桉叶油对维甲酸干扰大鼠胚胎植入及生长发育的影响

目的探讨桉叶油对维甲酸干扰大鼠胚胎植入及生长发育的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,FA组正常对照组、溶剂组(花生油+RA)、3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)及RA组。溶剂组用花生油2ml/只于孕第7~14天灌胃,每天1次,孕第10天维甲酸40mg/kg灌胃1次。桉叶油3个剂量组分别用300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg的桉叶油于孕第7~14天灌胃,每天1次,孕第10天维甲酸40mg/kg灌胃1次。RA组用40mg/kg的维甲酸于孕第10天灌胃1次。正常对照组给予自由摄食饮水。各组于孕21d早上处死孕鼠,取胚胎,记录孕鼠体重,子宫重,胎盘重。计胚胎植入总数,吸收胎数、活胎数、死胎数。观察胚胎外形,并测量胎鼠体重、身长、尾长。结果正常对照组、桉叶油+RA和溶剂+RA组孕鼠增重、子宫重、胎盘重与RA组比较均无差异;溶剂+RA组的孕鼠的胎盘重较其他各组低,与RA和桉叶油+RA各组比较差异无显著性,与正常对照组比较有差异(P0.05)。正常对照组的活胎率[(97.3±4.6)%]较灌胃维甲酸各组的活胎率高(P0.05),吸收胎率[(2.6±4.6)%]和畸形率(0)较灌胃维甲酸各组低(P0.05),死胎率为0;在灌胃维甲酸各组中,桉叶油高[(79.6±14.5)%]、中[(67.6±30.8)%]剂量组的活胎率较RA[(58.6±26.6)%]组高,但比较无差异;畸胎率[(44.5±41.6)%;(57.5±35.1)%]较RA[(68.1±43.6)%]组低,但差异无统计学意义。灌胃维甲酸各组的吸收胎率比较无差异。正常对照组的胎鼠体重、身长、尾长均值明显高于灌胃维甲酸各组胎鼠的体重、身长、尾长均值(P0.05);在灌胃维甲酸各组中,桉叶油各组胎鼠体重、身长的均值明显高于RA组和溶剂对照组(P0.05);溶剂对照组胎鼠体重、身长、尾长与RA组比较无差异;桉叶油各组胎鼠尾长的均值均高于RA组,但比较无差异。结论维甲酸干扰了大鼠胚胎的植入和发育,桉叶油对RA干扰大鼠胚胎植入有一定的拮抗作用,对RA引起的胎鼠生长发育迟缓有一定的抑制作用。     

孕期染汞对胎鼠脑损伤及S100B蛋白表达的影响

目的研究孕期染汞胎鼠脑组织的损伤情况,探讨S100B在胎鼠脑损伤中的表达及意义。方法建立孕鼠动物模型,将孕鼠随机分为对照组及染汞组(0.8、1.4、2.0mg·kg~(-1)·d~(-1));染汞组于妊娠6-9 d连续灌胃给药,对照组为蒸馏水同期灌胃。妊娠第19天用戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉孕鼠,剖腹取胎。应用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定各组胎鼠脑组织汞含量;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组胎鼠脑组织中S100B水平;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)法检测各组胎鼠脑细胞凋亡情况;蛋白印迹法(Western blot)检测各组胎鼠脑组织bcl-2蛋白表达情况。结果 0.8 mg·kg~(-1)·d~(-1)、1.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)及2.0mg·kg~(-1)·d~(-1)浓度的氯化甲基汞组,胎鼠脑组织中S100B蛋白的水平分别为(0.43±0.03)μg·L~(-1)、(0.62±0.03)μg·L~(-1)、(0.64±0.03)μg·L~(-1),呈增加趋势。胎鼠脑组织的汞含量较对照组明显升高(P0.05),S100B蛋白的表达量与对照组比较的差异有统计学意义P0.05);胎鼠的脑细胞凋亡率较对照组也明显升高(P0.05),实验组(染汞组)的bcl-2蛋白表达量较对照组则有明显下降(P0.05)。结论孕期染汞可导致胎鼠脑细胞凋亡增加,脑组织中S100B蛋白水平升高,提示S100B可成为孕期汞暴露胎鼠脑损伤的预测指标。     

桉叶油对大鼠胚胎发育的影响

目的 探讨桉叶油对SD大鼠胚胎发育的影响。 方法 取SD孕鼠25只,随机分成3个实验组（桉叶油高、中、低剂量）、溶剂对照组（花生油）和阳性对照组（环磷酰胺）,每组5只。实验组和溶剂对照组分别在大鼠妊娠第10天用300、200、100mg/kg 的桉叶油和花生油2ml/只灌胃,每天1次,连续5d。阳性对照组于孕第13天腹腔注射环磷酰胺1次（12.5mg/kg）。各组孕鼠于孕19d处死取胚胎,记录孕鼠的体重、子宫重、卵巢重和胎盘重;统计胚胎植入的总数、吸收胎数、活胎数和死胎数;观察胚胎外形,并测量胎鼠体重、身长和尾长。 结果 桉叶油灌胃SD孕鼠后,孕鼠的体重、子宫重、卵巢重及胎盘重与溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。胚胎植入总数、吸收胎数、活胎数及死胎数与溶剂对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。桉叶油各组活胎鼠平均体重、身长及尾长均较溶剂组高,但只有高剂量桉叶油组胎鼠平均体重（2.318±0.606）与溶剂组（1.462±0.397）比较有明显差异（P<0.05）,其余指标与溶剂组比较无明显差异（P＞0.05）。阳性对照组胎鼠平均体重、尾长明显低于溶剂组,且有差异（P<0.05）。阳性对照组胎鼠平均身长低于溶剂组,但统计学分析无差异（P＞0.05）。 结论 本实验条件下,桉叶油对SD孕鼠胚胎无毒性,环磷酰胺对大鼠胚胎有毒性。     

nNOS、Pax3和Cx43蛋白在人胚胎早期脊髓中的表达及意义

目的探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、转录调控因子成对盒3(Pax3)和连接蛋白43(Cx43)在人胚胎发育早期脊髓中的分布规律及其表达意义。方法应用免疫组织化学SABC法,检测第5~16周人胚胎脊髓前角中nNOS、Pax3和Cx43蛋白的表达情况。结果在第5~16周,nNOS和Pax3蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中由弱阳性逐渐变为阳性表达;在第5~12周,Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中均呈阴性表达;第13~16周,Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中呈阳性表达。结论nNOS、Pax3和Cx43蛋白与人胚胎脊髓的生长发育关系密切。     

CIH致聋仔鼠内耳Cx26与Cx30蛋白的表达研究

目的研究宫内缺氧对仔鼠内耳听力损伤影响及内耳缝隙连接蛋白26(Cx26)和缝隙连接蛋白30(Cx30)蛋白的表达影响。方法建立宫内慢性缺氧(CIH)孕鼠模型,16只SD孕大鼠分为正常组和缺氧组,每组8只。仔鼠出生后8周,听性脑干反应(ABR)检测后再分2个亚组:正常仔鼠组、缺氧耳聋仔鼠组(各12只)。动脉血气分析各组孕鼠和仔鼠动脉血氧分压(PaO_2)和血氧饱和度(SaO_2),免疫荧光染色、蛋白质印迹法检测仔鼠内耳Cx26和Cx30蛋白表达水平。结果缺氧组孕鼠与正常组比较,PaO_2和SaO_2均显著下降(P0.05),但比较两组孕鼠的PaCO_2、pH值,无统计学意义(P0.05)。缺氧耳聋仔鼠组内耳组织Cx26和Cx30蛋白的表达水平明显低于正常仔鼠组(P0.01)。结论缺氧耳聋仔鼠耳蜗组织Cx26和Cx30蛋白表达明显低于正常仔鼠,提示CIH致聋可能与Cx26和Cx30表达下降有关。     

依普利酮部分逆转甲状腺激素诱导的心肌电重构

目的:研究醛固酮拮抗剂依普利酮对甲状腺激素(T3)诱导的心肌电重构的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,并随机分为对照组、T3组、依普利酮(Epl)组、T3+Epl组采用免疫荧光法鉴定心肌细胞,CCK-8法检测T3与依普利酮对心肌细胞存活率的影响,细胞免疫荧光法、real-time PCR法、Western blot法检测各组钾离子通道Kv1.5、Kv4.3,L型钙离子通道Cav1.2缝隙连接蛋白40(Cx40)和Cx43 mRNA与蛋白的表达。结果:免疫荧光法显示所培养细胞为心肌细胞且95%以上横纹肌α-辅肌动蛋白(sarcomericα-actinin,α-actinin)抗体染色阳性。与对照组比较,T3增加Kv1.5、Kv4.3、Cav1.2与Cx40 mRNA与蛋白的表达,减少Cx43 mRNA与蛋白的表达;Ep1组Kv1.5、Kv4.3、Cav1.2与Cx40 mRNA与蛋白的表达降低,Cx43的表达升高;与T3组比较,T3+Epl组Kv1.5、Kv4.3、Cav1.2与Cx40 mRNA与蛋白的表达降低,Cx43的表达升高。结论:依普利酮可部分逆转甲状腺激素导致的心肌电重构。     

雌激素改善卵巢切除合并慢性铝中毒对大鼠心脏Cx43表达和金属元素变化的影响

目的 探讨雌激素治疗卵巢切除合并慢性铝中毒大鼠,对心脏间隙连接蛋白43(Cx43)表达和金属离子含量的影响. 方法 40只6月龄雌性SD大鼠,随机分为卵巢假切除组(Sham组),卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除合并慢性铝中毒组(OVX+Al组)和卵巢切除合并慢性铝中毒及尼尔雌醇灌胃组(OVX+Al+E2组).于术后3个月,利用离子体发射光谱仪测定心脏金属元素含量,采用免疫组织化学和图像分析法观测心肌细胞Cx43表达.结果 1. Cx43表达:Sham组心房肌Cx43遍布于心肌细胞侧面连接和端闰盘处.心室肌分布于心肌闰盘处.OVX组心房肌的Cx43颗粒部分由细胞侧-侧连接处移至闰盘处或杂乱排列,心室肌Cx43由闰盘处移至细胞侧-侧连接处或杂乱地无序排列,少部分出现在细胞质中,OVX+Al组Cx43排列类似于OVX组,且更加紊乱.OVX+Al+E2组心房肌Cx43回复正常分布,但心室肌未发现回复.2.图像分析结果,各组大鼠心肌细胞Cx43的面积构成比比较无显著差异.3.金属元素含量:在Sham组,金属元素在心脏含量的排列顺序如下:Mg＞Ca＞Fe＞Zn＞Al＞Si＞Cu＞Mn＞Se和Cd.各组间比较具有显著差异的是:与Sham组比较,OVX组Zn降低;OVX+Al+E2组Al、Cd、Si、Se均升高;OVX+Al组与OVX组比较,Si升高、Zn降低.OVX+Al+E2组与OVX+Al组比较, Cd、Mn、Se升高. 结论雌激素改善卵巢切除及加铝后引起的心脏金属元素含量改变和心肌细胞间隙连接蛋白Cx43重构.     

Igf2基因差异性甲基化区域在二(口恶)英致畸中的作用

目的研究2,3,7,8-四氯二苯并-对-二口恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)对胎鼠生长发育的影响,探讨TCDD致畸与胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor2,Igf2)基因的表达和差异性甲基化区域(differentially methylated regions,DMRs)甲基化状态的关系。方法经灌胃给予孕10d大鼠10μg/kgTCDD,孕20天剖宫取胎,比较实验组和对照组孕鼠妊娠结局,测量两组活胎的顶臀长、体重和胎盘重;用实时定量-逆转录PCR检测孕20天胎鼠肝脏组织Igf2基因mRNA的表达;用蛋白印迹方法检测蛋白的表达水平;用甲基化限制酶HpaⅡ酶切-PCR法(HpaⅡ-PCR assay)检测两组胎鼠肝脏Igf2基因DMR1的甲基化程度,用亚硫酸氢盐测序方法检测Igf2基因DMR2的甲基化程度。结果对照组胎鼠均正常;实验组出现死胎及吸收胎,发生率为12.2%,畸形胎发生率为11.6%,活胎顶臀长、体重及胎盘重均明显低于对照组;对两组胎鼠肝脏组织Igf2基因表达的检测结果显示,实验组Igf2mRNA表达的相对量为0.77±0.11,对照组为0.27±0.15,两者差异有统计学意义(P<0.01);同时实验组肝脏组织Igf2蛋白的表达量也明显高于对照组;两组胎鼠肝脏Igf2基因DMR1的甲基化程度无差异,DMR2甲基化程度实验组明显低于对照组。结论孕期暴露于TCDD可导致大鼠发生死胎、吸收胎、畸形胎和胎儿宫内发育迟缓,TCDD所致胎鼠发育异常可能与胎鼠肝脏组织Igf2基因DMR2甲基化程度降低引起的Igf2高表达有关。     

MEF-2C在妊娠糖尿病胎鼠心脏发育中的表达

目的了解肌细胞增强子-2C(MEF-2C)在妊娠糖尿病(GDM)胎鼠心脏发育过程中的表达,探讨其在GDM胎鼠心脏发育异常中的作用机制。方法将雌鼠随机分为对照组(n=24),GDM组(n=30):孕后腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg,柠檬酸组(n=30):孕后每只动物腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠液(2%链脲佐菌素溶剂)40 mg/kg,胰岛素组(n=30):采用2%STZ建立GDM模型鼠后于孕后72 h(血糖12～15 mmol/L)每天皮下注射给予中效胰岛素(诺和锐30R)20 U/kg,采尾静脉血监测血糖及称重,并分别于孕12、15、19 d 3个时间点剖腹获取胎鼠心脏组织:观察胎鼠心脏发育情况,HE染色观察心脏结构,免疫组化检测心脏组织MEF-2C蛋白,荧光定量PCR检测MEF-2C mRNA,Western blot检测MEF-2C蛋白。结果各组MEF-2C蛋白表达呈动态变化:孕12 d可见表达,孕15 d表达最高,孕19 d表达下降;与对照组相比,GDM组MEF-2C mRNA及MEF-2C蛋白的表达下降(P0.05)。结论妊娠糖尿病胎鼠心脏发育异常率显著增高,MEF-2C与GDM胎鼠心脏发育异常可能存在相关性。     

维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织中Caspase-3表达情况

目的　本文旨在探讨维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织Caspase-3表达情况。 方法　选取孕10 d Wistar大鼠,实验组用溶有维甲酸（40mg/ml）的橄榄油,以135 mg/kg经胃管注入给药制作脊柱裂畸形大鼠模型;对照组选取孕10 d Wistar大鼠给等量橄榄油。将实验组及对照组按照孕12、15、17和20 d分为4组。应用免疫组织化学方法比较分析Caspase-3在对照组、畸形组胎鼠脊髓组织细胞中的分布和表达情况。 结果　脊柱裂大鼠脊髓神经组织中Caspase-3在15 d开始增多,一直持续到20 d胚胎大鼠。其增高情况明显高于同一时间点对照组大鼠。胚胎15、17和20 d显性脊柱裂畸形鼠脊髓组织Caspase-3阳性细胞数多于对照组,荧光强度高于对照组。 结论　维甲酸诱导的脊柱裂胎鼠Caspase-3表达明显高于正常发育胎鼠。     

维甲酸诱导小鼠神经管畸形的剂量依赖性和时间特异性

目的探索不同的维甲酸（retinoic acid,RA）剂量对小鼠神经系统发育的影响以及在特异时间点作用于小鼠胚胎时对神经管闭合的影响。方法采用C57孕鼠于GD7．5分别腹部注射5mg／kg,7．5mg／kg,20mg／kgRA,于GD10．5腹部注射20mg／kgRA,观察胎鼠表型并称量胎鼠重量,胎脑重量,测量眼距和顶距（前囟到鼠喙的距离）。结果GD7．5腹部注射5mg／kgRA的胎鼠出现无眼畸形,7．5mg／kg的胎鼠出现脑膨出,20mg／kg的吸收胎率为1005,GD10．5腹部注射20mg／kgRA的胎鼠前肢短小其中,GD7．5给予7．5mg／kgRA处理后的胎鼠脑重显著低于正常组和其他实验组;GD7．5时给予7．5mg／kgRA处理组及GD10．5时20mg／kgRA处理组的胎鼠重量显著低于正常组;GD7．5时5mg／kgRA处理组的胎鼠顶距低于正常组。结论在胚胎发育的不同时期暴露于过量的RA会影响不同器官的发育,而且RA对颅面畸形的影响呈剂量依赖性。     

Histological observations of palatal malformations in rat embryos induced by retinoic acid treatment.

Malformations of the palate were induced in white rat embryos following maternal exposure to retinoic acid (tretinoin). Five experimental groups and the controls were treated by the following protocol: Group 1: pregnant rats received 100 mg retinoic acid (RA)/kg b.w. suspended in corn oil on gestational day (GD) 11.5; Group 2: 20 mg RA/kg b.w. from GD 8-12; Group 3: 20 mg RA/kg b.w. from GD 7.5-11.5; Group 4: 100 mg RA/kg b.w. on GD 10-11; Group 5: 100 mg RA/kg b.w. on GD 10 and 12; Group 6 received corn oil vehicle from GD 7-14.5; and Group 6: served as non-injected controls. In all retinoic acid treated groups, varying degrees of clefts with occasional attempts of fusion were noted. The severity and frequency of the malformations were dependent on dosage or gestational day of drug treatment. Our results indicate that RA, even at the lowest dose tested (20 mg/kg b.w.) severely affects the various tissues constituting the embryonic palatal shelves by altering cell interaction and possibly programmed cell death. These events would then result in lack of or inadequate differentiation with subsequent formation of aberrant craniofacial architecture.     

肠癌组织维甲酸受体的测定和维甲酸对其表达的影响

目的用放射配体结合分析法测定肠癌组织细胞内维甲酸受体 (retinoic acid receptor, RAR)含量，探讨维甲酸 (Retinoic acid, RA)对肠癌组织内RAR表达的影响.方法取Wistar大鼠160只，随机分4组，每组40只，其中第1、2组二甲基肼诱癌，第3、4组用生理盐水注射；于第7周开始，第2、3组按50mg/kg体重灌服维甲酸，每日1次，共8周.于7,14, 21周每组处死8只，于28周全部处死大鼠.测定RAR的含量.结果第1组肠癌发生率100%，第2组20%，差异有显著性（p<0.01）；结肠组织细胞核内存在丰富的RAR，而肠癌组织RAR含量明显减少，并主要表现为数量的减少； RA对正常组织、肠癌组织内的RAR表达有显著性影响，差别有统计学意义（p<0.05）.结论 RA可以减少二甲基肼诱发肠癌的发生；肠癌组织细胞内存在着RAR表达的异常； RA对肠癌组织的调控作用机制有待于进一步研究.     

低渗刺激下大鼠视上核星形胶质细胞对神经元反应的调控机制

目的观察低渗刺激后大鼠视上核(SON)星形胶质细胞对神经元反应的调节机制,以及牛磺酸拮抗剂(TAG)和缝隙连接阻断剂-甘珀酸(CBX)对反应的影响。方法成年SD大鼠20只,对照组经尾静脉注射0.9%盐水;低渗组经尾静脉注射低渗盐水(0.83%葡萄糖 0.3%NaCl);TAG 低渗组和CBX 低渗组分别经侧脑室注射TAG或CBX,2h后经尾静脉注射低渗盐水。常规固定取材制片。切片进行抗Fos、抗加压素(VP)、抗甘氨酸受体(GlyR)、抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、抗缝隙连接蛋白43(Cx43)免疫荧光染色,镜下观察在视上核神经元和星形胶质细胞的表达。结果低渗组视上核星形胶质细胞的GFAP和Cx43表达高于对照组,GlyR阳性神经元较对照组多,Fos和VP阳性神经元较对照组少;TAG 低渗组和CBX 低渗组,星形胶质细胞的反应同低渗组,而GlyR阳性神经元较低渗组少,VP-、Fos-阳性神经元较低渗组均有所增加。结论低渗刺激激活视上核星形胶质细胞,被激活的星形胶质细胞可能经缝隙连接释放牛磺酸而抑制神经元,减少VP的释放,此过程可被TAG和CBX所阻断。     

辛伐他汀对增龄大鼠椎体骨形成功能的影响

目的观察辛伐他汀对增龄大鼠腰椎椎体骨形成功能的影响,评价辛伐他汀对躯干骨骼的骨质疏松是否具有预防和治疗作用。方法 15月龄雄性SD大鼠60只,分为剂量组(以不同剂量辛伐他汀5、10、20、40 mg/kg/d进行灌胃)、对照组(灌服等量生理盐水)和基线组(于灌胃开始时即处死取材)共计6组,每组10只。3个月后分别行腰4椎体的双能X线骨密度测试、矿化沉积率测定、周围定量CT(pQCT)纵向扫描和第5腰椎椎体的生物力学压缩测试。结果 10 mg剂量组的骨密度、矿化率及pQCT测量值较高,但与对照组相比无统计学差异;10 mg和20 mg剂量组骨骼的材料特性略好于对照组,但无统计学差异。结论 10 mg剂量组(相当人体口服辛伐他汀12～24 mg/d)在多数指标中好于其他剂量组,但未发现明显统计学差异。说明辛伐他汀对增龄大鼠的躯干骨骼并不具有明显的骨形成促进作用,即对脊柱椎体的骨质疏松并不具有预防和治疗的作用。     

脂联素对大鼠缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43表达的影响

目的: 观察脂联素(APN)对大鼠缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,进一步探讨其抗心律失常的可能机制。方法: 将48只雄性Wistar大鼠随机分成:(1)假手术 (SM)组;(2)缺血再灌注(I/R)组:结扎冠状动脉左前降支,30 min后松开结扎线,再灌注120 min;(3)脂联素+缺血再灌注组1(I/R+APN1):先阻断血流30 min,于再灌注120 min开始时给予3.5 μg/kg APN;(4)脂联素+缺血再灌注组2(I/R+APN2):缺血前10 min给予3.5 μg/kg APN,余同I/R组。观察各组心律失常的发生情况;应用RT-PCR观察各组心室肌细胞 Cx43 基因表达;用免疫组织化学方法观察Cx43分布的变化;应用硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法测各组动物血清中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;用RT-PCR及Western blotting法分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA及蛋白的表达,用电镜观察各组心室肌超微结构的改变。结果: (1)I/R组与SM组比较,心律失常评分和血清MDA含量显著增高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01);心室肌Cx43表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),Cx43分布紊乱,失去正常的规律性;心肌细胞超微结构有明显损伤;心室肌eNOS mRNA及蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)无论缺血前还是缺血后使用脂联素处理,与I/R组相比,心律失常评分显著降低(P<0.01);Cx43及eNOS表达增高(P<0.01),Cx43分布紊乱的程度减轻;心肌细胞超微结构损伤明显改善。结论: APN可能通过氧化应激调节Cx43的功能,从而发挥抗缺血/再灌注心律失常的作用。