两热电厂粉尘引起大鼠肺组织损害及纤维化因子释放的比较研究

目的观察两个热电厂粉尘引起肺组织损害及纤维化因子释放等生物学反应的差异,探讨二者致尘肺患病率不同的机制。方法收集尘肺患病率不同的甲、乙两个热电厂粉尘(甲厂尘肺患病率大于乙厂尘肺患病率),对大鼠进行一次性气管内注入染尘,石英尘作为阳性对照组。染尘后10 d处死动物,检测其支气管肺泡灌洗液(BALF)中乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白和磷脂的含量,免疫组织化学检测其肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和转化生长因子-α(TGF-α)的表达。结果石英尘、甲厂和乙厂粉尘组大鼠BALF中LDH活力分别为(9.62±0.28)×103,(6.18±0.24)×103和(4.68±0.30)×103U/L,与对照组[(3.62±0.21)×103U/L]比较,差异有显著性(P<0.05),总蛋白含量分别为(0.96±0.03),(0.67±0.02)和(0.49±0.03)g/L,与对照组[(0.28±0.02)g/L]比较,差异有显著性(P<0.05),甲厂粉尘引起LDH和总蛋白含量增高均大于乙厂粉尘(P<0.05)。石英尘和甲厂粉尘组大鼠BALF中磷脂含量分别为(0.84±0.02)和(0.48±0.02)mmol/L,与对照组[(0.23±0.01)mmol/L]比较,差异有显著性(P<0.05),乙厂粉尘BALF中磷脂含量与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。3种粉尘均引起肺组织TNFα-和TGFβ-1表达增强(P<0.05),高倍镜视野中TNF-α阳性细胞数分别为(41.24±2.26),(30.33±1.86)和(16.97±1.85),(TGFβ-1)阳性细胞数分别为(58.66±5.73),(40.02±4.20)和(19.48±4.98)。其中,甲厂粉尘组大鼠肺组织TNF-α和TGFβ-1阳性表达增强均大于乙厂粉尘组大鼠(P<0.05)。仅石英尘引起TGF-α表达增强(P<0.05)。结论甲厂粉尘引起大鼠肺组织损害及纤维化因子TNF-α和TGFβ-1表达增强作用大于乙厂粉尘,这可能是二者致尘肺患病率不同的重要原因。     

热电厂锅炉灰粉尘对大鼠肺组织的早期毒效应

[目的 ]探讨某热电厂锅炉灰粉对染尘早期大鼠肺组织的毒性作用及其机制。 [方法 ]分别对石英组、灰粉尘组及对照组Wistar大鼠一次性气管内注入浓度为 5 0mg/ml的石英尘、锅炉灰粉悬浮液及生理盐水各 1ml ,染尘后 10d ,用 2 ,4 二硝基苯肼比色法、Folin 酚试剂法和钼蓝法测定支气管肺泡灌洗液 (BALF)中乳酸脱氢酶活性及总蛋白和磷酯含量 ,免疫组织化学染色法直接检测肺组织中的肿瘤坏死因子 α(TNF α)和转化生长因子 α(TGF α)的表达。 [结果 ]与生理盐水组相比 ,石英组和锅炉灰粉组大鼠BALF乳酸脱氢酶活性增高和总蛋白明显增加 (P <0 0 1) ,且石英组大于锅炉灰粉组 (P <0 0 1) ;锅炉灰粉组磷脂含量未见增高 (P >0 0 5 ) ,且明显低于石英组。生理盐水组未见TNF α表达 ,石英组和锅炉灰粉组均引起TNF α阳性表达 [(4 1 2 4± 3 2 6) %、(16 97± 1 85 ) % ] (P <0 0 1)。生理盐水组和锅炉灰粉组偶见肺泡上皮细胞表达TGF α[(2 19± 0 2 2 ) % ,(2 75± 0 2 7) % ] ,而石英组TGF α呈表达增多 (79 5 7± 5 0 9) % (P <0 0 1)。 [结论 ]染尘大鼠早期 ,锅炉灰粉能够引起大鼠肺组织损害 ,但毒性明显弱于石英尘。     

矽肺模型大鼠血清中细胞因子消长规律的探讨

目的检测矽肺模型大鼠血清中细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的规律,探讨细胞因子在肺纤维化过程中的作用。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分成对照组和实验组,每组30只;实验组经气管灌注1 ml游离二氧化硅粉尘悬液(100 mg/ml),对照组同法灌注等量生理盐水;分别于第1、7、14、21、28天,各组6只大鼠心脏取血,处死,并取肺组织。肺组织行HE染色,观察肺部炎症、纤维化等病理变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的含量。结果染尘大鼠血清IL-1含量均高于对照组,但不同时间,差别不明显;染尘第1、7、14天的IL-8含量均高于对照组,随着染尘时间增加,IL-8含量则渐回归正常;染尘第1、7天;TNF-α含量低于对照组;第14、21、28天TNF-α含量则高于对照组(P<0.05),染尘不同时间TNF-α含量也不同(F=30.724,P=0.001);血清TGF-β的波动则较明显,如染尘第1、7天其含量高于对照组,第14天则低于对照组,第21、28天又高于对照组(P<0.05),染尘不同时间的TGF-β含量也不同,差异具有统计学意义(F=33.236,P=0.001)。结论细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β在染尘不同时间血清中的含量不同,其分泌的变化可能与染尘大鼠肺纤维化发生、发展有关。     

转化生长因子-β及肿瘤坏死因子基因多态性与煤工尘肺的关系

目的 探讨转化生长因子-β(TGF-B)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因多态性与煤工尘肺发生的关系.方法 选择234名汉族男性煤工尘肺患者为病例组,440名接触煤尘无尘肺及其他肺部疾病者为对照组,采集外周静脉血,采用聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TGF-β(+869)位点和TNF-α(-238)位点基因多态性.结果 煤工尘肺病例组TGF-β(+869)位点基因型、等位基因分布频率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).TNF-α(-238)位点为G/A基因型者患Ⅰ期煤工尘肺的危险度是G/G基因型的1.74倍(95%CI:1.01～3.01,P<0.05),调整年龄、接尘工龄和工种后为1.58倍(95%CI:0.89～2.78,P>0.05).I期煤工尘肺患者G、A等位基因频率分别为93.10%和6.90%,对照组G、A等位基因频率分别为95.80%和4.20%,两组比较,X2=3.828,P=0.05.结论 TNF-α(-238)位点和TGF-β(+869)位点的多态性对煤工尘肺的发生不起主要作用.     

大容量肺灌洗对尘肺血清肿瘤坏死因子α和转化生长因子β1影响

目的 评价大容量肺灌洗(MWLL)对尘肺患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1( TGF-β1)的影响.方法 选取本院2009年1月至2010年12月新诊断的尘肺病患者,将自愿加入并签署知情同意书者分为灌洗组和对照组各20例,按照性别、年龄、粉尘性质、接尘量、吸烟指数等配对,观察治疗前后血清TNF-α、TGF-β1水平及肺功能和临床症状的改变.结果 灌洗组经MWLL后与灌洗前比较,TNF-α、TGF-β1水平明显降低(P＜0.05和P＜0.01),且两者均显著低于治疗后的对照组(P＜0.05).MWLL后灌洗组肺功能无明显改变,但症状较对照组改善明显(P＜0.05).结论 对致纤维化因子的机械清除是MWLL治疗尘肺病的机制之一.     

前列腺素E1联合血必净对肺间质纤维化大鼠转化生长因子β-1的影响

目的 探讨前列腺素E1联合血必净对急性肺间质纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法 采用一次性气管内注射博来霉素(1 ml/kg)的方法复制大鼠肺间质纤维化模型.将Wistar大鼠108只大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲泼尼龙治疗组、血必净治疗组、前列腺素E1治疗组、联合用药组(前列腺素E1联合血必净),每组18只.除正常对照组外,对各组造模大鼠分别予不同处理后第7、14、28天处死.免疫组化染色检测肺组织TGF-β1表达,EusA方法测定模型大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α浓度.结果 联合用药组大鼠肺组织各时点TGF-β1表达的巨噬细胞个数均明显低于模型组、血必净组、甲泼尼龙组、前列腺素E1组,差异均有统计学意义(P＜0.05).第7天时联合用药组BALF中TNF-α浓度明显低于模型组、甲泼尼龙组和前列腺素E1组,差异有统计学意义(P＜0.05);第14天时,联合用药组BALF中TNF-α浓度明显低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);第28天时,前列腺素E1组和联合用药组TNF-α水平低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 前列腺素E1联合血必净可明显抑制急性肺间质纤维化模型大鼠肺组织TGF-β1表达,减轻肺泡炎性反应.     

橙皮素对矽尘暴露大鼠肺组织中细胞因子的影响

目的探讨橙皮素干预对二氧化硅染尘大鼠肺组织损伤的拮抗作用及其对细胞因子的影响。方法将54只健康SPF级Wistar雄性大鼠随机分为6组,分别为阴性对照(生理盐水)组、二氧化硅(50 mg/ml)模型组、吡非尼酮(100 mg/kg)对照组和低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高剂量(400 mg/kg)橙皮素治疗组,每组9只。二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和不同剂量橙皮素治疗组均给予1 ml二氧化硅溶液(50 mg/ml)一次性经气管灌注造模;24 h后,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组采用灌胃方式进行干预,染毒容量为10 ml/kg,每天1次,连续28 d;阴性对照组和二氧化硅模型组均给予等容积生理盐水。检测大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-4、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)的水平,并进行肺组织肺泡炎及纤维化评分。结果与阴性对照组比较,二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着橙皮素染毒剂量的升高,大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均呈下降趋势。与二氧化硅模型组比较,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠的肺泡炎和肺纤维化评分均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与阴性对照组比较,二氧化硅模型组、吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着橙皮素染毒剂量的升高,大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β的水平均呈下降趋势,TNF-α、IL-4、IL-10的水平均呈先上升后下降的趋势,而IFN-γ的水平呈上升趋势。与二氧化硅模型组比较,吡非尼酮对照组和各剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α、IL-4的水平均降低,除低剂量橙皮素治疗组IL-1β和吡非尼酮对照组IL-4外,差异均有统计学意义(P0.05);而中、高剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中IL-10的水平和高剂量橙皮素治疗组大鼠肺组织中的IFN-γ水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论橙皮素可能通过抑制促炎因子的释放、促进抗炎因子的分泌从而减轻二氧化硅对肺组织的损伤作用,进而抑制矽肺纤维化的形成和发展。     

矽肺患者血清转化生长因子-β1和肿瘤坏死因子-α的变化

目的 观察矽尘接触者和矽肺患者及观察对象血清转化生长因子-β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,探讨TGF-β1、TNF-α在矽肺发生发展中的作用.方法 选择100名不接触粉尘的对照人群(对照组),200名接触矽尘1年以上的接尘工人(接尘组),32名矽尘作业观察对象(0+)(观察对照组)及130例矽肺患者(矽肺组),采用ELISA法检测其血清TGF-β1和TNF-α水平.结果 与对照组[(6.90±2.24)pg/ml]比较,接尘组、观察对象组和矽肺组TNF-α水平[(47.86±16.52)、(109.11±31.08)、(216.35±51.03)pg/ml]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与接尘组比较,观察对象组和矽肺组TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与对照组[(23.28±12.24)pg/ml]和接尘组[(29.31±14.52)pg/ml]比较,观察对象组和矽肺组TGF-β1水平[(46.16±17.35)、(58.36±31.94)pg/ml]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 TGF-β1和TNF-α在矽肺发生发展中有重要作用,检测外周血TGF-β1和TNF-α水平可应用于职业健康监护及矽肺的早期诊断.     

坎地沙坦对染尘大鼠肺纤维化的影响

目的 观察坎地沙坦对染尘大鼠矽肺形成过程中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肺纤维化及细胞因子的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为模型组、干预组、对照组,每组32只.干预组每天灌胃坎地沙坦10 mg/kg,模型组和对照组同法给予等量生理盐水;灌胃1周后,模型组和干预组水合氯醛腹腔注射麻醉,将0.5 ml矽尘混悬液(浓度为50 mg/ml)缓慢注入气管,对照组大鼠气管内注入0.5 ml灭菌生理盐水.染尘后第2天,各组大鼠恢复先前的处理后第3、7、14、28天各处死大鼠8只.计算肺脏系数并进行肺组织HE及Masson染色观察;用免疫组化方法测定肺组织血管紧张素转化酶(ACE)表达水平;用ELISA测定肺泡灌洗液中转化生长因子β1(TGF-β1)及AngⅡ含量.结果 干预组大鼠第3、7、14、28天肺泡炎症和纤维化程度均较模型组明显减轻,干预组大鼠肺脏系数明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,模型组和干预组肺泡灌洗液中TGF-β1和Ang Ⅱ含量均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,干预组肺泡灌洗液中TGF-β1和Ang Ⅱ含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).模型组和干预组肺组织ACE表达明显高于对照组,干预组肺组织ACE表达明显低于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 早期使用坎地沙坦干预能够明显减轻染尘大鼠的肺组织炎症和肺纤维化程度,降低肺泡灌洗液中的TGF-β1和AngⅡ含量,下调肺组织中ACE表达.     

体外大鼠肺泡巨噬细胞染尘模型时间探讨

采用肺泡灌洗法获取大鼠肺泡巨噬细胞,体外染尘培养5 h、10 h、20 h、22 h,收集细胞上清液采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测TNF-α、TGF-βⅠ水平。结果显示,随着染尘时间的增加,TNF-α、TGF-βⅠ的表达明显增加,且在20 h达高峰,22 h下降。各组不同时间点方差分析,差异有统计学意义(P0.05)。提示体外巨噬细胞染尘20 h为最佳细胞染尘模型的时间。