胶质瘤中p53基因突变p16基因缺失细胞增殖和凋亡及与临床病理特征的相关性研究

目的探讨P53基因突变、p16基因缺失、肿瘤细胞增殖活性(PCMNA)和凋亡在胶质瘤发生发展中的作用、相互关系及其与临床病理特征的相关性。方法应用LSAB免疫组化法检测96例不同类型胶质瘤中P53,P16蛋白表达及其肿瘤细胞增殖活性(PCNA);应用非同位素PCR-SSCP技术检测p53基因5-8外显子突变。应用PCR-DNA测序技术检测SSCP阳性标本中p53基因5-8外显子碱基突变谱和氨基酸顺序改变。应用TUNEL技术检测肿瘤细胞中凋亡的改变。结果结果显示96例不同类型胶质瘤中P53蛋白阳性表达率为41.7%(40/96),其中Ⅱ级肿瘤阳性率为27.3%(13/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率分别为62.5%(20/32)、63.6%(7/11),低分级与高分级胶质瘤中P53蛋白阳性表达率有显著性差异(χ2=4.88,P<0.05)。SSCP检测结果显示34/96(35.4%)例胶质瘤出现p53基因异常移动的单链DNA电泳带,主要分布在5,7,8外显子。在40例P53蛋白阳性的病例中有32例呈现该基因的单链构象多态性改变,两种方法检测的符合率基本一致。DNA序列分析显示,17例SSCP有异常电泳带的标本中均存在p53基因突变,而且主要发生在5-8外显子,突变类型多数为点突变或碱基缺失,突变位点多分布在第5外显子130-175号密码子之间,第8外显子270-291密码子之间,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p16蛋白的表达缺失率为60.4%(58/96),其中Ⅱ级肿瘤为39.6%(21/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤为81.2%(26/32)、100%(11/11),在高级别胶质瘤中P16表达缺失率均显著高于低级别的肿瘤。复合表达研究显示,p53蛋白的表达与p16缺失之间存在负相关性(P<0.05)。96例胶质瘤细胞增殖活性及凋亡检测显示,PCNA标记指数(PCNALabelIndex,PCNALI)随着肿瘤分级的升高而递增,而凋亡指数(Apoptosis Index,AI)随着肿瘤分级的升高而递减,PCNALI/AI之比随着肿瘤分级的升高而递增。结论p53异常表达和突变是胶质瘤中最常见的基因改变,与胶质瘤的组织学分级呈显著正相关;p53突变更常位于5、7、8外显子,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p53基因突变可以通过p53蛋白的表达来间接反映,p53基因的异常表达及突变与胶质瘤的发生和进展密切相关。p16的缺失更多见于高级别的胶质瘤,与胶质瘤的发生和进展密切相关。胶质瘤发生、发展与PCNA的高表达和细胞凋亡的抑制密切相关,PCNALI/AI比PCNALI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。p53基因突变、p16基因表达的缺失及PCNALI的增高和细胞凋亡的抑制在胶质瘤发生、发展中可能起着重要协同作用并与肿瘤的分化和异常增生显著相关,而胶质瘤细胞凋亡的发生受p53、p16基因的调控,p53及p16抑癌基因的失活,是胶质瘤逃逸凋亡的重要原因之一。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

目的：检测皮肤癌p53基因5－8外显子的突变频率,比较变性和梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）检测p53基因突变的敏感性,方法：分别采用DGGE和SSCP,对40例皮肤癌患者手术切除组织的p53基因5－8外显子进行突变检测。结果：皮肤癌p53基因5－8外显子的总突变率为35％,其中鳞状细胞癌（SCC）的突变率为36％,基底细胞癌（BCC）为33％,采用GGE和SSCP检测的突变率分别为33％和25％。结论35％的皮肤癌组织存在p53基因5－8外显子突变。GGE检测p53基因突变的敏感性高于SSCP。DGGE结合SSCP有助于提高突变检出率。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

肺癌p53基因突变与蛋白表达关系的研究

目的 以测序结果为标准,探讨免疫组织化学和聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）两种方法用于检测肺癌ｐ５３基因突变的敏感性及优缺点。方法 用免疫组织化学,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ产物直接测序检查３０例肺癌标本的Ｐ５３蛋白和基因改变,结果 ３０例肺癌标本经测序共检出２２例突变,突变位于第５外显子８例（３６％）,位于第６外显子２例（９％）,位于第７外显子７例（３２％）,位于第８外显子５例（２     

p53基因在涎腺多形性腺瘤发生中的基因序列突变

目的 检测腺多形性腺瘤ｐ５３基因第７、８外显子的碱基突变,探讨该瘤的发生及生物学特征。方法 从手术标本中选择涎腺多形性腺瘤１４例。采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析技术及ＤＮＡ核酸序列测定方法对涎腺多形性腺瘤７例第７外显子异常者。３例第８外显子阳性者。５例第７外显子ＳＳＣＰ（其中３例第８外显子ＳＳＣＰ也呈阳性）的肿瘤进行核酸序列测定。结果 发现ＳＳＣＰ阳性的肿瘤相应的外显子碱基序列已发生变化。第     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎悸组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌在存在状态基因突变及Ｒｂ基因的缺     

前列腺癌p53基因的点突变

目的 检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因突变的发生率,探讨共与前列腺癌发生的。方法 多聚酶链反应－限制性片段长度多态性方法,检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因第４号外显子７２位密码子的点突变。结果 前列腺癌ＤＮＡ样本中检出４号外显子Ｐ５３基因点突变４％,其中杂合性估变３６％,纯合性突变８％,对照组前列腺良笥增生未见Ｐ５３基因变化。结论 前列腺癌发生与５３基因突变有一定关系,应用Ｐ矣Ｂｓｔｕ１酶切多态性分析,对     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因ｐ５３基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染系统,检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第５￣８外显子的突变情况。结果：６０例喉鳞癌组织中,发生４７例第５￣８外显子迁移率异常的ＳＳＣＰ区带,总的突变率为７８．３％。ＳＳＣＰ阳性病例在外显子５、６、７、８中的突变率由高到低依次为Ｅｘｏｎ５、Ｅｘｏｎ７、Ｅｘｏｎ８、Ｅｘｏｎ６。提示第     

人食管癌及其癌旁组织p53基因外显子4—8的突变分析

目的：了解抑癌基因p53在人食管癌及其癌旁组织中的突变,尤其是p53外显子4的变异。方法：采用PCR-SSCP和DNA测序等方法对24例人食管鳞状细胞癌术后标本进行了p53基因外显子4-8的突变分析。结果：在食管癌组织及癌旁组织幸免被检测的15列标本中,分别有40.0%(6/15)和46.7%(7/15)发生了突变,两者差异无显著性,食管癌组织标本中有50%（9/18）的突变发生在外显子4。另外,有4例在食管癌组织及癌旁组织中同时检测出p53基因突变,年龄,性别,术前治疗（放射治疗,化学药物治疗）,肿瘤的部位等对癌组织的突变率并不产生影响。结论：在人食管癌及其癌旁组织中,p53基因的突变几率差异无显著性,年龄,性子4的突变可能产生了尤为重要的作用。     

P53 GENE MUTATIONS IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER DETECTED BY POLYMERASE CHAIN REACTION SINGLE-STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM ANALYSIS

Mutations of the p53 tumor suppressor gone are the most frequent genetic akerations detected in human lung cancer. To assess the pathogenic significance of p53 gone alterations in Chlnege non-small cell lung cancer (NSCLC), 74 paired samples of primary lung cancer and normal lung tissue far away from the cancer were analyzed for mutations of the p53 gene(exons 5-8) using exon-specific PCR, single-gtrand conformation polymorphimax (PCR-SSCP). p53 mutations were observed in 55.4% (41/74) of the samples.No linkaiges were detected between the incidence of p53 mutations and histological type, lymph node metastasis, age or sex. Significant association between p53 mutations and degree of differentiation in edenotmremmnas, not in squamous cell carcinomas, was observed, The frequency of p53 mutations in(65. 3%) was higher than in nonsmokers (33. 3%) and reached stafisrical significance. We also found p53 mutations in 6/7 samples which had tissue invasion and distant metastasis. These results suggest that smcking could be an important factor in lung carcinogenesis, p53 mutation is a worse prognosis indicator in ade and nocarcinomas and related to high aggressive behavior of human lung cancer.     

应用非同位素PCR-SSCP方法检测乳腺癌p53基因点突变

目的　探讨乳腺癌组织中p53基因点突变。方法应用非同位素PCR -SSCP技术检测 4 8例石蜡包埋乳癌组织中p53基因点突变。结果　 4 8例乳腺癌中 2 0例出现异常电泳 ,表明这些病例相应DNA片段中发生了点突变 ,其中 8例位于第 5- 6外显子 ,9例位于第 7外显子 ,3例位于第 8外显子。免疫组化检测突变p53蛋白的表达 2 5例为阳性 ( 52 % ) ,其中 5例SSCP未发现基因突变 ,突变可能发生在所检测的基因片点以外。结论　非同位素PCR -SSCP是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法 ,特别适用于大量标本基因点突变的筛选 ;p53基因点突变与突变型蛋白表达呈相关关系     

应用PCR-SSCP银染法检测肺癌p53基因的突变

目的：探索并建立一套适用于临床检测的ｐ５３基因突变的分析方法，探讨肺癌发生发展与ｐ５３基因突变的关系，为临床诊断和治疗提供分子依据。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对２２例肺癌患者ｐ５３基因的第６、第７外显子进行分析。结果：全部患者组织标本经ＰＣＲ扩增，均获得特异的ｐ５３基因扩增产物，进一步对第６第７外显子应用ＳＳＣＰ进行突变分析，不同组织类型肺癌的ｐ５３基因突变率各不相同，第７外显子的突变率（２７．３％）高于第６外显子（９．１％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是适于肺癌患者ｐ５３基因突变分析的简捷、快速而可靠的检测方法，通过进一步研究，将为肺癌的早期诊断、鉴别诊断和预后判断提供有价值的分子指标。     

p53和ras基因突变及HPV感染与喉鳞癌的关系

①目的　探讨人乳头瘤病毒 16 ,18型 (HPV16 ,18)感染 ,抑癌基因p5 3和癌基因ras突变与喉鳞癌的关系 ,并初步分析 3种致癌因素的相互关系。②方法　应用聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术 ,检测 40例喉鳞状细胞癌组织中 p5 3基因第 5 ,7外显子及ras基因 (N ras ,K ras,H ras)第 12密码子的突变情况 ,同时用PCR技术检测 40例标本中HPV16 ,18的感染情况。③结果　 40例标本检出HPV16阳性标本 14例 ,HPV18阳性标本 4例。 4例标本 p5 3基因第 5外显子第 143密码子发生突变 ,其中 1例HPV16阳性 ,p5 3基因第 7外显子未发现突变。 9例标本ras基因发生突变 (N ras 6例 ,K ras 2例 ,H ras 1例 ) ,其中 2例HPV16阳性 ,但未见 p5 3与ras基因同时发生突变者。HPV阳性和阴性标本中p5 3基因突变率、ras基因突变率的差异均无显著性(χ2 =0 .10 1,1.392 ,P >0 .0 5 )。④结论　HPV感染、p5 3和ras基因突变与喉鳞癌的发生密切相关 ,三者之间的关系尚待进一步探讨。     

中国南部人群家族性及早发性乳腺癌患者p53基因胚系突变分析

目的：分析p53基因在中国南方部分地区家族性和早发性乳腺癌中的突变位点及特征。方法：以中国南 方地区150例家族性和早发性乳腺癌患者为研究对象,提取静脉血基因组DNA,对p53基因的全部编码序列及外显子 与内含子拼接区进行扩增。 采用变性高效液相色谱进行预筛后,应用DNA测序分析和证实基因突变的结果。结果： 150例患者中,9例的p53编码区域共发现6种不同的p53变异,其中869_888ins20(插入突变)为新发现的致病性突变, 643_660del18(缺失突变)为已报道的致病性突变,91G>A,215C>G,537T>G和743G>A为已报道有致病意义的错义突 变位点。此外,还发现了第4外显子区域的同义突变141G>A及第3内含子区域的缺失突变IVS3+54_70del16和9个基因多 态性位点。家族性及早发性乳腺癌的p53总突变率为6.00%,其中家族性乳腺癌的p53突变率约为6.81%。早发性乳腺癌 突变率约为6.25%。结论：中国南部人群家族性乳腺癌患者的p53基因胚系总突变率高于国内外文献报道,首次发现 的插入突变869_888ins20的致病意义有待今后的功能学验证。缺失突变643_660del18丰富了国人p53基因突变数据库, 有可能是中国乳腺癌人群的特有突变。     

人脑原发性肿瘤中p53基因的PCR-SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤（３７．５％），１例为脑膜瘤（７．７％），且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

人脑原发性肿瘤中p53基因PCR—SSCP分析

为探讨ｐ５３基因突变与人脑原发性肿瘤发生的关系，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法，对３７例人脑原发性肿瘤中ｐ５３基因外显子５到外显子７之间的ＤＮＡ序列进行了突变分析。结果发现有１０例存在突变，其中９例为胶质瘤，１例为脑膜瘤，且肿瘤恶性程度越高突变频率越高。以上结果表明，人脑原发性肿瘤的发生与ｐ５３基因的突变密切相关，ｐ５３基因突变有可能是人脑原发性肿瘤尤其是胶质瘤发生的原因之一。     

Abnormal Change of p53 Gene in Gastric and PrecancerousLesions and APC Gene Deletion in Gastric Carcinoma and Near Tissues

Hypothesisoftumorsuppressorgenehadbeenproposedtwentyyearsag0['],butthefirstsuppressorgeneRb(retinoblas-toma)wasseparatedandcloneduntill986[z].Suppressorgene,includingp53andAPCgenes,n0whasbecomenew"hot"subjectintheareaoftumorresearch.p53genemutation,deleti0nandAPCgenedele-tionoccurredinsomehumantumorsandtheremaybesomerelationbetweenAPCgeneandp53genedeletion[3-7]-Inthispa-per,PCR-RFLP,PCR-SSCPmeth0dswereusedtoanalyzep53,APCgenealterationsingastriccancerandprecancerouslesi0nsinordertoin…     

抑癌基因p53第5～8外显子突变与喉鳞癌关系的研究

为探讨抑癌基因p53基因突变与喉鳞癌之间的关系,应用聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR－SSCP）银染系统,检测60例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因p53基因第5～8外显子的突变情况。结果：60例喉鳞癌组织中,发生47例第5～8外显子迁移率异常的SSCP区带,总的突变率为78.3%。SSCP阳性病例在外显子5、6、7、8中的突变率由高到低依次为Exon 5、Exon 7、Exon 8、Exon 6。提示第5、7外显子有可能是喉鳞癌发病相关的致癌因素选择性攻击的关键部位。     

喉癌p53基因点突变研究

目的　探讨喉癌组织 p5 3基因点突变的频率、特征。方法　选用 P5 3蛋白表达阳性的喉癌标本2 2例 ,正常喉组织 2例 ,采用聚合酶链反应 -限制性内切酶片段长度多态性 (PCR- RFL P)、单链构象多态性 (SSCP)及 DNA直接测序法分析 p5 3基因第 7外显子第 2 49位密码子的点突变。结果　在 2 2例喉癌中有 3例发生突变 ,分别位于 2 48、2 5 0及 2 5 4密码子 ,表现为碱基 C的丢失和 A→ T颠换 ,但无 2 49密码子突变。结论　在喉癌中 p5 3基因第 7外显子的第 2 49位密码子的突变可能并不常见     

周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液p53基因突变及其临床意义

目的:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53突变及其作为分子诊断标记的可行性.方法:DHPLC分析46例支气管肺泡灌洗液标本(33例肺癌,13例对照)p53基因Exon5～9突变.结果:肺癌组p53突变检出率36.36%(15/33),对照组未检出一例,两组p53突变率比较具有明显差异(P＜0.05);p53突变作为肺癌诊断分子标记,灵敏度36.36%(12/33),特异度100%(13/13).结论:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53基因热点突变可以作为周围型肺癌诊断的分子标记,但在支气管肺泡灌洗液标本检测单一基因突变不能满足临床诊断的需要.