基于Tau蛋白磷酸化探讨中医药干预阿尔茨海默病的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆减退为主要特征的神经退行性疾病,Tau蛋白过度磷酸化是该病的主要发病机制之一。Tau蛋白是主要分布于中枢神经系统神经元轴突的微管相关蛋白,其过度磷酸化则丧失与微管结合的能力,造成微管解聚、轴突转运障碍,形成Tau聚集体,进而引起神经细胞的凋亡,导致AD的发生。研究表明中医药可以通过多通路、多靶点调控Tau蛋白磷酸化来干预AD。主要以Tau蛋白磷酸化为切入点,对干预AD中医药的种类和作用机制进行总结,以期为中医药防治AD的研究提供参考。     

阿尔茨海默病模型大鼠Tau 蛋白异常磷酸化表达及补肾化痰法的干预作用

目的 探讨补肾化痰法对AD模型大鼠Tau蛋白异常磷酸化的影响.方法 应用脑立体定向技术给大鼠Meynent基底核注射凝聚态Aβ25-35+IBO构建AD模型.注射2周后,高、中、低量组分别给大鼠该药水煎液灌胃;西药组用哈伯因混悬液灌胃;正常组、空白组、模型组均给予等容积的生理盐水灌胃.28 d后采用蛋白免疫印迹法检测海马匀浆中Tau蛋白磷酸化总量.结果 正常组与空白组海马区Tau蛋白磷酸化水平无明显差异(P>0.05),模型组海马区Tau蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.01),给药后发现不但大鼠海马组织Tau蛋白异常磷酸化水平下降,高、中量组与模型组比较显著降低(P< 0.01),与西药组也有差异(P<0.01).结论 补肾化痰法可以降低Tau蛋白异常磷酸化水平,从而发挥其抗老年性痴呆的作用.     

柴胡皂苷D抑制Aβ_(25-35)诱导PC12细胞tau蛋白过度磷酸化

目的:探究柴胡皂苷D(SSD)对Aβ诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)tau蛋白磷酸化水平的影响。方法:将PC12细胞分为3组:对照组,用DMEM培养基常规培养;Aβ组,用含有10μmol/L Aβ25-35的DMEM培养基培养PC12细胞;SSD组,选择含有4μg/m L SSD+10μmol/L Aβ25-35的DMEM培养基共同培养PC12细胞,24 h后收集各组细胞;利用Western blot技术,检测对照组、Aβ组和SSD组PC12细胞中tau mRNA表达及蛋白表达水平的变化。结果:与对照组细胞相比,Aβ处理组tau蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05);而SSD组细胞tau蛋白磷酸化水平无明显改变(P>0.05);同时,与对照组相比较,Aβ处理组和SSD处理组细胞tau mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),tau总蛋白水平无明显变化(P>0.05)。结论:在PC12细胞中,SSD可抑制Aβ25-35诱导PC12细胞tau蛋白的过度磷酸化。     

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法 采用β淀粉样蛋白_25-35诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较...     

柴胡皂苷D对慢性应激诱导小鼠焦虑症的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对慢性应激诱导焦虑模型小鼠的影响及其作用机制。方法:选取50只雄性ICR小鼠,按照随机数字表法分为五组,分别为正常组、慢性应激组、氟西汀组(20 mg/kg)、柴胡皂苷D低剂量组(20 mg/kg)和柴胡皂苷D高剂量组(40 mg/kg)。除正常组外,其余四组予慢性应激诱导小鼠建立焦虑症模型。通过蔗糖偏好实验、旷场试验、强迫游泳试验和悬尾试验检测小鼠行为学。采用酶联免疫技术检测IL-6、IL-β、TNF-α; 采用Western blot技术检测小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白表达; 采用免疫组化法检测小鼠海马组织RIP140蛋白表达。结果:柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组均能改善焦虑症模型小鼠行为学,并能降低血清IL-6、IL-β和TNF-α水平。柴胡皂苷D低剂量组、柴胡皂苷D高剂量组可降低小鼠海马组织RIP140、p-NF-κB-p65、p-IκBα、p-IKKα和p-IKKβ蛋白的表达。结论:柴胡皂苷D可以缓解慢性应激焦虑模型小鼠症状,其机制与调控RIP140/NF-κB信号通路相关。     

木犀草素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响

目的 探讨木犀草素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系.方法 实验分为空白组、Aβ25-35组、木犀草素+Aβ25-35组、木犀草素+Aβ25-35+LY294002(PI3K/Akt阻断剂)组.MTT法检测细胞增殖率,DCFH-DA为荧光探针检测细胞总R...     

早期电针干预对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白水平的影响

目的:探讨早期电针"百会""大椎""肾俞"穴对快速老化小鼠(SAMP8小鼠)学习记忆能力和海马磷酸化Tau蛋白表达的影响,为临床电针治疗阿尔茨海默病(AD)时间点的选择提供参考。方法:将36只3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、3月龄电针组、9月龄电针组,每组12只;以12只同龄正常老化SAMR1小鼠作为空白对照组。3月龄电针组及9月龄电针组分别于小鼠3月龄及9月龄时予电针"百会""大椎""肾俞"穴治疗(连续波,2 Hz,1.5～2 mA),20 min/次,每日1次,8 d为一疗程,疗程间隔2 d,共治疗3个疗程。每组小鼠在水迷宫检测学习记忆能力结束后统一于10月龄取材;免疫组织化学法、免疫蛋白印迹法(Western blot)检测小鼠海马磷酸化Tau蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马Tau mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),原平台象限停留时间较短,跨越平台次数减少(P<0.01),海马磷酸化Tau蛋白及Tau mRNA表达较高(P<0.01);与模型组比较,3月龄电针组及9月龄电针组小鼠逃避潜伏期缩短(P...     

三七总皂苷对铝暴露体外血脑屏障通透性的影响

目的探讨三七总皂苷对铝暴露下血脑屏障功能的影响,初步揭示三七总皂苷拮抗铝神经毒性,防治阿尔茨海默病的可能机制及靶点。方法采用细胞插入器培养单层脑微血管内皮细胞Balb/c,建立体外血脑屏障模型。铝暴露24h后,通过跨内皮细胞电阻（TEER）和辣根过氧化物酶（HRP）透过率的变化,观察三七总皂苷对铝暴露血脑屏障通透性的影响。结果三七总皂苷能够提高TEER值,降低HRP透过率。其中,以高剂量组作用最为显著,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三七总皂苷可有效改善铝对血脑屏障功能性的损伤,这一作用可能是其抗阿尔茨海默病的脑保护作用机制之一。     

玉郎伞多糖对快速老化小鼠额叶、海马神经元丢失和Tau蛋白磷酸化的影响

目的:研究玉郎伞多糖(YLSP)对快速老化模型小鼠(SAMP8)额叶、海马神经元丢失和Tau(Ser202)异常磷酸化的影响.方法:选择6月龄SAMP8,随机分为模型组,石杉碱甲组(0.02 mg· kg-1),YLSP低、高剂量组(45,180 mg·kg-1),选择6月龄正常老化小鼠(SAMR1)作为对照组,以上各组每日上午灌胃给药1次,连续40 d,于末次给药的次日采用尼氏染色方法检测额叶和海马神经元缺失率;应用免疫组织化学方法检测额叶和海马Tau(Ser202)磷酸化水平.结果:模型组额叶、海马神经元缺失率分别为(46.4±8.4)％,(45.5±7.2)％.与模型组相比,石杉碱甲组(35.8±6.7)％,(34.2±5.6)％、YLSP低、高剂量组(35.1±6.4)％,(36.0±4.5)％,(25.6±6.6)％,(26.7±6.1)％额叶、海马神经元缺失率明显降低(P＜0.05或P＜0.01);模型组额叶、海马pSer202阳性细胞数(92.2±10.7),(98.6±11.4)个较对照组明显升高(12.3±2.1),(15.5±2.6)个(P＜0.01),与模型组相比,石杉碱甲组(48.5±6.4),(56.1±3.3)个、YLSP低、高剂量组(60.7±7.5),(65.9±8.0);(50.9±5.1),(53.6±6.7)个的额叶、海马Tau(pSer202)阳性细胞数明显降低(P＜0.01).结论:YLSP降低Tau蛋白异常磷酸化,减少脑部神经元缺失.     

逆灸对阿尔茨海默病大鼠海马CA3区Tau蛋白磷酸化及相关蛋白激酶的影响

目的:观察逆灸“百会”“肾俞”“足三里”对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马CA3区Tau蛋白及相关蛋白激酶糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、细胞周期蛋白依赖性激酶-5(CDK5)的影响,探讨逆灸防治AD认知障碍的可能作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和逆灸组,每组9只。逆灸组取“百会”“肾俞”“足三里”予逆灸疗法,15 min/次,1次/d, 6 d为1个疗程,共干预3个疗程。逆灸完成后,采用双侧海马注射1μLβ-淀粉样蛋白25-35聚集液复制AD大鼠模型。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,电镜观察海马神经细胞超微结构,苏木精-伊红染色法观察大鼠海马组织病理学变化,Western blot法检测大鼠海马CA3区GSK-3β、CDK5、SynapsinⅠ蛋白表达,免疫组织化学法观察大鼠海马CA3区GSK-3β、CDK5、p-Tau阳性表达。结果:与正常组、假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长、平台停留时间显著缩短、穿越原平台次数显著减少(P<0.01);海马超微结构观察显示神经元呈不同程度的水肿,可见突触,突触前囊内突触小泡减少,高尔基体水肿扩...     

�������Dͨ������mTORC�ź�ͨ·�շ��ΰ�ϸ�����ɵ������о�

??OBJECTIVE To discuss the effect and mechanisms of saikosaponin D (SSD) on apoptosis and autophagy of human hepatocellular carcinoma cells. METHODS The proliferation of cells in treatment of SSD was detected by MTT. The autophagosome was detected by GFP fluorescence staining. The apoptosis of hepatoma cells were detected by flow cytometry. The expressions of LC3-??, p-S6K1 and Beclin 1 in human hepatocellular carcinoma cells was detected by Western blot. RESULTS The proliferations of PLC, MHCC-97H, SMMC-7721 and Huh7 cells with SSD intervention for 48 h were dose-independent inhibited. The IC₅₀ of PLC, MHCC-97H, SMMC-7721 and Huh7 cells were 51.48, 46.19, 39.87, 48.95 ??mol??L^-1, respectively. After SSD treatment, the number of autophagosome of PLC, MHCC-97H, SMMC-7721 and Huh7 was significantly more than the normal control group (P<0.05). The apoptosis rate of PLC, MHCC-97H, SMMC-7721 and Huh7 cells induced by SSD+3-MA or SSD+z-DEVD-fmk was less than the SSD treated cells (P<0.05). The expressions of LC3-?? and phosphorylated S6K1 protein (p-S6K1) in PLC, MHCC-97H, SMMC-7721 and Huh7 cells induced by SSD were more than the normal cells, while the expression of Beclin 1 protein decreased. CONCLUSION It's suggested that SSD increase the autophagy and apoptosis of human hepatoma cells by regulating the mTORC signaling pathway.     

柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响。方法:设置对照组、150 mg·L^-1柴胡皂苷D组、100 mg·L^-1柴胡皂苷D组、50 mg·L^-1柴胡皂苷D组和25 mg·L^-1柴胡皂苷D组,采用CCK-8实验方法检测柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响;采用流式细胞术检测柴胡皂苷D对人乳腺癌细胞株SK-BR-3的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:柴胡皂苷D各浓度组细胞存活率分别为(85.3±4.13)%、(68.85±3.85)%、(45.28±3.25)%、(23.51±2.23)%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组G1期细胞比例分别为(58.23±2.21)%、(55.51±2.34)%、(45.67±3.23)%、(33.55±4.12)%,S期细胞的比例分别为(12.67±2.32)%、(10.34±2.45)%、(8.23±3.12)%、(7.34±3.98)%,G2期细胞所占的比例分别为(29.10±2....     

桂枝茯苓丸抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖机制

目的:通过观察桂枝茯苓丸对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,并检测细胞周期的变化和蛋白表达的改变,从而探讨桂枝茯苓丸对乳腺癌细胞产生抑制的作用机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,以5-氟尿嘧啶(5-Fu,25 mg·L~(-1))作为阳性药,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量桂枝茯苓丸培养液和在不同作用时间对细胞的抑制作用;选用1.8,2.7 g·L~(-1)的桂枝茯苓丸培养液作用48 h,流式细胞技术检测5-Fu组和桂枝茯苓丸培养液组的周期,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测表皮生长因子(EGFR),周期素A2(Cyclin A2)及周期素依赖性激酶2(Cdk2)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其EGFR,Cyclin A2,Cdk2蛋白表达。结果:桂枝茯苓丸对人乳腺癌细胞MCF-7细胞有抑制作用(P0.05),且具有时间-剂量依赖性。与空白组比较,1.8,2.7 g·L~(-1)桂枝茯苓丸作用MCF-7细胞48 h后S期细胞明显增加(P0.05),EGFR,Cdk2,Cyclin A2mRNA表达明显降低(P0.01);桂枝茯苓丸各质量浓度组中EGFR,Cdk2蛋白表达均下降(P0.05),但Cyclin A2蛋白表达仅2.7 g·L~(-1)组有明显降低(P0.05)。结论:桂枝茯苓丸在S期阻滞MCF-7细胞增殖,这可能与下调Cyclin A2,Cdk2,EGFR mRNA和其蛋白的表达有关。     

补肾化瘀泄浊方通过调控细胞外调节蛋白激酶信号通路阻抑人肾小管上皮细胞间充质转化的机制研究

目的:观察补肾化瘀泄浊方对转化生长因子(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)的上皮间充质转化(EMT)及Smad2/3的影响,探讨其阻抑HK-2?EMT的机制.方法:采用TGF-β1诱导建立HK-2?EMT模型,Western?blot检测TGF-β1对EMT标记蛋白、Smad2/3及细胞外调节蛋白激酶(ER...     

六君子汤提取物对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用

目的:研究六君子汤乙酸乙酯提取物对食管癌Eca109细胞增殖的影响。方法:以104个/孔的细胞密度接种96孔板中,培养24 h后,各组分别加入不同浓度六君子汤提取物的培养液100μL,质量浓度为10,20,40,60,80,100 mg·L-1,另设空白孔,每组设8个复孔,采用MTT比色法检测六君子汤提取物对食管癌Eca109细胞株生长抑制作用,采用流式细胞仪检测药物作用后细胞凋亡情况,激光共聚焦显微镜观察药物作用后细胞形态变化。结果:在10~100 mg·L-1内,不同浓度六君子汤提取物能有效抑制Eca109细胞增殖(P<0.05)。21.06,49.65,67.47 mg·L-1的六君子汤提取物作用Eca109细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,与空白组相比,差异有统计学意义(P<0.05);并且在激光共聚焦显微镜下观察到凋亡小体,与空白组相比,早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量明显增多。结论:六君子汤提取物能显著抑制食管癌Eca109细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究。     

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙ｄ（ＳＳｄ）对人急性早幼粒白血症细胞（ＨＬ６０）糖皮质激素受体（ＧＲ）ｍＲＮＡ表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分ＳＳｄ，以＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析ＳＳｄ对ＧＲ ｍＲＮＡ的改变。结果：经ＳＳｄ作用后，ＨＬ６０细胞＾３Ｔ－ＴｄＲ掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，ＳＳｄ１０μｇ／     

四君子汤与氟尿嘧啶联用对肝癌Bel-7402细胞生长的抑制作用

目的观察四君子汤与氟尿嘧啶(FU)联用对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞生长抑制作用。方法将体外培养的人肝癌Bel-7402细胞分成不含药血清组、FU组和高、中、低剂量四君子汤含药血清与FU联用组。将四君子汤含药血清和FU按各组所需的剂量加入到细胞培养板中,分别作用于细胞24 h。应用基于酶标仪的MTT法计算各组对细胞生长抑制率。结果四君子汤含药血清与FU联用各组能明显抑制细胞的增殖(均P0.01),并呈现剂量依赖性;其中高、中剂量含药血清与FU联用组明显优于FU组(P0.05)。结论四君子汤含药血清与FU联用比单用FU对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞的生长具有更明显的抑制作用。     

金叶败毒制剂抑制人巨细胞病毒蛋白激酶pul97的实验研究

目的研究中药金叶败毒制剂对人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）蛋白激酶Pul97的抑制作用,探讨其治疗HCMV感染的分子机制。方法采用半定量RT—PCR方法,检测中药金叶败毒制剂和更昔洛韦（GCV）干预后感染细胞HCMV pul 97mRNA表达水平,应用MTT法观察两种药物对感染细胞的增殖活性的影响。结果金叶败毒制剂和更昔洛韦对HCMV pul 97mRNA的表达有明显的抑制作用,在HCMV感染72h后两种药物均可明显增强感染细胞的增殖活性。结论金叶败毒制剂可能通过抑制HCMV蛋白激酶pul97基因的表达而抑制HCMV的表达和复制,从而促进感染细胞的增殖而达到抗病毒作用。     

远志皂苷元调控tau蛋白磷酸化的实验研究

目的观察远志皂苷元对阿尔茨海默（AD）大鼠模型海马tau蛋白磷酸化相关酶类表达的影响,并探讨其机理。方法清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组、多奈哌齐组及远志皂苷元低、中、高剂量组,每组10只。侧脑室注射寡聚体形式的β淀粉样蛋白（Aβ）1-42制备AD大鼠模型,术后给药组给予不同剂量远志皂苷元和多奈哌齐灌胃,对照组和AD模型组给予等量生理盐水灌胃。应用免疫组织化学方法和蛋白印迹法检测海马tau蛋白激酶（GSK-3β、CDK-5）和磷酸酯酶（PP-1、PP-2A）的表达水平。结果与对照组比较,模型组tau蛋白激酶表达明显升高,磷酸酯酶表达明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,远志皂苷元各剂量组蛋白激酶表达明显降低,磷酸酯酶表达明显升高（P〈0.01）。结论远志皂苷元能调节AD大鼠模型蛋白激酶和磷酸酯酶之间的平衡失调。     

长春新碱通过下调SODD蛋白表达诱导白血病细胞凋亡新机制研究

 目的研究死亡结构域沉默子(silencer of death domains,SODD)、caspase3、caspase8及caspase9在长春新碱诱导Jurkat白血病细胞凋亡过程中的变化,探讨长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡的新机制。方法采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测长春新碱(VCR)作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;ELISA酶联免疫吸附技术检测VCR作用Jurkat细胞后TNF-α分泌的变化;采用RT-PCR检测VCR对细胞,TNFR1mRNA表达的调节。结果Jurkat白血病细胞SODD蛋白高表达且高表达的SODD蛋白抑制肿瘤细胞凋亡,VCR能特异下调SODD蛋白的表达,有效诱导Jurkat细胞凋亡,但并不影响细胞TNF-α的分泌及TNFR1的表达;VCR诱导细胞凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9在该凋亡过程中无明显变化趋势。结论VCR下调SODD蛋白表达并启动外源性凋亡途径caspases级联(caspase8、caspase3),最终诱导Jurkat细胞凋亡,且VCR下调SODD蛋白的表达无需激活TNF/TNFR1信号途径即可导致凋亡的发生。