背根神经节内P物质、降钙素基因相关肽免疫阳性神经元与阴茎包皮系带感觉信息的传递

目的:探讨背根神经节(DRG)内P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)免疫阳性神经元与阴茎包皮系带感觉信息传递之间的关系。方法:通过荧光金(FG)逆行标记对大鼠阴茎包皮系带内神经末梢的来源作追踪定位,并结合SP、CGRP免疫荧光标记法,研究大鼠DRG内FG标记阳性神经元中SP、CGRP免疫阳性神经元的形态和分布。结果:FG逆行标记结果发现,大鼠阴茎包皮系带内的神经末梢起源于第6腰髓对应的背根神经节(L6-DRG)和第1骶髓对应的背根神经节(S1-DRG)的神经元。对这些神经元分别作SP、CGRP免疫荧光标记后发现,标记细胞大小不等,分别呈深红色和深绿色,沿神经束成行排列或散在分布。FG/SP、FG/CGRP双标记阳性细胞均为中小型,其数量分别占FG逆行标记阳性细胞总数的1/3和1/2,FG/SP/CGRP三标记阳性细胞占FG逆行标记阳性细胞总数的1/5。结论:大鼠L6-DRG和S1-DRG内的SP、CGRP免疫阳性神经元可能参与阴茎包皮系带感觉信息的传递。     

大鼠阴茎包皮和包皮系带内nNOS免疫阳性神经末梢的分布与起源

目的观察成年SD大鼠阴茎包皮和包皮系带内神经型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经末梢的分布和起源。方法免疫组织化学法观察nNOS免疫阳性神经末梢的分布,荧光金(Fluoro-gold,FG)逆行追踪和nNOS免疫荧光标记相结合法研究大鼠包皮系带内nNOS免疫阳性神经末梢的起源。结果成年SD大鼠阴茎包皮和包皮系带内均有nNOS免疫阳性神经末梢存在,这些神经末梢主要位于表皮基底层和真皮乳头层,呈树枝状或念珠状分布。阴茎系带处nNOS免疫阳性神经末梢的图像光密度值(3.4±0.38)明显大于阴茎包皮处(2.2±0.45)。FG逆标阳性细胞位于大鼠第六腰髓对应的背根神经节(L6-DRG)(9.6±1.2)个/mm2和第一骶髓对应的背根神经节(S1-DRG)(1.2±0.2个/mm2)内。阳性细胞大中小不等,大多沿神经束成行排列或散在分布。nNOS免疫荧光标记细胞在L6-DRG和S1-DRG内分别为(24.2±2.6)个/mm2和(24.1±2.1)个/mm2,细胞大多呈中小型。FG/nNOS双标阳性细胞均为中小型,其数量接近FG逆标阳性细胞总数的一半。结论大鼠阴茎包皮系带内含有浓密的nNOS免疫阳性神经末梢,这些神经末梢源自于L6-DRG和S1-DRG。     

背根神经节压迫对大鼠痛行为及脊髓背角内降钙素基因相关肽的影响

目的 建立有效的背根神经节慢性压迫模型，探讨大鼠痛行为及脊髓背角内降钙素基因相关肽的变化。方法 采用铬制1-0肠线通过椎间孔压迫大鼠L4、L5背根神经节制备压迫模型，术后观察缩爪阈值变化，用放射免疫分析方法测定脊髓背角中降钙素基因相关肽的含量。结果 压迫组术后痛敏明显，术后1周时达高峰，以后逐渐恢复，但到术后4周时仍未完全达到正常水平；假手术组术后痛敏恢复较快，于术后7d恢复至正常水平。压迫组背角内降钙素基因相关肽含量在术后5d及4周时均明显增高，与同组对侧、假手术组及对照组相比差异有显著性。光镜观察，压迫组术后5d压迫侧背根神经节出现明显的神经内膜水肿及神经元胞质水肿，到术后4周这种改变虽然仍存在，但明显减轻。结论 稳定可靠的背根神经节慢性压迫模型，受压侧脊髓背角中降钙素基因相关肽含量持续升高，与慢性痛行为一致。     

阴茎包皮及包皮系带内SP免疫阳性神经末梢的分布和来源

目的观察成人阴茎包皮和包皮系带内P物质(substanceP,SP)免疫阳性神经末梢的分布和来源。方法免疫组织化学法观察SP免疫阳性神经末梢的分布,荧光金(fluoro-gold,FG)逆行追踪和SP免疫荧光标记相结合法研究大鼠包皮系带内SP免疫阳性神经末梢的来源。结果成人阴茎包皮及包皮系带内均有密集的SP免疫阳性神经末梢存在,这些神经末梢主要位于表皮基底层,呈树枝状或念珠状分布,大多成束走行。阴茎系带处SP免疫阳性神经末梢的分布密度明显大于阴茎包皮处。FG逆标阳性细胞位于大鼠第六腰髓对应的背根神经节(L6-DRG)和第一骶髓对应的背根神经节(S1-DRG)。阳性细胞大中小不等,大多沿神经束成行排列或散在分布。SP免疫荧光标记细胞大多为中小型,呈深红色。FG/SP双标阳性细胞均为中小型,其数量占FG逆标阳性细胞总数的三分之一。结论SP参与了阴茎包皮及包皮系带感觉信息的传递。大鼠阴茎包皮系带内SP免疫阳性神经末梢源自于L6-DRG和S1-DRG。     

在高糖培养条件下咖啡因诱导背根神经节细胞释放降钙素基因相关肽的研究

目的:证实在高糖培养条件下大鼠背根神经节细胞生长情况及咖啡因诱导大鼠背根神经节细胞释放降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)。方法:取雌性Sprague-Dawley大鼠L3-S3背根神经节细胞行不同糖浓度(25、45、50、100、200、400 mmol/L)、不同时间(24、48 h)、不同咖啡因浓度(10、50、100、500、1000、5000μmol/L)培养,CCK-8实验检测细胞活力。确定培养条件后,将大鼠背根神经节细胞分为正常对照组、高糖组(HG组)、高糖+咖啡因组(HG+caf组)三组进行培养。qRT-PCR和ELISA法分别检测各组中背根神经节细胞内CGRP的mRNA水平及上清液内蛋白含量。结果:在培养24 h,200 mmol/L和400 mmol/L糖浓度培养下大鼠背根神经节细胞的活力明显下降(P<0.01)。在培养48 h,45 mmol/L糖浓度培养下大鼠背根神经节细胞的活力明显下降(P<0.05),而45 mmol/L以上的糖浓度培养下大鼠背根神经节细胞的活力下降更明显(P<0.01...     

周围神经端端或端侧吻合后降钙素基因相关肽和P物质免疫组织化学的对比研究

目的　探讨周围神经端端或端侧吻合后神经递质降钙素基因相关肽 (CGRP)和 P物质 (SP)水平的变化。　方法　选取雌性 Wistar大鼠 2 0只 ,随机分为 5组 ,每组 4只 ;实验组为 4组 ,正常对照组为 1组。实验组 :切断双侧腓总神经。将左侧腓总神经远侧断端吻合至胫神经侧方 ,右侧行腓总神经端端吻合 ,术后 1、2、4和 2 7周于各时间点分别在神经吻合口、腰段脊髓和背根神经节处取材 ,每次 4只进行 CGRP和 SP的免疫组织化学染色。对照组 :不行神经切断及吻合术 ,1周后检测同上。　结果　实验组术后 1周在腰段脊髓后角和背根神经节中 CGRP和 SP的表达均显著减少 ,术后 4、2 7周 ,CGRP和 SP在腰段脊髓后角的表达逐渐恢复至接近正常水平 ,但在背根神经节中的表达却无显著变化。端端、端侧吻合的两侧 CGRP和 SP变化的趋势一致 ,但在腰段脊髓后角的 4个时间点的样本中 ,端端吻合的表达显著高于端侧吻合。对坐骨神经进行乙酰胆碱酯酶 (Ach E)、SP、CGRP和 PGP9.5染色显示神经纤维均可通过端端与端侧神经吻合口。　结论　再生的神经纤维可以通过端侧吻合口 ,端侧吻合中感觉神经的恢复与端端吻合相似 ,但恢复的程度稍差于端端吻合。     

大鼠腰椎P物质和降钙素基因相关肽能神经纤维的分布

目的　观察腰椎小关节 ,椎间盘 ,前、后纵韧带 ,棘上、棘间韧带上 P物质 (SP)和降钙素基因相关肽 (CGRP)能神经纤维的分布 ,探讨其意义。方法　采用 2 5例 SD大鼠腰椎组织切片 ,以SP、CGRP多克隆抗体进行免疫组织化学研究。结果　 SP、CGRP能神经纤维在腰椎上有广泛的分布。除滑膜皱襞外 ,小关节的其他部位均观察到上述神经纤维。在椎间盘 ,神经纤维只分布于纤维环的最外层。棘间韧带上仅见 CGRP能神经纤维。结论　腰椎上有广泛的感觉神经分布 ,上述结构参与慢性下腰痛发生有其神经解剖学基础     

吗啡预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌P物质和降钙素基因相关肽的影响

目的观察吗啡预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌组织缺血区和非缺血区P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法健康成年雄性SD大鼠18只,体重270～300 g,随机分为3组(n=6),假手术组(S组)、单纯冠状动脉结扎组(I组)、吗啡干预冠状动脉结扎组(M组)。S组大鼠开胸后在冠状动脉左前降支下穿线不结扎;I组大鼠开胸后结扎冠状动脉左前降支;M组大鼠经尾静脉注射吗啡1．25 mg·kg-1,15 min后结扎冠状动脉左前降支。各组在手术后计时3 h。采用免疫组化、酶联免疫和反转录-聚合酶链反应法从蛋白和基因水平观察各组大鼠缺血区和非缺血区心肌SP和CGRP的表达。结果I组大鼠缺血区心肌SP／SP mRNA和CGRP／β-CGRP mRNA的水平较S组升高(P<0．05),M组低于I组(P<0．05),但仍高于S组(P<0．05);非缺血区各组的变化趋势类同缺血区,但各扎闭冠状动脉组SP／SP mRNA和CGRP／β-CGRP mRNA的水平均低于相应组缺血区的水平(P <0．05)。结论吗啡预先给药可降低急性心肌缺血大鼠心肌组织SP和CGRP的表达。     

电针与丁丙诺啡合用对慢性炎性痛大鼠脊髓背角P物质、降钙素基因相关肽的影响

目的 评价电针与丁丙诺啡合用对慢性炎性痛大鼠脊髓背角P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响,探讨其镇痛机制。方法 鞘内置管成功的成年雌性SD大鼠30只,随机分为5组（n=6）：正常组（A组）、致炎组（B组,大鼠右踝关节腔内注射完全弗氏佐剂50μl）、电针组（C组,大鼠致炎后第4、7、10天电针阳陵泉和足三里,频率2 Hz/100 Hz,强度≤2 mA,30 min/次）、丁丙诺啡组（D组,大鼠致炎后第4天开始,连续7d鞘内注射丁丙诺啡1．5mg）和针药合用组（E组,针药使用方法同C组、D组）。热板法测定大鼠痛敏分数。致炎后第11天取L4-6脊髓,测定SP、CGRP水平。结果 与B组相比,C组、D组、E组痛敏分数降低,患侧脊髓背角SP、CGRP水平减少（P＜0．05）;与C组、D组相比,E组痛敏分数、SP、CGRP水平减少（P＜0．05）。结论 电针和丁丙诺啡能减轻慢性炎性痛大鼠的痛敏反应,针药合用的作用更强,其镇痛机制与减少脊髓背角SP、CGRP表达有关。     

三叉神经痛大鼠半月神经节内降钙素基因相关肽mRNA及其相应蛋白的表达研究

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)在三叉神经痛(TN)发病机制中的作用.方法 40只雄性Wister大鼠随机均分为实验组(A组)及对照组(C组).A组大鼠左侧三叉神经分支眶下神经行慢性缩窄环术.观察术后大鼠对机械刺激的反应阈值,三叉神经节(TG)切片行CORP免疫组织化学反应和原位杂交反应,光镜观察摄片,并用HPIAS-1000病理图文分析系统软件进行测定.结果 术后2～8周,A组大鼠左侧疼痛阈值较对侧及C组左侧显著降低(P<0.01),左侧TG内CORP及CORP mRNA的表达较对侧及C组左侧显著升高(P<0.01);术后12周差异无统计学意义.结论 CGRP在TN的发病机制中发挥重要的作用.     

可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒对糖尿病大鼠阴茎勃起的作用

目的:探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导人降钙素基因相关肽(hCGRP)基因转移在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌分泌表达及其对阴茎勃起的作用。方法:建立链佐脲菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为3组,分别将VssHGCMV-hCGRP、VssCMV-GFP和rAAV空病毒液注射于阴茎海绵体。在注射后5 d,采用SMUP-PC型生物信号处理系统检测阴茎背神经电刺激诱发的阴茎勃起反应及海绵体内压(ICP)变化。切取海绵体组织,通过免疫组化技术和激光共聚焦显微镜分别检测hCGRP和绿色荧光蛋白(GFP)表达,以放射免疫法检测组织中环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)变化。结果:在VssCMV-GFP转染后5 d,显示阴茎海绵体内几乎所有组织均有广泛的GFP表达,而rAAV空病毒转染的海绵体则无GFP表达。VssHGCMV-hCGRP转染STZ诱导的糖尿病大鼠后5d,电刺激阴茎背神经可诱发明显的阴茎勃起,监测ICP明显增高[(60.5±4.5)mm Hg,1 mm Hg=0.133kPa],而对rAAV空病毒转染的对照组STZ糖尿病大鼠以同样的参数电刺激阴茎背神经则无勃起反应,ICP无明显增加[(22.3±1.3)mm Hg],两组差异有显著性(P<0.01)。免疫组化观察显示在VssHGCMV-hCGRP转染的STZ糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中hCGRP表达增强,同时当电刺激阴茎背神经诱发勃起反应时,海绵体内cAMP和cGMP水平均升高,分别为(48.4±6.5)nmol/L和(21.2±13.6)nmol/L,较rAAV空病毒组[(16.7±2.5)nmol/L和(0.42±0.12)nmol/L]明显增高(P<0.01)。结论:经阴茎海绵体内注射重组腺相关病毒VssHGCMV-hCGRP在糖尿病大鼠阴茎海绵体内获得了hCGRP转基因高效表达,其可增加阴茎背神经电刺激诱发的阴茎ICP和勃起反应。     

空气喷砂技术对牙髓组织中P物质作用的实验研究

目的：观察空气喷砂技术去龋时对牙髓组织的SP、CGRP神经反应性的影响。方法：实验组为空气喷砂技术组及高速涡轮机组,未制洞大鼠为空白对照组,制备雌性SD大鼠上颌磨牙,ABC免疫组织化学染色法观察牙髓组织内P物质的反应。结果：空气喷砂组大鼠牙髓SP、CGRP强阳性染色,高速涡轮机组大鼠牙髓SP、CGRP弱阳性染色,实验组间、实验组与对照组间均有差别,差别具有统计学意义（P〈0.05）。结论：空气喷砂技术刺激牙髓神经合成SP、CGRP增多,推论该技术在制备窝洞时对牙髓组织刺激性相对较小。