控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

补肾调经方、逍遥丸对小鼠卵母细胞GDF-9表达的比较研究

目的:观察补肾法、疏肝法对小鼠卵母细胞生长分化因子-9(growth differerntiation factor-9,GDF-9)蛋白及mRMA表达的影响。方法:将300只小鼠随机分为6组:补肾高、低剂量组;疏肝高、低剂量组;控制性超促排卵(COH)组和空白对照组,每组50只,应用Western blotting和Real-time PCR方法分别测定卵母细胞中GDF-9蛋白和mRNA的表达,并对比各组小鼠卵母细胞数量及优质卵泡率。结果:各治疗组卵母细胞中GDF-9蛋白及mRNA表达显著高于空白对照组及COH组,其中高剂量组优于低剂量组(P0.05),COH组的GDF-9蛋白及mRNA表达较空白对照组降低(P0.05);各治疗组及COH组卵母细胞数量高于空白对照组(P0.05),治疗组中高剂量组卵母细胞数量高于低剂量组(P0.05);各治疗组及空白对照组优质卵泡率优于COH组(P0.05),治疗组中高剂量组的优质卵泡率优于空白对照组(P0.05)。结论:补肾调经方、逍遥丸在促性腺激素应用的基础上能增加卵母细胞数量及优质卵泡率,其机制可能与调控卵母细胞中GDF-9的蛋白及mRNA表达有关。     

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15对多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡的影响

目的探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达对卵丘细胞凋亡的影响。方法收集本院行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS组(n=30)和对照组(n=60)患者的卵丘细胞。TUNEL法及流式细胞术检测卵丘细胞凋亡;免疫组织化学方法检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15蛋白表达,运用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对染色强度定量分析;Real-time PCR技术检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL)-2、BCL-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达。结果 PCOS组穿刺卵泡数、获卵数高于对照组(P0.01);PCOS组卵丘细胞凋亡率高于对照组(P0.05);GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组卵丘细胞胞质中均呈阳性表达;PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15、BCL-2、BAX mRNA的表达低于对照组(P0.05),BAX/BCL-2比值高于对照组(P0.05)。Pearson相关分析结果显示PCOS患者GDF-9、BMP-15与BCL-2 mRNA表达呈正相关,与BAX mRNA的表达呈负相关。结论 PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15异常表达可能是卵丘细胞凋亡增加的原因之一。     

经后增殖方和促黄体方能诱导超促排卵小鼠子宫内膜中整合素β_3的表达

目的:观察益气血补肝肾方对控制性超促排卵小鼠子宫内膜组织中整合素β3表达的影响。方法:将实验小鼠随机分为COH模型组、中药治疗组和对照组。进入实验后,中药治疗组每日给予中药灌胃,其余小鼠以等量生理盐水代替。COH模型组和中药治疗组给予GnRHa降调节,PMSG+hCG促排。每组分别于孕第1日(pd1)、pd2、pd4、pd5、pd6处死10只动物,取子宫内膜采用实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹的方法分别在mRNA和蛋白水平定量检测子宫内膜整合素β3表达情况。于妊娠第8日(pd 8)剖腹取各组小鼠子宫(每组10只),观察胚泡着床情况。结果:整合素β3在各组小鼠子宫内膜中呈周期性的表达,从孕第1日(pd 1)开始整合素β3表达逐渐增强,pd 4显著增加,pd 6表达开始减弱。与COH模型组相比,中药治疗组小鼠子宫内膜中整合素β3表达增强,两者相比有统计学意义(P<0.05);整合素β3在中药治疗组和对照组中的表达水平相近,两者相比无统计学意义(P>0.05)。COH模型组pd 8的平均胚胎着床数与中药治疗组和对照组相比,明显减少(P<0.05),而中药治疗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论:益气血补肝肾方可诱导小鼠子宫内膜中整合素β3的表达,并提高超促排卵小鼠的胚胎着床率,提示该方可能具有改善子宫内膜容受性的作用。     

GnRH-a控制性超促排卵(COH)对小鼠着床期Hoxa-10基因表达的影响

目的:研究GnRH-a长方案控制性超促排卵(COH)对小鼠妊娠率、胚胎着床率及着床期HOXA-10基因表达的影响,探讨COH影响胚胎着床的机制。方法:实验动物随机分为实验组(GnRH-a+hMG+hCG)和对照组(生理盐水),雌、雄合笼后观察小鼠阴栓率,于着床期取小鼠子宫,观察妊娠率及胚胎着床数,计算着床率;应用RT-PCR、Real-time PCR方法及免疫组织化学法分别检测小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10 mRNA及蛋白的表达。结果:实验组小鼠阴栓率及妊娠率均明显低于对照组(P<0.01),实验组胚胎着床数高于对照组(P<0.01),但胚胎着床率较对照组显著降低(P<0.05),着床期小鼠子宫内膜Hoxa-10mRNA及蛋白表达下降,与对照组比较均有明显差异(P<0.05)。结论:GnRH-a长方案COH可引起小鼠着床期子宫内膜Hoxa-10表达下降,导致子宫内膜容受性降低,从而影响小鼠妊娠及胚胎着床。     

GnRHa长方案超促排卵对围着床期小鼠子宫内膜溶血磷脂酸受体3(LPAR3)蛋白的表达及胞饮突发育的影响

目的:研究GnRHa/hMG/hCG控制性超促排卵对围着床期小鼠子宫内膜溶血磷脂酸受体3(LPAR3)蛋白的表达及胞饮突发育的影响。方法:雌性未孕昆明系小鼠72只,随机分为控制性超促排卵组(COH)和自然受孕组(NC),再按交配成功后天数每组分成4个亚组,接受相应的建模处理。用Western blotting检测性交后3~6 d(孕3~6 d)小鼠子宫内膜LPAR3蛋白的表达;同时用扫描电子显微镜观察子宫内膜胞饮突的发育。结果:COH组性交后3 d亚组LPAR3蛋白表达最强,NC组4 d亚组表达最强,但两者表达量无显著差异。COH组3~5 d亚组胞饮突发育不同步,大小不一,胞饮突数量较NC组相应时间明显减少,呈局灶性分布。NC组3 d亚组多为发育中的胞饮突,4 d亚组几乎均为完全发育的胞饮突,5 d亚组多为退化的胞饮突。结论:GnRHa控制性超促排卵可能通过改变小鼠子宫内膜LPAR3蛋白和超微结构的时序变化来影响子宫内膜容受性,从而影响胚泡着床。     

卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在高胰岛素血症大鼠卵巢中的表达与意义

目的:探讨卵泡生长分化因子-9(GDF-9)在卵泡发育异常及激素水平变化等方面的作用机制。方法:①利用改良Poretsky方法建立高胰岛素血症动物模型(模型组,n=20):hCG×9d+胰岛素×22d。采用下列方法验证模型:测定空腹血糖、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)、E2、LH、FSH,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);测定大鼠体重及卵巢重量;HE染色方法观察卵巢病理变化。②采用免疫组化和RT-PCR法检测模型动物及正常对照组(n=20)卵巢组织GDF-9 mRNA及蛋白的表达。结果:①与对照组比较,模型组FPG、FINS、HOMA1-IR、T升高(P<0.05)。②组间体重无统计学差异,但模型组卵巢重量显著大于对照组(P<0.05)。模型组各发育阶段卵泡明显减少,但囊性扩张的卵泡和闭锁卵泡增多,卵泡膜细胞增生,卵泡间质明显增厚。③模型组卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组(P<0.05)。结论:高胰岛素血症减弱卵巢组织GDF-9 mRNA和蛋白的表达强度;表达降低的GDF-9可能与PCOS卵泡发育异常及激素水平变化有关。     

控制性超促排卵对黄体期子宫内膜胶原纤维表达的影响

目的:探讨IVF-ET妇女控制性超促排卵(COH)时着床窗期子宫内膜胶原纤维(collagen fibril,CF)对子宫内膜容受性(ER)的影响。方法:共对25个刺激周期(SC)和20个自然周期(NC)妇女分别在取卵后或排卵后的第7±1日行外周血雌、孕激素水平检测和子宫内膜活检术,常规HE染色确定组织学分期,采用透射电子显微镜观察CF增生情况和改良Masson染色进行CF定量分析。结果:SC组外周血雌、孕激素水平均显著高于NC组(P<0.05)。SC组分泌期较NC组提前1～2 d,内膜腺体扩张和间质水肿明显。SC组分泌早、中和晚期内膜间质中的CF较NC组显著升高(P<0.01,P<0.05和P<0.05),且SC组分泌早期SC明显高于分泌中期(P<0.05)。结论:COH过程中过高的雌、孕激素水平可使子宫内膜分泌期提前并刺激内膜CF的过度增生,这可能是导致COH周期ER下降和着床失败的原因。     

Involvement of GDF-9, leptin,and IGF1 receptors associated with adipose tissue transplantation on fertility restoration in obese anovulatory mice

The aim was to analyze the effect of adipose tissue transplantation on growth differentiation factor-9 (GDF-9), insulin growth factor 1 receptor (IGF1R), and leptin receptor (LEPR) protein expression in ovaries of obese anovulatory mice. Leptin-deficient female (ob/ob) and wild-type mice were divided into untreated ob/ob mice and gonadal white adipose tissue transplanted ob/ob mice, with evaluation after 7, 15, and 45 days and compared to control wild-type mice. The corporal weight and glycemia levels increased in the obese group concomitant with polymicrocyst formation and abundant estrone, mimicking anovulatory disease. In the treated group after 45 days, glycemia, weight, ovarian size, and number of follicles were decreased and corpora lutea were decreased. The analysis of GDF-9 revealed that, whereas control ovaries presented follicular localization, the obese ovary lacked this protein. On the other hand, obese ovaries showed elevated expression of IGF1R that was normalized after the transplantation. Finally, LEPR was reduced in obese ovaries, and adipose tissue transplantation was efficient in returning it to normal levels. In conclusion, the adipose tissue transplantation, especially after 45 days, seems to stimulate ovulation, supported by the fact that several proteins involved in ovulation returned to basal levels.     

促性腺激素对小鼠卵泡生长分化因子9表达的影响

目的 探讨促性腺激素对小鼠卵泡生长分化因子9（GDF-9）及生长分化因子9B（GDF-9B）表达的影响.方法 以性成熟小鼠体外培养卵泡和性成熟雌性BALB/c小鼠作为研究模型,（1）体内实验：20只小鼠随机分为两组,A组10只,注射孕马血清促性腺激素（PMSG）,每只10 IU,B组10只,注射同等体积的生理盐水,24 h后取卵巢组织,免疫组化检测GDF-9的表达,原位杂交技术检测GDF-9B的表达,比较两组间GDF-9、GDF-9B的表达差异.（2）体外实验：小鼠卵巢组织经胶原酶消化后收取卵泡58个,随机分为两组进行体外培养,C组32个卵泡,培养液中加入卵泡刺激素（FSH）100 IU/L,D组26个卵泡,培养液中不加FSH.C、D组卵泡培养72 h后收集卵母细胞,行免疫组化检测,根据细胞着色强度（＋～＋＋＋＋）判定GDF-9表达情况.结果 （1）免疫组化：共计数370个卵泡,其中A组186个,染色强度为＋～＋＋＋＋的卵泡数分别为41（22.0%）、86（46.2%）、42（22.6%）、17（9.1%）个,B组184个,染色强度为＋～＋＋＋＋的卵泡数分别为78（42.4%）、79（42.9%）、26（14.1%）、1（0.5%）个,A组较B组卵巢组织GDF-9表达增强,差异有统计学意义（P＜0.01）.卵泡培养后共收集卵母细胞58 个,C 组32个,染色强度为＋～＋＋＋的卵泡数分别为9（28.1%）、17（53.1%）、6（18.8%）个;D组26个,染色强度为＋～＋＋＋卵泡数分别为16（61.5%）、8（30.8%）、2（7.7%）个,C组较D组GDF-9的表达增强,差异也有统计学意义（P＜0.05）.（2）原位杂交：共计数卵泡362个,其中A组184个,染色强度为＋～＋＋＋＋的卵泡数分别为58（31.5%）、85（46.2%）、39（21.2%）、2（1.1%）个,B组178个,染色强度为＋～＋＋＋＋的卵泡数分别为71（39.9%）、74（41.6%）、28（15.7%）、5（2.8%）个,A组与B组卵巢组织中GDF-9B的表达强度比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 促性腺激素在体内可增加卵巢组织GDF-9的表达,FSH在体外可增加卵泡GDF-9的表达,促性腺激素不影响GDF-9B的表达.     

GnRHa超排卵对小鼠着床期子宫内膜厚度及整合素α_v、β_1表达的影响

目的:观察GnRHa长周期辅助超排卵对小鼠子宫内膜组织厚度及整合素αV、β1 表达的影响,探讨提高IVF ET妊娠率的方法。方法:随机将36只小鼠分成3组。对照组为生理盐水(NS)组,单纯促排卵组为HMG+HCG组,GnRHa+促排卵组为Gn RHa+HMG+HCG组。促排卵和排卵后24h、48h,利用多功能图像分析仪检测子宫内膜厚度,用免疫组化技术检测子宫内膜整合素αV、β1 的表达。结果: 3组的子宫内膜厚度差异无显著性(P>0. 05)。整合素αV、β1 表达对照组呈强阳性,单纯促排卵组稍弱于对照组,两组差异无显著性(P>0 .05);GnRHa+促排卵组弱于前两组,与前两组分别比较差异有显著性(P<0. 05)。结论:控制性超排卵药物可以影响着床期子宫内膜整合素αV、β的表达,从而影响子宫内膜容受性,导致临床妊娠率偏低。     

卵巢过度刺激综合征中囊性纤维化跨膜转导调节器的表达

目的:探讨囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在卵巢过度刺激综合征(OHSS)发病中的变化及意义。方法:22日龄未成年Wistar雌鼠随机分为过度刺激组(实验组,n=16)和常规刺激组(对照组,n=16),PMSG10IU1d,连续腹腔注射4d,d5注射hCG30IU;对照组PMSG仅注射2d,hCG减量为10IU。测血E2水平,尾静脉注入美兰液,30min后取腹腔灌洗液和卵巢,用分光光度计测定腹腔灌洗液和卵巢组织中美兰含量,以判断腹膜和卵巢血管通透性;采用免疫组织化学法和免疫印记法检测卵巢CFTR蛋白表达量。结果:实验组大鼠卵巢重量、血E2水平、腹腔液和卵巢中美兰含量显著高于对照组;免疫组化法检测到CFTR表达于卵巢黄体细胞以及未排卵泡的黄素化颗粒细胞和卵泡膜细胞胞浆,免疫组化和免疫印记定量分析均显示实验组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于对照组。结论:血清E2水平异常升高,使体内CFTR表达量显著增加从而参与OHSS的一些病理生理变化。