bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响

目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌(SCLC)多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-PS-ODNs),然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂(DDP)诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组(AS-PS-ODNs转染组)]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组(NS-PS-ODNs转染组)]和对照组(H446细胞组、H446/DDP细胞组)。结果(1)W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 221,P<0.05)。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白(灰度值0.854±0.016),与对照H446细胞组(灰度值为0.103±0.005)相比差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义(F=11 028,P<0.01)。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平(灰度值为0.695±0.014),与对照H446/DDP细胞组(灰度值为0.942±0.018)相比,显著下降(t=2.26,P<0.01),但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平(t=2.31,P<0.01)。(2)流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为(20.9±0.2)%,明显低于对照H446细胞组的(31.1±0.21)%,差异有统计学意义(t=2.45,P<0.01);5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为(31.5±0.4)%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为(9.0±0.1)%,转染细胞的凋亡率显著增加(P<0.05)。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。     

肺癌耐药蛋白在非小细胞肺癌中的表达与临床相关性研究

目的：探讨肺癌耐药蛋白（LRP）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达与临床相关性。方法：通过纤维支气管镜活检、经皮肺穿刺活检或手术切除而药取肺癌组织标本69例,其中男52例,女17例。I、Ⅱ期28例,Ⅲ、Ⅳ期41例。采用免疫组织化学法进行检测,胞浆呈棕黄色着染为LRP阳性。结果：LRP主要表达于胞浆,69例肺癌组织中,LRP表达阳性39例,男性56％（29／52）,女性59％（10／17）,总检出率57％（39／69）,各年龄段间差异无显著性。肺腺癌中检出率67％（18／27）,肺鳞癌中检出率55％（17／31）;T1－2中检出率52％（23／44）,T3－4中检出率64％（16／25）;N3中检出率83％（5／6）;在M0中检出率57％（36／63）,M1中检出率50%(3/6)。LRP表达与NSCLC中组织类型无相关性（P＞0．05）,与原发灶的侵犯范围（T）及转移情况（N、M）无关。LRP阳性组化疗有效率低于LRP阴性组（P＜0．05）。随访中LRP阳性组死亡7例,LRP阴性组死亡3例。结论：在肺腺癌与鳞癌中由LRP引起的耐药发生机率相等;TNM指标只代表肿瘤进展而不代表耐药性差异;LRP在NSCLC中的表达与化疗的有效率及预后有一定的相关性,LRP表达阳性者预后差。有研究报道LRP的表达与多药耐药有关,LRP的检测能指导化疗方案的选择,提高化疗疗效,因此,值得进一步深入研究。     

YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

小细胞肺癌多药耐药机制研究进展

小细胞肺癌对多种化疗药物产生的多药耐药特性是造成化疗失败的主要原因.小细胞肺癌产生多药耐药的机制涉及膜糖蛋白介导的药物外排机制、细胞内pH、ROS、HIF-1、GSH的改变,以及DNA损伤修复机制异常等.系统性分析小细胞肺癌多药耐药产生的机制,将有助于指导临床用药及为耐药逆转的新药研发提供理论依据.     

川芎嗪、顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞分为A、B、C、D组。A组常规培养,B组加入川芎嗪培养液100μg/ml,C组加入顺铂培养液2μg/ml,D组加入上述浓度的川芎嗪及顺铂培养液,均继续培养72 h。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Westernblot法检测各组细胞中的Bcl-2、p53。结果 A组NCI-H446细胞凋亡率为5.23%±1.01%、Bcl-2蛋白为0.87±0.003 5、p53蛋白为0.19±0.002 3,B组分别为16.37%±1.23%、0.58±0.004 8、0.31±0.001 4,C组分别为19.2%±1.51%、0.32±0.003 9、0.46±0.002 5,D组分别为21.2%±1.79%、0.23±0.001 9、0.62±0.002 7。B、C、D组与A组相比,P均〈0.05;D组与B、C组相比,P均〈0.05。结论川芎嗪、顺铂联合应用可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,可能与其降低Bcl-2表达水平、升高p53表达水平有关。     

白藜芦醇诱导小细胞肺癌H446细胞凋亡机制的研究

目的研究白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞增殖的抑制、凋亡诱导作用及作用特点,并探讨其可能的机制。 方法采用MTT法观察白藜芦醇对H446细胞的毒性以及细胞抑制率,筛选合适的药物作用浓度。通过不同浓度组及不同作用时间组观察白藜芦醇对H446细胞的毒性及细胞抑制率。采用流式细胞术检测不同浓度白藜芦醇及白藜芦醇不同作用时间对H446细胞的凋亡诱导作用、线粒体膜电位的变化以及细胞内ROS释放量的变化。 结果白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞增殖有明确的抑制作用,高浓度时可引起细胞死亡,随着药物剂量增加和作用时间的延长,抑制作用更强,具有剂量依赖和时间依赖的特点,差异有统计学意义(P<0.05)。白藜芦醇可诱导H446细胞凋亡、促进细胞内ROS的释放、使线粒体膜电位下降,随着药物剂量增加和作用时间延长,凋亡诱导作用更强、细胞内ROS释放量更多、线粒体膜电位下降速度更快,呈现剂量和时间依赖的特点,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论白藜芦醇对小细胞肺癌H446细胞的增殖具有明确的抑制作用,其诱导小细胞肺癌H446的凋亡可能与线粒体功能障碍有关。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

紫杉醇顺铂方案联合同步放疗治疗顺铂依托泊苷化疗不敏感局限期小细胞肺癌的临床疗效

目的探讨紫杉醇顺铂联合同步放疗对顺铂依托泊苷(EP)不敏感局限期小细胞肺癌的治疗作用。方法 EP两周期化疗结束2 w后评估为无变化和疾病进展的患者为研究对象,在知情同意下随机分为继用EP方案化疗联合同步放疗组(观察组)和改用紫杉醇顺铂联合同步放疗组(对照组)。观察两组的毒副作用,评估治疗结束后4 w的近期临床有效率(RR),以疾病无进展生存时间(PFS)为随访终点。结果观察组的RR为37.5%(6/16),对照组为76.5%(13/17),两组差异显著。中位PFS:观察组为6.0个月,对照组为12.0个月,两组差异显著。两组骨髓抑制、放射性食管炎及放射性肺炎等不良反应无统计学差异。结论紫杉醇顺铂联合同步放疗对EP两周期化疗不敏感局限期小细胞肺癌有效。     

诺维本与顺铂治疗非小细胞肺癌

目的：观察诺维本（navrelbine,NVB)加顺铂治疗非小细胞肺癌（non small cell lung cancer,NSCLC)的疗效。方法：治疗NSCLC40例，病理类型鳞癌36例，腺癌4例，Ⅱ期4例，Ⅲa期为16例，Ⅲb期和Ⅳ期各10例。20例初治，20例复治。结果：CR4例，PR15例，NC20例，PC1例。总有效率47．5％。其中初治有效率为60％，复治有效率为35％，NVB的主要毒副反应为骨髓抑 制，WBC下降占100％，其中Ⅱ、Ⅲ度为80．5％，局部静脉炎发生率为35％。结论：经过简化的NVB＋PDD治疗NSCLC有效率较高，毒性相对较低，尤对对分期较早的病人，效果更好。     

热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL顺铂的培养液4μg/孔,D组先经过水浴处理后加入顺铂。继续培养72 h后,采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax。结果 NCI-H446细胞凋亡率A组为4.25%±0.56%、B组为8.12%±0.64%、C组为10.02%±0.82%、D组为12.12%±0.49%,B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。NCI-H446细胞中Bcl-2、Bax相对表达量A组分别为0.89±0.002 8、0.18±0.001 8,B组分别为0.61±0.004 2、0.32±0.002 0,C组分别为0.30±0.003 6、0.48±0.001 4,D组分别为0.21±0.001 7、0.64±0.002 5。B、C、D组与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。结论热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,其机制与降低细胞中Bcl-2表达、升高Bax表达有关。     

多药耐药基因在非小细胞肺癌中的共表达及临床意义

目的探讨多药耐药基因、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、谷胱甘肽-S转移酶π(GST-π)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)中的共表达情况及临床意义。方法1996-10~2001-10采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测哈尔滨医科大学呼吸内科49例NSCLC组织中上述耐药基因的4种多药耐药基因共表达水平,随访生存时间,计算生存概率。结果在NSCLC中总阳性率分别为53.1%,65.3%,67.3%,83.3%。两种和(或)两种以上阳性共表达率与单一阳性表达率之间有显著差异性(P<0.05)。阳性表达率在NSCLC的不同临床分期、分化程度间无差异性(P>0.05)。随着多药耐药基因共表达种类增加,生存曲线左移,生存时间缩短。结论NSCLC的MDR现象是由多药耐药基因共表达引起的,多药耐药基因共表达种类对预后有直接影响,可作为评价预后的可靠指标。     

多药耐药相关蛋白与非小细胞肺癌关系的研究进展

多药耐药相关蛋白（MRP）是非细胞肺癌（NSCLC）产生化疗耐药的原因之一,通过转运谷胱甘肽-x复合物与参与胞质囊泡运输抗癌药物,泵出细胞予以解毒。MRP在NSCLC中的表达与化疗敏感及预后有着密切的关系。多药耐药的逆转是目前研究的热点。     

川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响

目的观察川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响。方法将在体外培养的NCI-H446细胞分为川芎嗪组、顺铂组及川芎嗪联合顺铂组,分别加入相应药物,同时设空白对照组。MTT法检测各组细胞光密度值,进行集落形成实验,Western blot检测各组细胞的Cyclin D1、p16蛋白。结果加入川芎嗪、顺铂及川芎嗪＋顺铂培养后细胞变圆、坏死,存活的细胞减少。MTT实验显示在体外培养72 h及96 h时,川芎嗪组的光密度值分别为1.031±0.034、1.129±0.049,顺铂组分别为0.986±0.028、1.018±0.038,川芎嗪联合顺铂组分别为0.854±0.036、0.923±0.041,与空白对照组的1.336±0.067、1.437±0.045相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。细胞集落形成率川芎嗪组为17.9%±3.7%、顺铂组为15.8%±3.5%、川芎嗪联合顺铂组为11.2%±2.9%,与空白对照组的23.8%±4.2%相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。用药72 h后与对照组相比,川芎嗪组、顺铂组以及川芎嗪联合顺铂组p16蛋白表达水平升高（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）;三组Cyclin D1蛋白表达水平下降（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）。结论川芎嗪、顺铂均可抑制NCI-H446的增殖,二者联合应用抑制作用更明显,同时可降低细胞Cyclin D1的表达水平、升高p16的表达水平。     

小细胞肺癌阿霉素多药耐药细胞模型的建立及其与Bcl-2家族蛋白表达的关系

目的建立人小细胞肺癌（SCLC）阿霉素（ADM）多药耐药细胞系H446／ADM模型,分析凋亡相关基因Bcl-2家族在SCLC耐药性产生中的可能作用。方法采用ADM高浓度反复间歇诱导的方法,建立人SCLC的ADM多药耐药细胞系H446／ADM模型,流式细胞术分析细胞周期变化;MTT法分析细胞系的耐药谱。流式细胞术和Western blot法检测Bcl-2、Bcl-xL、Bak及Bax蛋白表达的变化。结果相对于亲代H446细胞,H446／ADM的生长速度减慢,细胞倍增时间延长,细胞周期分布G0／G1期细胞增加,G2／M期细胞减少;MTT法耐药谱分析示该细胞系对ADM的耐药倍数为33．09,此外,该细胞系对其他化疗药物如DNR、VCR、TAX、DDP、VP-16、MIT亦有交叉耐药。流式细胞术及Western blot法检测示H446／ADM细胞中Bcl-2和Bcl—xL表达明显高于H446,而Bak和Bax的表达水平明显降低（P〈0．05）。结论人SCLC耐药细胞系H446／ADM成功建立,有多药耐药性;Bcl-2家族蛋白表达的变化可能与耐药性产生有关。     

槲皮素对小细胞肺癌细胞株H446的凋亡调控作用

目的初步探讨槲皮素对人小细胞肺癌细胞株凋亡的影响。方法以不同浓度槲皮素培养H446细胞24 h后,运用免疫荧光染色法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果以0、15、30、60μmol/L浓度的槲皮素作用于细胞株24 h后,细胞凋亡率分别为(1.30±0.32)%(12.95±0.08)%,(16.8±0.19)%,(25.81±1.01)%,各组间均值具有显著性差异(P0.01),并且随着槲皮素浓度的增加,H446细胞凋亡率逐渐增加,两者呈正性相关。采用免疫荧光染色法检测发现,随着槲皮素作用浓度的增加,抗凋亡蛋白BCL-2的表达信号亦逐渐降低。结论槲皮素对人小细胞肺癌细胞株有促进凋亡的作用,其机制可能与抑制抗凋亡蛋白BCL-2的表达有关。     

TRAIL联合顺铂诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是体内天然的抗肿瘤药物,可由人体的免疫系统正常表达,目前在美国TRAIL已进入临床Ⅱ期研究阶段[1].本课题组在以往研究中发现,TRAIL在胶质母细胞瘤诱导凋亡过程中,发生凋亡抵抗而不能引起肿瘤细胞凋亡[2].因此,本文将研究TRAIL和化疗药物顺铂对非小细胞肺癌细胞联合诱导凋亡的作用,为TRAIL作为新药开发提供更进一步的理论依据,此方面研究国内还未见相关报道.     

诺维本加顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效

目的观察诺维本加顺铂联合化疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效及毒副作用。方法58例Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌,初治36例、复治22例,采用诺维本25mg/m2,静脉推注,d1,d8;顺铂30mg/m2,静脉滴注,d1-d3,联合化疗。结果初治36例有效率47.2%;复治22例有效率40.9%,腺癌34例有效率52.9%,鳞癌24例有效率33.3%,总有效率44.8%。主要毒副反应为骨髓抑制及恶心、呕吐,采用深静脉给药可以防止静脉炎发生。结论诺维本加顺铂联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效较好,副反应可耐受,且对一些复发患者也有较好疗效。     

浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用观察及机制探讨

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的细胞随机分成2组,对照组分别加入不同浓度的DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算两组细胞DDP的半数抑制浓度(IC50)及浙贝母碱的逆转倍数。将对数生长期的细胞分为3组,空白对照组不加任何药物,对照组加入DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;药物作用48 h后,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,用细胞免疫荧光法检测细胞中的人肺耐药蛋白(LRP)。结果实验组DDP的IC50为4.15μg/mL,对照组为15.46μg/mL,浙贝母碱的逆转耐药倍数为3.73。培养48 h后,空白对照组细胞凋亡率为2.56%±0.44%、LRP蛋白阳性细胞为(9.8±1.92)个/HP,对照组分别为为13.5%±1.42%、(9.2±1.9)个/HP,实验组为38.16%±2.25%、(5.8±1.3)个/HP;实验组与对照组、空白对照组比较,P均<0.05。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与其促进耐药细胞凋亡、下调LRP蛋白表达有关。     

旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

目的 探讨旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响及其作用的可能机制。方法 将H446细胞与0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、1.2 mg/mL虫体蛋白分别培养并设为实验组,不处理的H446细胞设为对照组,采用噻唑兰(MTT)比色法检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞增殖活性的抑制作用;采用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导H446细胞株凋亡的情况;采用Real-timePCR及Western blot法检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1) mRNA及蛋白的表达。结果 MTT比色法结果表明虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性;流式细胞术结果表明虫体蛋白作用于H446细胞24 h后,有明显的促凋亡作用;Real-timePCR及Western blot法结果显示,与阴性对照组相比,促凋亡基因Cyt-C和Apaf-1表达均上调。结论 旋毛虫肌幼虫虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性,并诱导细胞凋亡,其作用可能与Cyt-C和Apaf-1表达上调有关。     

非小细胞肺癌患者根治术后以顺铂为主的辅助化疗

背景根据既往的荟萃，设计一项国际肺癌辅助试验，以评估顺铂为主的辅助化疗对根治术后非小细胞肺癌患者的生存效果。方法我们将患者随机分为2组，一组采用以顺铂为主进行3或4个周期的化疗，另外一组为病例对照组。在对患者随机化之前，每个实验中心