恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人血管平滑肌细胞分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的：观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的影响。方法：采用体外培养第4-6代的人脐动脉VSMC，实验分为6组，即对照组、AngⅡ(1&;#215;10^-6mol／L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1，5，10，50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本，用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA)检测MCP-1的分泌量，免疫细胞化学检测MCP-1的蛋白表达。结果：AngII1&;#215;10^-6mol／L刺激VSMC24h，MCP-1的分泌量显著增高(P&;lt;0．05)；而1，5，10，50Gs恒磁场组细胞MCP-1的分泌量显著低于AngⅡ组(F=752．89，P&;lt;0．05)。AngⅡ1&;#215;10^-6mol／L与VSMC孵育24h后，MCP-1的表达显著增加(P&;lt;0．05和对照组)；而1，5，10，50Gs恒磁场组MCP-1的表达显著低于AngⅡ组(F=238．26，P&;lt;0．05)。结论：1～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用，抑制VSMC分泌与表达MCP-1.     

丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,以寻找药物作用的靶点。方法：分离大鼠胸主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,建立AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖模型;以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察丹参酮ⅡA对VSMC增殖的影响;用酶促反应定磷法测定钙调神经磷酸酶（CaN）活性;应用免疫细胞化学法观察原癌基因c-fos和c-myc的表达。结果：成功建立AngⅡ诱导的VSMC增殖模型;随着TSN浓度增加VSMC增殖活性呈明显下降趋势（P〈0.05,0.01）;TSN各组随着浓度的增加,VSMC中CaN活性显著下降（P〈0.01）,VSMC中c-fos和c-myc表达水平也显著下降（P〈0.01）。结论：TSN能抑制血管平滑肌细胞的增殖,并呈浓度依赖性。其机制可能与下调VSMC中CaN活性、c-fos及c-myc表达有关。     

干扰素-γ对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs)增殖的作用及干扰素-γ对其增殖的影响。方法 幼龄Wistar大鼠（4周龄）12只，分成对照组，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组，干扰素-γ组和干扰素-γ AngⅡ组，采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞，分别测定^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR),^3H-亮氨酸（^3H-Leu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果 AngⅡ（0.1μmol/L）作用24h能使VSMCs的^3H-TdR与^3H-TdR与^3H-Leu的掺入量比对照组增多。且S期和G2/M期细胞增多，细胞增殖指数增大；干扰素-γ组无以上作用，与AngⅡ组相比，干扰素-γ（500U/mL) AngⅡ组^3H-TdR,^3H-Leu的掺入量明显减少，S期细胞构成比和细胞增殖指数亦明显减少。结论 AngⅡ对血管平滑肌细胞有促增殖作用。这种促增殖作用能被干扰素-γ所拮抗。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人血管平滑肌细胞分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的:观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC)分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)的影响。方法:采用体外培养第4～6代的人脐动脉VSMC,实验分为6组,即对照组、AngⅡ(1×10-6mol/L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1,5,10,50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunoadsordentassay,ELISA)检测MCP-1的分泌量,免疫细胞化学检测MCP-1的蛋白表达。结果:AngⅡ1×10-6mol/L刺激VSMC24h,MCP-1的分泌量显著增高(P<0.05);而1,5,10,50Gs恒磁场组细胞MCP-1的分泌量显著低于AngⅡ组(F=752.89,P<0.05)。AngⅡ1×10-6mol/L与VSMC孵育24h后,MCP-1的表达显著增加(P<0.05和对照组);而1,5,10,50Gs恒磁场组MCP-1的表达显著低于AngⅡ组(F=238.26,P<0.05)。结论:1～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用,抑制VSMC分泌与表达MCP-1。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的影响。方法　采用体外培养的第 3代HUVEC ,分为 6组 ,即对照组、AngⅡ组及AngⅡ +不同强度 (1× 10 -4T、5× 10 -4T、10× 10 -4T和 2 0× 10 -4T)恒磁场组。各组细胞于无磁场条件下培养或不同强度磁场作用 48h后收集标本 ,用MTT比色法和3 H TdR掺入法测定细胞增殖情况 ,末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL法 )和流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞凋亡情况。结果　 1μmol/LAngⅡ可抑制HUVEC增殖 ,诱导HUVEC凋亡。AngⅡ +不同强度恒磁场组细胞增殖均显著高于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,细胞凋亡显著低于AngⅡ组 (P <0 .0 5 ) ,并呈现强度依赖效应。结论　 1μmol/L AngⅡ可抑制HUVEC增殖并诱导HUVEC凋亡 ;(1～ 2 0 )× 10 -4T的恒磁场可强度依赖性拮抗AngⅡ对HUVEC的作用 ,促进HUVEC增殖并抑制HUVEC凋亡。     

川芎嗪对兔血管平滑肌细胞增殖及c-fos和c-myc基因表达的影响

目的:观察川芎嗪对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及c-fos、c-myc基因表达的影响.方法:对高脂诱导动脉粥样硬化模型兔体外培养的主动脉VSMC增殖模型应用3H-TdR掺入、流式细胞仪和cDNA探针原位杂交方法观察川芎嗪对VSMC增殖和c-fos、c-myc基因表达的影响.结果:川芎嗪可显著抑制兔VSMC增殖,使处于G1期的VSMC显著增多,S期和G2+M期的细胞减少;同时抑制VSMC中c-fos和c-myc基因的表达.结论:川芎嗪对VSMC增殖有显著抑制作用,其机制可能与抑制VSMC中c-fos和c-myc基因表达有关.     

蜂胶水提液影响血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：观察蜂胶水提液对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响。方法：实验于2005-03／2006-04在泰山医学院基础医学研究所完成。组织块法培养人脐动脉平滑肌细胞。取3～5代细胞进行实验。将培养的人脐动脉平滑肌细胞随机分为4组：①对照组：不加任何药物。②模型组：加入100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。③蜂胶组：分别加入50mg／L、100mg／L、200mg,／L的蜂胶水提液预处理2h后，再加入终浓度为100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。④氯沙坦组：加入1．5μmol／L的氯沙坦预处理2h后，再加入终浓度为100nmol／L的血管紧张素Ⅱ。同步化后，按分组分别加入处理药物孵育24h，倒置显微镜下动态观察细胞形态学的变化，同时计数细胞存活率，并用血细胞计数板计数各组细胞。采用流式细胞仪检测细胞周期，并分析细胞不同周期所占比例。采用免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原。计算增殖细胞核抗原阳性细胞百分率。增殖细胞核抗原阳性细胞百分率（％）=增殖细胞核抗原阳性细胞总数／血管平滑肌细胞总数&;#215;100％。结果：①相差倒置显微镜下观察各组细胞加药前后形态学无明显变化，细胞存活率均达95．0％以上。②模型组细胞计数高于对照组和氯沙坦组（P〈0．01），100mg／L和200mg／L蜂胶组低于模型组（P〈0．01）；50mg／L和100mg／L蜂胶组高于氯沙坦组（P〈0．01），200mg／L蜂胶组与氯沙坦组差异无显著性（P〉0．05）。③模型组G0／G1期细胞百分比低于对照组、氯沙坦组（P〈0．01）；100mg／L和200mg／L蜂胶组高于模型组（P〈0.01）150mg／L蜂胶组低于氯沙坦组（P〈0.05），100mg／L、200mg／L蜂胶组与氯沙坦组差异显著性（P〉0．05）。④模型组增殖细胞核抗原阳性率高于对照组、氯沙坦组（P〈0．01）；100mg／L和200mg／L蜂胶组低于模型组（P〈0．01），蜂胶各浓度组与氯沙坦组间差异无显著性意义。结论：血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖，氯沙坦能阻滞该作用；一定浓度的蜂胶水提液可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞的增殖，其机制可能与限制细胞由G1期向S期转变及增殖细胞核抗原的表达有关。     

心血管疾病发病机制研究：细胞外信号调节激酶在血管紧张素Ⅱ引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的：研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERKs)信号途径在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)介导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法：选用6周龄230g清洁级SD大鼠2只：本实验在长海医院中心实验室完成。实验依随机数字表分为正常对照组、AngⅡ诱导组、PD098059预处理组、U0126预处理组。每组均为3孔(n=3)。实验以通过，H-胸苷(3H-TdR)掺入率与3H-亮氨酸掺入率分别反映VSMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率；并通过给予MAPK激酶特异性抑制剂PD098059及ERKs抑制剂UOl26预处理。观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果：①AngⅡ(1&;#215;10-7^mmol／L)处理30 min VSMC 3H-胸苷掺入率和3H-亮氨酸掺入率均明显增高(增加207．2％，P&;lt;0．01)；②AngⅡ增高3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制(增高抑制率52．3％。P&;lt;0．01)和完全被U0126所抑制(增高抑制率91．7％，P&;lt;0．01)；③AngⅡ增高3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制(增加抑制率29．3％，P&;lt;0．05)和明显被U0126所抑制(增加抑制率64．6％，P&;lt;0．01)。结论：ERKs激活在血管紧张素Ⅱ导致VSMC增殖反应中具有重要作用。并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应，影响血管平滑肌细胞的增殖效应。     

高糖条件下血管内皮细胞的增殖与凋亡

目的：研究高糖对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响.方法：用高糖（10、20、30、40、50mmol/L）作用培养的人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）,第2、4、6、8、10、12、14天,用氚-标记的脱氧胸腺嘧啶核苷（tritium-labelled thymidine deoxyribose,3H-TdR）掺入法测定每分钟计数（counts per minute,cpm）,流式细胞仪检测技术测定内皮细胞的增殖指数、凋亡指数和细胞周期的变化.结果：在高糖作用下,HUVEC cpm值显著低于对照组（P＜0.001）增殖指数低于对照组（P＜0.05）,凋亡指数高于对照组（P＜0.05）呈明显的剂量依赖关系,随作用浓度增大时间延长更为明显.各高糖组G1期百分率均升高（P＜0.01）,S期百分率均降低（P＜0.05）.结论：高糖使培养的人脐静脉血管内皮细胞凋亡加速,同时抑制了内皮细胞的增殖.根据G1期细胞百分率升高,S期细胞百分率下降的结果,高糖导致部分内皮细胞可能被阻滞在G1/S转变期.     

心血管疾病发病机制研究:细胞外信号调节激酶在血管紧张素Ⅱ引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERKs)信号途径在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法:选用6周龄230g清洁级SD大鼠2只:本实验在长海医院中心实验室完成。实验依随机数字表分为正常对照组、AngⅡ诱导组、PD098059预处理组、U0126预处理组。每组均为3孔(n=3)。实验以通过3H-胸苷(3H-TdR)掺入率与3H-亮氨酸掺入率分别反映VSMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率;并通过给予MAPK激酶特异性抑制剂PD098059及ERKs抑制剂UO126预处理,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果:①AngⅡ(1×10-7mmol/L)处理30minVSMC3H-胸苷掺入率和3H-亮氨酸掺入率均明显增高(增加207.2%,P<0.01);②AngⅡ增高3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制(增高抑制率52.3%,P<0.01)和完全被UO126所抑制(增高抑制率91.7%,P<0.01);③AngⅡ增高3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制(增加抑制率29.3%,P<0.05)和明显被UO126所抑制(增加抑制率64.6%,P<0.01)。结论:ERKs激活在血管紧张素Ⅱ导致VSMC增殖反应中具有重要作用,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应,影响血管平     

胰岛素样生长因子-1对内皮细胞活力及组织因子的影响

目的 研究胰岛素样生长因子-1（Insulin like growth factor-1，IGF-1）对血管紧张素Ⅱ（Angll）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞活力及组织因子（TF）的影响和其作用机制。方法 分别用不同浓度1GF-1预处理HUVEC细胞株HUVEC-12细胞30min后加入AngⅡ10^-6moL／L孵育24h，观察细胞活力及AngⅡ 1型受体（AT1-R）mRNA变化的量效关系。选择一个作用最明显的IGF-1浓度预处理HUVEC-12细胞30min后加入AngⅡ10^-6mol／L孵育12～48h，观察细胞活力变化的时效关系。同时测定孵育24h的HUVEC裂解液TF含量、一氧化氮合酶（NOS）活性及一氧化氮（NO）浓度，并于NOS抑制剂（L-NAME）预处理细胞30min后，再加入IGF-1和Ang11，观察孵育24h细胞活力、TF、AT1-RmRNA、NOS及NO水平变化。结果 ①AngⅡ能降低HUVEC-12细胞活力，上调AT1-RmRNA表达及增加TF含量，抑制NOS活性、减少NO生成；②IGF．1能显著抑制Angll诱导的细胞活力降低和AT1-RmRNA表达增加，以0．5μg／ml浓度作用最明显，此浓度处理细胞12～48h内细胞活力恢复具有时间依赖性；③IGF-1能抑制AngⅡ诱导的TF增加及改善AngⅡ诱导的NOS活性降低，增加NO生成；④L-NAME可明显拮抗IGF-1对血管内皮的保护作用。结论 IGF-1可明显提高Ang11诱导的内皮细胞活力及抗血栓能力，其作用可能是通过激活NOS-NO通路从而抑制AT1-R实现的。     

苦参碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的:探讨苦参碱对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的抑制作用及其机制.方法:差速贴壁法体外培养新生Wistar大鼠的心肌成纤维细胞,随机分为6组:对照组,AngⅡ组,Losartan+Ang Ⅱ组,不同浓度Mat(0.25、0.5、1.0 mmol/L)+Ang Ⅱ组.MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期并检测CyclinD1、p21的表达;免疫荧光细胞化学染色法检测p27蛋白表达.结果:(1)AngⅡ可显著提高心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率增加,G1期细胞比率下降,并降低细胞p27蛋白的表达.而对CyclinD1、p21蛋白表达无影响.AT1受体拮抗剂Losartan可完全阻断AngⅡ的作用.(2)在一定范围内(0.25～1.0 mmol/L),Mat能降低AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率下降,G1期细胞比率增加,并提高心肌成纤维细胞中p27、p21蛋白水平,且呈浓度依赖性.结论:(1)AngⅡ通过AT1受体促进CFs增殖,机制可能与降低p27蛋白的表达有关.而与CyclinD1、p21无关.(2)在一定范围内,Mat可剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其作用与增强p27、p21的蛋白表达有关.     

恒磁场对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响

目的观察不同强度的恒磁场作用不同时间对培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖、凋亡及分泌功能的影响。 方法将HUVECs分别暴露于场强为5、22、86或135 mT的恒磁场中,磁场作用时间分别为8、12或24 h。以流式细胞技术分析恒磁场对HUVECs增殖及凋亡的影响;比色法测定细胞培养液中一氧化氮（NO）含量的变化;放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素-1（ET-1）及6-酮-前列环素F1α（6-keto-PGF1α）的含量。 结果①低强度磁场（5 mT）短时间（8 h）作用于HUVECs可促使其增殖,但高强度磁场（135 mT）或作用时间过长（12 h或24 h）则会抑制HUVECs的增殖;②磁场对HUVECs凋亡无影响;③低强度磁场（5 mT）短时间（8 h）作用可促使HUVECs合成释放NO和6-keto-PGF1α,但高强度磁场（135 mT）或作用时间过长（12 h或24 h）则会抑制HUVECs合成分泌NO和6-keto-PGF1α;④细胞暴露于磁场8 h时,5 mT组和22 mT组与对照组比较,HUVECs合成释放ET-1量无明显变化（P&rt;0.05）,但86 mT组和135 mT组的细胞ET-1分泌量高于对照组（P<0.01）。当磁场作用时间分别为12 和24 h时,5 mT组与对应时间点对照组比较,细胞ET-1合成释放量仍无变化（P&rt;0.05）,22 mT组、 86 mT组、135 mT组则明显低于对照组（P<0.01）。 结论低强度磁场、短时间作用可促进HUVECs的增殖及舒血管物质的合成分泌,而高强度磁场或磁场作用时间过长则抑制HUVECs增殖,增加缩血管物质的合成。     

槲皮素对高糖诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究槲皮素(quercetin)对高糖(HG)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,从而探讨其对糖尿病血管并发症的治疗作用及机制.方法:利用组织贴块法体外培养sD大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验分为正常糖组、高糖组、高糖+槲皮素不同浓度组.MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术分析各组细胞周期变化;Western-blot法检测细胞细胞周期调控蛋白CyclinD1、CyclinE的表达.结果:槲皮素呈浓度依赖性抑制高糖诱导的大鼠VSMC的增殖;明显降低细胞的S期数目百分比(P<0.05),增加G0/G1期数目百分比(P<0.05);同时,槲皮素治疗组大鼠CyclinD1、CyclinE蛋白质水平下调(P<0.05).结论:从细胞分子水平说明槲皮素可能通过降低CyclinD1、CyclinE的表达,阻止细胞进入s期,减少有丝分裂来发挥时高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用.     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及苦碟子注射液的干预研究

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的诱导作用,及苦碟子注射液的干预作用。方法:体外培养HUVECs,用AngⅡ(在10-6mol/LAngⅡ的DMEM培养液中48h)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组和苦碟子注射液组(给予AngⅡ刺激前1h先加用10%苦碟子注射液)。采用CCK-8法检测细胞存活率,以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法检测小凹蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)的表达。结果:与对照组比较,AngⅡ诱导组细胞存活率明显下降,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,Cav-1蛋白表达水平明显上调,表明AngⅡ成功诱导了HUVECs衰老,而给予苦碟子注射液干预后上述变化改善。结论:苦碟子注射液可以延缓AngⅡ诱导HUVECs衰老,其作用机制可能与下调Cav-1蛋白表达有关。     

恒磁场对人脐静脉内皮细胞增殖的影响 实验证据支持磁场效应可降低RS发生率

目的观察恒磁场(staticmagneticfield,SMF)对人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendotheliumcell,HUVEC)增殖的影响,以探讨SMF能否用于经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneoustrans-luminalcoronaryangioplasty,PTCA)及支架植入术后冠脉再狭窄(restenosis,RS)的防治。方法用含100g/L小牛血清的DMEM培养液体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304),分别在给予SMF和无SMF条件下培养,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法和流式细胞技术分析SMF对HUMEC的DNA合成及细胞周期的影响。结果对照组cpm值为1194.669±287.250,恒磁场组cpm值为1356.578±363.845,差异显著(P<0.05)。恒磁场组S期细胞高于对照组,G1期细胞较对照组降低,增殖指数PI值(S+G2M)%增高,差异显著(P<0.05)。结论SMF对HUMEC的增殖具有明显的促进作用。SMF对PTCA支架植入术后的冠脉RS可能具有防治作用。     

CGRP 在内皮祖细胞抑制 Ang Ⅱ所致 VSM Cs 增殖中的作用

【目的】探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在内皮祖细胞（EPCs）抑制血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖过程中的作用。【方法】采用ELISA检测EPCs表达CGRP ,对EPCs条件培养基采取CGRP抗体封闭和CGRP受体阻断后,观察EPCs条件培养基对 AngⅡ诱导的DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率及细胞周期的影响。【方法】EPCs能够表达并分泌高浓度的CGRP;CGRP阻断后,EPCs条件培养基对AngⅡ诱导的VSMCs DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率、细胞周期进程的抑制作用均较对照组明显降低（ P＜0．05）。【结论】EPCs通过旁分泌CGRP抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控表达对体外培养血管平滑肌细胞中P21表达的影响

目的：利用多西环素开放(Dox-on)可调控哺乳动物表达系统将AT2R基因引入体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)，并经两次抗生素的筛选建立起了受四环素类似物多西环素(Doxycicline，Dox)紧密调控、表达血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensin Ⅱ subtype 2 receptors，AT2R)基因的双重稳定VSMC细胞系，在此基础上对细胞周期素激酶抑制蛋白-P21的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法：通过常规分子生物学方法，建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞系。将该VSMC细胞系随机分为8组：①未转染对照组。②未转染+血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)组。③转染组。④转染+AngⅡ组。⑤转染+AngⅡ+Dox组。⑥转染+AngⅡ+Dox+CV-11974组。⑦转染+AngⅡ+Dox+PD123319组。⑧转染+AngⅡ+Dox+CV-11974+PD123319组。应用RT-PCR和免疫细胞化学染色技术，观察该双重稳定表达AT2R的VSMC细胞系中p21的mRNA及蛋白表达情况；采用AngⅡ及其1，2型其受体拮抗剂干预上述细胞，观测上述指标的变化。结果：加入Dox前转染组p21表达处于高水平，其mRNA及蛋白表达强度分别为118．363&;#177;19．225，0．196&;#177;0．013；AngⅡ1&;#215;10^-7moL／L干预VSMC后p21mRNA及蛋白表达强度均显著降低，分别为51．761&;#177;4．429，0．032&;#177;0．014(t=13．10，10．41，P&;lt;0．01)；在AngⅡ1&;#215;10^-7moL／L干预的同时加入Dox后，p21呈现较强表达，其mRNA及蛋白表达强度明显高于转染+AngⅡ组(t=13．76，13．53，P&;lt;0．01)；CV-11974可进一步增强p21的表达，其中p21mRNA及蛋白表达强度明显高于转染+AngⅡ组(t=9．81，34．90，P&;lt;0．01)；PD123319干预组p21表达则处于低水平，与转染+AngⅡ组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：AngⅡ干预降低VSMC中p21表达水平，这一作用是通过AT1R介导的；经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用，说明在这一生物学效应上，AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。AT2R基因经诱导后表达可以参与VSMC细胞周期进展的有效调控。     

干扰素-γ对血管紧张素II诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用及干扰素 -γ对其增殖的影响。方法　幼龄Wistar大鼠 (4周龄 ) 1 2只 ,分成对照组、血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )组、干扰素 -γ组和干扰素 -γ +AngⅡ组 ,采用组织块贴壁法培养胸主动脉平滑肌细胞 ,分别测定3H -胸腺嘧啶 (3H -TdR)、3H -亮氨酸 (3H -Leu)的掺入量和细胞周期中各期细胞构成比。结果　AngⅡ (0 1 μmol/L)作用 2 4h能使VSMCs的3H -TdR与3H -Leu的掺入量比对照组增多 ,且S期和G2 /M期细胞增多 ,细胞增殖指数增大 ;干扰素 -γ组无以上作用。与AngⅡ组相比 ,干扰素 -γ(50 0U/mL) +AngⅡ组3H -TdR、3H -Leu的掺入量明显减少 ,S期细胞构成比和细胞增殖指数亦明显减少。结论　AngⅡ对血管平滑肌细胞有促增殖作用 ,这种促增殖作用能被干扰素 -γ所拮抗     

线粒体介导血管紧张素Ⅱ诱导NOX1基因表达的增加

目的：探讨在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）NOX1基因表达增加中线粒体所起的作用。方法：体外培养大鼠主动脉VSMCs,用线粒体呼吸链的抑制剂阻断线粒体的作用,用荧光实时定量PCR检测NOX1基因表达的量。结果：AngⅡ能够诱导NOX1基因的表达增加,线粒体呼吸链的抑制剂能够抑制上述这一作用。结论：在大鼠的VSMCs中,AngⅡ诱导NOX1的增加通过线粒体呼吸的作用。