细胞色素P—450亚族选择性底物的合成

为了便于国内同行对细胞色素Ｐ－４５０亚族的深入研究，作者合成了Ｐ－３５０ＩＡ和ⅡＢ亚洲的选择性底物乙氧基异酚恶唑和戊氧基异酚恶唑，并对合成品与国外标准产品的结构和酶学表征进行了比较。结果表明：合成品无论从结构上还是从酶学表征上均与国外产品基本一致。因此，在Ｐ－４５０研究中可用本合成品替代国外产品。     

高效液相色谱法测定人肝细胞色素P450 3A4转基因细胞中氨氯地平

目的 :研究氨氯地平经人肝细胞色素 P4 5 0 3A4 (CYP3A4 )的代谢 ,建立反相高效液相色谱的测定人肝转基因细胞 CYP3A4酶 S9孵育液中氨氯地平浓度的方法。方法 :与人肝转基因细胞提取的 S9上清液孵育之后的样品 ,用 3倍量的甲醇沉淀后离心 ,取上清液用 0 .4 5μm微孔滤膜滤过后进样。采用 Hypersil C18柱 ,以乙腈 -磷酸盐缓冲液 (4 5∶ 5 5 ,v/ v,p H4 .5 )为流动相 ,普萘洛尔为内标 ,在 2 5 0 nm波长处测定。结果 :氨氯地平浓度在 0 .2～ 30 .0μg/ ml范围内线性关系良好 ,r=0 .9993,方法平均回收率为 (98.2± 2 .4 ) % (n=5 ) ,日内和日间相对标准偏差(RSD)均小于 10 % ,检测限为 2 0 ng/ ml,定量限为 0 .2 μg/ ml(回收率为 10 4 .0 % ,RSD为 11.4 % ,n=5 )。结论 :建立的反相高效液相色谱方法简便、准确 ,可用于研究氨氯地平在人肝 CYP3A4转基因细胞中的代谢。     

肝微粒体制备与细胞色素P450含量测定

对肝匀浆经一次高速离心制成的Ｓ－９部分和聚乙二醇凝集两次高速离心制成的微粒体组分进行了细胞色素Ｐ４５０含量测定，结果显示Ｓ－９部分蛋白质含量，细胞色素Ｐ４５０总量的明显高于微粒体组分，但细胞色素Ｐ４５０比含低于微粒体组合。     

细胞色素P450氧化还原酶在发育中的作用

细胞色素P450氧化还原酶(POR)是一种电子供体,参与许多发育相关的内源性物质的代谢,从而影响机体的生长发育。本文就POR在发育相关内源性物质代谢中的作用以及POR缺陷导致的发育不良等方面进行综述。     

探针药物在人类细胞色素P450研究中的作用

细胞色素氧化酶Ｐ４５０在药物代谢、前致癌物激活的过程中起重要的作用,且在不同个体之间活性存在差异。本语文针对探针药物在各类细胞色素Ｐ４５０酶活性测定及研究中的作用,进行较全面客观的综述。     

细胞色素P450与体温调节

细胞色素P450（cytochrome,CYP450)是一类以还原态与CO结合后在450nm处具有最高吸收峰的含血红素的单链蛋白质。它于1958年被发现以来，就引起了人们的广泛重视。近年来每年发表的有关CYP450的研究论文已超过2000篇。花生四烯酸一旦从膜磷脂中释放出来可被三个主要的酶系统氧化：环氧化酶、脂氧化酶和依赖于CYP450的单氧化酶。环氧化酶化酶途径导致发热，这一点已被大量的研究结果所证实。一些学者报导脂氧化酶途径不参与体温调节，依赖于CYP450的单氧化酶途径有参与解热和控制发热上限的作用。     

细胞色素P450酶系统在中医药研究中的应用

细胞色素P450发现于50年代,30多年来取得很大进展。在药物代谢、毒理学、肿瘤生化等的研究中,都涉及到细胞色素P450及其同功酶的作用。     

环磷酰胺对小鼠肝细胞色素P450含量的影响

目的　了解环磷酰胺 (CP)对小鼠肝细胞色素P4 5 0含量的影响。方法　小鼠腹腔注射CP 2 0mg·kg-1·d-1和CP 4 0mg·kg-1·d-1,连续 4天。以聚乙二醇法制备微粒体 ,测定肝微粒体中P4 5 0的含量。结果　CP 2 0mg·kg-1和CP 4 0mg·kg-1两组动物肝微粒体P4 5 0含量与对照组相比明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　CP具有抑制P4 5 0的作用     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

大鼠嗅粘膜内细胞色素P450 2A3的发育表达

目的：研究细胞色素P450 2A3(cytochrome P450 2A3，CYP2A3)在大鼠嗅粘膜表达变化的规律。方珐：应用免疫组化方法观察胎鼠、幼鼠及成年鼠嗅粘膜内CYP2A3的免疫表达。结果：大鼠嗅粘膜内CYP2A3的表达始于孕17d，随胎仔发育表达不断增强，生后3周达一峰值，并持续增长至成年期。固有层Bowman’s腺细胞内CYP2A3表达强度从出生后3周开始超出支持细胞。结论：嗅粘膜内CYP2A3酶表达与嗅感受神经元功能发育基本同步，二者可能存在共同的生长调控因子，而Bowman’s腺细胞是嗅粘膜内CYP2A3酶表达及发挥功能活性的主要部位。     

稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

细胞色素P450介导蚊虫代谢抗性及防治应用的相关研究进展

随着化学杀虫剂在公共卫生和农业上的长期大量应用,导致蚊虫抗药性的发生与发展,从而为病媒疾病的控制带来了前所未有的挑战。目前研究表明代谢抗性是蚊虫抗性中主要的抗性机制之一,其中细胞色素P450作为代谢抗性相关酶类中重要的酶系家族,参与了蚊虫内源及外源化合物的生物转化和代谢。细胞色素P450介导蚊虫代谢抗药性的酶系主要是CYP6、CYP9和CYP4家族。近年来随着生物信息学和分子生物学技术的发展,蚊虫全基因组水平抗性基因及抗性机制取得更全面和深入的研究,越来越多的CYP被发现和证实与蚊虫的抗药性相关,并且应用于相关病媒控制及抗性管理中。本综述介绍了CYPs在蚊虫代谢抗性方面的基础研究情况,以及在蚊虫防治及蚊虫抗性管理中的相关研究进展。     

氢溴酸槟榔碱对人肝CYP450 酶的体外影响

目的 采用液质联用法结合特异性探针技术,研究氢溴酸槟榔碱（AH）对人肝微粒体（HLM） 中细胞色素P450（CYP450）亚型酶的体外影响。方法 将CYP1A2、2E1、3A4、2C9、2D6、2B6 的探针 底物分别在0 ～ 160μmol/L AH 的HLM 中温孵,高效液相法测定CYP1A2、2E1、3A4、2C9 的酶活性;高 效液相色谱- 串联质谱仪测定CYP2D6、2B6 的酶活性。结果 AH 对HLM 中CYP2D6、2B6、2E1、2C9 的酶活性有轻微抑制作用,且随AH 浓度的升高而增强。当AH 为160μmol/L 时,对CYP2D6、2B6、2E1、 2C9 酶活性的抑制率分别为36.2%、38.3%、35.0% 和35.4%。结论 槟榔嗜好者使用CYP1A2、2E1、3A4、 2C9、2D6、2B6 6 个CYP450 酶的底物药物时,其代谢相互作用的风险仍不可忽视。     

广东汉族妇女细胞色素P450 1A1基因多态性检测分析

目的探讨广东汉族妇女细胞色素P450 1A1(CYP1A1)基因的多态性分布规律.方法采用等位基因特异性扩增和PCR-RFLP技术,对160例广东汉族正常妇女的CYP1A1基因多态性进行了检测.结果 CYP1A1基因7号外显子A4889G多态位点A,G等位基因频率分别为75.0%和25.0%.AA,AG,GG基因型分布频率分别为57.5%,35.0%,7.5%;CYP1A1基因3′端非翻译区的MspⅠ多态位点m1及m2等位基因的频率分别为65.0%及35.0%.m1m1,m1m2,m2m2基因型分布频率分别为42.5%,45.0%,12.5%.广东汉族妇女CYP1A1基因A4889G多态与MspⅠ多态存在连锁不平衡关系(χ2=23.394,P<0.005).结论广东汉族妇女CYP1A1基因多态分布与日本人相近,与欧美人不同.广东汉族妇女CYP1A1基因两位点多态存在连锁不平衡关系.     

西咪替丁对非酒精性脂肪性肝炎大鼠细胞色素P450的抑制作用

目的：研究西咪替丁对大鼠肝微粒体细胞色素P450（CYP450）表达的影响。方法：应用高脂饲料诱导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠模型，给予3种不同剂量的两咪替丁灌胃，紫外分光光度计测量CYP450及同工酶CYP2E1含量，放免法测定血清透明质酸（HA）含量，生化分析仪测定转氨酶等指标，观察肝组织学特点。结果：与NASH组比较，高、中剂量西咪替丁组大鼠的CYP450及同工酶CYP2E1含量均下降，谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、HA水平也下降，低剂量西咪替丁组各指标略有降低，但差异无显著性。结论：西咪替丁能抑制NASH大鼠肝微粒体CYP450、CYP2E1表达，降低血清中HA含量，改善肝功能，减轻肝损害。     

Screening of the whole human cytochrome P450 complement (CYPome) with enzyme bag cocktails

We have previously introduced the use of permeabilized fission yeast cells (enzyme bags) that recombinantly express full-length CYPs for drug metabolism studies. Such enzyme bags are cells with pores that function as enzymes in situ. They can easily be prepared without a need for ultracentrifugation and may be used in similar protocols as microsomes. In this study we report the preparation of enzyme bag cocktails that permit the testing of multiple CYPs in a single enzyme bag reaction. Moreover, we established a convenient testing scheme that permits a rapid screen of all human CYPs for activity towards any given candidate substrate. An important aspect of this approach is the reduction of individual CYP test assays. If a cocktail containing many CYPs tests negative, it follows that all CYPs included in that cocktail need not be tested individually, thus saving time and resources. The new protocol was validated using two probe substrates.     

炎症性疾病中细胞色素P450表达调控的研究进展

细胞色素P450(cytochrome P450,CYPs)是人体内催化外源化合物氧化反应的主要代谢酶,参与了近90％药物的代谢.在炎症性疾病过程中,CYPs家族某些成员的表达可能会下降从而改变药物的代谢表型,对CYPs的诱导或抑制可能改变药物代谢速度,进而影响体内药物的浓度.而在此过程中影响CYPs的机制可能与Th1细胞分泌的IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-y,Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、TGF-β,核受体和microRNA有关.本文综述炎症性疾病中CYPs的调节作用及相关机制,为炎症性疾病临床用药提供参考.     

Spectroscopic studies of the interaction between phosphorus heterocycles and cytochrome P450

P450 fatty acid decarboxylase OleT from Staphylococcus aureus (OleT_SA) is a novel cytochrome P450 enzyme that catalyzes the oxidative decarboxylation of fatty acids to yield primarily terminal alkenes and CO₂ or minor α- and β-hydroxylated fatty acids as side-products. In this work, the interactions between a series of cycloalkyl phosphorus heterocycles (CPHs) and OleT_SA were investigated in detail by fluorescence titration experiment, ultraviolet–visible (UV–vis) and ³¹P NMR spectroscopies. Fluorescence titration experiment results clearly showed that a dynamic quenching occurred when CPH-6, a representative CPHs, interacted with OleT_SA with a binding constant value of 15.2 × 10⁴ M⁻¹ at 293 K. The thermodynamic parameters (ΔH, ΔS and ΔG) showed that the hydrogen bond and van der Waals force played major roles in the interaction between OleT_SA and CPHs. The UV–vis and ³¹P NMR studies indicated the penetration of CPH-6 into the interior environment of OleT_SA, which greatly affects the enzymatic activity of OleT_SA. Therefore, our study revealed an effective way to use phosphorus heterocyclic compounds to modulate the activity of cytochrome P450 enzymes.