和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞周期阻滞的作用

目的:观察和厚朴酚(HNK)联合青蒿素(ART)对人鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期的调控作用,探讨其可能的机制。方法:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷(TdR,终浓度为2 mmol.L-1)处理16 h,2次PBS洗脱后用RMPI-1640培养基10 h,再次加入终浓度为2 mmol.L-1的TdR处理16 h,PBS洗脱后收集细胞用于下一步的实验研究。HNK(7.5 mg.L-1),ART(7.5 mg.L-1)单独及联合作用于已同步化的CNE-2细胞24 h,同时设立对照组,流式细胞仪检测细胞周期分布的改变;RT-PCR检测cyclin D1,cyclin E1,p27 mRNA表达。结果:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷2次处理后,流式细胞仪检测显示,G1,S,G2期细胞比例分别为(72.64±5.01)%,(24.60±4.35)%,(0.00)%,表明细胞处于G1/S交界处。HNK+ART组、HNK组、ART组的G1期细胞比例分别为(90.78±9.49)%,(67.86±1.59)%,(66.77±2.25)%,提示HNK+ART组较HNK组或ART组显著地将CNE-2细胞阻滞在G1期(P<0.05)。RT-PCR检测显示HNK+ART组、HNK组、ART组的cyclin D1mRNA表达分别为(0.237±0.014),(0.328±0.002)及(0.368±0.007);cyclin E1 mRNA的表达各组依次是(0.445±0.027),(0.572±0.005)及(0.542±0.006);p27 mRNA的表达各组分别是(1.069±0.046),(0.543±0.022)及(0.388±0.004),与单药组比较,HNK+ART组显著下调cyclin D1,cyclin E1 mRNA的表达(P<0.05),显著上调p27 mRNA的表达(P<0.05)。结论:HNK+ART应用以协同方式诱导CNE-2细胞阻滞于G1期,这可能与通过下调cyclin D1及cyckin E1的mRNA表达及上调p27 mRNA表达有关。     

芒柄花素2-羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其包合行为探讨

目的制备芒柄花素-2-羟丙基-β-环糊精(FMN-2-HP-β-CD)包合物,并对其包合行为进行初步探讨。方法通过对比研磨法、酸碱中和搅拌法和超声法,筛选FMN-2-HP-β-CD包合物制备方法;以HPLC法测定芒柄花素(FMN)的量;以载药量为指标,以正交试验设计法优化FMN-2-HP-β-CD包合物的制备处方及工艺;采用扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射分析(XRD)验证包合物的形成;通过相溶解度法考察包合物中主客体分子之间的包合物物质的量之比,并通过分子对接法与相关热力学参数的计算对其包合行为进行探讨。结果选用酸碱中和搅拌法,在FMN与2-羟丙基-β-环糊精(2-HP-β-CD)物质的量之比为1∶1、温度50℃、2-HP-β-CD质量浓度为5 g/L的条件下制备FMN-2-HP-β-CD包合物,经验证其载药量达(9.42±0.25)%;相溶解度曲线呈AL型,包合稳定常数随着温度升高而减小;热力学参数显示,FMN与2-HP-β-CD包合是一个以焓变作为主要驱动力的放热、熵减小的过程;分子模拟表明FMN是以7-OH部分从2-HP-β-CD的大口端进入内腔,与2-HP-β-CD上的氧原子形成1个氢键。结论制备的FMN-2-HP-β-CD包合物重复性好,能提高FMN的溶解度;分子模拟FMN与2-HP-β-CD包合行为与相关热力学参数结果相符合。     

荆防颗粒挥发油β-环糊精制备工艺的优化

目的 优化荆防颗粒挥发油β-环糊精包合物制备工艺。方法 以挥发油包合率、包合物得率为评价指标,比较胶体磨法、饱和水溶液法、超声法包合物制备工艺,确定包合方法;在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken响应面法,以挥发油包合率、包合物得率的综合评分为考察指标,考察挥发油与β-环糊精的比例(1∶6～1∶10)、β-环糊精与水的比例(1∶2～1∶4)以及研磨包合时间(15～25分钟)对包合物制备工艺的影响,通过气相色谱法对包合前后挥发油化学成分进行检测。结果 经对比,胶体磨法得到的包合物挥发油包合率(80.37%)和包合物得率(86.55%)均高于饱和水溶液法(75.19%、79.49%)和超声法(68.38%、72.05%),故选择胶体磨法制备荆防颗粒挥发油β-环糊精包合物;优选出的最佳工艺条件为挥发油∶β-环糊精为1∶8,β-环糊精∶水为1∶3,研磨包合时间为21分钟,3次验证实验结果显示,挥发油包合率平均为85.98%,包合物得率平均为92.51%。结论 优选的荆防颗粒挥发油包合工艺包合率和包合物得率均较高,包合工艺科学、合理、可行。     

和厚朴酚对热打击F98细胞的保护作用机制研究

目的探讨和厚朴酚(HNK)对热打击F98细胞的保护作用机制。方法建立F98细胞热打击模型,实验分为正常对照组、模型组(热打击组,HS组)、HNK组(10,20μmol·L-1)剂量组。采用CCK-8检测细胞活力、流式细胞仪分析ROS探针荧光强度、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,采用WesternBlot检测丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)及其下游激酶MK2、PRAK磷酸化水平,分别给予MAPKs家族抑制剂、转染MK2及PRAK失活性腺病毒、不同剂量HNK预处理细胞,检测各组细胞ROS及细胞凋亡水平。结果 1.热打击可诱导F98细胞内ROS水平升高介导细胞凋亡,ROS具有促凋亡作用,经过HNK预处理的细胞ROS、细胞凋亡水平明显下降,以高剂量组作用更为明显(P0.05)。2.热打击可激活F98细胞内MAPKs家族的p-p38、p-ERK、p-JNK,并证实只有p38MAPK参与调节F98细胞内ROS累积并介导细胞凋亡,经过HNK预处理F98细胞后,可明显抑制p38、ERK的磷酸化水平,并可下调ROS及细胞凋亡水平。3.热打击可激活细胞内的p-MK2、p-PRAK,加入MAPKs家族抑制剂预处理后证实二者均为p38的下游激酶;加入HNK可显著抑制MK2及PRAK,给MK2特异性抑制剂CMPD-1及转染MK2、PRAK失活性腺病毒预处理细胞,结果表明,经过CMPD-1及转染MK2失活性腺病毒预处理的F98细胞的ROS水平及细胞凋亡水平明显下降,高剂量HNK可显著抑制平p38、MK2的磷酸化,明显降低热打击F98细胞的ROS及细胞凋亡水平。结论 HNK通过抑制p38/MK2路径下调ROS水平对热打击F98细胞发挥保护作用。     

穿心莲内酯-羟丙基-β-环糊精包合物的鉴定和热力学稳定性研究

目的 制备和鉴定穿心莲内酯-羟丙基-β-环糊精包合物,并考察穿心莲内酯和羟丙基-β-环糊精之间的包合摩尔比及包合过程的热力学常数.方法 采用冷冻干燥法制备穿心莲内酯-羟丙基-β-环糊精包合物,采用差示扫描量热法(DSC)、X射线衍射(XRD)和红外光谱法(IR)对包合物进行鉴定,通过表观溶解度法考察包合物中主客分子之间的包合摩尔比及包合过程的热力学常数.结果 25、35、45 C下穿心莲内酯和羟丙基-β-环糊精能形成1:1摩尔比包合物,相溶解度图呈AL型,包合过程为放热反应.结论 穿心莲内酯-羟丙基-β-环糊精包合物能显著增大药物的溶解度.     

制备方法和工艺对姜黄素-磷脂复合物-壳聚糖微球体外性质的影响

目的 为提高姜黄素的口服吸收,研制姜黄素-磷脂复合物-壳聚糖微球,优选其制备方法和工艺.方法 分别采用离子凝聚法(滴入法、注入法)和乳化交联法制备姜黄素-磷脂复合物-壳聚糖微球,考察工艺条件对微球载药量和释药速率的影响,并对各方法制备的微球进行表征.结果 DSC、IR和SEM证实,3种方法制得的微球均具有良好的球形,姜黄素仍以磷脂复合物的形式存在于壳聚糖微球中而并未解离.离子凝聚滴入法制备的微球载药量高达5％以上,但粒径大,为(1.11±0.08) mm;无突释效应,累积释药量平稳增加.离子凝聚注入法制备的微球粒径最小,为(16.19±4.91) μm,载药量也达5％以上;虽有较弱的突释效应,但释药最完全.乳化交联法制备的微球粒径居中,为(77.48±19.37) μm,但载药量仅在1％左右,且突释效应强,释药量最低.磷脂复合物并没有改变壳聚糖微球的释药规律,各微球的药物释放均符合Weibull分布.结论 离子凝聚注入法更适合制备姜黄素-磷脂复合物-壳聚糖微球.     

辣椒碱-羟丙基-β-环糊精包合物制备鉴定及 热力学稳定性研究

目的:制备及鉴定辣椒碱-HP-β-CD包合物,并考察辣椒碱和HP-β-CD之间的包合摩尔比及包合过程的热力学常数.方法:采用饱和水溶液法制备辣椒碱-HP-β-CD包合物,以差示扫描量热法(DSC)、X射线衍射法(XRD)和红外光谱法(IR)对包合物进行鉴定,通过表观溶解度法考察包合物中主客分子之间的包合摩尔比及包合过程的热力学常数.结果:25,35,45℃下辣椒碱和HP-β-CD能形成1:1摩尔比包合物,相溶解度图呈A_L型.结论:辣椒碱-羟丙基-β-环糊精包合物能显著增大药物的溶解度.     

和厚朴酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用。方法选取SPF级BALB/c小鼠40只,随机分为5组,每组8只,即正常组,模型组,HNK高、低剂量组,地塞米松(DEX)组,利用LPS诱导小鼠急性肺损伤(ALI)模型,和厚朴酚腹腔注射后检测肺干湿比值(W/D)、进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞计数、检测血气分析、计算肺泡液体清除率(AFC)等。ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α和细胞因子IL-1β表达的变化,Western blot法和Real time PCR检测各组小鼠肺组织MMP-9和NF-κB表达。结果模型组中,小鼠BALF中中性粒细胞计数、肺W/D比值、TNF-α、IL-1β、MMP-9以及NF-κB水平明显增高,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.05);小鼠PaO_2、酸碱度(pH)、AFC显著降低,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,HNK高、低剂量组,小鼠BALF中中性粒细胞计数、肺W/D比值、TNF-α、IL-1β、MMP-9以及NF-κB表达水平明显下降,PaO_2、p H、AFC显著上升,差异均有统计学意义(P0.05)。结论和厚朴酚通过抑制NF-κB、MMP-9对LPS诱导的急性肺损伤发挥重要的保护作用。     

京尼平-β-环糊精包合物制备工艺研究

 目的研究京尼平-β-环糊精包合物最佳制备工艺。方法采用研磨法,以包合物的含量和京尼平(genipin,GP)收率为考察指标,通过正交实验设计,综合平衡后确定最佳制备工艺。结果最佳包合条件为:包合时间1 h、GP和β-环糊精的配比(摩尔比)1∶1、包合溶剂为水。经红外光谱法、紫外光谱法、电镜扫描法、X-射线衍射法和相溶解度法鉴定,确证形成京尼平-β-环糊精包合物。结论采用最优包合条件制备的包合物收率为76.27%,京尼平含量为16.5 mg·g^-1。制成包合物后提高了京尼平的稳定性,制备工艺简单,同时也为京尼平制备成各种剂型开辟良好的前景。     

RP-HPLC-ELSD法分离制备抗肿瘤成分达玛烷-3β,12β,20,25-四醇差向异构体

目的以制备反相高效液相-蒸发光散射检测(RP-HPLC-ELSD)法为基础,大量分离制备达玛烷-3β,12β,20,25-四醇(25-OH-PPD)差向异构体,比较间隔连续进样法和离线制备法大量分离制备25-OH-PPD差向异构体的制备效率,探寻出最佳的分离制备色谱法。方法分别对间隔连续进样法以及离线制备法在不同比例的流动相和不同进样量下对25-OH-PPD差向异构体分离制备情况进行了考察,通过比较制备效率、转移率等筛选出最佳的制备方法。结果 2种方法最佳分离制备色谱条件和制备结果:间隔连续进样法流动相为甲醇-水(83∶17),体积流量20 m L/min,进样质量浓度20 mg/m L,进样量1 m L,20(S)-25-OH-PPD的制备效率为18.01 mg/h,20(R)-25-OH-PPD的制备效率为35.36 mg/h;离线制备法流动相为甲醇-水(81∶19),体积流量20 m L/min,进样质量浓度200 mg/m L,进样量2.5 m L;20(S)-25-OH-PPD的制备效率为50.55mg/h,20(R)-25-OH-PPD的制备效率为51.93 mg/h。结论离线制备法分离制备效率优于小质量浓度间隔连续进样法,离线制备法操作简单,重现性好,制备量大,为25-OH-PPD差向异构体混合物的大量分离制备奠定了良好的基础。     

pH、无机盐和有机溶剂对美洲大蠊醇提取物中蛋白质稳定性的影响

目的:对美洲大蠊醇提取物中蛋白质稳定性进行研究.方法:通过采用UV法和Folin-酚试剂法,考察了pH、无机盐和有机溶剂等影响因素对蛋白质稳定性的影响.结果:pH、氯化钠、硫酸铵、乙腈和甲醇随着剂量的增加,在不同程度上破坏了蛋白质的结构.结论:不同的影响因素通过改变蛋白质物理化学性质,破坏了蛋白质的稳定性.     

基于熵权-TOPSIS模型优选三棱醋制方法

目的 构建熵权-逼近理想解排序法（technique for order preferenceby similarity to ideal solution,TOPSIS）模型,通过多指标成分含量测定的分析比较,为优选三棱Sparganii Rhizoma醋制方法提供科学依据。方法 采用醋炙法、醋烤法、醋蒸法、醋煮法4种不同醋制方法对三棱进行炮制加工,HPLC法测定对羟基苯甲酸、香草酸、香兰素、对羟基苯甲醛、阿魏酸5种成分含量变化,并以上述5种成分的含量作为评价指标,利用熵权法测定不同评价指标的信息熵以确定各评价指标权重,利用熵权法加权生成的数据进行TOPSIS模型分析,通过讨论正理想解和负理想解,对三棱醋制方法进行综合分析评价,进而优选三棱最佳醋制方法。结果 不同方法醋制的三棱成分含量差异较大,醋炙法炮制后,对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香兰素成分含量显著增加;醋煮法炮制后,阿魏酸、香兰素成分含量显著降低,其他无显著变化。经熵权-TOPSIS模型测算,三棱的生品、醋炙品、醋蒸品、醋烤品、醋煮品的相对接近度分别为0.193、0.932、0.227、0.523、0.082,可知三棱不同醋制方法中醋炙法最佳,醋烤法与醋蒸法次之,醋煮法最差。结论 基于熵权-TOPSIS模型优选出三棱最佳醋制方法为醋炙法,为中药炮制工艺的选择与临床炮制品的合理使用提供科学依据。     

美洲大蠊药渣中多糖制备工艺优化及促创面愈合的综合利用研究

目的采用响应面法优化美洲大蠊药渣中多糖提取工艺,并考察其促创面愈合的作用,为美洲大蠊药渣综合利用提供思路。方法在单因素实验基础上,采用Box-Behnken设计最佳美洲大蠊多糖提取工艺,并分析其单糖组成。采用0.1、0.05、0.025 g/mL美洲大蠊多糖作用于创面损伤模型小鼠,计算创面愈合率,用苏木精-伊红和天狼猩红染色评价创面愈合程度。结果美洲大蠊多糖的最佳提取工艺为碱液浓度0.02mol/L,提取时间1.65h,提取温度62℃,该条件所得多糖转移率为13.68%,且由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖7种单糖组成。创面愈合实验表明,第3、6、9、14天多糖给药组创面愈合率均高于模型组,且组织切片染色表明该多糖组分能促进胶原和肉芽组织生成,从而促进创面愈合。结论响应面法优化的提取工艺切实可靠,提取率高;美洲大蠊药渣提取多糖能促进小鼠创面愈合,提示美洲大蠊药渣中多糖具有开发为创面用相关产品的应用前景。     

凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格 星虫多糖中蛋白质的含量

目的: 建立一种快速、简单、准确测定方格星虫多糖中蛋白质含量的方法。方法: 分别采用凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,并进行稳定性、精密度、重复性和回收率测定。结果: 凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白的含量分别为2.40%,2.22%,其回收率分别为98.69%,100.97%,2种方法测得蛋白质含量基本相同,无显著性差异(P>0.05)。结论: 综合考虑,凯氏定氮法简便、快速、准确,可用于方格星虫多糖中蛋白质的质量控制。     

不同软化方法对白芍饮片质量的影响

目的:比较不同软化方法对白芍饮片质量的影响。方法:采用热浸法测定蒸法、煮法、闷润法、浸泡、减压冷浸法5种软化方法制得的白芍饮片中浸出物含量;采用HPLC测定各饮片中芍药苷和芍药内酯苷的含量。结果:各饮片中水溶性浸出物含量大小顺序为蒸法>闷润法>减压冷浸法>煮法>浸泡法;醇溶性浸出物、芍药苷及芍药内酯苷的含量大小为闷润法>蒸法>煮法>减压冷浸法>浸泡法。结论:闷润法及蒸法软化白芍药材质量优于其他加工方法。     

藏药松生等醇提物不同极性提取部分体外抗氧化活性研究

目的: 通过体外还原力和抗氧化评价方法研究藏药松生等提取物的抗氧化活性。 方法: 将松生等用70% 乙醇浸泡、提取、浓缩所得浸膏依次用石油醚, 二氯甲烷,乙酸乙酯, 正丁醇、乙醇进行萃取,各组分都配制成适当稀释倍数的溶液, 通过普鲁士蓝法、Fenton法和,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法分别测定各组分的还原力,·OH自由基的清除能力以及抗氧化的活性,并计算各组分的IC₅₀。 结果: 3种抗氧化实验表明乙酸乙酯、正丁醇、乙醇部分都具有明显抗氧化的作用。其中用DPPH法测得的IC₅₀分别是乙酸乙酯0.060 5 g·L^-1,正丁醇0.076 3 g·L^-1,乙醇0.083 3 g·L^-1。 结论: 提取物清除率与样品浓度存在明显的量效关系,浓度大于1.0 g·L^-1时其还原能力几乎接近于维生素(VC),清除能力接近甚至超过60%。其中在大极性溶液层还原力和抗氧化的能力最强。     

GC-MS分析测定乌骨藤挥发性成分

目的:研究乌骨藤挥发性成分。方法:采用石油醚和乙醚作为溶剂,用索氏提取法提取挥发性成分,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)鉴定其化学成分。结果:采用石油醚作为溶剂鉴定出24种化合物,占挥发成分的55.43%,其中脂肪酸占75.10%,烷烃类占11.91%;乙醚作为溶剂提取鉴定出24种化合物,占60.43%,脂肪酸占38.98%,烷烃类占39.27%。结论:测定了乌骨藤挥发性成分,为进一步研究乌骨藤成分提供了理论依据。     

冬虫夏草及其近缘品中铅、镉、砷污染评价及人体健康累积风险评估方法探索

目的：对冬虫夏草及其近缘品中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）的残留量进行测定,探索符合冬虫夏草及相关产品使用特点的污染评价及人体健康风险评估方法。方法：基于冬虫夏草及其近缘品中Pb、Cd、As的残留量监测数据,综合运用单因子污染指数法、尼梅罗综合指数法、金属污染指数法对冬虫夏草及其近缘品进行重金属污染评价,计算重金属日暴露量,分别采用危害指数法和更加精确的靶器官毒性剂量法对Pb、Cd、As联合暴露产生的健康风险进行累积风险评估。结果：污染评价结果说明,冬虫夏草及其近缘品中As的污染应引起关注,不同品种污染程度为冬虫夏草（繁育品）=蛹虫草<冬虫夏草（野生品）<香棒虫草<亚香棒虫草;人体健康风险评估结果表明,对于心血管和神经系统,1批冬虫夏草（野生品）全草中Pb、Cd、As联合暴露产生的累积健康风险需被进一步关注。结论：冬虫夏草及其近缘品重金属污染评价,以及人体健康风险评估方法,可为中药安全性评价及相关限量标准的制修订提供参考。     

银耳多糖中糖醛酸含量的测定

目的 建立一种操作简单、快速、准确地测定银耳多糖中糖醛酸的方法。方法 考察中性糖在咔唑法和间羟基联苯法中对糖醛酸测定的干扰，考察加人氨基磺酸对中性糖的抑制作用。并对银耳多糖中糖醛酸进行测定。结果 中性糖在咔唑法和间羟基联苯法中均有不同程度的干扰。对糖醛酸中酸性杂多糖配制质量浓度超出一定范围时，两种方法测得糖醛酸的结果会与实际值有较大误差。结论 测定银耳多糖采用间羟基联苯法，同时待测样品质量浓度配制在0．25～0．50mg／mL时，所测结果更接近于实际值。     

樟帮栀子饮片HPLC指纹图谱研究

目的：建立樟帮栀子饮片的HPLC特征指纹图谱,为其质量控制提供参考。方法：采用RP-HPLC,Agilent Zorbax Eclipse XBD-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量20 μL,检测波长238 nm（0~20 min）,440 nm（20~40 min）。结果：初步建立了樟帮栀子饮片HPLC指纹图谱,确定共有峰9个。将11批不同产地、相同炮制方法的栀子饮片指纹图谱与樟帮栀子饮片对照指纹图谱进行相似度比较,相似度在0.495~0.952。结论：用于建立樟帮栀子饮片指纹图谱的10批天齐堂饮片厂提供的栀子饮片相似度理想,而收集于不同产地、采用相同的炮制方法炮制的栀子饮片内在质量具有较大差异性。