脑缺血再灌注损伤时 c-fos、c-jun 的表达和细胞凋亡

目的　研究脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和原癌基因c fos、c jun表达。 方法　 8周龄健康雄性Wistar大鼠 2 4只 ,随机分为缺血再灌注组、假手术组和对照组 ,每组各 8只。制作大鼠大脑中动脉栓塞 (MCAO)再灌注模型 ,缺血 4h再灌注 2h后断头处死 ,TUNEL法检测神经细胞凋亡 ,免疫组织化学法检测神经细胞c fos、c jun蛋白的表达。结果　缺血再灌注组细胞凋亡率、平均吸光度及c fos、c jun阳性细胞率、平均吸光度均高于假手术组和对照组 (P <0 .0 5 )。结论　脑缺血再灌注损伤可诱导c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡 ;脑缺血再灌注大鼠神经功能评分与c fos、c jun蛋白的表达和细胞凋亡呈正相关。     

L-NAME对大鼠局灶性脑缺血灌注损伤Fos蛋白表达的影响

目的观察一氧化氮含量的变化对缺血再灌注损伤后Fos蛋白表达的影响。方法采用线拴法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,利用NADPH组化和Fos蛋白免疫组化双标技术研究NOS抑制剂L－NAME对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑皮层Fos蛋白表达的影响。结果缺血60min再灌注3h后损伤侧脑组织皮质一氧化氮合酶阳性神经元较正常增多并深染,Fos蛋白表达增加,L－NAME（3mg／kg）治疗组脑皮质神经元Fos蛋白的表达量较对照组减少,L－NAME（10mg/kg）治疗组脑皮质神经元Fos蛋白的表达量较对照组明显减少,同时也可见给予L－NAME后脑组织皮质内NOS阳性神经元无论在数量上还是在细胞着色、胞体突起均明显减少。结论c－fos基因表达也可能部分参与了NO的致神经细胞损伤过程。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Fas表达与细胞凋亡关系的研究

目的 :本实验通过观察缺血再灌注后大鼠脑组织中 Fas的表达及细胞凋亡的情况 ;初步探讨脑缺血后 Fas表达与细胞凋亡的关系 ,以及其发生的机理。方法 :采用 TUNEL和免疫组化方法观察细胞凋亡及 Fas蛋白在脑缺血再灌注后随时间延长动态变化情况 ,并利用图像分析测定二者的免疫强度。结果 :脑缺血再灌注后神经细胞过度地表达 Fas,以缺血半暗带明显 ,且在缺血再灌注后 6小时达高峰 ,于 2 4小时开始下降。而细胞的凋亡于缺血再灌注后 6小时开始增加 ,于 2 4小时达高峰 ,于 36小时略有下降 ,凋亡细胞分布也以缺血半暗带明显。结论 :脑缺血再灌注可引起Fas的过度表达和神经细胞凋亡增加 ,而缺血后 Fas的过度表达是诱导细胞凋亡的重要的因素之一     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后CAD表达与细胞凋亡的关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带 Caspase-3激活的 DNA酶 (CAD)基因的表达变化与细胞凋亡的关系。方法　线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)及再通模型。应用 RT-PCR技术检测MCAO再通后不同时相缺血半暗带皮质 CAD基因的表达 ,同时利用 TU NEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律。结果　脑缺血再灌注 6h,半暗带皮质 CAD m RNA显著升高 ,密度比值为 0 .74± 0 .0 4,再灌注 2 4h达到高峰 (1.13± 0 .11)。对应各时相均可见神经细胞凋亡 ,凋亡细胞以再灌注 48h组为最高 (113 .10± 13 .88)。结论　脑缺血再灌注可致 CAD基因表达上调 ,可能参与了缺血后神经细胞凋亡过程     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时c-fos、bcl-2蛋白的表达

目的：为探讨细胞凋亡在脑缺血再灌注时脑损伤过程中的作用。方法：采用免疫组化法检测大鼠脑缺血再液注不同时间内ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２蛋白表达的水平。结果：①脑缺血再灌注时在缺血侧皮层和基底节区可见ｃ－ｆｏｓ阳性表达,并于缺血 ３０ｍｉｎ再灌注１ｈ时阳性表达达高峰;②脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,于缺血２ｈ再灌注３ｈ时阳性表达达高峰。结论：ｃ－ｆｏｓ和ｂｃｌ－２参与大鼠脑缺血再灌注时缺血性细胞损伤的发生。     

甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响

目的 研究甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断（MCAO）模型，给予不同剂量甘露醇进行干预，用TUNEL染色标记大鼠神经细胞凋亡情况，按Swanson方法测量、计算梗死体积，并与未干预组及生理盐水对照组比较。结果 大、小剂量甘露醇均能减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经细胞凋亡，并能阻止梗死体积的扩大。大、小剂量的效果之间无明显差异。结论 甘露醇的脑保护作用不完全与脱水降颅压有关，还可通过抑制神经细胞凋亡而发挥重要的脑保护作用。     

局灶脑缺血后胰岛素对c-fos、c-jun基因表达的影响

目的　观察胰岛素对局灶缺血性脑组织 c- fos、c- jun基因表达的影响。方法　 30只肾血管性高血压大鼠随机分 4组 ,在大脑中动脉闭塞 (MCAO)后即予胰岛素 (2 .1IU / kg,A组 )、葡萄糖和胰岛素 (2 .1IU / kg,B组 ;4.5 IU / kg,C组 )、生理盐水 (D组 ) ,采用原位杂交技术检测各组 MCAO后 3h脑组织 c- fos、c- jun基因的表达。结果　与其它组比较 ,A组血糖下降明显 (P<0 .0 1) ,MCAO后 1h、2 h、3h分别为 3.80± 0 .3mm ol/ L、3.6 8± 0 .3mm ol/L、3.6 9± 0 .3mm ol/ L。 c- fos m RNA被诱导出现于缺血侧皮层和尾壳核 ,C组 c- fos m RNA明显增加 (P<0 .0 1) ,皮层和尾壳核的灰度为 12 3.5 8± 8.72、141.0 8± 8.49;c- jun m RNA仅出现于缺血侧皮层 ,A、B、C组的 c- jun m RNA均增加明显 ,灰度分别为 171.82± 7.33、172 .5 6± 7.91、15 5 .0 9± 7.91,其中 C组的增加更为显著 (P<0 .0 1)。结论　胰岛素促进缺血脑组织 c- fos、c- jun基因表达可能是其神经保护作用机制之一。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡研究

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤后海马CA1区神经元凋亡、TUNEL阳性细胞变化,以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白的表达情况.方法 将健康雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠随机分为假手术组和I/R组,每组再分为缺血再灌注后3、6、12、24、48、72 h亚组.应用免疫组化方法检测再灌注后不同时间点大鼠海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值变化,采用原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术检测凋亡阳性细胞数.结果 各组非缺血侧相应区域神经元胞质中Bcl-2均有微弱表达.I/R组缺血侧海马CA1区于再灌注3 h开始出现Bcl-2和Bax蛋白微弱表达,随再灌注时间延长神经元内Bcl-2表达逐渐增强,再灌注24 h后Bcl-2表达达高峰,假手术组与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 I/R损伤后海马CA1区神经元不仅存在变性坏死,还存在明显的细胞凋亡且细胞凋亡在大鼠I/R损伤中发挥重要作用;I/R可诱导海马CA1区细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达,且其表达呈一定规律.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2蛋白在大脑皮质的表达

目的观察bcl-2蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注（FCIR）后表达的变化。方法大脑中动脉内线栓法（MCAO）建立缺血再灌注（IR）模型，用免疫组化（SP）法观察bcl-2蛋白不同时间的表达。既染色观察各个时间点细胞形态学变化。结果脑缺血2h再灌注2h bcl-2表达升高（P〈0．01），IR 6h达到高峰，IR 12h开始下降。结论随着脑缺血再灌注时间延长脑损伤加重，bcl-2蛋白表达减少，bcl-2蛋白表达增加对细胞存亡有重要意义。     

达纳康抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后P^53蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的研究达纳康在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用及其分子机制.方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉(MCAO)缺血1h再灌注24h模型,18只雄性大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组和达纳康治疗组,每组6只.采用Zea-Longa评分法观察神经功能缺损程度,采用免疫组织化学方法、TUNEL法分别观察各组P53蛋白表达和细胞凋亡.结果假手术组神经功能缺失评分为0分,高倍视野下无P53蛋白染色阳性细胞及凋亡细胞;达纳康治疗组神经功能缺失评分(0.48±0.37分)、P53蛋白染色阳性细胞数(5.16±1.84个/高倍视野)、凋亡细胞数(4.18±1.21个/高倍视野)均较生理盐水对照组(2.76±0.82分、10.43±1.56个/高倍视野、8.16±1.50个/高倍视野)显著减少(P<0.01).结论达纳康可明显减轻局灶性脑缺血再灌注损伤,其抑制神经细胞P53蛋白的表达,进而抑制细胞凋亡,是其脑保护作用的分子机制之一.     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤c-fos表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后c-fos表达的影响及与缺血时间关系,探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组(n=5)、对照组(n=25)、IGF-1治疗组(n=25),其中后2组按缺血再灌时间(6h、12h、1d、3d、7d)不同可分为5个亚组,每组5只,治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg/kg稀释为1 ml的IGF-1,假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1 ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4%多聚甲醛经心脏灌注固定,取大鼠脑组织,应用免疫组化S-P法和HE染色检测c-fos蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果与对照组相比,治疗组大鼠脑组织c-fos表达明显减少,神经细胞坏死程度明显减轻。结论IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用,其作用机制包括降低c-fos的表达,发挥神经保护作用。     

胰岛素对局灶性脑缺血再灌注大鼠c—fos和bcl—2基因表达的影响

目的探讨胰岛素对脑缺血再灌注损伤的中枢保护机制.方法参照ZeaLonga线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫组化法检测同一剂量胰岛素(2IU/kg)对缺血再灌注不同时限点脑组织FOS和BCL-2蛋白的表达.结果与假手术对照组和未用药组相比,胰岛素能显著上调缺血侧大脑皮层及基底节区FOS和BCL-2蛋白的表达(P<0.001).结论胰岛素能促进缺血再灌注脑组织FOS和BCL-2蛋白的表达,这可能是其中枢保护机制之一.     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注后MMP-9表达和脑水肿的影响

目的通过研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达和脑水肿的影响，探讨亚低温脑保护的可能机制。方法雄性SD大鼠72只，随机分为假手术组、亚低温组、常温组，线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注48h模型，缺血时间2h。采用比色法测定脑组织中伊文思蓝（EB）含量反映血脑屏障（BBB）通透性；干-湿重法检测脑组织含水量；免疫组化法检测MMP-9表达。结果与假手术组相比，缺血鼠缺血侧脑组织的EB含量及脑含水量明显增高，可见大量MMP-9免疫阳性细胞（P〈0．05）。亚低温组和常温组大鼠脑EB含量分别为（22．42±1．86）μg/g脑重和（38．67±2．94）μg／g脑重，脑含水量分别为80．07％±0．56％和82．49％±0．97％，皮质缺血区MMP-9阳性细胞IOD值分别为380．33±40．87和695．16±67．67，纹状体区MMP-9阳性细胞IOD值分别为294．19±33．47和451．87±5．77，差异均有显著性意义（P〈0．05）。亚低温明显减轻缺血脑组织病理学损伤。结论推测亚低温可通过抑制MMP-9表达，减轻BBB的破坏，继而减轻脑水肿，从而发挥确实的脑保护作用。     

Apoptosis and protein expression after focal cerebral ischemia in rat

We used double staining histochemistry to investigate the relationship between apoptotic cell death and selective protein expression associated with DNA damage (p53, Bax, MDM2, Gadd45), DNA repair (PCNA) and cell cycle proteins (cyclin A, cyclin D, cdk2, cdk4) in rats (n=6; control rats, n=5) subjected to transient (2 h) middle cerebral artery occlusion (MCAo) and 46 h of reperfusion. Few apoptotic cells were detected in the non-ischemic hemisphere of control rats. In ischemic animals, scattered apoptotic cells were present in the ischemic core and clustered apoptotic cells were present and localized to the inner boundary zone of the ischemic core. Proteins were preferentially localized to the cellular cytoplasm of control rats and in the non-ischemic hemisphere of rats subjected to MCAo. However, after MCAo these proteins were expressed and were preferentially localized to nuclei within the ischemic lesion. DNA damage induced proteins (wt-p53 and p53-response proteins) were preferentially expressed within apoptotic cells after ischemia. DNA repair proteins and cell cycle proteins were preferentially expressed within morphologically intact cells and in reversibly damaged cells in the ischemic areas. The selective expression of proteins associated with DNA damage, DNA repair and cell cycle observed in morphologically intact cells, ischemic injured cells and apoptotic cells suggests a differential role for these proteins in cell survival and apoptosis after stroke.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达与神经元凋亡的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(AIF)的表达变化及与细胞凋亡的关系.方法 将Wistar大鼠分为假手术组(6只)和模型组(30只).模型组大鼠采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,假手术组大鼠插线较模型组浅,不造成大脑中动脉闭塞.观察假手术组及模型组缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h和7 d缺血半暗带AIF的表达,同时利用TUNEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律.结果模型组脑缺血再灌注6 h在缺血半暗带区AIF阳性细胞显著增加,再灌注48 h达到高峰[(130.47±11.32)个];各时相点均可见细胞凋亡,凋亡细胞数以再灌注48 h最多f(118.53±11.67)个];各组问比较差异均有统计学意义(JP<0.05).结论 局灶性脑缺血再灌注可致AIF表达增加.并引起细胞凋亡.     

亚低温对局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑皮质脑源性神经营养因子表达及神经元凋亡的影响

目的 观察局灶性脑缺血-再灌注后亚低温干预对大鼠脑源性神经营养因子表达及神经元凋亡的影响，并探讨脑源性神经营养因子在亚低温脑保护机制中的作用。方法 采用线栓法制备成年雄性SD大鼠左侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血-再灌注改良模型，缺血时间2h。随机分为常温缺血组和亚低温缺血组。常温时大鼠脑温控制于36．5℃～37．5℃，肛温为35．9℃～36．9℃；亚低温时脑温维持于32．5℃～33．5℃，肛温为32．2℃～33．1℃。两组大鼠分别于脑缺血一再灌注及亚低温干预后2、6、24和72h进行神经功能缺损评分，并同时行三苯基氯化四唑（1TC）染色、HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色及免疫组化与TUNEL双重染色，从而评估大鼠神经功能缺损状况；检测脑梗死体积及脑源性神经营养因子表达水平；观察组织病理学变化和神经元凋亡数量。结果 与常温缺血组相比，亚低温缺血组大鼠神经功能缺损评分低（P〈0．01），脑梗死体积小（P〈0．01），缺血灶周围脑皮质中的脑源性神经营养因子表达水平增高（P〈0．01），而且神经元凋亡数量少（P〈0．01）。在脑源性神经营养因子免疫组化染色呈阳性反应的神经元细胞核中，未发现TUNEL染色阳性者。结论 亚低温干预治疗可促进缺血灶周围的脑皮质对脑源性神经营养因子的表达，从而抑制神经元凋亡，减少大鼠脑梗死体积，改善神经功能缺损体征。     

大鼠短暂脑缺血后海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达的时间规律

目的 探讨大鼠脑缺血-再灌注后脑海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达规律。方法 采用左侧大脑中动脉插入丝线结扎(LMCAO)方法制作大鼠脑缺血-再灌注缺血模型，分别按照30min至7d的不同灌注时间取材，应用原位杂交方法标记各实验组大鼠脑组织海马区c-for mRNA表达数量；应用免疫组化方法标记各实验组大鼠脑组织中海马区FOS阳性神经元数量。结果 c-fos mRNA阳性细胞在MCAO缺血再灌注1h开始表达，2h达高峰，至2d时c-fos mRNA阳性细胞表达基本消失；c-fos免疫活性细胞从2h开始表达，4h达高峰，4d时表达基本消失。脑缺血—再灌注后c-fos mRNA与FOS蛋白在海马区表达具有一定的时间上规律性。结论 本研究证明了大鼠MCAO缺血—再灌注后可诱发FOS蛋白和c-fos mRNA表达增加，且基因和蛋白的表达均具有一定的时间规律性和相关性。     

高温通过上调组织蛋白酶L表达加重局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤

目的 研究高温对局灶性脑缺血组织蛋白酶L(CTSL)表达的影响,探讨高温加重缺血性脑损伤的机制. 方法 100只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组(n=20)、常温组(n=40)和高温组(n=40).常温组和高温组参照Longa等方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAo)缺血1h再灌注模型.高温组保持肛温39.0℃(瑞沃德恒温加热装置),共3h.假手术组和常温缺血组保持肛温37.5℃.假手术组只分离血管,不结扎,不插线.测定再灌注24 h后3组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积及脑含水量.Western blotting和免疫组化法检测再灌注3h、6h和24 h后大鼠缺血脑组织CTSL表达. 结果 (1)高温组大鼠再灌注24 h后神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比及手术侧脑含水量均高于常温组大鼠再灌注24h后结果(3.37±0.48 vs.2.20±0.42、59.08％±0.98％vs.37.96％±0.16％、84.82％±1.79％ vs.82.18％±0.45％),差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)Western blotting检测结果显示,常温组大鼠各时间点CTSL表达无明显变化;而高温组大鼠CTSL表达于再灌注后3h即开始增加,24 h仍未恢复正常,各时间点均高于常温组,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)免疫组化法显示神经元与神经胶质细胞均可表达CTSL,以神经胶质细胞为主.再灌注后3h、6h、24 h,高温组大鼠CTSL阳性表达神经元中CTSL平均密度值均明显高于常温组及假手术组大鼠,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 脑缺血再灌注时,高温可能通过上调CTSL的表达加重缺血性脑损伤.