NF-κBp65、Lin28B和IL-6在不同临产状态孕妇外周血中的表达

目的:探讨NF-κBp65、Lin28B和IL-6在早产和足月妊娠孕妇外周血中的表达情况,进一步明确其在分娩发动中的预测价值。方法:采集先兆早产组、早产临产组、足月临产组和正常妊娠组各25例孕妇的外周血血清,采用ELISA法检测并比较4组血清中NF-κBp65、IL-6、Lin28B的表达情况;同时将先兆早产组与早产临产组、临产组(包括早产临产组和足月临产组)与正常妊娠组NF-κBp65、IL-6、Lin28B表达水平行直线相关分析。结果:(1)NF-κBp65的表达水平在早产临产组中最高(13.99±0.72 ng/ml),IL-6的表达水平在早产临产组中最高(54.34±6.66 pg/ml),Lin28B的表达水平在正常妊娠组中最高(10.67±0.52 ng/ml),经LSD-t检验,4组中NF-κBp65、IL-6及Lin28B的表达水平两两间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)先兆早产组和早产临产组中NF-κBp65与IL-6的表达均呈正相关(r=0.557,P0.05;r=0.587,P0.05),NF-κBp65与Lin28B的表达及IL-6与Lin28B的表达均无相关性(P0.05)。(3)临产组中NF-κBp65与IL-6的表达呈高度正相关(r=0.899,P0.05),NF-κBp65与Lin28B的表达呈高度负相关(r=-0.863,P0.05);IL-6表达水平与Lin28B的表达呈高度负相关(r=-0.798,P0.05)。结论:IL-6和NF-κBp65对早产临产具一定预测价值;Lin28B与胎儿成熟程度相关,对早产无预测价值。     

钙结合蛋白Calbindin-d28k在雌(女)性生殖中的作用

钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)是一种维生素D依赖性钙结合蛋白,参与了多种生殖事件。本文综述了CaBP-d28k的结构特点,在雌(女)性生殖系统的表达、作用及其调节。     

非编码RNA在卵泡发育和卵巢疾病中的研究进展

非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA)是目前生物医学领域的研究热点,如长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)和小非编码RNA:微小RNA(mirco RNA,mi RNA)、内源性小干扰RNA(endogenous small interfering RNA,endo-si RNA)、PIWI相互作用RNA(PIWI interacting RNA,pi RNA)等,它们作为细胞内基因调控网络的重要成员影响细胞的各种生命活动。近年来研究表明这些非编码RNA在卵巢也发挥重要作用,参与了颗粒细胞增殖、分化、凋亡以及激素合成的调控,在卵母细胞存活和发育中发挥重要作用,非编码RNA的表达异常与多囊卵巢等疾病密切相关,本文就非编码RNA与卵巢卵泡发育以及卵巢相关疾病的研究作一简述。     

AMH蛋白在性成熟小鼠卵泡发育不同阶段及自然衰老过程卵巢组织中的表达变化

目的:通过检测抗苗勒氏管激素(AMH)蛋白在成年小鼠卵泡发育不同阶段和自然衰老过程卵巢中的表达变化,为卵泡的生长发育调控及卵巢衰老发生发展的机制研究奠定理论基础。方法:选用12,24,36,48周龄自然衰老C57BL/6小鼠为模型。收集12周龄C57BL/6小鼠不同发育阶段的卵巢和24,36,48周龄自然衰老C57BL/6小鼠卵巢。采用免疫组织化学方法和蛋白印迹技术检测各组卵巢中AMH蛋白的表达。结果:免疫组织化学显示,AMH蛋白在始基卵泡、初级卵泡,次级卵泡、窦状卵泡的颗粒细胞中均有表达,但在黄体和闭锁卵泡的颗粒细胞中未见表达。始基卵泡颗粒细胞中AMH蛋白表达明显低于初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡(P<0.05);窦状卵泡颗粒细胞中AMH蛋白表达明显低于初级卵泡和次级卵泡(P<0.05);初级卵泡和次级卵泡的AMH蛋白表达未见明显差异(P>0.05)。不同鼠龄的小鼠同级别卵泡颗粒细胞AMH的染色程度未见明显差异;但是24周龄以后间质中开始出现AMH蛋白表达,并且AMH的表达随鼠龄增加而上升;48周龄小鼠卵巢间质中AMH蛋白表达明显高于24周龄和36周龄(P<0.05);24周龄与36周龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白印迹技术结果显示,AMH蛋白在小鼠卵巢组织中的表达随鼠龄增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AMH蛋白主要表达于卵泡发育早期阶段的颗粒细胞,并且其在间质中随鼠龄增加表达增强,但是在整个卵巢组织中其表达量随鼠龄增加而降低。提示AMH可能在卵泡发育以及卵巢衰老中起重要的调控作用。     

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎着床和发育中的作用

Wnt/β-catenin信号通路作为经典的Wnt信号转导通路参与调控细胞增殖、凋亡和分化等多种生物学过程。在胚胎着床和发育过程中,Wnt/β-catenin信号通路失活或其受体、配体的异常表达均可引起胚胎着床失败、器官分化异常、发育畸形甚至死亡。     

TNF-α在LPS引起小鼠宫内胎儿生长抑制和骨骼发育迟缓中的作用

目的:研究TNF-α在细菌脂多糖(LPS)引起小鼠宫内胎儿死亡(IUFD)、生长抑制(IUGR)和骨骼发育迟缓中的作用。方法:LPS组小鼠在受孕晚期腹腔给予LPS(75μg/kg);LPS+PTX组在LPS处理前30min经腹腔注射给予TNF-α合成抑制剂己酮可可碱(PTX,100mg/kg);对照组给予生理盐水和/或PTX,部分孕鼠给药1d当天处死,部分孕鼠边续给药3d,于孕d18处死,测母肝、胎肝和胎盘的TNF-α等并统计活胎、死胎和吸收胎数,称量活胎体重,测量胎鼠身长和尾长,评价胎鼠骨骼发育情况。结果:①小鼠受孕d15-17给予LPS后,平均每窝死胎数为8.17±1.95,显著高于对照组的0.05±1.09,PTX预处理预防LPS引起的IUFD;LPS处理显著导致胎儿IUGR和骨骼发育迟缓,PTX预处理明显减轻LPS对胎儿的作用。②LPS明显诱导母肝和胎盘组织TNF-αmRNA表达,增加母鼠血清和羊水TNF-α浓度;PTX预处理显著抑制TNF-α产生。结论:孕期给予LPS引起小鼠宫内胎儿死亡、生长抑制和骨骼发育迟缓,TNF-α至少部分参与了LPS引起的宫内胎儿死亡、生长抑制和骨骼发育迟缓。     

微小RNA-21表达在卵巢癌细胞生长和凋亡过程中的作用

目的;探讨微小RNA-21( miR-21)在卵巢癌细胞生长、凋亡中的作用及调节机制。方法构建表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒,采用酶切鉴定和测序法证实。实验分为3组,即转染组：卵巢癌细胞株OVCAR3细胞转染重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒;阴性对照组：OVCAR3细胞转染阴性对照pSIREN-miR-21-Neg质粒;空白对照组：OVCAR3细胞不转染质粒。采用茎环实时荧光定量逆转录(RT)-PCR技术检测3组细胞中miR-21的表达,蛋白印迹法检测3组细胞中程序性细胞死亡因子4( PDCD4)蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测3组细胞的增殖及凋亡情况。结果成功构建了表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-niR-21质粒,并经酶切鉴定和测序法证实。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中niR-21的表达水平分别为0.26±0.08、1.26±0.21和1.00,转染组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中PDCD4蛋白的灰度值分别为1443 ±33、858±19和846±16,转染组明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAP3细胞增殖的A值分别为0.661±0.015、0.848±0.150、0.935±0.133,转染组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染48 h后,转染组细胞的早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为(25.821±0.763)％、(0.010 ±0.003)％、(0.238±0.023)％;P ＜0.01];转染72 h后,转染组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于阴性对照组和空白对照组[早期凋亡率分别为( 30.480±0.821)％、(7.792±0.312)％、(7.033±0.257)％,P＜0.01;晚期凋亡率分别为(3.558±0.211)％、(1.557±0.067)％、(1.049±0.028)％,P＜0.05]。结论miR-21参与调节卵巢癌细胞的生长和凋亡过程,可能通过调控PDCD4蛋白的表达而发挥作用。     

Y-box结合蛋白1通过沉默信息调节因子1mRNA稳定性调节抑制人颗粒细胞凋亡在早发性卵巢功能不全中的作用与机制

目的:探讨 Y-box 结合蛋白 1(YBX1)调节沉默信息调节因子 1(SIRT1)对颗粒细胞增殖和 凋亡的影响,研究 YBX1 和 SIRT1 在早发性卵巢功能不全(POI)患者及卵巢功能正常患者间表达水 平差异及临床意义。 方法:留取 2022 年 6 月至 2023 年 7 月于江苏大学第四附属医院生殖医学中心 进行体外受精(IVF) / 卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕的 POI 患者(POI 组)及卵巢储备功能正常患 者(对照组)的颗粒细胞和血清,利用免疫印迹(WB)检测 YBX1 蛋白表达水平;利用实时荧光定量 核酸扩增法( RT-qPCR) 检测 YBX1 及 SIRT1 mRNA 表达水平,并分析血清中其与卵泡刺激素 (FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2 )、抗苗勒管激素(AMH)、窦卵泡数(AFC)的相关性;利用 5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)、细胞计数试剂 8(CCK8)检测细胞增殖、原位末端标记法(TUNEL)检测细 胞凋亡;RT-qPCR 检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)、B 细胞淋巴瘤因子-2(Bcl2)、Bcl2 相关 X 蛋 白(BAX)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA 表达情况;RNA 免疫沉淀(RIP)实验检测 YBX1 与 SIRT1 的相互作用。 结果:与对照组患者相比,POI 组患者颗粒细胞和血清中 YBX1 蛋白及 SIRT1 mRNA 的表达降低(P < 0. 05);血清中 YBX1、SIRT1 mRNA 表达与 FSH、LH 负相关(r < 0,P < 0. 05),与 E2 、 AMH、AFC 正相关(r > 0,P < 0. 05);在颗粒细胞中上调 YBX1 后 SIRT1 蛋白表达量、SIRT1 mRNA 的 稳定性、EdU 阳性率、细胞活性、PCNA mRNA 表达量、Bcl2 / BAX 比值均增加(P < 0. 05),Caspase-3 mRNA 表达量、TUNEL 阳性率均降低(P < 0. 05)。 结论:YBX1 和 SIRT1 在 POI 患者中表达水平显 著下调,且其表达水平与临床卵巢功能指标相关;YBX1 结合 SIRT1 mRNA 增强其稳定性,可能促进 颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡,提示 YBX1 和 SIRT1 有望成为 POI 诊疗的新靶点。     

正常妊娠滋养层组织中Lin28B表达变化的研究

目的:探讨Lin28B在正常妊娠不同阶段滋养层细胞中的表达变化及其临床意义。方法:收集40例正常早期妊娠者(孕早期组),包括20例妊娠5~7+6周(孕早A组)和20例妊娠8~12+2周(孕早B组),15例孕17~27周(孕中期组),以及20例孕37~41周(孕晚期组),共75例正常孕妇的绒毛和胎盘组织。采用RT-q PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测胎盘组织Lin28B基因和蛋白的表达差异及细胞定位。结果:1在正常妊娠不同时期的滋养层组织中细胞滋养细胞和合体滋养细胞中均可检测到Lin28B蛋白的表达。2 Lin28B m RNA表达量各组间有统计学差异(P0.05),早孕A组最高,随着孕周进展逐渐下降,至孕晚期达最低水平。3正常妊娠不同时期的滋养层组织中Lin28B蛋白表达呈现为随着孕周的增加而逐渐下降趋势。结论:Lin28B在正常妊娠进展过程中表达下调,提示其可能参与了滋养细胞的增殖和浸润及胎盘的发育。     

醋酸棉酚对小鼠生殖细胞染色体的影响

本文报道了成熟的ICR 雄性小鼠,每日灌服醋酸棉酚0、1、2.5、5、7.5、10、20、30、40、50毫克/公斤,连续19天后,进行生殖细胞的染色体畸变和SCE 频率的观察。精原细胞的SCE 率检测结果表明,除了20—50毫克/公斤体重/日(临床剂量的50—125倍)高剂量组与对照组比较有显著差异(P<0.005)外,其他用药组与对照组之间不存在明显的差异(P>0.05)。精原细胞和精母细胞染色体异常率的检测表明,各用药组和对照组之间均无明显差异(P>0.05)。结果提示:常用的小剂量棉酚似不具有明显的生殖细胞遗传物质损伤效应。由此推断,停药恢复生殖能力后,对子代可能也不会有明显的影响,但是不可忽视高剂量棉酚引起精原细胞SCE 率的增加。     

42例卵巢恶性生殖细胞肿瘤临床特征及预后分析

目的:探讨卵巢恶性生殖细胞肿瘤的临床特征与预后的关系。方法:收集我院2006年8月至2012年2月收治的42例卵巢恶性生殖细胞肿瘤的临床资料,分析其肿瘤类型、分期、治疗方案等预后相关因素,研究其临床特征与不良预后的关系。结果:42例卵巢恶性生殖细胞肿瘤包括混合性生殖细胞肿瘤16例(38.1%)、未成熟畸胎瘤12例(28.6%)、无性细胞瘤6例(14.3%),卵黄囊瘤4例(9.5%)、绒毛膜癌1例(2.4%)及胚胎癌1例(2.4%)等。42例患者全部进行手术治疗,其中30例在初次手术中保留了生育功能,34例在术后给予BEP方案(博来霉素+依托泊苷+顺铂)或BVP方案(博来霉素+长春新碱+顺铂)化疗。2年生存率97.5%(39/40),死亡1例(Ⅳ期混合性生殖细胞肿瘤),复发率37.5%(15/40),混合性生殖细胞肿瘤复发占66.7%(10/15);5年生存率88.2%(15/17),死亡2例(均为恶性混合性生殖细胞肿瘤)。不同病理分期、肿瘤直径、肿瘤类型和手术方式的5年生存率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:保留生育功能手术及规范化的BEP或BVP方案化疗,5年总体生存率较高,但混合性生殖细胞肿瘤预后相对较差。卵巢恶性生殖细胞肿瘤的病理分期、肿瘤直径及肿瘤类型与生存率的关系还需进一步研究。     

卵巢恶性生殖细胞肿瘤预后因素分析

目的:分析影响卵巢恶性生殖细胞肿瘤(MOGCT)预后的相关因素.方法:回顾性分析天津医科大学总医院和天津市人民医院1987年1月至2004年12月的65例MOGCT的临床和随访资料,探讨影响MOGCT预后的相关因素.结果:MOGCT总的2年和5年生存率分别为53.64%和51.85%,差异无统计学意义(P0.05).MOGCT的预后因素包括:肿瘤病理类型、FI.GO分期、腹水量和术后残存瘤灶直径.无性细胞瘤和未成熟畸胎瘤是预后较好的病理类型(P0.05),早期预后好于进展期(P0.01),腹水量100 ml(P0.05)和残存瘤灶直径≤2 cm(P0.01)具有较好预后.结论:应重视MOGCT初次治疗时的临床分期、病理类型和腹水量,施行彻底的减瘤术和规范的辅助化学治疗可改善预后,提高患者的生存率和生活质量.     

Laparoscopic Treatment of Mixed Malignant Ovarian Germ Cell Tumor in a 16-Year-Old Female Adolescent

BackgroundMalignant ovarian germ cell tumors are rare entities, although they account for a large proportion of ovarian masses in young women. These tumors have traditionally been removed via laparotomy, because of their large size and solid nature. The use of laparoscopy for treatment of adnexal masses in adolescents has been heavily debated and poorly studied to date.CaseA 16-year-old female patient presented with abdominal pain and an 11-cm adnexal mass on ultrasound. An emergent laparoscopic salpingo-oophorectomy was performed without complication. Pathology revealed a mixed malignant ovarian germ cell tumor.Summary and ConclusionLaparoscopic fertility-sparing surgery offers many benefits over laparotomy, and should be considered in cases of young women with large adnexal masses, even if potential for malignancy exists.     

人卵丘细胞与卵母细胞发育及成熟的关系

卵丘细胞与卵母细胞共处于同一个卵泡液微环境中,卵丘细胞与卵母细胞之间复杂的"对话机制"调控着卵母细胞的成熟和卵丘细胞的增殖延伸。在窦卵泡阶段,卵丘细胞由颗粒细胞分化而来,通过缝隙连接与卵母细胞共同形成一个结构和功能上的合胞体。卵泡发育不同时期,卵丘细胞对卵母细胞的代谢调控主要表现为:在窦卵泡期,卵丘细胞为卵母细胞发育提供必需的营养,而卵母细胞分泌的信号因子亦调控着卵丘细胞的增殖和延伸;在排卵前卵泡中,卵丘细胞主要通过调控卵母细胞中cAMP水平,促使卵母细胞恢复减数分裂;在排卵后卵泡中,卵丘细胞亦影响着精-卵结合及胚胎发育的过程。另外,伴随卵泡内微环境的变化,卵丘细胞与卵母细胞间发生着复杂的信号传递,从而对卵母细胞的发育实现分子水平的调控,其中部分基因可能作为卵母细胞发育成熟、胚胎发育及妊娠结局的分子标志物。     

Disorder of Sex Development: A Case of Late-Diagnosed Ovotestis and Its Postsurgical Follow-up

BackgroundTrue hermaphroditism is characterized by the presence of both testicular and ovarian tissue. This case report aimed to describe a case of ovotestis in adolescents.CaseA 17-year-old patient presented with undifferentiated genitalia. Thelarche occurred at age 14, menarche occurred at age 15, and menstruation was regular. Physical examination showed female phenotype, Tanner IV breasts, gynecoid hair, enlarged clitoris, and labia majora symphysis with a single orifice. The patient presented high levels of total testosterone. The left gonad contained typical ovarian tissue and the right gonad contained both seminiferous tubules and ovarian tissue (ovotestis). Vaginoscopy revealed a single orifice (urethra and vagina). Right gonadectomy confirmed the presence of ovotestis.Summary and ConclusionKnowledge of true hermaphroditism is important for early diagnosis and proper management.     

骨髓间充质干细胞条件培养液促进小鼠卵母细胞体外成熟的研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响。方法:分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM)。收集小鼠生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞,根据有无完整颗粒细胞层包裹颗粒细胞-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC)分为2类,分别在4种培养基(CM、DMEM、α-MEM、HTF)中培养不同时间,观察卵母细胞核成熟情况,荧光标记后激光共聚焦检测皮质颗粒(cortical granules,CG)分布和含量变化;体外受精后观察受精率和囊胚形成率。结果:2类COC卵母细胞的成熟率CM组明显高于DMEM组、α-MEM组、HTF组(P<0.01);体外受精率和囊胚形成率CM组明显高于DMEM组、HTF组(P<0.01),与α-MEM组和体内成熟组间差异无统计学意义(P>0.05);CM组卵母细胞内CG分布和含量变化与核成熟同步。结论:CM能使小鼠卵母细胞核、质同步成熟,提高了成熟率和卵母细胞质量。     

多囊卵巢患者行未成熟卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育观察

目的:探索在不用或小剂量使用促性腺激素条件下对多囊卵巢患者的未成熟卵母细胞体外培养至成熟、受精、卵裂和妊娠的可行性。方法:阴道B超引导下穿刺取卵后将卵子分别培养于3种不同培养基:基本培养基(f-HTF+75 mIU/mL rFSH+500 mIU/mL rhCG)+10%SPS(SPS组), 基本培养基+20% hFF(FF组)和基本培养基+20% hFF+2 ng/mL rEGF(FF+EGF组),共培养25-48 h,然后行体外受精和胚胎培养。结果:体外培养卵丘-卵母细胞复合体102个,成熟率65.69%,受精率83.58%,2PN率71.43%,卵裂率51.72%,优质胚胎率40.00%。FF组较SPS组有更高的成熟、受精、卵裂和优质胚胎率,再添加EGF后卵子的成熟、受精和优质胚胎率增加。刺激组和未刺激组在卵子成熟、受精、卵裂和优质胚胎率方面均无显著差异。PCO患者卵子的成熟、受精、卵裂和优质胚胎率均高于PCOS患者,ICSI组优质胚胎率增加,但均无统计学差异。随培养时间延长,卵子的成熟、受精、卵裂和优质胚胎率均升高,其中正常受精率和卵裂率有显著差异(P<0.05)。结论:PCO和PCOS患者行IVM可行,二者无明显差异。培养液中添加激素、FF、EGF以及延长培养时间至48 h,可促进卵子成熟。但有关临床用药、培养条件仍有待改善,进一步提高卵子和胚胎质量以获得妊娠。     

Gonadoblastoma-Associated Mixed Gonadal Germ Cell Tumor with Dysgerminoma and Hepatoid Yolk Sac Tumor Components in 46XY Gonadal Dysgenesis

BackgroundDisorders of sex development are congenital conditions with atypical chromosomal, gonadal, or anatomical sex development. Gonadal dysgenesis in patients containing a Y chromosome have a high risk of developing germ cell tumors with potential for malignant transformation.CaseWe present the case of a 17-year-old phenotypic female with primary amenorrhea and 46,XY complete gonadal dysgenesis. Pelvic ultrasound showed a solid cystic lesion in the right gonad. Pathology showed a gonadoblastoma-associated mixed gonadal germ cell tumor with dysgerminoma and hepatoid yolk sac tumor.Summary and ConclusionTo our knowledge, this mixed neoplasm association has not been previously reported and this case illustrates the challenges for the diagnosis of gonadal dysgenesis-associated tumors, emphasizing its recognition and prognostic implications.