转基因骨髓源性肝干细胞移植对大鼠肝纤维化的影响

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法采用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清的培养液筛选和扩增BDLSC,使用RT-PCR方法检测培养2周时肝干细胞标志表达。体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC并移植入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,观察大鼠肝功能、胶原面积及病理组织学的变化。结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,并表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白。体内研究显示,与模型组和BDLSC组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)及总胆红素(TBIL)水平均有不同程度的降低,凝血酶原时间(PT)时间缩短,白蛋白(ALB)水平升高,肝组织细胞外基质(ECM)水平及羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低;肝组织结缔组织增生程度减轻,假小叶形成不明显,胶原面积明显减少。结论uPA基因修饰BDLSC移植能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,改善纤维化大鼠的肝功能,从而为转基因BDLSC移植治疗肝纤维化的临床应用提供理论依据和实践基础。     

转基因骨髓源性肝干细胞移植对肝纤维化大鼠细胞外基质积聚的影响

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏细胞外基质(ECM)积聚的影响.方法 体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC.采用皮下注射CCl4方法 建立大鼠肝纤维化模型.将纯系Fisher大鼠随机分为正常组、模型组、BDLSC组(尾静脉注入2×104BDLSC)和BDLSC-uPA组(尾静脉注入2×106AduPA转染的BDLSC),各9只.观察各组大鼠肝功能和血清ECM水平的变化;采用半定量逆转录(RT)-PCR方法 检测大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原(COL Ⅰ、COLⅢ)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、3、9及金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1、2 mRNA的表达.结果 BDLSC-uPA组大鼠肝功能明显改善;血清ECM水平和羟脯氨酸含量明显低于模型组和BDLSC组;肝组织COL Ⅰ mRNA(38.9±2.7)、COLⅢ mRNA(8.5±1.6)表达均明显低于模型组和BDLSC组(均P<0.05),MMP-2mRNA(157.5±32.6)、MMP-3 mRNA(105.5±14.6)、MMP-9 mRNA(187.5±22.8)表达均高于模型组和BDLSC组(均P<0.05),而TIMP-1、2 mRNA的表达则差异无统计学意义(P>0.05).结论 uPA基因修饰BDLSC移植可能通过上调MMP的表达,促进ECM的降解,从而改善纤维化大鼠的肝功能,抑制大鼠肝纤维化.     

肝损伤大鼠骨髓源性肝干细胞的筛选分化与扩增

目的探讨利用肝损伤早期和淤胆血清培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选、诱导分化和扩增肝干细胞亚群,以快速、高效地获取骨髓源性肝干细胞.方法建立淤胆型肝损伤大鼠模型和制备含5%淤胆血清病理条件培养液,以促进骨髓源性肝干细胞的体内、外筛选和扩增,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测培养2周时骨髓细胞各种肝干细胞标志表达.结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,细胞表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白.结论淤胆型肝损伤早期大鼠体内环境和含淤胆血清体外病理微环境可能有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞,从而为临床细胞移植治疗各种肝脏疾病提供种子细胞.     

肝损伤大鼠骨髓源性肝干细胞的筛选分化与扩增

目的探讨利用肝损伤早期和淤胆血清培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选、诱导分化和扩增肝干细胞亚群,以快速、高效地获取骨髓源性肝干细胞。方法建立淤胆型肝损伤大鼠模型和制备含5%淤胆血清病理条件培养液,以促进骨髓源性肝干细胞的体内、外筛选和扩增,采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测培养2周时骨髓细胞各种肝干细胞标志表达。结果病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,细胞表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白。结论淤胆型肝损伤早期大鼠体内环境和含淤胆血清体外病理微环境可能有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞,从而为临床细胞移植治疗各种肝脏疾病提供种子细胞。     

雌激素对雄性大鼠肝纤维化形成的影响

目的探讨体内睾酮(T)和雌激素(β-Est)抑制肝纤维化的关系.方法CCl4皮下注射诱导肝纤维化模型,观察20μg·kg-1·d-1β-Est对完整或去势雄性大鼠肝纤维化形成的影响.以标准酶、ELISA、RIA分别测定血清肝功能、细胞外基质(ECM)和性激素水平;VG胶原染色观察肝组织病理学改变,结合图像分析计算胶原面积;RT-PCR和免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、激活素βA(ACTβA)在组织中的表达.结果β-Est能改善去势纤维化大鼠肝功能,降低ECM分泌、肝组织纤维化程度和TGF-β1、ACTβA表达,而对完整雄性大鼠肝纤维化形成无影响;两组大鼠血清雌二醇水平无显著性差异.结论β-Est能抑制肝纤维化形成,T影响其发挥保护作用,可能是造成肝纤维化性别差异原因之一.     

丹酚酸B对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的防治作用

目的观察丹酚酸B对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用。方法采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,分为正常组、对照组、丹酚酸B低剂量及高剂量组。检测大鼠血清肝功能指标、肝组织氧化应激指标、肝组织病理及胶原沉积情况;应用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)含量。结果对照组大鼠血清ALT、AST显著升高,治疗组显著下降;治疗组大鼠肝脏胶原纤维沉积明显减少;对照组大鼠肝组织SOD活性及GSH含量明显降低,MDA和TGF-β1含量显著升高;治疗组大鼠肝组织SOD活性及GSH含量有所升高,MDA和TGF-β1含量降低。结论丹酚酸B具有抗CCl4诱导的大鼠肝纤维化及氧化损伤的作用。     

雌激素对雄性大鼠肝纤维化形成的影响

目的探讨体内睾酮(T)和雌激素(β-Est)抑制肝纤维化的关系。方法CCl4皮下注射诱导肝纤维化模型,观察20μg·kg-1·d-1β-Est对完整或去势雄性大鼠肝纤维化形成的影响。以标准酶、ELISA、RIA分别测定血清肝功能、细胞外基质(ECM)和性激素水平;VG胶原染色观察肝组织病理学改变,结合图像分析计算胶原面积;RT-PCR和免疫组化检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、激活素BA(ACTβA)在组织中的表达。结果β-Est能改善去势纤维化大鼠肝功能,降低ECM分泌、肝组织纤维化程度和TGF-β1、ACTβA表达,而对完整雄性大鼠肝纤维化形成无影响;两组大鼠血清雌二醇水平无显著性差异。结论β-Est能抑制肝纤维化形成,T影响其发挥保护作用,可能是造成肝纤维化性别差异原因之一。     

环氧合酶-2在CCl4诱导大鼠肝纤维化形成中的作用

目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化形成过程中的作用.方法 用50% CCl4经腹腔注射,每周2次共8周诱导雄性S-D大鼠肝纤维化模型.将S-D大鼠随机分3组正常对照组给橄榄油腹腔注射;罗非昔布组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予选择性COX-2抑制剂罗非昔布(按10 mg·d-1·kg-1体重溶于10 mL生理盐水中灌胃);模型对照组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予同等体积的生理盐水灌胃.第8周末处死大鼠,病理组织学观察肝纤维化严重程度并评分,并通过Masson三色染色法将胶原染成蓝色,用图像分析仪自动分析胶原面积.用Western blot检测肝组织COX-2表达和Ⅳ型胶原.计数肝窦内α-SMA阳性的细胞数来观察肝星状细胞的活化.结果 与肝纤维化模型组相比,罗非昔布干预组肝组织纤维化严重程度明显减轻(平均积分分别为4.00±0.00 vs 2.89±0.60, P＜0.05)、胶原面积也减少(分别为30.7±8.9 vs 23.5±6.5, P＜0.05)、肝窦内平均α-SMA阳性细胞数明显减少(分别为12.5±1.3 vs 7.4±1.4, P＜0.01);Western blot分析提示与肝纤维化模型组相比,罗非昔布能降低Ⅳ型胶原表达、对COX-2表达无明显影响.结论 COX-2在肝纤维化的形成过程中发挥重要作用,选择性COX-2抑制剂罗非昔布具有减轻或阻止肝纤维生成的作用.     

安博维拮抗肝纤维化的实验研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体阻断剂安博维对四氯化碳(CCl4)诱导的实验性肝纤维化大鼠纤维化水平的影响。方法大鼠肝实质损伤性纤维化模型由CCl4诱导。36只雄性Wister大鼠被随机分为3组:对照组、模型组及治疗组,每组12只。除对照组外所有大鼠均给予皮下注射40?l4(精致橄榄油配制,每3天1次,共6周)。对照组注射等体积的精制橄榄油。治疗组同时给予血管紧张素Ⅱ受体阻断剂灌胃。每天1次,至6周。实验结束后处死大鼠收取肝组织及血清标本。利用HE和VG染色对肝组织胶原表达及纤维化程度进行评价。血清学检测包括层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原检测(放射免疫法)。结果与模型组相比,血管紧张素Ⅱ受体阻断剂安博维可显著降低肝纤维化大鼠血清LN,HA,PCⅢ及Ⅳ型胶原水平,并显著改善肝纤维化程度(P<0.05)。结论安博维对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有良好的防治作用。     

大鼠β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞的体外分选及鉴定

目的 尝试从骨髓干细胞(BMSC)中分选出具备干细胞和肝细胞双重特性的β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞(BDLSC)亚群,为细胞移植治疗肝病提供合适的供体细胞.方法 利用免疫磁珠细胞分选(MACS)方法体外分选淤胆型大鼠模型的β2m-/Thy-1+ BDLSC,流式细胞仪检测其纯度,RT-PCR法和免疫荧光染色法鉴定其肝相关性表型的表达.结果 MACS法能成功分选纯化BDLSC,其在基因和蛋白水平均表达肝细胞样表型.结论 β2m-/Thy-1+ BDLSC是BMSC中较特异的肝干细胞亚群,具有可能益于肝病治疗的巨大潜力.     

肝星状细胞与脂肪性肝病和肝纤维化

脂肪性肝病和肝纤维化是最常见的两种弥漫性肝脏病理学改变,在致病因素作用下两者常相继发生或合并存在,并可进一步发展为肝硬化,严重威胁人民生命健康。近年来由于生活水平的不断提高、饮食结构的变化以及预防保健措施的相对滞后,在代谢性肝病中脂肪性肝病的发病率正在逐步上升,在我国某些地区已成为仅次于病毒性肝炎的第二大常见肝病。肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应,表现为肝内结缔组织增生与沉积,它是向肝硬化发展的中间环节。肝纤维化是肝脏细胞外基质异常生成和积累的结果,肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞、窦内…     

脂肪肝与痰涎肝

中医学之痰涎,来源于五谷,是由于机体代谢失常产生。张景岳讲到"痰即人身之津液,无非水谷之所化(按:‘化’即代谢)。此痰亦即化之物,而非不化之属也……但化得其正则形体强,营卫充……若化失其正则脏腑病,津液败而血即成痰。"李时珍也曾说过"痰之为物……入于肝则流伏,蓄聚而成胁痛"及尤在泾"左胁之痛,多因留血,右胁之痛,悉是痰积",说明肝有一特异证候,即痰涎肝。痰涎肝与脂肪肝无论生理、病理、体征等极为相似,故冠以痰涎肝之名。     

血型不合肝移植治疗肝功能衰竭

目的探讨血型不合肝移植治疗肝功能衰竭的可行性和疗效。方法回顾性分析本中心包括21例血型不合在内的66例肝移植治疗肝功能衰竭的临床资料,包括终末期肝病模型（MELD）评分、生存率和主要并发症的发生率。结果血型相同组和血型不合组受体MELD评分分别为31．7±3．2和32．8±2．9,差异无统计学意义（P=0．154）。两组平均生存时间分别为（806．0±70．0）d和（720．3±118．5）d,术后3个月、1年、2年、3年生存率分别为84．2％、77．4％、67．6％、60．1％和75．6％、64．0％、58．2％、58．2％,两组累积生存率差异无统计学意义（P=0．417）。急性排斥反应发生率分别为8．9％（4／45）和19．0％（4／21）,差异无统计学意义（P=0．253）。血型不合组术后感染和胆道并发症发生率分别为76．2％（16／21）和28．6％（6／21）显著高于相同组的48．9％（22／45,P=0．037）和8．9％（4／45,P=0．038）。严重感染和肾功能衰竭是血型不合肝移植术后早期主要死亡原因。结论在血型相同供肝严重短缺的情况下,ABO血型不同肝移植是治疗肝功能衰竭的有效手段。感染和。肾功能衰竭是围手术期最主要死因。合理的免疫抑制治疗、有效控制感染、加强围手术期的管理是提高血型不合肝移植成功率的关键。     

腹腔镜肝切除治疗肝脏良性肿瘤

目的探讨腹腔镜肝切除对肝脏良性肿瘤的治疗价值。方法不阻断肝脏血流的情况下,应用多功能手术解剖器(PMOD)进行完全腹腔镜下肝切除14例,其中肝海绵状血管瘤11例,肝脏局灶性结节性增生1例,肝脏肉芽肿性炎症1例,肝囊肿纤维化1例。结果14例腹腔镜肝切除术均获成功。无中转开腹,无术后死亡,无术后并发症发生。平均手术时间153．6min,术后平均住院时间6．4d。随访35．6个月(3～44个月)无一例复发。结论对于有症状或诊断不明的肝脏肿块,同时伴胆囊结石(需手术切除)的肝脏血管瘤患者,采用PMOD进行腹腔镜肝切除是一种安全有效的治疗手段。     

对进展期肝癌肝脏移植治疗进展

肝移植可能是根治肝癌的方法。而进展期肝癌早期易复发、长期预后较差,曾是移植的禁忌症。目前通过严格限定移植标准和术前降期治疗,患者移植术后可能获得较好的预后。笔者通过查阅近年来的相关文献,对移植标准的演进和移植前降期治疗的进展作一综述。     

脂肪肝对肝功能的影响

目的：了解脂肪肝对肝功能的影响。方法：对4009名各类人员做空腹腹部B超、肘静脉血肝功能检验、胸部X片等检查。结果：脂肪肝的发病率为35．5％，不同程度脂肪肝伴有肝功能异常者42名，占脂肪肝患者的2．9％，但基本排除由脂肪肝引起。结论：因营养过剩引起的脂肪肝一般不会导致肝功能异常。脂肪肝的真正危害性并非其对肝脏本身的影响，而在于引起脂肪肝的原因——肥胖、高脂血症、嗜酒等诱发心脑血管疾病的高危因素。     

螺旋CT肝脏分区容积研究

目的　观察正常肝脏、肝硬化肝脏和肿瘤肝脏各分区容积的变异性。方法　收集行CT扫描的住院肝硬化病人 5 0例 ,正常对照组 4 0例 ,异常对照组 (肝右叶巨块型肝癌 ) 2 9例。分别测量正常肝、肝硬化肝的 4个分区容积和异常对照组的左外区容积 ,比较三组各值和差异。结果　正常肝和肝硬化肝左外区 ,左内区 ,右前区 ,及右后区的构成比分别为 [(16 .8± 2 .6 ) %、(15 .5± 3.3) %、(30 .5± 3.2 ) %、(31.9± 3.0 ) % ]和[(13.9± 6 .8) %、(2 0 .0± 7.95 ) %、(31.35± 5 .9) %、(30 .4± 5 .8) % ];肝硬化组、正常对照组和异常对照组三组所测的左外区容积分别为 15 9.0 0ml、15 8.97ml和 2 4 7.76ml,异常对照组与其它两组差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　肝硬化时 ,左外区容积变化无差异 ,左内区、右前区和右后区均有明显缩小。右半肝巨大肝癌时 ,左外区容积代偿性增大。