N-乙酰-L-半胱氨酸对二氧化硅致大鼠肺成纤维细胞基质金属蛋白酶表达升高的抑制

目的 探讨N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）对染矽尘大鼠肺成纤维细胞（LFb）基质金属蛋白酶（MMPs）MMP-2、MMP-9动态表达的影响.方法 将75只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组.每组25只,模型组和干预组经气管注入SiO2粉尘悬液复制矽尘中毒模型,干预组在注入SiO2粉尘悬液前用NAC预处理;对照组给予同体积生理盐水.注射后1、3、7、14和28d分别获取LFb,用免疫细胞化学方法和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法观察MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的动态变化.结果 （1）模型组LFb各时间点MMP-2蛋白表达高于对照组,分别是对照组的1.343、2.198、3.492、2.834和1.405倍,mRNA表达分别是对照组的2.015、4.889、7.364、3.406和2.277倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）;在1、3、7 d MMP-9蛋白表达分别是对照组的1.372、1.286和1.306倍,在1、3 dmRNA分别是对照组的1.797和1.698倍,差异均有统计学意义（P＜0.01）.（2）干预组在各时间点MMP-2蛋白表达低于模型组,在3、7、14、28 d高于对照组（分别是对照组的1.628、2.485、2.072和1.190倍）,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;在各时间点mRNA表达低于模型组,高于对照组（分别是对照组的1.612、3.062、3.930、1.976和1.419倍）,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.在1、3、7 d MMP-9蛋白表达低于模型组,在3、7d高于对照组,在1、3 d mRMA表达低于模型组,高于对照组,分别是对照组的1.304和1.331倍,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 NAC能抑制SiO2所致大鼠LFb的MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA表达的升高.     

NAC对矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达影响的体外研究

目的探讨N-乙酰-L半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。方法对Wistar大鼠行支气管肺泡原位灌洗术,获取肺泡巨噬细胞,将其分为对照组、损伤组和干预组。各组均用DMEM培养基培养,损伤组在培养基中加入SiO2粉尘悬液,干预组用NAC预处理1 h后再加入SiO2粉尘悬液。各组肺泡巨噬细胞分别孵育1、2、4、8 h,用免疫细胞化学和RT-PCR方法结合图像分析观察其MMP-2、MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果损伤组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白表达在各时间点较对照组明显增强(P<0.01),分别是对照组的1.669,2.340,3.538和2.006倍;基因表达较对照组明显增强(P<0.01),分别是对照组的1.636,2.250,2.576和1.538倍。MMP-2表达无明显变化。干预组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白和基因表达在各时间点较损伤组明显减弱(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论应用NAC可降低矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对氰化钠致大鼠线粒体损伤的酶系保护作用

[目的]研究N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对氰化钠(sodium cyanide,NaCN)所致大鼠大脑皮质线粒体损伤的保护作用.[方法]①取SD大鼠66只,按每组6只随机分成11组:第1组,生理盐水(Normal saline,NS)组,腹腔注射NS 10 ml/kg;第2～6组,系按染毒后5个不同时相节点先后处死的NaCN染毒组,均于左侧腹腔注射NS 10 ml/kg,20 min后于右侧腹腔注射NaCN 3.2 mg/kg(亚致死剂量)染毒;第7～11组,系5个也按与上述相同时相节点先后处死的NAC保护组,相同染毒,只是在染毒前20 min先于左侧腹腔注射NAC 250 mg/kg.分别于染毒后5、15、30、60、90 min 5个不同时相节点处死各组,并分离大脑皮质,用比色法测定皮质线粒体内过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、钠钾腺苷三磷酸酶(Na -K -ATPase)、钙镁腺苷三磷酸酶(Ca2 -Mg2 -ATPase)5种酶活性.②再另制备16只大鼠的离体大脑皮质线粒体,分别悬浸于PBS缓冲液(PBS对照组)、0.1 mmol/LNAC(NAC对照组)、0.1 mmol/L NaCN(NaCN甲组)、1 mmol/L NaCN(NaCN乙组)、0.1 mmol/LNAC 0.1 mmol/L NaCN(NAC甲组)、0.1 mmol/L NAC 1 mmol/L NaCN(NAC乙组)6种液体15 min并离心后,按Veitch和Dunkley等方法分别测定其线粒体复合酶Ⅰ～Ⅳ的活性.[结果]①与NaCN染毒组比较,NAC保护组大鼠大脑皮质线粒体内GSH-Px,SOD,Na -K -ATPase、Ca2 -Mg2 -ATPase活性明显增高,XOD活性显著下降(P＜0.01).②NAC组无明显逆转NaCN对线粒体呼吸链复合酶Ⅳ活性的抑制,但可部分逆转呼吸链复合酶Ⅰ活性的剧增(P＜0.01)和复合酶Ⅱ活性的下降(P＜0.05).[结论]NAC可通过其抗氧化作用,促进氧化抗氧化平衡,保护线粒体功能,从而对抗氰化物中毒所致大脑皮质线粒体损伤,发挥其对氰化物中毒的保护作用.     

SOD对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

[目的]探讨超氧化物歧化酶（SOD）对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。[方法]对雄性Wistar大鼠行支气管肺泡原位灌洗术，获取肺泡巨噬细胞。将贴壁后的肺泡巨噬细胞分为对照组、模型组和干预组，均用无血清DMEM培养基孵育。模型组加入SiO2粉尘悬液，干预组用SOD预处理1h后再加入SiO2粉尘悬液。各组肺泡巨噬细胞分别孵育1、2、4、8、16h，用免疫细胞化学和RT-PCR方法观察其MMP-2、MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。[结果]模型组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h均较对照组明显增强（P〈0．01），分别是对照组的1．229、1．358、1．401、1．354倍和1.402、1．637、1．705、1．463倍。MMP-2蛋白及其mRNA表达无明显变化。干预组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达在1、2、4、8h较模型组显著减弱（P〈0．05），但仍高于对照组（P〈0．05）。[结论]应用SOD可降低染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白及其mRNA的表达。     

尘肺患者血清中基质金属蛋白酶9和19的表达

目的 检测尘肺病患者外周血清中基质金属蛋白酶(MMP)9和19的表达水平,探讨其作为尘肺病相关生物指标的可行性.方法 选择98例男性尘肺病患者(Ⅰ期49例,Ⅱ期36例,Ⅲ期13例),其中矽肺41例,煤工尘肺57例.98例男性健康体检者作为对照.空腹情况下采集3 ml外周静脉血,分离血清,用酶联免疫吸附法测定样本血清中MMP9和MMP19水平.结果 矽肺组血清中MMP9和MMP19表达均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);煤工尘肺组血清中MMP9和MMP19表达均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);矽肺组血清中MMP19表达水平高于煤工尘肺组,差异有统计学意义(P＜0.05).接尘工龄≤7年患者血清中MMP19表达水平高于接尘工龄＞20年的患者,差异有统计学意义(P＜0.05).不同肺功能损伤患者血清中MMP9和MMP19表达,差异无统计学意义(P＞0.05).尘肺病组与健康对照组血清中MMP9和MMP19表达均呈明显正相关关系(r=0.235,P＜0.05);血清中MMP9表达与尘肺分期呈负相关关系(P＜0.05).结论 尘肺病患者血清中MMP9和MMP19表达变化有作为尘肺病相关生物标志物的潜能.     

二硫化碳对孕鼠胚胎和子宫组织基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9表达水平的影响

目的 观察二硫化碳(CS2)对孕鼠胚胎和子宫组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平的影响,探讨CS2致胚胎毒性作用机制.方法 昆明种小鼠随机分为对照组、卵泡发育期染毒组、胚胎植入早期染毒组、胚胎植入晚期染毒组,染毒组分别在卵泡发育期、胚胎植入早期、胚胎植入晚期腹腔注射631.4 mg/kg CS2,1次/d,连续2 d.孕第9天检查胚胎植入和发育情况,应用明胶酶谱法检测胚胎和子宫组织中MMP-2、MMP-9表达水平.结果 与对照组(30.700±5.599)比较,植入晚期染毒组胚胎植入数(16.000±12.166)明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).染毒后胚胎组织中MMP-2、MMP-9表达均降低,其中植入晚期染毒组MMP-2、MMP-9分别为0.6837±0.0929、0.7309±0.0822,卵泡发育期染毒组分别为0.6222±0.0997、0.7520±0.1068,与对照组(分别为1.0000±0.0710、1.0000±0.0413)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);植入晚期染毒组孕鼠子宫组织中MMP-2(1.3153±0.3032)、MMP-9(5.0210±4.0307)表达水平较对照组(分别为1.0000±0.1771、1.0000±0.0996)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胚胎植入晚期暴露CS2后胚胎毒作用明显,胚胎和子宫组织中MMP-2、MMP-9表达水平异常可能是CS2致胚胎毒性的重要机制之一.     

N-乙酰半胱氨酸和硒对镉急性毒性的影响

目的对急性染镉大鼠预先投予N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine，NAC)和亚硒酸钠(Na2SeO3)。探讨其对急性染镉大鼠肝、肾毒性的影响。方法将Wistar大鼠32只随机分成4组。第1组为对照组。皮下注射0．9％氯化钠，第2组为单纯染镉组，皮下注射35μmol／kg的氯化镉溶液；第3、4组大鼠分别腹腔注射1mmol／kg NAC和10μmol／kg Na2SeO3预处理后2h，再皮下注射35μmool／kg的氯化镉溶液。染毒24h后测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(GPT)活性以及肝、肾皮质中镉(Cd)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与对照组比较，单纯染镉组大鼠的血清LDH、GPT活性及肝肾镉含量显著升高，肝GSH、MDA含量显著升高，GSH-Px活性显著下降。与单纯染镉组比较，NAC预处理组的血清GPT和LDH活性及肝GSH、MDA含量显著降低，肝、肾皮质镉含量显著降低；Na2SeO3预处理组血清GPT和LDH活性及肝、肾皮质GSH、镉含量显著降低，肝GSH-Px活性及肾MDA含量显著升高。结论NAC和亚硒酸钠对急性染镉所致肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与NAC或亚硒酸钠预处理后改变体内GSH含量或GSH-Px活性有关。     

子宫内膜癌组织中基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子-2的表达和意义

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制因子-2(TIMP-2)的表达,分析其与子宫内膜癌发生发展、侵袭、转移的关系。方法:选取EC患者癌组织标本64例为EC组,选取同期子宫内膜轻、中度不典型增生20例为增生症组及内膜正常组20例作为对照。用免疫组化法检测MMP-2、TIMP-2在3组中的表达。结果:MMP-2、TIMP-2在EC组阳性表达高于正常组(P<0.05)和增生症组(P<0.05),而增生症组与正常组比较阳性表达无统计学差异(P>0.05);MMP-2表达与手术-病理分期、肌层浸润深度、组织学分级及淋巴结的转移相关(P<0.05);TIMP-2表达仅与淋巴结有无转移有关(P<0.05);EC组MMP-2表达高于TIMP-2(P<0.05),且两者表达具有一致性(P<0.05)。结论:子宫内膜癌组织中MMP-2和TIMP-2均高表达;但TIMP-2的表达却不足以抑制MMP-2高表达的活性,可能与子宫内膜癌的发生发展、浸润和转移有关。     

基质金属蛋白酶及抑制物在胎膜早破中表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9、-2及其抑制因子-1、-2在胎膜早破孕妇的胎膜中的变化及与胎膜早破的关系.方法 应用免疫组织化学S-P法对上述两组胎膜组织检测基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制因子-1、基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶抑制因子-2的表达.结果 胎膜早破组和对照组胎膜中基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶-2的阳性表达分别为100%、87%,差异有显著性(P＜0.01);胎膜早破组胎膜中基质金属蛋白酶抑制因子-1、基质金属蛋白酶抑制因子-2的表达较正常孕妇组低,但差异无显著性(P＞0.05).结论 基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶-2在胎膜早破孕妇胎膜中高表达,可能是胎膜早破发生的原因之一,需及时采取预防措施,防止胎膜早破的发生;人工诱导基质金属蛋白酶抑制因子-1、基质金属蛋白酶抑制因子-2或降低基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9的含量以防止胎膜早破的发生、发展,有望成为胎膜早破预防及治疗的辅助手段.     

N-乙酰半胱氨酸和α-硫辛酸对汞急性肾功能损伤的影响

为探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)和α-硫辛酸(LA)对汞急性肾功能损伤的影响,将32只Wistar大鼠随机分成4组:对照组、单纯染汞组、NAC干预组、LA干预组。单纯染汞组先腹腔注射生理盐水,2 h后,皮下注射HgCl2溶液9.2μmol/kg。NAC和LA干预组先分别腹腔注射NAC溶液2 mmol/kg及LA溶液0.35 mmol/kg,2 h后,皮下注射HgCl2溶液。对照组在相应时间内注射生理盐水。染毒后12 h将鼠移至代谢笼中收集12 h尿样,染毒后48 h腹主动脉取血并切取肾脏,测定尿碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性,尿蛋白、血清尿素氮(BUN)含量及尿和肾皮质中汞含量。与对照组比较,单纯染汞组尿汞、肾皮质汞含量,尿ALP、LDH、NAG活性,尿蛋白、BUN含量显著升高;NAC干预组尿汞、肾皮质汞含量及LA干预组肾皮质汞含量明显升高。与单纯染汞组比较,LA干预组尿汞含量显著降低,肾皮质汞含量明显升高;两干预组尿ALP、LDH、NAG活性及尿蛋白、BUN含量显著降低。说明NAC和LA预处理对汞急性肾功损伤有一定的保护作用,但对LA改变汞组织分布应进一步研究。     

雷公藤内酯醇对纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶的影响

目的研究雷公藤内酯醇（TL）对人纤维肉瘤HT-1080细胞表达基质金属蛋白酶（MMP）-2和-9的影响。方法以终浓度分别为6、12和18nM的TL处理HT-1080细胞72h，未加药物处理细胞为对照组，RT—PCR检测MMP-2和-9mRNA表达，明胶酶谱实验检测MMP-2和-9的活性。结果与对照组比较，18nMTL处理HT-1080细胞72h后，MMP-9的mRNA表达及活性明显下调，但MMP-2的表达及活性无明显变化。结论TL抑制纤维肉瘤HT-1080细胞表达MMP-9。     

SiO2刺激矽肺肺泡巨噬细胞对MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 探讨SiO2对矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1表达的影响.方法 收集矽肺患者肺泡AM,体外经SiO2刺激3、6、12、18、24、36 h,分别用明胶酶谱法和免疫细胞化学方法检测AM中TIMP-1、MMP-9蛋白表达和MMP-9活力.结果 实验组AM中6、12、18、24 h MMP-9的蛋白表达增强,在18 h时最高(积分吸光度值为0.386±0.037),与同期对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组12、18、24、36h AM中MMP-9活力的表达增强,在24 h最强(吸光度值3.061±0.153),与同期对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组与对照组各时间点TIMP-1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外SiO2刺激矽肺肺泡AM可影响MMP-9蛋白及其活力的表达.     

基质金属蛋白酶在退变椎间盘组织中的研究及发现

颈椎病和腰椎间盘突出症的重要原因是椎间盘发生了退行性病变后,椎体间松动,椎体缘产生骨刺,或间盘破裂脱出压迫神经根,脊髓或椎动脉所引起的一系列症状。椎间盘退变的病因目前未明确。通过这些年国内外学者的研究,细胞外基质的降解与椎间盘的退变有较密切的关系,基质金属蛋白酶在细胞外基质的降解发挥着重要作用。     

二氧化硅对人肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响

目的探讨SiO2是否通过影响矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)基质金属蛋白酶(MMPs)金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)系统参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺患者的AM,在体外以SiO2(50μgml)和不加血清的DMEM培养基培养2、6、12、18、24、36h,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP9和TIMP1的表达。结果经SiO2刺激的AMMMP9表达明显上调,且随刺激时间不同表达量也不同,于18h达高峰(平均光密度值为0.440±0.021),与同期对照组AM(0.390±0.011)相比,差异有统计学意义(P<0.05);而TIMP1的表达与对照组(平均光密度值分别为0.175±0.019、0.162±0.044)的差异无统计学意义(P>0.05)。结论SiO2可诱导AM高表达MMP9。AM在损伤早期通过产生MMP9而降解基底膜,可能与包括成纤维细胞在内的各种细胞的迁移有关。     

纳米SiO2与标准SiO2对大鼠肺毒作用的比较研究

目的观察纳米SiO_2与标准SiO_2对大鼠的肺部毒性作用。方法72只雄性SD大鼠分为纳米SiO_2组、标准SiO_2组和对照组,每组24只。纳米SiO_2组或标准SiO_2组分别一次性气管注入纳米SiO_2或标准SiO_2颗粒悬浮液0.5 ml,分别观察3、7、14、28d后,各处死6只大鼠,测定肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数和总蛋白含量;HE染色和胶原纤维(VG)染色进行病理观察。结果染尘3、7、14d纳米SiO_2组大鼠BALF中自细胞总数[(16.0±6.0)×10~6、(11.1±4.0)×10~6、(12.2±4.6)×10~6]明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),纳米SiO_2染尘3d时明显高于标准SiO_2组[(5.7±3.7)×10~6],差异有统计学意义(P<0.01)。染尘14、28d纳米SiO_2组大鼠BALF中总蛋白含量[(0.41±0.14,0.41±0.19)g/L]明显高于对照组和标准SiO_2组相应时间点的总蛋白含量,高于纳米SiO_2染尘3和7d时的总蛋白含量,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。染尘3d时,纳米SiO_2组肺泡腔、支气管壁及血管壁周白细胞严重浸润,标准SiO_2组肺泡腔及血管壁周也有炎性浸润,但比纳米SiO_2组轻。两组VG染色均未见明显胶原纤维分布。结论在该实验条件下,纳米SiO_2引起大鼠早期肺部炎症反应比标准SiO_2严重,持续时间更长,引起肺部损害的颗粒负荷阈值可能比标准SiO_2低。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与子宫内膜癌

基质金属蛋白酶是迄今发现最重要的一种降解细胞外基质的蛋白水解酶,其含量变化与肿瘤侵袭转移关系最为密切。基质金属蛋白酶及其组织抑制剂共同参与细胞外基质的合成与降解,两者之间比例失衡将导致肿瘤的侵袭和转移。子宫内膜癌是女性常见的恶性肿瘤之一,研究基质金属蛋白酶及其抑制剂与子宫内膜癌的关系,对于子宫内膜癌早期诊治、预后评估及其预防均具有重要意义。     

湿热痹片对AA大鼠滑膜组织中MMPs高表达的改善作用

目的观察湿热痹片对佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠关节滑膜组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响。方法以Mtb免疫SD大鼠诱导类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA),灌胃给予相应药物,连续28天。采用核酸原位杂交法检测MMP-1和MMP-3在大鼠关节滑膜组织中的表达,经图象分析以平均光密度(MIOD)做半定量测量。结果湿热痹片高剂量组能显著降低AA大鼠滑膜组织中MMP-1、MMP-3的MIOD(P<0.01),湿热痹片低剂量组对MMP-1也有降低作用(P<0.05)。结论湿热痹片对AA大鼠滑膜组织中MMP-1、MMP-3的高表达有显著的改善作用。