TRAIL诱导CHP212细胞凋亡中Caspase8／Caspase3活性的变化

目的：探讨Caspase8和Caspase3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡中活性的变化。方法：应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase8／Caspase3抑制剂＋TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用；比色法测定Caspase8、Caspase3相对活性；透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果：TRAIL可诱导CHP212细胞凋亡，并存在剂量依赖性；Caspase8／Caspase3抑制剂能抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。随TRML作用时间的延长，Caspase8、Caspase3活性逐步升高，分别于作用16h、8h后达高峰。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论：TRAIL通过Caspase信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8和Caspase3活性增高。     

TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中 Caspase 8活性的变化

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡过程中Caspase 8活性的变化.方法：应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase 8抑制剂（zIETD-FMK）＋TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用 应用比色法测定Caspase 8相对活性 应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果：CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感，存在剂量依赖性.随TRAIL作用时间的延长，Caspase 8活性逐步升高，于作用16h达高峰 不同浓度TRAIL处理组Caspase 8相对活性随浓度增加而递增.zIETD-FMK能阻断Caspase 8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用.透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论：TRAIL通过Caspase 8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase 8活性增高.     

5氮杂胞苷联合干扰素-γ上调神经母细胞瘤细胞Caspase 8表达的研究

目的：应用去甲基药5氮杂胞苷（5AZA）和/或干扰素（IFNγ）诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞Caspase 8的表达,并观察是否可以恢复NB细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的敏感性。方法：应用Western blot方法检测5AZA和/或IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase 8蛋白的表达;应用流式细胞术检测5AZA、IFNγ、TRAIL、5AZA和/或IFNγ＋TRAIL、5AZA和/或IFNγ＋Caspase 8抑制剂zIETD-FMK＋TRAIL对NB细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Caspase 8相对活性。结果：对TRAIL耐药的SY5Y细胞不表达Caspase 8,经5AZA和/或IFNγ处理后Caspase 8蛋白表达水平逐步增加;IFNγ与5AZA联合作用后其Caspase 8表达较单一用药明显增加。IFNγ和/或5AZA与TRAIL联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。5AZA和/或IFNγ＋TRAIL组的SY5Y细胞Caspase 8相对活性明显高于对照组、IFNγ组、5AZA组、TRAIL组及抑制剂组。结论：5AZA联合IFNγ可以明显上调NB细胞Caspase 8表达;表达Caspase 8的NB细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感;TRAIL诱导NB细胞凋亡过程中伴随Caspase 8活性的增加。     

应用Alamarblue法检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用

目的：神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞对TRAIL的杀伤效应不敏感与其Caspase 8表达的缺失有关。本研究中我们用γ-干扰素（Interferonγ,IFNγ）诱导NB细胞株CHP212和SH-SY5Y（SY5Y）Caspase 8表达,观察表达Caspase 8的NB细胞是否对TRAIL的细胞毒作用敏感,从而探讨Alamar blue法用于测定细胞体外增殖及细胞毒实验的可行性。方法：应用Western-blot方法检测IFNγ作用前后NB细胞Caspase 8蛋白的表达;应用Alamar blue还原率测定IFNγ、TRAIL、IFNγ＋TRAIL、Caspase 8抑制剂＋TRAIL对NB细胞生长的影响。结果：对TRAIL敏感的CHP212细胞表达Caspase 8且经IFNγ处理后Caspase 8表达水平逐步增加;对TRAIL不敏感的SY5Y细胞不表达Caspase 8,IFNγ作用后其Caspase 8蛋白表达明显增加。CHP212细胞还原率随TRAIL浓度的增加和作用时间的延长而降低,各实验组与对照组比较有显著差别（P〈0.05）。SY5Y对TRAIL耐药,而IFNγ＋TRAIL组的SY5Y细胞还原率与单独用IFNγ或TRAIL组比较,显著降低（P〈0.01）。结论：Alamar blue还原率测定结果表明CHP212细胞对TRAIL的细胞毒作用敏感,存在时间和剂量依赖性;经IFNγ诱导表达Caspase 8的SY5Y细胞对TRAIL的细胞毒作用亦敏感。本研究结果证实Alamar blue法是一种简便、敏感、安全的方法,可用于体外测定细胞增殖及化疗药的细胞毒作用。     

IFNγ对TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的调节作用

目的:探讨IFNγ(γ-干扰素)对TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y凋亡的影响及其发生机制.方法:应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase 8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ TRAIL及IFNγ Caspase 8抑制剂 TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果:SY5Y细胞不表达Caspase 8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase 8表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase 8的SY5Y细胞对TRAIL敏感,且与TRAIL浓度有关,Caspase 8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase 8的SY5Y细胞的杀伤作用;透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论:IFNγ可逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,其发生机制可能是IFNγ通过上调SY5Y细胞Caspase 8表达而实现的.     

5氮杂胞苷联合干扰素-γ上调神经母细胞瘤细胞Caspase 8表达的研究

目的:应用去甲基药5氮杂胞苷(5AZA)和/或干扰素(IFNγ)诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞Caspase 8的表达,并观察是否可以恢复NB细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性。方法:应用Western blot方法检测5AZA和/或IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase 8蛋白的表达;应用流式细胞术检测5AZA、IFNγ、TRAIL、5AZA和/或IFNγ+TRAIL、5AZA和/或IFNγ+Caspase 8抑制剂zIETD-FMK+TRAIL对NB细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Caspase 8相对活性。结果:对TRAIL耐药的SY5Y细胞不表达Caspase 8,经5AZA和/或IFNγ处理后Caspase 8蛋白表达水平逐步增加;IFNγ与5AZA联合作用后其Caspase 8表达较单一用药明显增加。IFNγ和/或5AZA与TRAIL联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。5AZA和/或IFNγ+TRAIL组的SY5Y细胞Caspase 8相对活性明显高于对照组、IFNγ组、5AZA组、TRAIL组及抑制剂组。结论:5AZA联合IFNγ可以明显上调NB细胞Caspase 8表达;表达Caspase 8的NB细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感;TRAIL诱导NB细胞凋亡过程中伴随Caspase 8活性的增加。     

IFNγ、TRAIL及化疗药联合诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的探讨γ-干扰素(Interferon,IFNγ)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorre-latedapoptosisinducingligand,TRAIL)及化疗药联合诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞株SH-SY5Y(SY5Y)凋亡的作用及其发生机制。方法应用Western-blot方法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase8蛋白的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ TRAIL、IFNγ Caspase8抑制剂(zIETD-FMK) TRAIL及IFNγ 化疗药 TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响。结果SY5Y细胞不表达Caspase8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase8蛋白表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感;zIETD-FMK可明显抑制TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用;化疗药可增强SY5Y细胞对TRAIL的敏感性。结论IFNγ可通过上调SY5Y细胞Caspase8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受,化疗药可增强TRAIL对SY5Y细胞的诱导凋亡作用。     

喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

应用Alamar blue法检测TRAIL对神经母细胞瘤细胞的细胞毒作用

目的:神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞对TRAIL的杀伤效应不敏感与其Caspase 8表达的缺失有关.本研究中我们用γ-干扰素(Interferon γ,IFNγ)诱导NB细胞株CHP212和SH-SY5Y(SY5Y)Caspase 8表达,观察表达Caspase 8的NB细胞是否对TRAIL的细胞毒作用敏感,从而探讨Alamar blue法用于测定细胞体外增殖及细胞毒实验的可行性.方法:应用Western-blot方法检测IFNγ作用前后NB细胞Caspase 8蛋白的表达;应用Alamar blue还原率测定IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL、Caspase 8抑制剂+TRAIL对NB细胞生长的影响.结果:对TRAIL敏感的CHP212细胞表达Caspase 8且经IFNγ处理后Caspase 8表达水平逐步增加;对TRAIL不敏感的SY5Y细胞不表达Caspase 8,IFNγ作用后其Caspase 8蛋白表达明显增加.CHP212细胞还原率随TRAIL浓度的增加和作用时间的延长而降低,各实验组与对照组比较有显著差别(P<0.05).SY5Y对TRAIL耐药,而IFNγ+TRAIL组的SY5Y细胞还原率与单独用IFNγ或TRAIL组比较,显著降低(P<0.01).结论:Alamar blue还原率测定结果表明CHP212细胞对TRAIL的细胞毒作用敏感,存在时间和剂量依赖性;经IFNγ诱导表达Caspase 8的SYSY细胞对TRAIL的细胞毒作用亦敏感.本研究结果证实Alamar blue法是一种简便、敏感、安全的方法,可用于体外测定细胞增殖及化疗药的细胞毒作用.     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中Caspase3的变化

目的：观察三氧化二砷（As2O3)诱导K562细胞凋亡过程中Caspase3 活性的变化。方法：K562细胞分别用浓度为0．5umol/L,1umol/L,2umol/L,5umol/L的As2O3处理不同时间＊（0,6h,12h,24h,47h,72h),用流式细胞仪检测K562细胞凋亡率,荧发光光度计检测Caspase3活性,结果：1umol/L-5umol/L的As2O3可诱导K562细胞凋亡,As2O3学在2umol/L以上时作用更明显,K562细胞凋亡过程中Caspase3活性明显升高,结论：As2O3可诱导K562细胞凋亡,以2umol/L以上的浓度作用更明显,Caspase3活化参与了As2O3诱导K562细胞凋亡的过程。     

IFN-γ联合阿霉素或依托泊苷增强TRAIL对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用

  目的  探讨半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)和死亡受体(DR)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤(NB)细胞凋亡中的作用。  方法  应用RT-PCR方法检测γ干扰素(IFN-γ)作用前后NB细胞Caspase 8 mRNA的表达; 应用Western blot方法检测Caspase 8、DR4和DR5蛋白表达; 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术检测IFN-γ, TRAIL, IFN-γ+TRAIL, Caspase 8抑制剂+TRAIL及IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL对NB细胞株生长及凋亡的影响。  结果  IFN-γ在NB细胞株SKNDZ中诱导了Caspase 8mRNA及蛋白表达。SY5Y细胞对TRAIL不敏感, 而IFN-γ与TRAIL或阿霉素, 依托泊苷联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。IFN-γ+TRAIL组SY5Y细胞早期凋亡率(23.09+2.35)%高于TRAIL组[(6.15±0.54)%(P< 0.01)], 但低于IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组[(43.41±6.46)%/(38.86±7.29)%, P< 0.01]。阿霉素或依托泊苷可以诱导NB细胞株DR5蛋白表达, 但未诱导DR4蛋白表达。IFNγ诱导后表达Caspase 8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感, 而阿霉素或依托泊苷处理后同时表达DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用相对敏感。IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组SKNDZ细胞早期凋亡率(11.54±2.49)%/(13.38±1.65)%高于IFN-γ+TRAIL组(P< 0.01)。  结论  IFN-γ上调Caspase 8表达及化疗药阿霉素或依托泊苷诱导DR5表达可以恢复NB细胞对TRAIL的敏感性, Caspase 8和DR5在TRAIL诱导NB细胞凋亡中起着十分关键的作用。      

半胱氨酸酶在NS-398诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的 探讨选择性环氧合酶(COX-2)抑制剂NS-398诱导肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。方法 采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;Western blot法检测不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase3表达的变化; 并以流式细胞术检测半胱氨酸酶-3(Caspase-3) 酶活性的变化。结果 流式细胞术显示NS-398(0、100、200、300、400μmol/L)作用HepG2细胞24h后,对照处理组没有出现凋亡峰,其余各组(100、200、300、400μmol/L)出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%,(60.22±2.03)%(P<0.01),不同浓度NS-398处理后凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Caspase-3蛋白表达增加,随着NS-398处理浓度的增加,表达活性Caspase3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%、(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论 选择性COX-2 抑制剂可能通过调节Bcl-2蛋白表达活化Caspase3,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡。     

Correlation of tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) with high Caspase 3-like activity in myelodysplastic syndromes.

Increased intramedullary apoptotic death of hematopoietic cells is thought to contribute to the ineffective hematopoiesis in myelodysplastic syndromes (MDS). Furthermore, high amounts of tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) have previously been correlated with apoptosis in MDS marrows. The present studies were undertaken to examine the status of two key downstream effectors of TNF alpha signaling, i.e. Caspase 1 and Caspase 3 enzymes, using a fluorometric assay in the bone marrow aspirate mononuclear cells (BMMNC) in relation to apoptotic DNA fragmentation detected by in situ end-labeling (ISEL) of DNA and with localization of TNF alpha in the corresponding biopsies from 14 MDS patients. Both Caspase 1 and 3 were detectable in freshly harvested BMMNC, albeit median Caspase 3 levels (47.5 units/mg protein) being almost 10 times higher than Caspase 1 (4.0 units/mg protein). Upon short-term culture for 4 h in a serum-supplemented medium in vitro a significant increase was seen in Caspase 3 activity (58.8 +/- 13.9 at 0 h vs. 177.8 +/- 55.2 units/mg protein at 4 h, n = 14, P = 0.017) and in percent cells labeled by ISEL (apoptotic index or AI%: 0.76% +/- 0.25% vs. 3.99% +/- 1.1%, n = 14, P = 0.004, respectively). Caspase 1 activity increased after 15 min in culture. Interestingly, TNF alpha levels measured by immunohistochemistry correlated with the net increase in Caspase 3 activity after 4 h (p = 0.517, n = 13, P = 0.07) and the starting levels of Caspase 1 at 0 h correlated with the Caspase 3 levels attained at 4 h (p = 0.593, n = 13, P = 0.033). Additionally when TNF alpha-positive bone marrows (8/14) were compared with the negative marrows (6/14) the Caspase 3 levels were significantly higher in the TNF alpha-positive marrows (189.6 +/- 66.2 vs. 25.0 +/- 14.6 units/mg protein, respectively, P = 0.043). The increase in AI%, though not statistically significant, was also higher in the TNF alpha-positive marrows. Finally in HL60 cells the effects of different Caspase inhibitors and pentoxifylline (PTX) (interferes with lipid signaling of cytokines) on TNF alpha-induced apoptosis were evaluated. TNF alpha treatment significantly increased AI% (P < 0.003) as compared to the untreated controls. A co-treatment with three Caspase inhibitors, zVAD.FMK (inhibitor of Caspases 1 and 3, 10 microM/l), Ac.YVAD.FMK (Caspase 1 inhibitor, 1 microM/l), Ac.DEVD.FMK (Caspase 3 inhibitor, 10 microM/l) as well as PTX (250 microM/l) significantly curtailed the AI% induced by TNF alpha. The present studies thus identify the downstream effectors of TNF alpha-inducible apoptosis in MDS and so also the suppressors of TNF alpha apoptotic signaling. These results may have significant clinical implications in the therapy of MDS in the future.     

Embelin 通过上调死亡受体 DR4 / DR5 mRNA 表达增加 HL - 60 细胞对 TRAIL的敏感性

目的：探讨Embelin增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的敏感性及可能的作用机制.方法：TRAIL 1、5、10、50及100 ng/ml分别处理HL-60细胞6、12、24及48h,MTT法绘制细胞生长曲线;TRAIL 10 ng/ml±亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,Annexin V/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测24h时Caspase-3、8及9的表达;亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,实时荧光定量PCR检测DR4及DR5 mRNA 的表达.结果：TRAIL对HL-60 细胞具有增殖抑制作用.亚细胞毒浓度的Embelin联合10 ng/ml TRAIL作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的Caspase-3、8及9的表达也随之增加.结论：亚细胞毒浓度的Embelin可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与上调DR4及DR5 mRNA表达并进而启动凋亡途径有关.     

石蒜碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡作用及其机制

目的 通过研究石蒜碱在体外对人肺癌NCI-H460细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用，探讨石蒜碱抗肿瘤机制。方法 MTT法检测石蒜碱对NCI-H460细胞增殖的抑制作用，流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡率，比色法检测凋亡因子相关因子Caspase 3活性。结果 石蒜碱能够有效抑制肺癌NCI-H460细胞增殖，IC₅₀为（5.79±0.11）μmol/L，对NCI-H460细胞的凋亡具有诱导效应，可增强肺癌Caspase 3的活性。结论 石蒜碱在体外能有效地抑制NCI-H460细胞增殖并促进其凋亡，其机制可能与激活Caspase 3的表达从而诱导肿瘤细胞凋亡有关。