JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路对结肠癌细胞增殖迁移的影响

目的探讨JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路在结肠癌细胞增殖迁移中的作用。方法应用JAK2抑制剂AG490处理人结肠癌Lovo细胞株。采用MTT法进行细胞增殖实验：采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用免疫荧光染色和Western blot检测Lovo细胞中波形蛋白和磷酸化STAT3（P—STAT3）的表达水平。结果AG490处理后,Lovo细胞增殖明显受到抑制．且呈剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。细胞划痕后24h,AG490处理组（实验组）的细胞划痕宽度恢复20％,而对照组划痕宽度恢复60％（P〈0．05）。实验组Lovo细胞中P—STAT3和波形蛋白蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路参与调控人结肠癌细胞的增殖和迁移。     

可溶性血管内皮生长因子受体1基因转染结肠癌Lovo细胞的实验研究

目的研究人可溶性血管内皮生长因子受体1（sFlt-1）基因转染结肠癌Lovo细胞后对其细胞生长及培养上清液VEGF含量的影响。方法使用脂质体介导方法把含sFlt-1基因的重组质粒pcDNA3-sFlt-1转染Lovo细胞,通过RT-PCR及ELISA法鉴定sFlt-1的表达,MTT比色法及ELISA法检测该蛋白对Lovo细胞生长及VEGF含量的影响。结果pcDNA3-sFlt-1成功转染Lovo细胞．ELISA法检测到转染后培养上清液中sFlt-1蛋白的表达．MTT实验显示此培养上清液可抑制Lovo细胞的生长．转染后2、14、21和28d细胞培养上清的抑瘤率分别为（23．92±9．16）％、（13．98±10．21）％、（22．54±11．92）％和（33．43±9．34）％,与未转染组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;ELISA证实细胞培养上清中VEGF的含量降低,与未转染组比较,差异亦均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论将sFlt-1基因转染至结肠癌Lovo细胞后,可获得具有生物活性的sFlt-1蛋白．抑制癌细胞生长。     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

人重组白介素6对人结肠癌HT-29细胞黏蛋白表达的调控

目的研究人重组白介素6（rIL-6）对人结肠癌HT-29细胞中黏蛋白表达的调控,以期对结肠癌的发生发展进一步了解。方法采用流式细胞技术和RT-PCR分别检测1、2、5、10和20μg/L的rIL-6作用于HT-29细胞后黏蛋白1和黏蛋白2表达变化,采用Transwell细胞侵袭实验研究rIL-6对HT．29细胞侵袭力的影响。结果2μg／L以上的rIL-6能够促进结肠癌HT-29细胞中黏蛋白1的表达,分别为（12．5±1．6）％、（26．6±2．7）％、（33．9±2．8）％和（58．9±2．5）％,均高于阴性对照组（8．0±0．8）％（P〈0．01）。反之,2μg／L以上的rIL-6可抑制黏蛋白2的表达,分别为（30．5±2．6）％、（17．0±2．7）％、（11．0±2．0）％和（5．3±1．8）％,均低于阴性对照组（41．6±3．6）％（P〈0．01）。随着rIL-6浓度的增加,HT-29细胞的透膜细胞数增加（P〈0．01）。结论rIL-6能促进结肠癌HT-29细胞中黏蛋白1的表达．抑制黏蛋白2的表达,对结肠癌细胞的浸润有促进作用。     

结肠癌多药耐药性相关基因筛选与鉴定

目的筛选结肠癌多药耐药相关基因,探讨结肠癌多药耐药的机制。方法通过逐步递增氟尿嘧啶（5-FU）浓度孵育结肠癌Lovo细胞,建立耐药细胞株Lovo／5-FU。M1Tr法检测Lovo／5-FU细胞对5-FU和顺铂（CDDP）的敏感性。采用二维电泳-质谱联用技（2DE—MS）术比较Lovo和Lovo／5-FU两株细胞间差异表达蛋白,并采用Western blot法鉴定筛选蛋白。结果与Lovo相比,Lovo／5-FU细胞对5-Fu和CDDP的IC。值分别升高31倍和3倍（均P〈0.01）。通过2DE—MS筛选得到。在耐药株中CAP—G和RhoGD12表达上调,6-PGL、DCI、Prdx-6和Maspin表达下调。Western blot检测显示．Lovo／5-FU细胞中RhoGD12和CAP-G较Lovo增高6．14倍和2．98倍（均P〈0．01）．而Maspin则明显下降至Lovo中的5．2％（P〈0．01）。结论结肠癌耐药性的产生是多基因、多通路改变的结果。CAP—G、RhoGD12、Masoin是潜在的结肠癌多药耐药相关基因。     

BH3-only在奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的研究BH3-only基因表达在奥沙利铂诱导人结肠癌细胞株凋亡中的作用及其机制。方法采用不同浓度（0．3、0．6、1．25、2,5、5、10和20mg／L）奥沙利铂处理人结肠癌细胞株SW480及HT29,应用MTT检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测凋亡情况;荧光定量PCR检测BH3-only基Bim和PUMA表达。结果不同浓度奥沙利铂分别作用于结肠癌细胞SW480后,出现不同程度的细胞生长抑制作用,呈剂量依赖性。5mg／L和10mg／L浓度的奥沙利铂作用于SW480细胞24h后,细胞凋亡率分别为（4．87±0．55）％和（12．10±1．04）％,作用48h后分别为（11．47±0．85）％和（30．07±2．01）％,作用72h后分别为（28．99±2．12）％和（38．32±3．15）％,均显著高于相应时间点对照组细胞的凋亡率[（0．30±0．10）％、（0．40±0．10）％和（0．50±0．20）％,均P〈0．01]。同时Bim和PUMAmRNA表达水平也显著高于对照组（P〈0．05）。而同样处理的HT29细胞其生长抑制率、细胞凋亡率及Bim和PUMAmRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW480生长并诱导其凋亡的作用,其机制可能与促凋亡相关基因BH3-only（Bim和PUMA）表达增强有关。     

抑癌基因RASSF1A在结肠癌中的表达研究

目的探讨抑癌基因Ras相关区域家族1A（RASSFlA）基因在结肠癌组织以及相应正常结肠组织中的表达并分析其表达与结肠癌临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测34例结肠癌手术标本和相应的正常结肠组织中RASSFlA蛋白的表达水平,应用RT-PCR法检测RASSFlAmRNA在结肠癌和正常结肠组织中的表达情况。结果①免疫组织化学法结果：结肠癌组织中RASSFlA蛋白表达阳性率明显低于其在正常结肠组织中的表达阳性率[35．3％（12／34）比97．1％（33／34）,P〈0．05]。结肠癌组织中RASSFlA蛋白的表达与肿瘤分化程度和TNM分期均有关（P〈0．05）,即高、中分化及TNM分期较低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSFlA蛋白表达阳性率较高P〈0．05）。②Western blot法结果：在34例结肠癌患者中RASSFlA蛋白表达水平明显低于其在相应的正常结肠组织中的表达水平[0．3168＋0．0196比0．9144±0．1776,P〈0．05];该结果与RT-PCR法检测到的RASSFlAmRNA表达情况基本一致[0．1589±O．2237和0．5723±0．1939,P〈0．05]。结论RASSFlA基因的失表达可能在原发性结肠癌的发生、发展中起重要作用,检测RASSFlA的表达情况可为结肠癌的早期诊断提供帮助。     

奥沙利铂联合低分子柑橘果胶对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨奥沙利铂联合低分子柑橘果胶（LCP）对人结肠癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法分别检测各浓度奥沙利铂单药和奥沙利铂联合低分子柑橘果胶对人结肠癌细胞（HT29）增殖的影响．计算两药物相互作用指数（CDI）。流式细胞仪检测IC50浓度奥沙利铂单药及联合用药处理HT29细胞的凋亡比例,采用Westernblot分析凋亡相关蛋白procaspase．3、8、9、PARP的变化。结果奥沙利铂单药与联合LCP用药对HT29细胞生长均有抑制作用,其效应呈时间和浓度依赖性：联合组对HT29细胞的生长抑制作用更为显著（P〈0．01）．两药物CDI小于1。单药与联合用药均能使HT29细胞凋亡比例增加,药物作用6、24、48h后单药组细胞凋亡率分别为（9．76±0．47）％、（20．45±0．74）％和（28．70±3．29）％,联合组细胞凋亡率为（20．63±0．69）％、（34．35±1．02）％和（49．47±3．04）％,联合用药组较单药组细胞凋亡更加显著（均P〈0．01）。单药组与联合组HT29细胞的凋亡相关蛋白procaspase-3、8、9、PARP蛋白的表达均下调,联合组较单药组procaspase-3、9、PARP蛋白表达下调更为显著．但两组细胞procaspase-8表达基本相同。结论LCP能增加奥沙利铂的细胞增殖抑制和诱导凋亡能力．该效应可能与活化线粒体凋亡途径有关。     

生长抑素抑制人结肠癌细胞增殖的实验研究

目的：研究外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29的影响，并探讨其作用机制。方法：人结肠癌细胞株HT-29分成正常对照组、生长抑素组（SS组）、生长激素组（GH组）和生长抑素＋生长激素组（GH＋SS组）。MTT法测定细胞抑制率，流式细胞仪测定细胞周期分布、增殖指数、凋亡率，RT—PCR方法测定bcl．2及baxmRNA水平。结果：生长抑素能够明显抑制人结肠癌细胞株HT-29增殖（P〈0．01）、降低S期和G2／M期细胞比例（P〈0．05）、降低增殖指数（PI）（P〈0．05）、促进细胞凋亡（P〈0．01）、降低bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高baxmRNA表达（P〈0．01），生长激素则无明显作用。GH＋SS组表现与SS组相似。结论：生长抑素可能通过抑制GdG．期细胞进入S期和G2／M期以及促进细胞凋亡两种途径抑制体外培养的人结肠癌细胞株HT-29增殖。生长抑素可能是通过改变bax基因和bcl-2基因的表达影响肿瘤细胞的凋亡。生长激素对体外培养的人结肠癌细胞株HT-29无显著影响。     

Smoothened（Smo）基因在结肠腺癌Lovo细胞的表达及其作用

目的探讨Smoothened（Smo）基因在结肠腺癌Lovo细胞的表达水平及在细胞增殖与凋亡过程中的作用。方法应用Westernblot及半定量RT—PCR检测结肠腺癌Lovo细胞内Smo基因的表达水平,再应用RNAi技术降解Lovo细胞内的SmomRNA表达,然后应用MTT法、流式细胞术检测SmomRNA被降解后Lovo细胞增殖水平与凋亡水平的变化。结果结肠腺癌Lovo细胞内有Smo蛋白及SmomRNA的高表达,SmomRNA被降解后,Lovo细胞的增殖水平明显抑制（P〈0．05）,凋亡率明显升高（P〈0．001）。结论结肠腺癌Lovo细胞的发生与Smo基因的高表达有关,Smo基因参与结直肠癌的增殖与凋亡过程。     

miR-183作用于Ezrin抑制结肠癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨miR-183对结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的影响及是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。方法:采用脂质体转染细胞,高表达或沉默miR-183,用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化,用Western Blot分析细胞Ezrin蛋白表达的改变;通过共表达miR-18和Ezrin,以及共沉默miR-18和Ezrin,观察miR-183对细胞侵袭和迁移能力的影响的变化,进一步证实miR-183是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。结果:高表达miR-183后,与对照组相比,细胞侵袭及迁移能力明显下降,Ezrin蛋白的表达水平降低(P0.01,P0.001);反之,沉默miR-183的表达,细胞侵袭和迁移能力明显增强,Ezrin蛋白的表达水平增高(P0.01);高表达miR-183和Ezrin蛋白,与对照组(仅高表达miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05);沉默miR-183和Ezrin的表达,与对照组(仅沉默miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力降低(P0.001)。结论:miR-183能够抑制结肠癌细胞SW620的侵袭和迁移,且通过调控其靶基因Ezrin蛋白的表达发挥作用。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞Caco-2细胞增生的分子机制

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增生及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,MTY法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于结肠癌细胞增生的影响,并计算Ic。值;RT—PCR法检验COX-2、Survivin的mRNA的表达影响。结果MTF结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人结肠癌细胞增生,其24h,48h,72h的Ic。分别为：（99．519±10．355）μmol／L、（71．546±6．446）μmol／L、（59．622±15．999）μmol／L;RT-PCR结果显示：人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0．808±0．021、0．101±0．002（t=19．037,P=0．000）;Survivin mRNA灰度值分别为：0．798±0．031、0．190±0．002（t=18．987,P=0．002）。结论塞来昔布抑制结肠癌细胞增生,塞来昔布抗肿瘤机制可能是通过抑制COX-2及Survivin的mRNA的表达来实现的。     

乳腺癌间质成纤维细胞对MDA-MB-231种植肿瘤生长和转移的影响及其机理探讨

目的通过裸鼠接种方式进行体内实验,观察乳腺癌间质成纤维细胞（CAFs）对种植肿瘤生长和转移的影响,并探讨其作用机理。方法选择MDA．MB．231乳腺癌细胞系细胞（简称MDA）、乳腺癌患者的CAFs和癌旁正常乳腺组织的正常成纤维细胞（NFs）,结合不同的试剂,包括生理盐水（NS）、基质细胞衍生因子-1（SDF-1）配体拈抗剂1,4,8,11．四氮杂环十四烷（AMD3100,简称AMD）,组合成以下6种处理：MDA＋NS、NFs＋NS、MDA＋NFs＋NS、MDA＋NFs＋AMD、MDA＋CAFs＋AMD及MDA＋CAFs＋NS。将36只Bal b／c无胸腺裸小鼠按配伍随机方法分成6组,分别接受上述处理。将细胞悬液接种于裸鼠,接种后饲养46d处死,观察种植肿瘤的大小,有无淋巴结、肺及肝脏转移。采用ELISA法检测6组裸鼠的血浆SDF-1浓度,采用real-timePCR法检测6组裸鼠肿瘤组织中的SDF．1mRNA水平,采用Westernblot法检测6组裸鼠肿瘤组织中SDF-1蛋白的表达水平。结果除NFs＋NS组外,其余5组均有种植肿瘤形成。MDA＋CAFs＋NS组裸鼠的种植肿瘤体积[（9．092±2．662）cm3]、血浆SDF．1浓度[（75．25±16．23）ng／L]、肿瘤组织中SDF-1 mRNA（中位数为14．714）及其蛋白（中位数为0．673）的表达水平均最高,与其他5组比较差异均有统计学意义（P〈0．050）。6组裸鼠的肝和肺组织均未见转移灶。但MDA＋CAFs＋NS组有4只、MDA＋NS组有2只裸鼠存在腋窝淋巴结转移,其他组均未发现腋窝淋巴结转移。结论乳腺癌CAFs对乳腺癌的生长起促进作用,且可促进肿瘤淋巴结的转移;其作用可能是通过乳腺癌CAFs分泌SDF-1,与其特定的受体即趋化因子受体4（cxcR4）结合来实现的。     

趋化性细胞因子受体CXCR4基因表达对人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的探讨趋化性细胞因子受体CXCR4基因表达对人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。方法Real-time PCR 检测人骨肉瘤细胞株 HOS-8603、U2OS 和 MG-63 中 CXCR4 mRNA 的表达情况;构建、鉴定pcDNA3/CXCR4 重组质粒并将其转染到 HOS-8603 细胞中（PCDNA3/CXCR4 组）,同时制备转染 pcDNA3 空质粒的阴性对照组（pcDNA3组）。MTT检测细胞增殖情况,穿膜小室重组细胞基底膜迁移实验检测细胞迁移情况。结果 HOS-8603细胞中CXCR4 mRNA相对表达含量低于U2OS、MG-63细胞（P 〈0.05）。转染后24、48h,pcDNA3/CXCR4 组 CXCR4 mRNA 表达量是 pcDNA3 组的 96 倍和 124 倍（P 〈0.05）。与 pcDNA3 组比较,转染后24、48、72 h,pcDNA3/CXCR4组细胞增殖率和发生迁移的细胞数明显增加（P 〈0.05）。结论 CXCR4的表达可能是促进骨肉瘤细胞增殖和迁移的重要因素。     

RNA干扰畸胎瘤源性生长因子基因对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰畸胎瘤源性生长因子（PCDGF）基因对食管鳞癌细胞Eca-109的影响.方法 脂质体介导PCDGF-shRNA的表达载体转染Eca-109细胞,应用RT-PCR、Westernblot检测转染后细胞PCDGF mRNA及蛋白的表达情况,分别采用Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒和Boyden小室法检测转染后Eca-109细胞的增殖能力和侵袭能力.结果 转染组PCDGF mRNA和蛋白表达水平均较其他组下调.转染24、48和72 h转染组细胞增殖均受到抑制,抑制率分别为20.4％、21.1％和20.9％,其细胞增殖活性较未转染组、阴性质粒组和脂质体组均明显降低（均 P＜0.05）.未转染组、阴性质粒组、脂质体组和转染组的细胞迁移数分别为118.8±12.0、100.8±9.0、114.3±4.7和 53.5±16.3,转染组与其余3组比较,差异均有统计学意义（P=0.001,P=0.002,P=0.002）.结论 RNA干扰PCDGF基因可抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及侵袭能力,PCDGF基因可能成为基因治疗的新靶点.     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对结肠癌细胞的体外抗肿瘤性

目的研究腺病毒介导的Bcl—XL shRNA对结肠癌细胞株的体外抗肿瘤性。方法将已有的Bcl-XL腺病毒进行扩增纯化．并通过反转录反应分析该腺病毒在mRNA水平对Bcl-XL的表达调控。通过MTT检测及克隆形成实验,了解该腺病毒对结直肠癌细胞株（Lovo细胞株）的体外杀伤作用。结果Ad／Bcl．XLshRNA作用于Lovo细胞株导致Bcl—XL mRNA表达水平下降。与对照腺病毒Ad／GFP相比,Ad／Bcl-XL shRNA显著抑制Lovo细胞的增长（P〈0．05）,且该抑制效应呈剂量和时间依赖性;显著抑制Lovo细胞的克隆形成（P〈0．05）,且该抑制效应呈剂量依赖性。而Ad／Bcl—XL shRNA对正常人成纤维细胞（NHFB）无明显杀伤作用。结论腺病毒介导的Bcl-XL shRNA对Lovo细胞株具有杀伤作用,可能存在潜在的结肠癌治疗价值。     

Cdx2对胃癌细胞生物学性状的影响

目的 观察Cdx2对人胃癌细胞MGC-803生物学性状的影响.方法 利用脂质体将pCMV-Cdx2-HA和pCMV-HA质粒分别转染MGC-803细胞,应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测MGC-803细胞中Cdx2基因的表达;应用体外实验及流式细胞仪分别检测Cdx2对MGC-803的侵袭力、黏附力、增殖力、迁移力和凋亡率的影响.结果 转染pCMV-Cdx2-HA质粒的MGC-803细胞中可以检测到高Cdx2的表达,其侵袭能力[穿膜细胞数:(64.33±11.94)个/视野下降到(23.93±8.95)个/视野]、黏附能力[(1.172±0.042)]、增殖力[(26.13±1.60)%]和迁移能力[(42.87±2.19)%]较对照组明显降低(P＜0.05),而且凋亡率升高,48 h和72 h的凋亡率分别为(11.40±0.36)%、(9.72±0.50)%(P＜0.05).结论 Cdx2高表达对MGC-803具有抑制其侵袭转移的作用,并促进肿瘤细胞的凋亡.