9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对肺癌细胞凋亡的协同作用

目的探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株(H460和H292)的生长抑制和诱导凋亡的协同作用。方法实验分为9-cis-RA 1、5、10、20μmol/L组;8-cl-cAMP 5、10、20、50μmol/L组;9-cis-RA(5、10μmol/L) 8-cl-cAMP(10μmol/L)联合组和阴性对照组。以台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,以Hoechst33258荧光染色法、DNA凝胶电泳法和流式细胞术等检测细胞凋亡。结果与阴性对照组比较,9-cis-RA明显抑制H460细胞生长,具有时间和浓度依赖性,并诱导凋亡(P<0.01),5μmol/L 9-cis-RA诱导48 h凋亡率最高;同样条件下,H292细胞对9-cis-RA不敏感。8-cl-cAMP抑制H460和H292生长,有浓度依赖性;与相同剂量单药组比较,联合用药组H460细胞和H292细胞的生长抑制率和凋亡率均显著提高(P<0.01)。结论人NSCLC细胞株H460和H292对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA明显抑制H460细胞生长,诱导凋亡,H292则表现耐药;9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和诱导凋亡具有协同作用,并可部分逆转H292细胞对9-cis-RA的耐药性。     

土槿乙酸联合9-顺式维甲酸促进白血病细胞凋亡的机制研究

目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸 (PLAB) 联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸 (9-cis RA) 促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。 方法 应用透射电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳分析 H-60 细胞凋亡,RT-PCR 检测 HL-60 细胞 Cyclin D1 和 CDK4 mRNA 表达。 结果HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现 DNA Ladder,Cyclin D1 及 CDK4 mRNA 的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大 (P＜0.05)。结论PLAB 联合 9-cis RA 抑制 HL-60 细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关。     

8-氯腺苷对Molt-4细胞的生长抑制和凋亡诱导作用研究

目的:研究8-氯腺苷(8-Choroadenosine,8-Cl-Ado)对人T淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4的生长和凋亡的作用,以及对相关基因和CREB结合活性的影响。方法:以不同浓度8-Cl-Ado处理体外培养的Molt-4细胞,采用MTT法测定药物半数抑制浓度(IC_(50)),用光学显微镜、流式细胞仪和琼脂糖电泳分析细胞凋亡,分别用斑点杂交法和免疫组化法观察c-mye和bcl-2的表达情况,用凝胶阻滞电泳检测CREB与DNA结合活性变化。结果:8-Cl-Ado可显著抑制Molt-4细胞的生长,IC_(50)为0.6μmol/L。8-Cl-Ado可诱导Molt-4细胞凋亡,细胞出现典型的凋亡形态学变化,流式细胞分析G_1期细胞数增加,S期细胞数减少并有亚G_1峰,琼脂糖电泳可见DNALadder出现,此外观察到c-myc基因表达瞬时增强和CREB结合活性的增强,但bcl-2基因表达无明显变化。结论:8-Cl-Ado能抑制Molt-4细胞的生长和诱导其凋亡,此生物学效应可能与c-myc瞬时表达增强及CREB结合活性增强有关。该药对molt-4细胞bcl-2基因表达无影响。     

维甲酸和干扰素联合应用诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究维甲酸和干扰素联合应用对膀胱癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其可能分子机制。方法 :应用全反式维甲酸 (ATRA)和 9-顺式维甲酸 (9cRA)联合干扰素α 2a(IFNα 2a)作用于 4组膀胱癌细胞 ,运用TUN NEL、FCM、RT PCR及Western等技术观察维甲酸、干扰素单独或联合应用对不同膀胱癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡的影响以及核维甲酸类受体、STAT1蛋白等方面的改变。结果 :ATRA和 9cRA对所有膀胱癌细胞的抑制生长和诱导凋亡作用均不明显 ,而IFNα 2a能增强ATRA和 9cRA对膀胱癌的这种作用 ,且联合应用ATRA和IFNα 2a能诱导膀胱癌细胞RARβ和Stat1的表达。结论 :IFNα 2a能协同ATRA和9cRA对膀胱癌细胞生长抑制和凋亡诱导效应 ,上调STAT1基因表达可能是其主要分子机制 ,实验显示了维甲酸和干扰素联合应用治疗膀胱移行细胞癌的协同作用。     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响

目的研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响.方法以1和5μmol/L 9-cis-RA处理肿瘤细胞株,分别于0、12、24、36、48、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化,应用流式细胞术分析细胞周期分布、Bcl-2表达和凋亡细胞数.结果9-cis-RA可抑制肺鳞癌细胞生长;用药后细胞分化征明显,可见凋亡细胞.流式细胞计数显示,用药组细胞G0/G1百分率明显升高,S期细胞百分率下降,细胞凋亡率增加,Bcl-2的表达下降.结论9-cis-RA能抑制人肺鳞癌L78细胞、A2细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡.     

赫赛汀和9-顺式视黄酸联合用药对HER2阳性荷瘤鼠乳腺癌细胞的抑制效应

目的 探讨赫赛汀和9-顺式视黄酸单独和联合用药对HER2阳性乳腺癌细胞周期进程的体内协同抑制效应及其分子机制.方法 将处于对数生长期的MCF-7HER2细胞皮下注射到BALB/c裸鼠体内,用赫赛汀和9-顺式视黄酸分别单独和联合处理裸鼠移植瘤模型20d,测量各组裸鼠移植瘤的体积大小.利用免疫印记法检测移植瘤细胞HER2、P27、Cyclin E和CDK2蛋白的表达变化.结果 赫赛汀和9-顺式视黄酸联合作用组较对照和单独作用组能显著减小HER2阳性乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的体积,二者联合运用还能在体内显著改变荷瘤鼠癌细胞HER2、P27、Cyclin E和CDK2的表达.结论 联合应用赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体内通过对细胞周期相关蛋白的表达进行调控从而达到协同抑制HER2阳性乳腺癌细胞的作用.     

Herceptin和9-顺式视黄酸对MDA-MB-453乳腺癌细胞协同抑制作用的研究

目的 探讨Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药对MDA-MB-453乳腺癌细胞的协同抑制效应.方法 用Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合处理MDA-MB-453细胞24～72 h,用MTT法观察其对乳腺癌细胞的增殖抑制效应,通过流式细胞仪法检测乳腺癌细胞周期相的分布,用TUNEL法检测细胞凋亡的情况.结果 Herceptin和9-顺式视黄酸联合作用组较对照和单独作用组能够显著抑制HER2/neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性,并将其细胞周期进程阻遏于G0/G1期,同时还能有效诱导其发生凋亡.结论 Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药可有效协同抑制HER2/neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性.     

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体　（ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ　ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后,两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高,其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化。探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化。结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关。     

9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌CyclinD1、Cdk4表达的影响

目的:研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性。方法:采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化。结果:9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P<0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P<0.01)。结论:9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关。     

9—顺—维甲酸对非小细胞肺癌CyclinDl、Cdk4表达的影响

目的研究9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌A549、PG、SPC-A1的细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响,探讨其抑制非小细胞肺癌生长与影响CyclinD1、Cdk4表达的相关性.方法采用半定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子CyclinD1、Cdk4表达的变化.结果9-顺-维甲酸既可以降低PG、SPC-A1的CyclinD1表达(P＜0.01),又可以降低PG、A549的Cdk4表达(P＜0.01).结论9-顺-维甲酸对非小细胞肺癌生长的抑制作用,与其调控细胞周期因子CyclinD1、Cdk4的表达密切相关.     

Osimertinib联合二甲双胍对非小细胞肺癌PC 9/GR细胞的协同效应

目的 研究Osimertinib联合二甲双胍对吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌PC 9/GR细胞的生长抑制效应及其可能机制.方法 Osimertinib和二甲双胍单药或联合作用于PC 9/GR细胞后,应用MTT法检测不同药物处理组处理后对PC 9/GR细胞的抑制率影响;荧光染色法观察和流式细胞术检测Osimertinib和二甲双胍单药或联合诱导细胞凋亡的变化;Western blot法检测各药物处理组细胞磷酸化及非磷酸化的AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和70 ku核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)蛋白的表达水平.结果 Osimertinib和二甲双胍双药联合作用可显著抑制PC 9/GR细胞的增殖,作用强于各单药(P<0.05),表现为协同作用(联合指数<1);双药联合时相较于单药表现出更强的诱导细胞凋亡的作用;二甲双胍可上调细胞内p-AMPK蛋白的表达,Osimertinib和二甲双胍均可下调p-P70S6K蛋白,且双药联合较单药下调p-P70S6K蛋白水平更为显著.结论 Osimertinib和二甲双胍联合用药对PC 9/GR细胞的增殖有显著抑制作用并可以促进其凋亡的发生,具有协同作用.     

熊果酸对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长抑制及促凋亡作用研究

目的:研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的影响并探讨其机制。方法:通过右侧腹股沟区皮下接种人非小细胞肺癌A549细胞的方法建立荷肺癌裸小鼠模型,分别腹腔注射给予不同剂量UA(5、10、20mg/(kg·d))和顺铂(2mg/(kg·d))进行干预治疗,疗程14d。观察裸小鼠生存状态和肿瘤特征;称量瘤重并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL染色法观察肿瘤组织细胞凋亡状况,IHC法检测肿瘤组织中Caspase-3、Bax、bcl-2蛋白表达并进行半定量分析。结果:与模型组比较发现:经UA治疗14d能够明显改善荷肺癌裸小鼠饮食状况和精神状态,瘤体减小、活动度和硬度降低;较模型组,UA治疗组移植瘤组织呈现细胞皱缩、片状坏死等病变,凋亡细胞数量显著增多,瘤体重量显著减轻、抑瘤率显著升高;移植瘤组织中Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达显著升高、bcl-2蛋白表达显著降低,Bax/bcl-2比值显著升高;UA上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:UA具有抑制荷肺癌裸小鼠移植瘤生长的作用,作用机制可能与UA调节凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、bcl-2)表达而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

赖氨大黄酸和紫杉醇对肺癌细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用

目的:研究赖氨大黄酸（RHL）、紫杉醇单独和两者联合对人肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:选取处于对数生长期肺癌细胞株H460,随机分为对照组(不加药物)、紫杉醇组(1 μmol•L^-1紫杉醇)、RHL组(100 μmol•L^-1 RHL)和紫杉醇联合RHL组,并设空白组。采用MTT法和流式细胞术分别检测各组处理后48 h的细胞增殖率和凋亡率;采用Western blotting 方法检测凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达水平。结果:细胞培养48 h后,联合用药组细胞增殖率显著低于对照组、紫杉醇组和RHL组 (P<0.05),联合用药组细胞凋亡率显著高于对照组、紫杉醇组和RHL组(P<0.05),联合用药组caspase-3和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片段蛋白表达强度明显高于对照组、紫杉醇组和RHL组,联合用药组Bcl-2和NF-κB蛋白表达强度明显低于对照组、紫杉醇组和RHL组,同时RHL组紫杉醇上调的MEK和ERK蛋白磷酸化强度降低。结论:紫杉醇和RHL均可抑制肺癌H460细胞增殖,诱导细胞凋亡;RHL通过降低ERK活性、上调caspase-3和PARP的切割片段蛋白表达,增强紫杉醇抑制肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

氧化苏木素诱导肺癌 A549细胞凋亡及对内质网应激通路的影响

目的：探讨氧化苏木素对人肺癌A549细胞的凋亡作用及其对内质网应激通路的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）细胞毒实验检测氧化苏木素对肺癌A549细胞的毒性作用;流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和细胞质细胞色素C（cyto‐c）表达的变化。结果氧化苏木素对人肺癌A549细胞的IC50值为（5．36±0．62）μmol／L。0、5、10、20μmol／L的氧化苏木素作用肺癌A549细胞48 h后,细胞凋亡率分别为（1．15±0．32）％、（19．61±4．52）％、（30．18±6．35）％和（39．48±7．44）％,各组间差异有统计学意义（P＜0．05）。与对照组比较,5、10和20μmol／L 氧化苏木素作用肺癌A549细胞48 h后,GRP78出现显著的升高,细胞质中的cyto‐c也显著增加。结论氧化苏木素通过内质网应激途径诱导了人肺癌A549细胞凋亡。