去势大鼠骨髓间充质干细胞的成脂向分化

背景：骨髓间充质干细胞在适宜条件下,其成脂向分化增强可促进机体内脂肪细胞的生成。 目的：观察去势对大鼠体质量的影响,从骨髓间充质干细胞功能变化角度分析其病理机制。 方法：选用同一批次、周龄相同、体质量相近的健康雌性SD大鼠,分为2组,去势组行双侧卵巢切除建立骨质疏松症模型,假手术组部分切除双侧卵巢附近脂肪组织。3个月后显微CT检测两组大鼠股骨骨质量及体质量。分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,体外传至第5代,成脂诱导后脂滴油红O染色法检测骨髓间充质干细胞成脂能力;反转录-聚合酶链反应法检测骨髓间充质干细胞成脂相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ及脂蛋白酯酶mRNA表达。 结果与结论：去势3个月后,大鼠骨质疏松症模型成功构建。与假手术组相比,去势组大鼠股骨骨质量明显降低,体质量有明显增加,骨髓间充质干细胞成脂向分化增强(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞成脂向分化增强可能是大鼠去势后体内脂量生成增多,引起体质量肥胖性改变的重要原因。     

Notch信号在人脂肪源间充质干细胞成脂中的作用

目的通过研究Notch在hADSCs成脂中的作用,为肥胖提供新的药物靶点。方法分离脂肪抽吸液中的hADSCs并进行成脂诱导。RT-qPCR分析成脂中Notch1、Notch2、DLL1和DLL3的表达;DAPT抑制Notch信号,Western-blot检测NICD、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt、PPARγ的表达。结果所分离的细胞可成功诱导成脂。Notch1、Notch2、DLL1和DLL3表达水平在成脂过程中逐渐降低;10μM DAPT可显著降低NICD的表达水平,PPARγ表达水平升高,p-PI3K/PI3K与p-Akt/Akt表达水平均降低。同时使用PI3K/Akt激活剂IGF-1后,PPARγ表达水平下降。结论 Notch信号抑制可通过降低PI3K/Akt通路的活性促进hADSCs成脂。     

雌激素影响冻存肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化

背景：雌激素对脂肪干细胞向脂肪细胞诱导分化会有负向调节作用,但对长期深低温保存的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞向脂肪细胞分化的效果尚未见报道。 目的：探讨雌激素对长期深低温保存的及新鲜提取的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞成脂分化能力的影响。 方法：将长期深低温保存后复苏的及新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞分为4组进行成脂诱导分化,新鲜+雌激素组和冻存+雌激素组诱导时添加10-7 mol/L雌激素,新鲜组和冻存组不添加。成脂诱导分化14 d进行油红O染色及成脂量定量检测。 结果与结论：长期深低温保存后复苏的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞与新鲜提取的细胞形态和排列无差异;长期深低温保存后复苏的与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞表面抗原分子CD29、CD44均呈阳性,CD31均呈阴性表达。成脂诱导后可观察到细胞内有脂滴形成,油红O 染色呈阳性。在成脂诱导分化14 d对各组进行成脂量比较,新鲜组与新鲜+雌激素组,冻存组与冻存+雌激素组的吸光度之间比较,差异有显著性意义,但新鲜组与冻存组之间差异无显著性意义。结果表明：小剂量雌激素可抑制长期深度低温保存后复苏的肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞的成脂分化;长期深低温保存后复苏的与新鲜提取的第3代肾脂肪囊来源脂肪间充质干细胞在成脂诱导方面无显著性差异。     

miR-302对脂肪间充质干细胞向成脂和成骨分化的调控

背景：间充质干细胞具有自我更新能力,在一定条件下能够分化为一定谱系的细胞,但很多机制至今未明。 目的：探究miR-302b对脂肪间充质干细胞向成脂和成骨分化的调控作用。 方法：miR-302模拟物转染作用于脂肪间充质干细胞进行成骨成脂诱导,对照组转染miR-302阴性对照模拟物miR-NC。采用碱性磷酸酶染色及活性分析、茜素红染色、油红O染色和萃取实验观察miR-302上调对脂肪间充质干细胞成骨和成脂分化的影响,以及Western blot检测miR-302上调后成骨分化转录因子Runx2和成骨早期标志物碱性磷酸酶在脂肪间充质干细胞中的表达。 结果与结论：①碱性磷酸酶沉淀物在miR-302过表达细胞中产生的量均明显少于对照组,进一步发现miR-302过表达实验组碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P < 0.05)。②miR-302过表达明显抑制了矿物质沉积钙结节的形成,miR-302上调实验组橘红色的钙结节明显少于对照组。③miR-302过表达实验组油红O染色阳性的细胞数明显高于对照组,进一步表明实验组细胞萃取得到的油红O吸光度值明显上升(P < 0.05)。④成骨诱导第6天时成骨分化转录因子Runx2和成骨早期标志物碱性磷酸酶在miR-302过表达的细胞中都有不同程度的下降。⑤以上结果表明miR-302的上调能够抑制脂肪间充质干细胞的成骨分化,同时促进其向成脂分化。miR-302在间充质干细胞向成脂和成骨分化平衡发挥了双向调控作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

骨髓和脂肪来源的间充质干细胞免疫调节作用的比较

目的比较脂肪源间充质干细胞(AMSCs)和骨髓来源间充质干细胞(BMSCs)的免疫调节能力的差异。方法用流式细胞仪分析AMSCs和BMSCs的表型。通过MSCs和淋巴细胞共培养体系,检测MSCs对T细胞增殖、周期、活化、凋亡以及Th细胞分化的影响。结果表型分析结果显示AMSCs和BMSCs的表型基本一致。AMSCs和BMSCs都能抑制T细胞的增殖和早期活化,并在调节辅助性T细胞亚群的分化上作用类似。但在MSC对活化后T细胞的凋亡影响方面,BMSCs能够抑制活化T细胞的凋亡,而AMSC没有这种作用。结论 AMSCs和BMSCs对T淋巴细胞的影响基本类似,其对活化T细胞凋亡影响的差异还有待进一步的机制研究。     

miR-424负向调节人脂肪源间充质干细胞向成脂细胞分化

目的研究miR-424对人脂肪源间充质干细胞(hAMSCs)向成脂分化的影响。方法用real-time PCR检测hAMSCs成脂分化前后细胞内miR-424水平的变化。在脂质体介导下,用人工合成的miR-424模拟物转染hAMSCs提高细胞内miR-424的含量,随后对其进行成脂诱导。用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,用real-time PCR和Western blot检测成脂关键转录因子PPARγ及相关标记物mRNA的表达。结果 hAMSCs成脂分化后,miR-424表达下调。与对照组细胞相比,转染miR-424模拟物的实验组细胞中miR-424含量明显升高。成脂诱导第8天油红O染色结果显示,实验组脂滴形成显著少于对照组。PPARγ和成脂相关标记物的表达量也出现下调。结论 miR-424可负向调节hAMSCs向脂肪细胞分化。     

脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较

背景：近几年来脂肪来源的间充质干细胞因其取材容易也被广泛研究。 目的：比较脂肪来源和骨髓来源间充质干细胞的生物学特性。 方法：分离及体外培养人骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌因子水平等。 结果与结论：脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异。脂肪来源间充质干细胞增殖速率比骨髓来源的间充质干细胞快。在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓的10倍以上。提示脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞具有相同功能,但脂肪组织是一个更有应用前景的干细胞来源。     

猪的脂肪和骨髓来源间充质干细胞培养特性比较

目的明确小型猪的脂肪来源间充质干细胞（A_r_MSCs）和猪的骨髓来源间充质干细胞（BM—MSCsl体外培养特性的异同。方法广西巴马小型猪,雌雄不限,猪龄4～6个月,体质量20～30kg。AT-MSCs来源于小型猪腹股沟皮下组织．BM—MSCs来源于小型猪的骨髓组织。培养AT-MSCs和BM—MSCs并观察它们的细胞形态。流式细胞仪检测Arr_MSCs和BM—MSCs的表面标志物（CD29、CD34、CD45、CD90）。分别观察Arr-MSCs和BM—MSCs的细胞生长分化能力;实时聚合酶链反应（PCR）检测基因表达。结果流式细胞仪检测结果表明,A．r_MSCs和BM—MSCs均表达CD29[分别为（99．06±0．30）％、（99．94±0．05）％]、CD90[分别为（97．404-0．40）％、（97．43±1J29）％1阳性,CD34、CD45阴性。AT-MSCs传代需培养5～7d,而BM—MSCs需培养7～10d。与BM—MSCs比较,AT—MSCs具有更强的生长分化能力。实时PCR检测基因表达结果显示．AT—MSCs和BM—MSCs均能分化心肌特异标志物a—skeletalactin和Troponin—I．二者差异无统计学意义．表明AT—MSCs和BM—MSCs均具备多项分化潜能．结论AT—MSCs是小型猪干细胞移植治疗的理想选择．     

定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞

目的建立体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为成骨细胞的模型,为将MSC3用作骨组织工程的种子细胞奠定基础。方法用成骨添加剂（地塞米松10^-8mol/L、β-甘油磷酸钠10mmol／L、维生素C50mg/L）定向诱导传代大鼠骨髓MSCs分化为成骨细胞,通过形态学、生长曲线、免疫细胞化学及碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞。结果诱导组具有成骨细胞的形态和生长特点,增殖相对缓慢,但与对照组间的差异没有统计学意义（P〉0．05）,碱性磷酸酶活性增强。结论建立了体外定向诱导大鼠骨髓MSCs向成骨细胞转化的模型,成骨添加剂不影响细胞的增殖,可迅速大量获得种子细胞。     

绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪分化能力初探

探讨绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪分化能力的变化.选用3月龄健康SD雌性大鼠行双侧卵巢切除术后,建立骨质疏松症的动物模型,使用密度梯度离心法分别获取各组的骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养传至3、4代后,加入成脂肪诱导液进行成脂肪诱导后,观察细胞形态改变,并用RT-PCR法检测成脂肪分化过程的标志物脂蛋白脂酶(LPL)的mRNA水平.实验分为3月正常未诱导组(3conMSCs)、3月骨质疏松未诱导组(3ovx MSCs)、3月正常成脂肪细胞诱导组(3conADI)、3月骨质疏松成脂肪细胞诱导组(3ovxADI).结果显示(1)形态学改变,成脂肪诱导后,MSCs成类圆形,在胞浆内有脂滴形成,3ovxADI组形成脂滴明显多于3conADI组.(2)LPL的mRNA的表达,未诱导组3conMSCs组和3ovx MSCs组没有表达;诱导组在诱导7 d时,有表达,而且3ovxADI组明显高于3conADI组;诱导14 d时,趋势一致,诱导组的表达量均高于7 d.通过检测成脂肪分化的指标LPL的mRNA的表达发现,3ovx组明显高于3con组.研究结果表明,绝经后骨质疏松症大鼠MSCs成脂肪分化能力增强.     

Comparison of DNA synthesis in white and brown adipose tissue in rats with ventromedial hypothalamic lesions

Ventromedial hypothalamic (VMH) lesions cause excessive fat accumulation in white adipose tissue (WAT), and brown adipose tissue (BAT); however, little information is available on whether or not cell proliferation occurs in WAT and BAT after VMH lesioning. In this study, we determined the DNA content and thymidine incorporation in unilateral parametrial WAT and interscapular BAT 0, 1, 3, and 7 days after VMH lesioning, and examined the mechanism of increased DNA content in WAT. In rats with VMH lesions, the weight of WAT and BAT had increased significantly at 7 days, and the DNA content and thymidine incorporation of WAT had increased significantly at 3 days and continued to increase for up to 7 days, while those of BAT did not increase for as long as 7 days after VMH lesioning. Restricted food intake according to the pair-feeding method partially inhibited the increased DNA content in WAT. The increased DNA content in WAT was mostly restored but not completely by the administration of anti-insulin antibody, and by administration of propranolol, a -adrenergic blocker. The results demonstrated that VMH lesions induced DNA synthesis in WAT early after VMH lesioning, but did not induce DNA synthesis in BAT, and suggested that either hyperinsulinemia or a -adrenergic receptor mechanism or both may be responsible for the increased DNA content in WAT.     

Ⅱ型固有淋巴细胞在白色脂肪棕色化中的作用

正Ⅱ型固有淋巴细胞(typeⅡinnate lymphoid cells,ILC2s)于2001年被发现,由共同淋巴样祖细胞发育而来,广泛分布在血液、肠道、气管、肺脏、脾脏、肝脏、动物脂肪和皮肤等部位,经白细胞介素(interleukin,IL)-25或IL-33刺激后可产生IL-5和IL-13等2型辅助性T(type 2 helper T,Th2)细胞因子,在Th2     

不同来源间充质干细胞表面标记的比较

目的 探讨人脐带间充质干细胞（HUCMSCs）、人脂肪间充质干细胞（ADSCs）和人经血源子宫内膜间充质干细胞（MenSCs）之间表面标记的差异及随培养代次增加表面标记的变化。 方法 分别将HUCMSCs、 ADSCs和MenSCs培养至第3、6、9、12代,用流式细胞术、免疫荧光法检测CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD45的表达并进行比较。 结果 培养MenSCs和HUCMSCs呈纺锤状,ADSCs形态多样以梭型、多角形为主。流式细胞术检测显示,人HUCMSCs、ADSCs和MenSCs的第3代CD29、CD44、CD73和CD105阳性表达率均在95%以上,CD45阴性表达;第3代MenSCs CD90的表达率为(72.43±0.76)%,均低于其在HUCMSCs（99.67±0.12）%和ADSCs（99.70±0.15）%表达（P＜0.001）。HUCMSCs、ADSCs和MenSCs随培养代次的增加表面标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD45表达率差异无显著性（P>0.05）。免疫荧光结果与流式细胞术结果一致。 结论 HUCMSCs、ADSCs和MenSCs随培养时间的增加稳定高表达 CD29、CD44、CD73、CD90和CD105,不表达CD45,MenSCs的CD90表达率低于其在HUCMSCs和ADSCs的表达。     

Dissociation between brown adipose tissue thermogenesis and sympathetic activity in rats with high plasma levels of oestradiol

It has been shown previously that high plasma levels of oestradiol inhibit brown adipose tissue thermogenesis. Since rats and mice show a close association between thermogenic activity in and sympathetic discharge to brown fat, we measured the noradrenaline turnover in rats with high plasma levels of oestradiol to establish whether the observed inhibition of thermogenic activity is brought about by a reduction in the sympathetic drive to brown adipocytes. Oestradiol-filled Silastic capsules were implanted subcutaneously in female rats previously acclimated either to thermoneutrality or to cold. Control rats received empty implants. After 15 days treatment, noradrenaline turnover was measured by blocking its synthesis with -methyl-p-tyrosine. As expected, noradrenaline turnover was higher in cold-acclimated rats than in rats kept at thermoneutrality. The presence of high plasma oestradiol levels did not alter sympathetic activity in any of the treated groups despite reducing thermogenic activity. This result reveals that oestradiol dissociates the thermogenic activity of brown adipose tissue from its sympathetic activation. Such dissociation has never been previously reported in rats, although it seems to be common in Syrian hamsters. However the causative factor in this species is unknown.A preliminary report of this work was presented to the XXXIIth International Congress of Physiological Sciences, Glasgow, August 1993 and appears as abstract No. 287.6/P.     

C57小鼠脂肪及骨髓间充质干细胞生物学特性的比较

背景：研究发现,脂肪源干细胞具有和骨髓间充质干细胞一样的贴壁和形成成纤维样克隆特性,并具有向骨、脂肪、软骨等多系分化的能力。 目的：比较C57小鼠脂肪源间充质干细胞和骨髓间充质干细胞的生物学特点。 方法：在无菌的条件下分别从C57小鼠的脂肪和骨髓中获取脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。体外分离、培养并将脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞传至第3代,进行细胞形态、表面标记、生长动力学分化潜能测定和Notch信号相关基因的检测。 结果与结论：脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞形态学相似,第3代的脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均表达CD29、CD105、Sca-1,不表达CD34、CD133,但骨髓间充质干细胞还表达CD45;生长曲线和细胞克隆分析显示脂肪间充质干细胞的增殖速度明显比骨髓间充质干细胞快;脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均可向成骨、成脂、成软骨诱导分化,脂肪间充质干细胞更易向成骨诱导;Notch相关基因检测显示脂肪源干细胞的Jagged-1表达水平明显比骨髓间充质干细胞低,而Hes-1的表达水平脂肪源干细胞明显高于骨髓间充质干细胞的表达水平。提示脂肪间充质干细胞比骨髓间充质干细胞扩增能力更强,更易向成骨分化,可能与Hes-1表达水平有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Epigenetic programming of mesenchymal stem cells from human adipose tissue

Stromal stem cells identified in various adult mesenchymal tissues (commonly called mesenchymal stem cells [MSCs]) have in past years received more attention as a result of their potential interest as replacement cells in regenerative medicine. An abundant and easily accessible source of adult human MSCs are stem cells harvested from liposuction material. Similarly to bone marrow-derived MSCs, human adipose tissue-derived stem cells (ASCs) can give rise to a variety of cell types in vitro and in vivo; however, they have a propensity to differentiate into primarily mesodermal lineages. Even so, their capacity to differentiate into nonadipogenic mesodermal pathways seems to be restricted. Emerging DNA methylation profiles at adipogenic and nonadipogenic gene promoters in freshly isolated, cultured, or differentiated ASCs aim to provide an epigenetic explanation for this restrictive differentiation potential. A review of these studies indicates that human ASCs are epigenetically marked by mosaic hypomethylation of adipogenic promoters, whereas nonadipogenic lineage-specific promoters are hypermethylated. Surprisingly, in vitro differentiation toward various pathways maintains the overall methylation profiles of undifferentiated cells, raising the hypothesis that ASCs are at least epigenetically preprogrammed for adipogenesis. Novel attempts at reprogramming the epigenome of MSCs have been initiated to enhance the differentiation capacity of these cells.     

明胶微冰胶支架有利于脂肪来源间充质干细胞体外干性维持并提高其体内应用价值

目的研究人脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)与明胶微冰胶材料体外联合培养时,材料是否能维持间充质干细胞的生物学特性。方法 ADSCs种植于明胶微冰胶材料后进行Calcein-AM和PI活细胞染色检测细胞活力,细胞滴度蓝法检测细胞增殖能力,定量PCR检测干性基因OCT4、Nanog、SOX2表达情况,以及在成脂成骨诱导过程比较ADSCs在二维环境和种植于明胶微冰胶材料后的分化潜能。结果 ADSCs在三维明胶微冰胶支架材料中能保持较高活性,增殖能力不受影响,干性基因表达上调,成脂成骨分化相关基因表达水平比二维诱导环境低。结论明胶微冰胶可以为ADSCs提供一个较二维培养更好的微环境,有利于ADSCs体外干性维持,从而在干细胞移植法治疗相关疾病时以非侵入性的细胞传递方式发挥更长期的应用价值。     

低温保存脂肪间充质干细胞的生物学特性评价

目的 探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞（ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响。方法 分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温（-196℃）冻存 12个月后复苏。MTT 法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老;免疫细胞化学方法检测细胞表面分子CD73、CD90和CD105;条件培养基诱导后,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白（cTnT）,茜素红、碱性磷酸酶和油红 O 染色检测成骨、成脂诱导分化潜能,Real time-PCR检测cTnT、Gata4、Ost和Runx2。未经低温保存的第3代ADMSCs为对照。 结果 低温保存的ADMSCs其增殖活性、衰老率与未冻存细胞比较差异无显著性（P>0.05）。诱导后ADMSCs的cTnT阳性表达、茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色呈阳性反应,冻存组与对照组比较差异无显著性(P>0.05）。结论 低温保存对ADMSCs体外生长特性和成心肌、成脂肪细胞、成骨细胞的分化潜能差异无显著性。     

差速贴壁法分离培养脂肪源间充质干细胞

目的:探讨差速贴壁法从大鼠腹股沟脂肪垫分离纯化脂肪源间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)的可行性。方法:采用差速贴壁培养法分离ADMSCs,并与普通培养法得到的ADMSCs进行表面分子CD44阳性率对比。在第2代ADMSCs中加入条件培养基进行诱导,根据条件培养基的不同分成3组:①成骨诱导组:加入成骨培养基;②成脂诱导组:加入成脂培养基;③对照组:仅加入基础培养基。成骨诱导组和对照组进行碱性磷酸酶(ALP)检测,成脂诱导组和对照组进行油红O染色检测。结果:差速贴壁培养法获得CD44阳性率更高的ADMSCs。成骨诱导组的ALP大大高于对照组,成脂诱导组油红O染色阳性,对照组油红O染色均为阴性。结论:差速贴壁培养法从大鼠腹股沟脂肪垫中分离得到高纯度ADMSCs。