16 p53蛋白在胃癌和胃癌前病变中表达及临床意义

目的检测p16、p53突变蛋白在胃癌和胃黏膜癌前病变中的表达，探讨抑癌基因与胃癌的关系以及在胃癌早期诊断中的意义。方法采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP)法。结果p16、p53蛋白在胃癌与胃黏膜癌前病变之间的表达差异有显著性。结论p16蛋白缺失和p53蛋白突变与细胞异型性和生物学行为改变有密切关系。     

p16、p53和c-erbB-2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的:探讨p16、c-erbB-2 和 p53蛋白表达与膀胱移行细胞癌(TCC)病理分级、临床分期和转移的关系.方法:应用免疫组化SP法对75例膀胱癌组织中p16、p53及c-erbB-2蛋白表达进行检测.结果:75例膀胱癌中p16、p53及 c-erbB-2 的阳性率分别41.3%(31/75)、44.0%(33/75)和40.0%(30/75),p16和 c-erbB-2 蛋白在膀胱癌中的阳性率与肿瘤病理分级和临床分期有显著意义(P<0.05),p53和 c-erbB-2 阳性率与肿瘤临床分期及转移有密切的关系(P<0.01).77.3%(58/75)肿瘤有上述蛋白的阳性表达,其中53.3%(40/75)的肿瘤同时有多个蛋白的阳性表达.结论:肿瘤的多因素分析比单因素分析更有价值,癌基 c-erbB-2 和抑癌基因p53、p16蛋白的表达异常及协同作用在膀胱癌的发生发展中起重要作用.     

三氧化二砷抑制恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的研究

目的:研究不同浓度的三氧化二砷(As2O3)对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制及诱导B16细胞凋亡的作用,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制,为其治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据. 方法:采用3H-TdR和3H-UdR掺入肿瘤细胞DNA和RNA的方法,观察不同浓度的As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸生物合成的抑制作用; 用流式细胞术(FCM)检测As2O3诱导B16细胞的凋亡及细胞毒作用. 结果:As2O3 对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制和诱导凋亡及细胞毒作用有显著的浓度和时间依赖关系(P<0.01).结论:As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的抑制作用和诱导凋亡及细胞毒作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强.     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞黏附和迁移的影响

目的:了解三氧化二砷(As₂O₃)对黑素瘤B16细胞迁移能力的影响,评价As₂O₃抗肿瘤侵袭和转移能力。方法:用Transwell侵袭转移模型评价As₂O₃抗黑素瘤B16细胞的侵袭和转移作用。MTT法检测B16细胞的黏附能力。流式细胞术检测B16细胞表面黏附分子CD44的表达情况。结果:As₂O₃可显著抑制B16细胞的迁移和黏附能力(P<0.05~P<0.01),降低细胞表面黏附分子CD44的表达(P<0.01)。结论:As₂O₃具有抗黑素瘤B16细胞侵袭和转移作用,降低细胞表面黏附分子CD44的表达可能是其机制之一。     

三氧化二砷纳米粒子对人直肠癌细胞COX-2及p53基因表达影响的研究

目的 研究三氧化二砷(As2O3)纳米粒子对人直肠癌细胞COX-2及P53表达的影响.方法 采用溶胶-凝胶法制备As2O3纳米粒子.选用人直肠癌细胞株HR8348,利用免疫组化方法,检测经As2O3纳米粒子作用后,COX-2及P53的变化.结果 As2O3纳米粒子可下调人直肠癌HR8348细胞COX-2的表达,而P5...     

低剂量三氧化二砷对HepG2细胞p53基因转录水平的下调作用

目的：探讨低剂量三氧化二砷（As2O3）对p53启动子转录活性的调节作用。方法：确定p53启动子区域,聚合酶链反应（PCR）扩增p53p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-p53p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测氯霉素乙酰转移酶（CAT）的表达活性;并以小同浓度三氧化二砷刺激HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果：成功克隆出614bp的新的p53启动子,pCAT3-p53p和不同浓度的三氧化二砷（0．25hcmoL／L）瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCATF3-Basic守载体的11．2倍,表明pCAT3-p53p具有强的启动子活性。选用0．25、0．5、2．5、5．0μmol／L浓度的三氧化二砷刺激pCAT3p53p转染的HepG2细胞,其CAT吸光度值分别为：0．076、0．186、0．149、0．1l9,CAT活性随着三氧化二砷浓度的倍增呈衰减趋势。结论：p53启动子有反式激活下游基因表达的活性,低剂量：三氧化二砷对p53基因转录水平具有下调作用。     

三氧化二砷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响.方法 采用MTF法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法 检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响.结果 MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性.12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P<0.01).同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用.结论 As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一.     

三氧化二砷对615系小鼠皮下移植性胃癌的抗癌作用及机制研究

目的:观察不同剂量三氧化二砷(As 2O3)对于实体型胃癌移植瘤615系小鼠模型的抑瘤及诱导凋亡作用.方法:40只615系小鼠皮下注射鼠前胃癌细胞株MFC建立移植瘤模型,然后随机分为5组,每组各8只.分别在腹腔内注射5-Fu、生理盐水及不同剂量的As2O3(1、2、4 mg·kg-1·d-1),给药8 d,末次给药24 h后计算抑瘤率,流式细胞术观察凋亡率,透射电镜观察凋亡细胞超微结构,免疫组化半定量分析凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达情况.结果:As2O3对移植瘤生长有明显抑制作用,表现为瘤细胞超微结构出现凋亡征象且凋亡率增加,以2 mg·kg-1·d-1组作用最明显;免疫组化显示As2O3作用下Bcl-2基因阳性细胞数降低,Bax阳性细胞数则上升.结论:As2O3主要是通过诱导细胞凋亡对荷胃癌鼠皮下移植瘤具有明显抑制作用.     

三氧化二砷对前列腺癌细胞PC-3凋亡抑制蛋白XIAP表达的影响

[目的]探讨三氧化二砷(As2O3)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖、细胞凋亡及X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响.[方法]取对数生长期PC-3细胞,分别经0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR检测XIAP蛋白表达及XIAP mRNA表达的变化.[结果]0.5,1.0,2.0μmol/LAs2O3均可抑制PC-3细胞增殖,在处理24,48,72h后,细胞生长抑制率间差异具有统计学意义(P<0.01).检测0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3处理48h的PC-3细胞株细胞凋亡率分别为11.47%±1.81%,38.47%±1.60%,58.93%±3.35%,相比较差异具有统计学意义(P<0.01).As2O3处理48h时0.5,1.0,2.0μmol/L As2O3组的XIAP mRNA表达水平分别为0.67±0.12,0.25±0.15,0.03±0.01,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]As2O3可抑制PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,此作用可能与As2O3抑制PC-3细胞XIAP基因的表达有关联.     

三氧化二砷对鼠恶性黑素瘤B16细胞凋亡的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10 μmol/L 、20 μmol/L时, B16细胞的早期凋亡率分别为7.18%、21.1%、3.59%,晚期凋亡率分别为2.63%、5.35%、6.34%,总凋亡率分别为9.81%、26.45%、9.93%.结论: B16细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率对As2O3有浓度依赖关系,高浓度的As2O3使B16细胞出现坏死.