人卵母细胞与体细胞的电融合效率

目的探索适合于人体细胞核移植的电融合参数,并比较不同类型和数目体细胞的电融合效率。方法首先对体外授精(IVF)后的低评分胚胎行电融合,观察不同电融合参数下胚胎的融合及继续发育情况,确定最适电融合参数;其次将1～2个颗粒细胞或成纤维细胞置入IVF后未受精卵子的卵周隙(PVS)中,在最适电融合参数下行电融合。结果在两段交流脉冲间给予200 V、25μs的直流脉冲为本研究的最适电融合参数;颗粒细胞与卵母细胞的电融合效率低于成纤维细胞(P<0.05);在PVS中加入2个颗粒细胞,其单个颗粒细胞的电融合效率高于加入1个颗粒细胞(P<0.05),而成纤维细胞则无差异。结论低融合效率的体细胞与卵母细胞电融合时可通过增加PVS中体细胞的数目来提高融合效率。     

胚胎早期发育体外共培养体系的比较

目的 探讨共培养体系中体细胞对胚胎早期发育的影响及比较2种常用共培养体系的优劣. 方法 实验分3组:同种不同类型体细胞.受精卵分别在含颗粒细胞和成纤维细胞的M199培养液中培养;异种同类型体细胞,受精卵分别在含牛颗粒细胞和小鼠颗粒细胞中M199培养液中培养;2种共培养体系比较,受精卵分别在"M199 颗粒细胞"和"B2 Vero细胞"的共培养体系中培养. 结果 颗粒细胞组较成纤维细胞组囊胚率高(P＜0.05);牛颗粒细胞组和小鼠颗粒细胞组在卵裂率和囊胚率方面差别无统计学意义;"M199 颗粒组"在卵裂率和囊胚率方面与"B2 Vero组"差别无统计学意义,但囊胚细胞数较少(P＜0.05). 结论 在一定的条件下,共培养体系中体细胞对胚胎早期发育有一定影响;"B2 Vero细胞"的共培养体系优于"M199 颗粒细胞"的共培养体系.     

核方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响

目的探讨胞质内直接注核法和电融合法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响.方法采用血清饥饿法同步化处理的SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞,常规超排KM小鼠获得卵母细胞,采用盲吸法去核,分别采用直接注核法和电融合法构建重组胚胎,6-DMAP+CCB+乙醇激活重组胚, CZB培养液中培养.结果电场强度(V/cm)和脉冲(ms)为 1500/30; 1500/40; 1800/30; 1800/40时,融合率为 81.5%; 83.3%; 77.6%; 82.0%.直接注核法和电融合法构建重组胚的卵裂率分别为33.1%和28.9%,桑椹胚发育率为17.8%和15.5%.结论电场强度为1500～1800V/cm, 脉冲为30ms或40ms时,都能获得较高的融合率;直接注核法构建的核移植重组胚胎的卵裂率要比电融合法略高,但统计学分析差异不显著.     

注核方法对大鼠-小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响

目的 :探讨胞质内直接注核法和电融合法对大鼠 -小鼠种间体细胞核移植重组胚发育的影响。方法 :采用血清饥饿法同步化处理的 SD大鼠成纤维细胞作为供体细胞 ,常规超排 KM小鼠获得卵母细胞 ,采用盲吸法去核 ,分别采用直接注核法和电融合法构建重组胚胎 ,6- DMAP+ CCB+乙醇激活重组胚 ,CZB培养液中培养。结果 :电场强度 ( V/cm)和脉冲 ( ms)为 :1 5 0 0 /30 ;1 5 0 0 /40 ;1 80 0 /30 ;1 80 0 /40时 ,融合率为 :81 .5 % ;83.3% ;77.6% ;82 .0 %。直接注核法和电融合法构建重组胚的卵裂率分别为 33.1 %和 2 8.9% ,桑椹胚发育率为 1 7.8%和 1 5 .5 %。结论 :电场强度为 1 5 0 0～ 1 80 0 V/cm,脉冲为 30 ms或 40 ms时 ,都能获得较高的融合率 ;直接注核法构建的核移植重组胚胎的卵裂率要比电融合法略高 ,但统计学分析差异不显著     

离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中松弛素样因子mRNA的表达及调节

目的:观察松弛素样因子(relaxin-like factor, RLF)mRNA在离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞中的表达,初步探讨影响其表达调控的可能机制.方法:离体培养来自健康Wistar大鼠卵巢的颗粒细胞和黄体细胞,分别加入血小板活化因子(PAF)、促性腺激素(FSH或hCG)、腺苷酸环化酶激动剂(Forscolin)、蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波酯(PMA),以培养液作为对照.采用RT-PCR方法观察各组RLF mRNA的表达,每组设5个复孔.结果:离体培养的大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞均有RLF mRNA的表达,颗粒细胞中加入PAF、FSH、Forscolin、PMA组RLF mRNA的表达均较对照组增强(P＜0.05或P＜0.01);黄体细胞中加入PAF、Forscolin、PMA组RLF mRNA的表达均较对照组增强(P＜0.05),但加入hCG组无明显变化.结论:大鼠卵巢颗粒细胞和黄体细胞RLF mRNA的表达受PAF的正性调节,蛋白激酶A(PKA)和PKC信号通路的激活可能促进RLF mRNA的表达.     

不同电融合条件对小鼠卵丘细胞核移植重组胚融合和早期发育的影响

目的 研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找最佳电融合参数。方法 将直径10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体。在不同电融合条件下诱导两者间的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4~8细胞和桑椹胚进行观察和计数。结果 电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1000~2000kV/cm和脉冲时程40~160ms。低于容许范围的电融合参数会降低供体核-卵母细胞复合体的融合率,而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡。如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4~8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异。此外,脉冲重复次数以1~2次为佳。结论 优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素。     

体外受精-胚胎移植周期颗粒细胞解偶联蛋白2的表达与胚胎发育的关系

目的 探讨体外受精周期颗粒细胞解偶联蛋白2(UCP2)的表达与细胞内活性氧水平关系以及对胚胎发育的影响.方法 运用UCP2抗体和DCFH-DA,采用流式细胞仪技术,分别检测了53例体外受精周期颗粒细胞UCP2表达和细胞内活性氧水平.其中≤35岁组35例,＞36岁组18例.结果 颗粒细胞UCP2的表达与细胞内活性氧水平负相关(r=-0.578,P＜0.01),并且,年长妇女颗粒细胞UCP2表达下降,UCP2表达低者,良好胚胎形成率降低,取卵数大于等于15个的患者颗粒细胞UCP2表达升高,卵母细胞成熟比例低.结论 颗粒细胞通过增加UCP2表达反馈性抑制细胞内活性氧水平过高,进而控制卵泡液活性氧水平,保护卵母细胞免受氧化应激损伤.     

利用废弃胚胎行人原核移植方法的初步建立

 【目的】 探索利用废弃胚胎进行人原核移植的方案?【方法】 收集废弃多原核受精卵117个?用显微操作-电融合的方法构建原核移植重构胚胎?分别比较钙离子浓度0.05 mmol/L(n=39)和0.1 mmol/L(n=58)的两种电融合液以及电压分别为1 800 V/cm(n=58)和2 000 V/cm(n=20)的两种电场条件对重构合子融合率和发育的影响?【结果】 操作成功率70.1%,融合成功率59.8%,得到43个卵裂胚胎,其中23个(53.5%)6细胞以上胚胎?共14个重构胚发育至8细胞或以上,得到3个囊胚?将电压由2 000 V/cm下降到1 800 V/cm,重构胚胎融合率?卵裂率和囊胚率的差异没有统计学意义(P > 0.05),但6-细胞率明显上升(22.2% vs. 60.9%, P < 0.05)?和钙离子浓度为0.05 mmol/L的融合液比较,0.1 mmol/L的融合液融合率明显上升(39.3% vs. 69.0%,P < 0.05),卵裂率?6-细胞率和囊胚率皆无统计学差异(P > 0.05)?【结论】 通过显微操作-电融合的方法,用废弃胚胎重构人核-质异质的胚胎模型,是可行的?经济的?     

IVF治疗中卵丘颗粒细胞密度对胚胎学结局的影响

目的 研究体外受精(IVF)时卵丘卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex, COC)上的卵丘颗粒细胞密度对胚胎学结局的影响。方法 回顾性分析710个IVF周期,其中卵丘颗粒细胞部分切除周期(研究组)355个及未处理对照周期355个。研究通过比较两组中患者的受精率、卵裂率、优质胚胎率、卵子利用率、临床妊娠率和活产率等多种指标来探讨IVF治疗时卵丘颗粒细胞对胚胎学和移植结局的影响;随后又按照授精皿中的卵子数将患者分为低密度(1~5个)、中密度(6~10个)和高密度(11~15个)3组,通过与对照组患者比较,进一步明确不同COC授精密度情况下颗粒细胞密度对受精和胚胎发育的影响。结果 研究组患者的受精率、正常受精率、有效成囊率和卵子利用率均显著高于对照组(P<0.01),而其异常受精率则显著低于对照组(P<0.01)。低、中及高不同授精密度下,当授精密度≤5个卵子时,研究组和对照组的受精率、正常受精率、异常受精率、有效成囊率和卵子利用率等比较,差异均无统计学意义(P>0.05);当授精密度>5个时,研究组的正常受精率、有效成囊率和卵子利用率均显著高于对照组(P<0.05),异常受精率均显著低于对照组(P<0.05)。两组的临床妊娠率、种植率、活产率等比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 体外授精时,通过切除COC上的卵丘颗粒细胞以降低其密度,能够改善患者IVF治疗时的胚胎学结局。     

颗粒细胞抑制素B的表达及其在女性生殖中的意义

目的 探讨抑制素B(INH-B)在颗粒细胞的表达与卵巢反应、卵子成熟及胚胎发育之间的关系.方法 收集39名实施体外受精-胚胎移植(IVF-ET)者的颗粒细胞,通过免疫组化技术测定颗粒细胞INH-B表达强度.按照获卵数将患者分为三组,A组:获卵≤5枚;B组:获卵6 ～ 15枚;C组:获卵≥16枚.分析比较各组INH-B表达强度、胚胎实验室数据及临床结局.结果 ①A组的INH-B表达强度显著低于其他二组(P＜0.001),B组与C组间INH-B表达强度无显著差异(P＞0.05).②颗粒细胞INH-B表达强度与获卵数、受精卵数、卵裂数及可用胚胎数呈正相关(均P＜0.001).③颗粒细胞INH-B表达强度与IVF-ET 临床妊娠率无显著相关(P＞0.05).结论 颗粒细胞INH-B表达可反映细胞自身的功能状态,颗粒细胞功能减退是卵巢反应减低、发育卵泡数目减少的主要原因之一.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。