PS1/APP双转基因阿尔茨海默病模型传代小鼠的基因型鉴定及其组织学分析

目的对所获的PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型小鼠进行基因鉴定,进一步对其进行组织学分析,检测老年斑(senile plaque,SP)的形成情况.方法设计特定的引物,PCR扩增转入基因组DNA中的APP基因,对转入PS1/APP的小鼠应用刚果红染色结合免疫组化观察Aβ沉积、小胶质细胞和星型胶质细胞的活化.结果与未转入的阴性对照相比,在PS1/APP双转基因的AD小鼠皮质和海马内可见Aβ斑块形成,围绕在Aβ斑块周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,形成典型的SP结构.结论我们获得的PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD患者脑内的主要病理过程,提供有效的实验动物模型.     

β-淀粉样蛋白致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的 :模拟人类Alzheimer病 (AD)的大鼠病理模型 ,观察其学习记忆及病理性改变。方法 :大鼠双侧海马微量注射聚合态Aβ1 40 制备AD动物模型 ,Y 型迷宫测定大鼠学习记忆能力 ,HE染色、刚果红染色和银染检测病理变化。结果 :海马内注射Aβ1 40 可引起大鼠学习记忆能力下降 ,注射区Aβ沉积 ,神经元丢失及胶质细胞增生 ,神经原纤维缠结。结论 :Aβ1 40 海马内注射能较好的模拟AD的学习记忆障碍、神经元损伤等行为学和病理学等方面的特征 ,作为AD研究较好的动物模型。     

杏仁核注射Aβ_(1-42)大鼠脑内星形胶质细胞形态学变化

目的　探讨Aβ1-42 诱导模拟人类Alzheimer’s病 (AD)的大鼠病理模型中星形胶质细胞形态学变化及其在AD中的作用机制。方法　双侧杏仁核内注射 β-淀粉样多肽 1～ 4 2片段 (Aβ1-42 )制作大鼠AD模型 ,注射一周后采用GFAP免疫组化染色分析大鼠海马GFAP的表达。结果　杏仁核内注射Aβ1-42 后海马区出现星形胶质细胞增生、肥大、数目明显多于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　AD模型神经元损伤、死亡与Aβ神经毒性直接相关 ,反应性星形胶质细胞参与Aβ导致神经元细胞毒性损伤作用。     

C17.2神经干细胞移植Aβ1-40损伤大鼠海马后的分化及对学习记忆的改善

目的 探讨永生化神经干细胞株C17.2移植Aβ1-40损伤大鼠海马后的存活、分化以及细胞移植对AD大鼠的治疗作用.方法 单侧海马齿回注射凝聚态Aβ1-40复制AD大鼠模型;C17.2神经干细胞移植到海马Aβ1-40注射处,免疫荧光观察移植细胞的存活、分化,Morris水迷宫检测干细胞移植对AD大鼠空间学习记忆障碍的改善情况.结果 C17.2神经干细胞移植到AD大鼠海马后存活良好,DAPI核染显示移植细胞广泛迁移,Cy3荧光显示大部分移植细胞分化为GFAP阳性细胞,并可见一定数量的移植细胞分化为NF200阳性细胞,其中部分发出类似神经元的长突起.行为学检测表明干细胞移植对AD大鼠空间学习记忆能力有明显改善.结论 永生化神经干细胞移植AD大鼠海马后能有效存活,移植细胞可分化为胶质细胞、神经元并能改善AD大鼠学习记忆功能障碍.     

β-淀粉样蛋白致大鼠Alzheimer病模型的研究

目的模拟人类Alzheimer病的大鼠模型,观察其学习记忆及病理性改变。方法大鼠双侧海马微量注射聚合态Aβ1-40制备AD动物模型,Y-型迷宫测定大鼠学习记忆能力,HE染色、刚果红染色检测病理变化。结果海马内注射Aβ1-40可引起大鼠学习记忆能力下降,注射区Aβ积,神经元丢失及胶质细胞浸润。结论Aβ1-40海马内注射能较好地模拟AD的学习记忆障碍、神经元损伤等行为学和病理学方面的改变,可作为AD研究较好的动物模型。     

AD模型小鼠海马和小脑Aβ的沉积与相关miRNAs表达的变化

目的通过对比观察AD模型小鼠海马与小脑Aβ沉积和相关miRNAs表达的变化,探讨AD模型小鼠小脑是否存在Aβ沉
积和相关miRNAs的差异表达。方法选择12月龄大小的APPswe/PS△E9双转基因AD小鼠作为实验组（EG）,同月龄的同种
系的野生型小鼠C57为对照组（CG）,每组各12只。将小鼠脑组织分为左右两部分,右侧脑组织行刚果红染色检测淀粉样物质
在海马及小脑的沉积;左侧脑组织分别用于提取海马及小脑的miRNA,应用实时荧光定量PCR方法分别检测两组小鼠海马及
小脑组织的miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p的表达情况。结果刚果红染色：实验组小鼠海马
及小脑均可见橘红色的Aβ沉积,对照组小鼠海马及小脑均未见橘红色的Aβ沉积。实时荧光定量PCR：四种miRNAs在实验组
海马的表达均低于对照组（P<0.05）;miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p 和miR-669f-3p 在实验组小脑的表达低于对照组（P<
0.05）;miRNA-298-5p和miR-669f-3p在实验组海马的表达低于小脑（P<0.05）。结论APPswe/PS△E9双转基因AD小鼠小脑中
也存在Aβ沉积,其形成可能与miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p和miR-669f-3p的表达下调有关。
     

达纳康对类老年痴呆大鼠脑组织胶质细胞原纤维酸性蛋白和IL-1β、IL-6及APP mRNA表达的影响

目的研究达纳康(EGb761)对β-淀粉样蛋白(Aβ)25~35所致类老年性痴呆(AD)模型大鼠神经免疫调节的作用机制。方法采用双侧杏仁核注射Aβ25~35造成类AD大鼠模型,观察大鼠莫里斯(Morris)水迷宫空间记忆能力,并分别通过免疫组化和RT-PCR方法研究类AD大鼠神经元胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)、APP mRNA表达;观察炎性细胞因子IL-1β、IL-6的变化以及EGb761的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,皮层、海马APP mRNA的表达上调;海马、皮层GFAP阳性胶质细胞和IL-6 mRNA以及海马IL-1βmRNA表达增高。EGb761能够提高模型大鼠定向学习记忆能力,降低海马、皮层GFAP阳性胶质细胞表达,降低海马部位APP mRNA的表达。结论EGb761能显著改善Aβ诱导的痴呆模型大鼠学习记忆障碍,降低海马APP mRNA表达,减轻神经细胞的炎症和免疫联级反应。提示有效控制AD患者脑内Aβ免疫联级反应是EGb761的重要作用机制之一。     

脑灵汤对阿尔茨海默病模型大鼠TGF-β1表达的影响

目的 探讨脑灵汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠TGF-β1(转化生长因子β1)表达的影响.方法 采用向大鼠海马内注射Aβ1-42(β淀粉样蛋白)建立AD模型,通过Y-电迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;行HE染色观察海马CA3区神经元形态;采用刚果红染色检测Aβ的沉积;用免疫组化SP法检测TGF-β1的表达情况.结果 脑灵汤能改善模型大鼠的学习记忆能力,减少Aβ的沉积,且脑灵汤组TGF-β1的表达较AD模型大鼠的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色结果,脑灵汤组大鼠海马CA3区细胞排列较整齐、均匀,结构较清晰,形态、排列、数目较模型组明显改善;刚果红染色结果,正常组、假手术组大鼠脑组织切片中未见A13沉积;模型组大鼠脑组织切片在CA1区与齿状回之问可见明显Aβ1沉积;脑灵汤组未发现明显的Aβ沉积.结论 脑灵汤能增强AD大鼠海马区域TGF-β1的表达,可能通过此机制减少海马AB蛋白的沉积,从而改善模型大鼠学习记忆能力.     

APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆功能与超微结构的对照研究

目的观察APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠的记忆功能与超微病理改变。方法采用水迷宫实验检测记忆功能,透射电镜观察海马区超微病理改变。结果APP/PS1双转基因AD小鼠的水迷宫潜伏期比对照组小鼠明显延长,而在探索实验中两者差异无统计学意义;电镜观察到APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元肿胀,突触稀松形态不一。结论APP/PS1双转基因AD小鼠能够较好的模拟AD患者的表现及病理过程,提供有效的实验动物模型。     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

【目的】探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化。【方法】选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究。【结果】(1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积。【结论】7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加。     

β-淀粉样蛋白脑室注射对大鼠海马星型胶质细胞活化和细胞增殖的作用

目的 通过观察大鼠侧脑室注射β-淀粉蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)后海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)的表达,探讨Aβ对海马局部星型胶质细胞活化增生的作用及对海马神经发生的可能影响.方法 40只SD大鼠分为对照组(n=10)和实验组(n=30),将Aβ1-42注射入大鼠侧脑室,分别于术后3、7、14、30 d处死动物,应用免疫组化方法观察GFAP的表达,并用免疫荧光双标标记BrdU、GFAP以判断增殖细胞的种类.结果 实验组大鼠海马GFAP阳性细胞明显增加,到7 d达到高峰,14 d后逐渐下降,较对照组差异显著(P<0.01),实验组各时相点Br-dU、GFAP双标结果显示有部分BrdU阳性细胞GFAP为阳性,对照组双标阳性细胞很少.结论 β-淀粉蛋白脑室注射后大鼠海马星型胶质细胞活化增生,部分增生的星型胶质细胞可能来源于神经干细胞.     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用

目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.     

ES细胞来源的神经前体细胞移植Aβ损伤大鼠海马后的分化及对学习记忆的改善

目的 观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植Aβ海马损伤大鼠后的存活、分化以及细胞移植对模型大鼠的治疗作用.方法 采用改良的无血清方法将表达绿色荧光的小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,移植至单侧海马注射Aβ1-40损伤模型大鼠注射处;免疫荧光双染观察移植细胞的存活、分化.结果 胚胎体在改良的N3选择性培养基生长5 d后,90%以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性神经前体细胞.移植到模型大鼠海马后神经前体细胞存活良好,EGFP荧光显示移植细胞呈集落生长,Cy3荧光显示大部分细胞分化为GFAP阳性细胞,移植区周围可见一定数量NF200阳性细胞,其中部分发出类似神经元的长突起.行为学结果显示移植大鼠记忆能力较对照组明显改善.结论 胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植Aβ1-40损伤模型大鼠海马后能有效存活,大部分移植细胞分化为胶质细胞,小部分分化为神经元,细胞移植能改善模型大鼠学习记忆功能障碍.     

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的 评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1（+/-）小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1（+）小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1（-）小鼠,表明5月龄APP/PS1（+）小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1（+）小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1（+）小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。     

回神颗粒对APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠A沉积的影响

目的 研究回神颗粒对APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 通过Morris水迷宫的方法检测小鼠行为学变化,HE染色观察各组海马神经细胞形态,免疫组化方法检测小鼠海马区Aβ1-42、SorLA、Caveolin-1、BACE1、PS-1、APP的表达.结果 中药回神颗粒能降低APP/PS1/tau三转基因痴呆模型小鼠脑组织的A沉积(P＜0.01),提高脑组织中SorLA表达、降低Caveolin-1、BACE1、PS-1、APP(P＜0.05,P＜0.01).结论 回神颗粒可通过调节胞内SorLA、胞膜Caveolin-1蛋白的表达进而抑制Aβ生成、沉积等病理改变,防治阿尔茨海默病.     

GLP-1对AD转基因鼠氧化应激的保护作用

目的:胰高血糖素样肽1(GLP-1)对AD转基因鼠氧化应激的保护作用及其可能机制.方法:将C57BL分为假手术组、AD组、GLP-1干预组,假手术组为正常小鼠,其他两组为AD转基因小鼠,GLP-1干预组分别侧脑室注入不同浓度(5、10、20、50、100 nmol)的GLP-1,连续5d,假手术组注入同等剂量PBS.3组免疫组化检测小鼠海马Aβ蛋白表达;QDs-SA量子点检测脑组织GFAP蛋白;运用分光光度仪检测海马组织海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:与假手术组比较,AD模型组Aβ含量明显升高,海马GFAP阳性细胞明显深染,体积增大,数量增多,AD组SOD活性降低,MDA含量均明显高(P＜0.05);干预组不同浓度的GLP-1注入能减少Aβ含量,增高SOD活性,降低MDA含量.结论:AD转基因鼠模型中Aβ含量明显升高,产生氧化应激损伤,GLP-1能通过降低氧化应激损伤减少细胞内Aβ聚集.     

脑室注射Aβ1—40对大鼠皮质和海马纤连蛋白基因表达的影响

目的：研究脑室注射Aβ1-40对大鼠皮质、海马纤连蛋白基因表达的影响。方法：通过脑室注射Aβ1－40，建立大鼠AD模型，采用逆转录PCR方法研究纤连蛋白在皮质、海马的表达情况。结果：通过Morris氏水迷宫实验、脑片刚果红染色及胆碱乙酰转移酶表达水平等方面验证AD模型成功，在AD鼠皮质、海马纤连蛋白基因高表达。结论：纤连蛋白为整合素的配体，Aβ1-40诱导基基因高表达可能介导Aβ1-40与小胶质细胞的结合，激活小胶质细胞促进神经元死亡。     

姜黄素对小鼠海马 Aβ生成酶和降解酶的影响

目的探讨姜黄素对9月龄AD小鼠海马CA1区β淀粉样蛋白(Aβ)生成酶早老素2(PS2)及降解酶胰岛素降解酶(IDE)和脑啡肽酶(NEP)的持续影响。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg/kg)和姜黄素高、中、低(400、200、100 mg/kg)剂量组,同窝非转基因C57/BL6J小鼠作为对照组,连续灌胃6个月,应用免疫组织化学和Western-blot检测Aβ生成酶PS2、Aβ降解酶IDE和NEP的表达。结果与对照组相比,模型组Aβ生成酶PS2表达增加(P0.01);与模型组相比,各干预组小鼠海马Aβ生成酶PS2表达减少(P0.01或P0.05),海马CA1区PS2阳性细胞减少(P0.05)。与对照组相比,模型组Aβ降解酶IDE和NEP表达显著减少(P0.01);与模型组相比,各干预组小鼠海马Aβ降解酶IDE和NEP表达增加(P0.01或P0.05),海马CA1区IDE和NEP阳性细胞增加(P0.01或P0.05)。结论增加AD模型小鼠海马Aβ降解酶IDE和NEP的表达,减少Aβ生成酶PS2的表达,是姜黄素减少Aβ沉积的作用机制之一。     

丁苯酞对阿尔茨海默病模型大鼠海马GFAP和VEGF的影响

目的:研究阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及丁苯酞对其的影响.方法:成年雄性SD大鼠60只,随机分为模型组、丁苯酞组及对照组,每组20只,通过海马内注射β-淀粉样蛋白1-42建立阿尔茨海默病大鼠模型,喂养60 d后取各组大鼠脑组织,进行GFAP 和VEGF免疫组织化学染色. 结果:与对照组比较,模型组大鼠海马各区GFAP阳性细胞明显增多,VEGF表达减少,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,丁苯酞组大鼠海马各区GFAP阳性细胞数明显减少,VEGF表达增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论:丁苯酞可能通过减少海马GFAP表达,增加VEGF的表达,从而达到保护AD模型大鼠神经血管单元的作用.