Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长的作用机制

目的研究Smad4基因对人类胃癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨其对人类胃癌细胞生长抑制的作用机制。方法运用脂质体介导转染方法将Smad4基因导入其表达缺失的胃癌MKN28细胞株中,经G418筛选,获得稳定表达Smad4基因的Smad4 -MKN28细胞和作为对照的Smad4--MKN28细胞。体外培养亲本细胞、Smad4 -MKN28细胞和Smad4--MKN28细胞,各组细胞于第1、3、5、7天取三瓶细胞计数,计算平均值,并绘制生长曲线;细胞培养48h后应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的改变;用RT-PCR和Western blotting方法检测细胞Bcl-2、Bax基因的mRNA和蛋白的表达。结果稳定转染Smad4重组质粒的Smad4 -MKN28细胞较未转染的Smad4--MKN28细胞生长速度减慢(P<0.05);流式细胞仪检测结果示Smad4 -MKN28细胞G0-G1期细胞百分数增加(P<0.05),S期细胞百分数减少(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05);RT-PCR结果示Smad4 -MKN28细胞Bax基因表达增加(P<0.05),Bcl-2基因表达减少(P<0.05),Western blotting结果示两者的编码蛋白也出现相应的变化。结论恢复Smad4表达后细胞增殖减慢,凋亡增加,促凋亡基因表达上调,抑制凋亡基因表达下调,两者比值增大,从而使肿瘤细胞的生长受到抑制。     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

Smad4在胃癌组织中表达的研究

目的检测Smad4在胃癌组织及其相应正常胃粘膜组织中的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法选取39例经外科手术切除及组织病理学证实的胃癌患者癌组织标本及相应正常胃粘膜组织,应用冰冻切片免疫组化染色方法,在蛋白水平进行检测。结果正常胃粘膜细胞浆中都有Smad4阳性表达,39例胃癌患者癌组织中22例有Smad4阳性表达(56.4%),两者之间差异有显著性(P<0.05)。Smad4蛋白的表达与癌细胞的分化程度及浸润程度相关,分化程度越低、浸润程度越重,其阳性表达率越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移、远处转移无相关性。结论Smad4的表达下降与胃癌的发生有关,而且与癌细胞的分化程度及浸润程度密切相关,Smad4可能作为胃癌诊断和预后的分子标志。     

Smad4蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：观察胃癌Smad4蛋白的表达情况及与胃癌临床病理特征的关系。方法：应用免疫组织化学染色SP法检测25例正常胃黏膜、60例胃癌组织Smad4蛋白的表达情况。结果：胃癌组织Smad4蛋白的阳性表达率(70.00%)明显低于正常胃黏膜(92.00%,P＜0.05)。胃癌组织Smad4蛋白的表达与胃癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.01,P＜0.05)。结论：胃癌组织Smad4蛋白表达降低可能是胃癌发生发展的重要因素。     

TGF-βSMADS通路及其Smad4基因在胃癌中的研究现状

转化生长因子β（TGF—β）／SMADS信号转导通路在肿瘤发生机制中发挥重要作用。近年来,许多研究表明了TGF—β超家族的配体、受体、SMAD蛋白、上游和下游调节因子与多种信号通路间的相互对话在不同肿瘤中的作用机制。Smad4基因是TGF-β信号转导系统的重要中间环节,其失活在人类肿瘤中占很高比例,可导致多种肿瘤的发生、发展。目前认为,Smad4基因的蛋白失活主要与该基因的缺失、突变和甲基化有关。突变包括无义突变、错义突变和移码突变等;缺失包括单等位基因杂合性缺失和双等位基因纯合性缺失。     

胃癌组织中Smad4和Galectin-3的表达及相关分析

目的 为了探讨胃癌组织中Smad4和Galectin-3的表达情况及相互关系.方法 采用免疫组织化学方法检测Smad4和Galectin-3在胃癌、临近正常组织及转移淋巴结中的表达,并使用同济千屏HPIAS-2000图像分析软件进行定量分析.结果 Smad4则主要在正常组织细胞浆中表达,在胃癌组织中分化越低,染色强度越弱,尤其在低分化胃癌中更为明显(P<0.001).与正常组织相比,Smad4减弱具有明显差异性(P<0.01).Galectin-3阳性表达以及染色强度与胃癌的分化程度密切相关(P<0.001),分化越低,染色强度越深,在淋巴结转移的癌组织中表达明显(P=0.001),与正常组织比较,具有显著的差异性(P<0.001).结论 在相同胃癌组织中Galectin-3表达增强,Smad4蛋白表达减弱,同时检测,有利于提高胃癌诊断的准确性.     

Smad4对人胰腺癌细胞HS766T生长抑制的研究

目的 探讨Smad4基因在人胰腺癌细胞中的肿瘤抑制作用。方法 应用分子克隆技术构建Smad4真核表达载体，然后用脂质体法将其导入到Smad4同源缺失的人胰腺癌细胞HS766T中，经G418筛选获得可稳定表达Smad4的人胰腺癌细胞克隆，用细胞计数和噻唑蓝(MTT)法观察细胞生长速度及增值率，流式细胞仪(FCM)检测Smad4表达、细胞凋亡及细胞周期情况。结果 获得了Smad4真核表达质粒pcDNA3．1—Smad4。Smad4导人人胰腺癌HS766T细胞后，肿瘤细胞增值能力明显受到抑制、生长速率显著下降，并出现细胞周期G1期阻滞。结论 Smad4基因具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用，可作为胰腺癌基因治疗的靶基因。     

腺病毒介导的ING4基因抑制胃癌细胞生长及其分子机制

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING4基因的转录,MTT法检测hING4基因对SGC-7901细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hING4基因诱导SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测hING-4基因诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子bcl-2和bax的改变。结果:Ad-hING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有hING4目的基因的转录,该基因表达可以显著抑制SGC-7901细胞的生长,诱导S期减少、G2/M期阻滞和凋亡,hING4基因能使SGC-7901细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论:重组腺病毒Ad-hING4对胃癌细胞SGC-7901具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达有关。     

KLF4对胃癌SGC-7901细胞株体外生长增殖的影响

目的探讨Krppel样因子4(krppel-like factor 4,KLF4)对人胃癌SGC-7901细胞株生长增殖的影响。方法以人胃癌SGC-7901细胞株为研究对象,脂质体介导转染pcDNA3.1IE-KLF4重组质粒并建立KLF4稳定过表达细胞株,以未转染KLF4基因和转染空质粒载体的胃癌细胞株为对照。用RT-PCR和免疫细胞化学法检测KLF4 mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期及增值指数。结果 RT-PCR和免疫细胞化学法检测示转染组细胞与未转染组和空载体组相比较,KLF4 mRNA和蛋白均明显表达(P<0.05)。流式细胞术检测显示转染组G1期细胞增多[(65.08±3.43)%,P<0.05],而S期和G2/M期细胞减少[(30.39±1.80)%、(4.53±1.66)%,P<0.05],增殖指数亦降低[(34.92±3.42)%,P<0.05]。结论 KLF4对SGC-7901细胞株体外生长增殖具有抑制作用。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,端粒酶活性抑制。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导胃癌细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。     

体外转染PTEN基因对人结肠癌细胞生长的影响

目的 探讨野生型PTEN基因表达对结肠癌细胞体外生长的影响.方法 应用脂质体转导技术,将含野生型PTEN基因重组真核表达质粒pBp-PTEN转染Lovo细胞并稳定表达.Western blotting鉴定后,观察Lovo细胞转染前后生长、细胞周期、凋亡的改变.结果 转染后细胞生长曲线提示转染组曲线平缓,无明显对数生长期,生长速度较对照组明显降低(P《0.01);细胞周期测定显示转染组细胞G1期比例上升,提示PTEN可能对G1/S期转换点起阻滞作用;转染组细胞凋亡比率增高(P《0.01),尤其是早期凋亡.结论 外源性PTEN基因的转染可以抑制结肠癌细胞的体外生长.     

体外转染PTEN基因对人结肠癌细胞生长的影响

目的探讨野生型PTEN基因表达对结肠癌细胞体外生长的影响。方法应用脂质体转导技术,将含野生型PTEN基因重组真核表达质粒pBp-PTEN转染Lovo细胞并稳定表达。Western blotting鉴定后,观察Lovo细胞转染前后生长、细胞周期、凋亡的改变。结果转染后细胞生长曲线提示转染组曲线平缓,无明显对数生长期,生长速度较对照组明显降低(P<0.01);细胞周期测定显示转染组细胞G1期比例上升,提示PTEN可能对G1/S期转换点起阻滞作用;转染组细胞凋亡比率增高(P<0.01),尤其是早期凋亡。结论外源性PTEN基因的转染可以抑制结肠癌细胞的体外生长。     

阿斯匹林对胃癌细胞株SGC—7901的体外细胞毒作用

近年研究表明非甾体类抗炎药物对某些肿瘤具有抑制作用。本文采用噻唑蓝体外细胞毒试验（MTT）,观察阿斯匹林对人胃癌细胞株SGC－7901的生长抑制作用。结果表明：阿斯匹林对SGC－7901生长有明显的抑制作用,其抑制率与阿斯匹林浓度和作用时间呈正相关性（r分别为0．8873和0．8256,P值均小于0．001）。小剂量阿斯匹林联合5－Fu作用于SGC－7901,其生长抑制率有明显提高。结论：阿斯匹林具有抑制人胃癌细胞株SGC－7901生长的作用,与5－Fu联用效果更佳。     

苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用

目的 研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制。方法 用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用。结果 随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P<0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感。透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡。结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关。     

苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用

目的研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制.方法用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72 h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用.结果随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P＜0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感.透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡.结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关.     

人胃癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901抗脱落凋亡的特性，为研究肿瘤细胞抗脱落凋亡的机制奠定基础。方法：应用软琼脂集落形成实验，DNA ladder检测，流式细胞术等技术观察胃癌细胞脱落培养后细胞生长状况的改变。结果：对照组细胞MDCK（狗的正常肾脏上皮细胞系）在软琼脂中不生长，没有形成细胞集落；悬浮培养15h后，可见有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现；流式细胞仪检测，悬浮培养24，48h可见有凋亡峰出现，而HGC27等4种胃癌细胞系在软琼脂中均形成大小不等的细胞集落，脱落培养15h后，没有细胞凋亡特征性的DNA ladder出现，流式细胞仪检测，与贴壁培养的对照组相比细胞周期没有显性差异。也没有凋亡峰的出现。结论：MDCK细胞属于锚着依赖性细胞，可出现脱落凋亡，胃癌细胞HGC27，BGC823，MGC803，SGC7901属于抗脱落凋亡细胞。     

mdr1基因在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系的表达

目的探讨mdr1在多药耐药相关的几种人胃癌细胞系中的转录、翻译、P-gp功能变动趋势.方法培养SGC7901/VCR(人胃癌多药耐药细胞亚系)、SGC7901和BGC823(人胃腺癌细胞系)于RPMI1640,用RT-PCR和原位杂交检测mdr1mRNA的表达,用免疫印迹和免疫组化检测P-gp的表达,用流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积.结果半定量RT-PCR显示,SGC7901/VCR mdr1和β-actin吸收峰面积之比为5.63,SGC7901为0.61,BGC823为0.85.杂交信号呈紫蓝色颗粒,分布于胞质.免疫印迹显示SGC7901/VCRP-gp的表达最强,SGC7901最弱.P-gp阳性呈棕黄色颗粒,位于细胞膜上.SGC7901中,少数细胞P-gp表达极强.SGC7901/VCR平均光密度为(1.8310±0.8401),SGC7901为(0.3590±0.2512),BGC823为(0.6260±0.4996)(P＜0.05).SGC7901/VCR阿霉素特异荧光强度为(6.59±50.30),SGC7901为(35.88±14.55),BGC823为(27.44±7.06)(P＜0.001).结论在多药耐药相关的人胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC823中,mdr1基因均表达,P-gp具有药物外排功能,SGC7901/VCR的mdr1表达最强,SGC7901最弱,BGC823居中.