EPO/NGF对大鼠背根节压迫性损伤的治疗作用

目的:外源EPO/NGF通过其抗痛敏作用,抗凋亡作用及对钠离子通道的影响来探索和研究其在背根神经节(DRG)慢性压迫中的治疗作用。方法:制作多节段DRG慢性压迫大鼠模型,并给予外源EPO或NGF,进行行为学检测,测量大鼠的机械痛阈值和热痛阈值,Tunnel方法原位检测组织中细胞凋亡情况,通过免疫荧光技术,RT-PCR和Western Blot技术检测c-jun,c-fos,NGF,Nav1.8的表达情况。结果:与对照组相比,模型组的大鼠从建模第1 d起痛阈就开始下降,并持续到13 d;与模型组相比,EPO/NGF治疗组的机械痛阈值和热痛阈值得以升高,DRG神经细胞的损伤和凋亡现象减轻或者恢复。NGF的表达由于受到压迫损伤而降低,在给予外源NGF或EPO治疗后表达升高,Nav1.8的表达与NGF相一致。结论:EPO和NGF在神经系统中具有一定的抗凋亡作用,镇痛作用及促进钠离子通道Nav1.8的表达,并且痛阈的降低与Nav1.8表达下降具有一定相关性。     

人参皂苷Rg1调控癫痫大鼠海马Bcl-2和Bax的表达

目的:本研究通过建立氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫模型,用人参皂苷Rg1(Rg1)进行干预,检测癫痫大鼠海马中的Bax、Bcl-2的表达及Rg1对其的调控作用,初步探讨Rg1对癫痫可能的神经保护机制。方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为5组,即空白对照组,模型组,低、中、高剂量Rg1治疗组,每组20只,观察行为学变化,并于点燃后72 h取脑,分别通过免疫荧光显色、免疫印迹和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的蛋白和RNA表达情况。结果:空白组未出现癫痫发作及死亡,不同剂量的Rg1预处理组与模型组相比,大发作潜伏期时间延长。匹罗卡品诱导大鼠癫痫发作后,海马神经元的胞质内凋亡因子Bax免疫阳性反应增强,蛋白产物表达增多,抗凋亡因子Bcl-2表达减少。Rgl预处理组促凋亡因子Bax及其mRNA表达减少,抗凋亡因子Bcl-2及其mRNA表达增加。结论:癫痫发作后可引起凋亡因子的表达变化,而人参皂苷Rg1可以通过下调促凋亡因子Bax的表达,上调抗凋亡因子Bcl-2的表达,从而发挥抗癫痫的神经保护作用。     

瘦素对体外培养大鼠背根神经节神经元中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:研究瘦素对大鼠背根神经节(DRG)神经元中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:用不同浓度(1、 10和100nmol/L)的瘦素处理体外培养大鼠DRG神经元;采用免疫印迹技术,检测神经元中Bcl-2和Bax蛋白的表达变化.结果:10和100nmol/L的瘦素能促进DRG神经元中Bcl-2蛋白的表达;瘦素对Bax蛋白表达没有影响.结论:瘦素能促进DRG神经元中Bcl-2蛋白的表达,提示瘦素可通过提高Bcl-2蛋白表达来抑制Bax的促凋亡作用,从而改善DRG神经元的存活.这对进一步研究瘦素对DRG功能调节具有重要的意义.     

芍药苷减轻布比卡因诱导背根神经节细胞神经毒性的机制研究

目的 基于细胞凋亡和氧化应激途径探讨芍药苷减轻布比卡因（BV）麻醉诱导背根神经节（DRG）原代神经细胞神经毒性的作用。方法 将DRG原代神经细胞随机分成空白对照组、芍药苷组、BV组及芍药苷+BV组。MTT法检测细胞的增殖率;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和活性caspase-3的表达水平;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（ROS）水平;ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和丙二醛（MDA）水平。结果 与空白对照组比较,BV组、芍药苷+BV组中DRG原代神经细胞的增殖率、Bcl-2表达及SOD和GPx含量显著降低,而细胞凋亡率、Bax和活性caspase-3表达、平均荧光强度、MDA含量显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;芍药苷组DRG原代神经细胞的增殖率、凋亡率、Bax、Bcl-2、活性caspase-3表达无显著变化（P>0.05）,但平均荧光强度、MDA含量显著降低,SOD、GPx含量显著升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与...     

芍药苷抑制佐剂性关节炎大鼠FLS 异常增殖

目的:研究芍药苷(PF)对佐剂性关节炎(AA)大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)异常增殖的影响。方法:采用完全弗氏佐剂足跖注射法制备AA大鼠,造模后第28天股动脉放血处死大鼠,分离培养FLS,大鼠足爪肿胀评分法检测PF灌胃治疗对AA大鼠的治疗作用,ELISA检测PF对AA大鼠FLS细胞因子IL-8表达的影响,MTT检测PF加入FLS培养液对AA大鼠FLS增殖的影响,Real time q PCR检测PF加药对AA大鼠FLS促凋亡基因Bax、凋亡因子Caspase 3、抗凋亡基因Bcl-2、RA病理基因Fibronectin表达的影响。结果:PF显著抑制AA大鼠足爪肿胀程度,PF加入FLS培养液后对FLS增殖具有一定的抑制作用,对AA大鼠FLS中Bax、Caspase 3表达具有显著上调作用,对Bcl-2、Fibronectin、IL-8表达具有显著抑制作用。结论:PF可能通过抑制AA大鼠FLS异常增殖抑制AA大鼠病理发展。     

Urocortin调控Bcl-2家族与大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡

目的观察神经肽Urocortin对大鼠缺氧/复氧心肌细胞Bcl-2及相关基因mRNA表达和细胞凋亡的影响。方法培养新生大鼠的心肌细胞并缺氧/复氧处理,用RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bad mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果Urocortin治疗组Bcl-2的mRNA表达与缺氧/复氧组比较明显增加(P<0.05),Bax的表达明显下降(P<0.05),Bcl-xL、Bad mRNA表达无明显改变(P>0.05)。Urocortin治疗组凋亡细胞率与缺氧/复氧组比较减少(P<0.05)。结论Urocortin调节心肌细胞Bcl-2家族基因转录下凋促凋亡基因Bax表达,上调抑凋亡基因Bcl-2使Bcl-2/Bax比值增加。这可能是Urocortin抗大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的机制之一。     

人参皂甙Rg1对大鼠肢体缺血再灌注后脑组织Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨肢体缺血再灌注(LIR)后脑组织Bax和Bcl-2基因表达的变化及人参皂甙Rg1对其影响.方法: 复制大鼠LIR模型,用人参皂甙Rg1进行干预,测定脑组织丙二醛(MDA)含量,采用尼氏染色观察脑组织病理学改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测Bax、Bcl-2表达,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2表达变化.结果: 大鼠LIR后,脑组织海马区、中脑红核区神经元细胞受损,脑组织出现水肿裂隙,Bax的表达明显上调,与细胞凋亡数量的增加相一致,Bcl-2表达也相应增加.人参皂甙Rg1干预组与LIR组相比,MDA含量、凋亡细胞数、Bax表达降低.Bcl-2表达降低不明显.结论: LIR后有细胞凋亡机制参与脑损伤的发生,人参皂甙Rg1可能通过抑制Bax表达,降低Bax/Bcl-2比值,从而减轻脑损伤.     

牛膝多肽对体外培养的MPP~+诱导的大鼠多巴胺能神经元凋亡的保护作用

目的:观察牛膝多肽(achyranthes bidentatapolypeptides,ABPP)对MPP~+(1-甲基-4-苯基-吡啶离子)损伤多巴胺能神经元的保护作用。方法:原代培养大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元,与浓度50 ng/ml的ABPP或50ng/ml神经生长因子(NGF)共同孵育6 h,加入20μmol/L MPP~+损伤多巴胺能神经元12 h。使用四甲基偶氮唑盐(methyl thiaaolyl terazolium salt color imetry,MTT)比色法测定细胞活力;采用末端标记技术(Td T-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:ABPP或NGF预处理6 h可增强多巴胺能神经元的细胞活力,抑制MPP~+损伤后多巴胺能神经元的凋亡,上调Bcl-2/Bax蛋白的表达水平。ABPP对大鼠多巴胺能神经元的保护作用优于NGF。结论:与NGF相比,ABPP发挥了更好的拮抗MPP~+对多巴胺能神经元损伤的作用,其机制可能与上调Bcl-2/Bax蛋白的表达水平相关。     

凋亡相关蛋白在曲美他嗪干预的心力衰竭大鼠心肌细胞中的表达

目的:探讨曲美他嗪对心力衰竭心肌细胞凋亡情况及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:随机将雄性Wistar大鼠分为假手术组、心衰组和曲美他嗪组,除假手术组其他组大鼠均采用腹主动脉缩窄术建立心衰模型.观察各组大鼠的血流动力学参数,H-E染色观察大鼠心肌细胞病理形态结构,透射电镜观察心肌细胞超微结构,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学检测各组大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,曲美他嗪组大鼠心功能明显改善,AI明显降低,Bcl-2阳性表达显著增高,Bax阳性表达明显降低.结论:曲美他嗪可促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax的表达,该机制可能参与了曲美他嗪的心保护作用.     

中药六味地黄汤对衰老大鼠卵巢组织Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达的影响

目的探讨六味地黄汤对衰老大鼠卵巢组织凋亡相关基因Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达的影响。方法D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型,造模后灌胃何首乌饮连续60天后,大鼠断头取卵巢。采用免疫组织化学分析方法检测各组大鼠凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达;Western Bloting法检测各组大鼠卵巢Caspese-3蛋白表达的变化。结果模型组较正常组卵巢细胞Bax、Caspse-3表达量增加,Bcl-2表达减弱;六味地黄汤可使卵巢Bax、Caspse-3表达量降低,Bcl-2表达增加。差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄汤剂能延缓衰老大鼠卵巢细胞凋亡的发生,其机制可能是通过干预凋亡相关基因Bax/Bcl-2及Caspese-3蛋白表达抑制卵巢细胞的凋亡。     

神经生长因子对周围神经损伤后再生和修复的实验研究

手术切除５ｍｍ兔的尺神经，在两断端间连接肌桥并套装硅胶管，形成一个封闭腔，向腔内注入神经生长因子。间隔不同时间取尺神经桥接区、桥接区近段、远段、尺神经的脊髓投射节段和相应脊神经节，用光镜和电镜观察神经溃变和再生情况并作图像分析；用酶标示踪和电生理方法检测神经通路的重建状况。结果显示，周围神经离断后，肌束桥接并用硅胶管套装后注入外源性神经生长因子，可明显地促进离断神经的再生和修复。     

Differing effects on the pre- and paravertebral sympathetic ganglia of adult mice produced by antisera to nerve growth factors from mice and snakes

Antiserum to nerve growth factor isolated from mouse salivary glands causes, in adult mice, a reduction of approximately 50% in weight of the superior cervical ganglia. Prevertebral ganglia are less sensitive than paravertebral ganglia. The reduction in weight of the superior cervical ganglia results from a reduction in size of the principal sympathetic neurones (mean diameter falling by approximately 30%) rather than from a reduction in both cell size and cell numbers. If, as seems to be the case in neonatal mice, the antiserum acts by neutralizing endogenous nerve growth factor, no effect on adult neurone numbers would be expected. The origin of the reduction in neurone size is not understood.Antisera to nerve growth factor isolated from snake venoms do not affect the superior cervical ganglia of adult mice. It is suggested that chemical differences between the snake venom and mouse salivary gland nerve growth factors might lead to differences in the antisera produced from these respective antigens.     

Interaction of nerve growth factor with pheochromocytoma cells. Evidence for tight binding and sequestration

When the rat pheochromocytoma clonal cell line PC 12 is incubated with nerve growth factor a portion of the bound ligand does not dissociate from the cells in a medium free of nerve growth factor. This fraction is defined as tightly bound nerve growth factor and is further separable into trypsin sensitive and trypsin resistant compartments.These findings suggest that a series of events occur in which nerve growth factor is bound, sequestered and then taken into the cell. The tight binding of nerve growth factor is linearly dependent on cell density, raising the possibility of its participation in the increase in cell-to-cell and cell-to-substrate adhesivity that is mediated by nerve growth factor.     

白血病患者NGF和CD271测定的临床意义

目的:观察初治白血病患者神经生长因子(NGF)及其低亲和性受体CD271的表达水平变化及其临床意义.方法:运用酶标记免疫吸附分析(ELISA)测定40例急/慢性白血病患者(病例组)血清NGF水平以及流式细胞术(FCM)测定白血病细胞群CD271阳性表达率,同时选择35例健康体检者为对照组.结果:病例组患者血清NGF水平...     

坐骨神经瓦勒变性大鼠许旺细胞生物学特性及分泌功能变化

背景：研究表明外周神经损伤后,许旺细胞在基底膜管内形成Bunger带,引导再生轴突延伸,但具体作用机制目前尚不清楚。 目的：观察大鼠坐骨神经损伤后瓦勒变性对许旺细胞生物学特性及分泌功能的影响。 方法：建立大鼠坐骨神经横切模型,分为坐骨神经瓦勒变性组(坐骨神经横断组)和手术对照组。采用神经段单酶消化法分离培养许旺细胞,光镜下观察细胞形态变化,S-100免疫荧光鉴定。取第1代许旺细胞,利用计数法绘制14 d内许旺细胞的生长曲线,MTT法检测14 d内许旺细胞增殖活性,酸性磷酸酶法检测许旺细胞黏附能力,ELISA法检测神经生长因子浓度。 结果与结论：坐骨神经段培养第14天,坐骨神经横断组神经段边缘可见大量许旺细胞,呈线形排列;手术对照组许旺细胞数量少,呈散在分布,两组许旺细胞S-100均呈阳性表达。许旺细胞传代培养第3天,两组许旺细胞均进入对数增长期,随时间延长,细胞数及细胞增殖吸光度值均呈上升趋势,坐骨神经横断组细胞数及增殖吸光度值明显高于手术对照组(P < 0.05);坐骨神经横断组许旺细胞黏附能力明显高于手术对照组(P < 0.05);ELISA法检测示,坐骨神经横断组神经生长因子浓度在培养第4,6,8,10,12,14天时均高于手术对照组(P < 0.05)。结果表明大鼠坐骨神经损伤后两三周,瓦勒变性对许旺细胞生物学功能具有显著影响,可诱导许旺细胞幼稚化,促使许旺细胞在短期内迅速分裂增殖,并分泌大量神经营养因子及细胞外黏附成分,为再生轴突的延伸提供适宜的神经微环境;并增加细胞黏附能力,为外周神经损伤修复提供适宜的神经微环境。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

NGF和GM_1联合应用对去细胞异种神经支架移植后神经再生和修复的影响

为了探讨神经生长因子(NGF)和单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)联合应用对去细胞异种神经支架移植后神经再生及功能恢复的影响,本研究将SD大鼠随机分为生理盐水对照组、NGF治疗组、GM1治疗组、NGF+GM1联合治疗组,选取兔胫神经进行化学萃取,形成去细胞异种神经支架桥接大鼠10mm坐骨神经缺损,移植前分别用等渗盐水(NS)、NGF液、GM1液或NGF+GM1液浸泡去细胞异种神经支架,术后各组大鼠术侧小腿肌内分别注射NS液、NGF液、GM1液或NGF+GM1液。术后4、8周行大体观察并用神经电生理、肌湿重、免疫组织化学等方法测定神经纤维再生及功能恢复情况。结果显示:在同一时间点,NGF+GM1联合治疗组坐骨神经运动传导速度恢复率、小腿腓肠肌复合动作电位波幅恢复率、小腿三头肌湿重恢复率均优于单独用药组(P<0.05);免疫组织化学结果显示NGF+GM1联合治疗组有大量再生有髓神经纤维顺畅地通过远端吻合口。本研究结果提示联合应用NGF和GM1可明显促进去细胞异种神经支架移植后的神经纤维再生与功能恢复。     

胆囊收缩素促坐骨神经再生的可能机制

背景：前期实验发现,八肽胆囊收缩素能促进大鼠坐骨神经损伤后的再生,但具体机制仍不清楚。目的：筛选有效指标,尝试从神经生长因子及神经再生微环境的角度分析八肽胆囊收缩素促进大鼠坐骨神经再生的机制。方法：选择健康SD大鼠,制备坐骨神经单侧离断伤模型后随机分为2组,八肽胆囊收缩素治疗组造模后连续7 d腹腔注射八肽胆囊收缩素8 nmol/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水。检测两组大鼠局部神经生长因子蛋白表达、脊髓诱导型一氧化氮合酶水平、血清超氧化物歧化酶活性和丙二醛浓度,同时检测脊髓凋亡细胞数。结果与结论：八肽胆囊收缩素治疗组大鼠局部神经生长因子蛋白表达高于对照组(P < 0.01),脊髓诱导型一氧化氮合酶和凋亡细胞数低于对照组(P < 0.01),血清超氧化物歧化酶活性高于对照组且丙二醛浓度低于对照组(P < 0.01,0.05)。说明胆囊收缩素促进坐骨神经再生的可能机制包括保护神经元、抗细胞凋亡、抑制炎性反应、抗NO及氧化反应、抗丙二醛减轻自由基损伤等方面外,还可刺激神经生长因子的表达和释放。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

中西药结合促进心梗后大鼠胆碱能神经的恢复

目的：观察葛根素与神经生长因子联合应用对大鼠心肌梗死后去胆碱能神经支配的影响，以证实二者联合应用对心梗后大鼠胆碱能神经功能恢复的作用。方法：实验用SD大鼠32只，分为正常组、心肌梗死组、神经生长因子组及联合用药组。术后2d取材，以Karnovsky-Roots法，显示胆碱能神经纤维，应用多功能真彩色病理图像分析系统分析胆碱能神经纤维密度。结果：心肌梗死组存活心肌中胆碱能神经纤维密度最低，联合用药组胆碱能神经纤维密度最高。结论：葛根素与神经生长因子联合应用能够明显减缓大鼠心肌梗死后的去胆碱能神经支配，促进神经功能的恢复。     

坐骨神经损伤后雏菊叶龙胆的修复作用实验研究

目的观察雏菊叶龙胆是否对坐骨神经损伤后有促进功能恢复的作用,其中是否有睫状神经营养因子的参与。方法雄性Wistar大鼠225只,右侧坐骨神经离断后显微镜下缝合。造模后随机分为对照组、雏菊叶龙胆25 mg组、50 mg组、75 mg组和甲钴胺组5组。对照组生理盐水注射,其他组相应剂量的雏菊叶龙胆及甲钴胺注射,1、3、5周测定神经传导速度及腓肠肌肌细胞截面积,免疫组化分析睫状神经营养因子(CNTF)阳性细胞比率。结果雏菊叶龙胆50 mg、75 mg组与对照组、甲钴胺组神经传导速度相比有明显差异,雏菊叶龙胆25 mg组与75 mg、50 mg组相比有明显差异(P=0.025)。3周时对照组、甲钴胺组、雏菊叶龙胆25 mg、50 mg、75 mg组腓肠肌肌细胞截面积分别为:(455.06±29.38)μm2、(679.03±81.48)μm2、(465.31±71.55)μm2、(670.24±91.26)μm2、(669.28±78.54)μm2,对照组、雏菊叶龙胆25 mg组与其他组比较有显著差异(P0.05)。3周时各组睫状神经营养因子免疫组化可见雏菊叶龙胆25 mg组和对照组与雏菊叶龙胆50 mg、75 mg组比较结果有统计学差异。结论雏菊叶龙胆可促进坐骨神经损伤后功能恢复,可促进神经功能恢复中有睫状神经营养因子参与。     

Peripheral nerve injury,scarring, and recovery

ABSTRACT

Peripheral nerve injuries (PNI) resulting from trauma can be severe and permanently debilitating. Despite the armamentarium of meticulous microsurgical repair techniques that includes direct repair, grafting of defects with autograft nerve, and grafting with cadaveric allografts, approximately one-third of all PNI demonstrate incomplete recovery with poor restoration of function. This may include total loss or incomplete recovery of motor and/or sensory function, chronic pain, muscle atrophy, and profound weakness, which can result in lifelong morbidity. Much of this impaired nerve healing can be attributed to perineural scarring and fibrosis at the site of injury and repair. To date, this challenging clinical problem has not been adequately addressed. In this review, we summarize the existing literature surrounding biological aspects of perineural fibrosis following PNI, detail current strategies to limit nerve scarring, present our own work developing reliable nerve injury models in animal studies, and discuss potential future studies which may ultimately lead to new therapeutic strategies.