高效液相色谱用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定

目的 建立通过双糖吸收试验评价肝硬化大鼠肠道通透性的高效液相色谱法(HPLC).方法 建立四氯化碳诱导大鼠肝硬化模型.采用HPLC检测30例正常大鼠和30例肝硬化大鼠尿液标本中甘露醇和乳果糖排出率比值.以NH2柱(4.6 mm×250 mm×5 mm,Warters)为色谱柱; 柱温为室温;流动相为乙腈∶水70∶30(V/V);流速为1.0 ml/min;进样量为20 μl.示差折光检测器(RID 2000).结果 在上述色谱条件下,尿样中甘露醇和乳果糖能得到良好基线分离,甘露醇和乳果糖的出峰时间分别为6.721 min和9.242 min.该法检测甘露醇和乳果糖的线性范围分别为5～1 000 μg/ml、2.5～500 μg/ml.甘露醇的加样回收率在92.7%～98.0%,乳果糖的加样回收率在91.3%～97.4%.肝硬化大鼠肠道通透性(乳果糖/甘露醇比值:0.03578±0.01245)显著高于正常大鼠(0.02563±0.00871).结论 HPLC检测肠道通透性具有准确性高、重复性好、简便灵敏等特点,可用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定和监测.     

肠道急性移植物抗宿主病黏膜通透性与肠黏膜病理改变的相关性研究

目的研究肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)黏膜通透性变化与肠黏膜病理改变以及二者之间的关系。方法32只BALB/C小鼠随机分为4组:单纯照射组(对照组)和3个时段aGVHD组(aGVHD后7、11和15天组),各8只。TBI剂量8.0Gy,剂量率1.0Gy/min。高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析(HPLC-ELSD)检测尿液标本中乳果糖(lactulose,L)和甘露醇(mannitol,M)的排出率比值(L/M),评价各组小鼠的肠道通透性;收集空肠组织标本做病理评估。结果肠道aGVHD后7、11和15天组L/M比值均明显高于对照组(P<0.05),分别为0.509±0.353,0.717±0.012,0.762±0.014,0.291±0.053。aGVHD后7、11和15天组aGVHD严重程度评分较对照组显著增加(P<0.05),分别为0.810±0.259,1.940±0.176,2.750±0.267,0.000±0.000。各组L/M与肠道aGVHD严重程度水平呈显著相关(r=0.903,P<0.01)。结论 aGVHD后随着时间延长肠黏膜通透性逐渐增加且肠道aGVHD严重程度评分逐渐增高;aGVHD后肠道通透性与肠道aGVHD严重程度呈显著相关,尿液L/M可作为肠道aGVHD严重程度的无创评估方法。     

液相色谱-串联质谱法测定尿中乳果糖、甘露醇和乳糖含量

目的建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS／MS）测定人尿中乳果糖、甘露醇和乳糖含量。方法尿样用水和乙腈直接稀释后，以LunaNH2（100&#215;2．0mm，5μm）为分析柱，乙腈-水（80：20，v／v）为流动相，0．3mL／min流速进行色谱分离。采用负离子化电喷雾、多反应监测（MRM）扫描方式进行质谱定量分析，离子通道选择m／z为：甘露醇181．1／88．9，乳果糖和乳糖341．3／160．9，内标353．4／166．9。结果甘露醇、乳果糖、乳糖和内标的保留时间分别为2．9、4．1、4．7和4．7min。在0、1～40μg／mL浓度范围内线性关系良好（r≥0．9980）。最低定量限分别为0．1μg／mL（甘露醇、乳果糖）和0．2μg／mL（乳糖）。日内、日间精密度（CV％）分别为0．60％～4．31％、2．55％～7．71％，准确度分别为86．4％～107．6％、95．9％～102．9％。回收率为84．7％～105．5％。结论该方法的样品处理简单快速，检测专一灵敏、准确可靠，可用于肠通透性评价中甘露醇及乳果糖的含量测定。     

重度慢性乙型病毒性肝炎患者肠道屏障的变化及其临床意义

目的:研究重度慢性乙型病毒性肝炎患者肠道屏障的变化并初步探讨其临床意义。方法:采用高效液相色谱蒸发光散射器(HPLC-ELSD)检测30例正常人和30例重度慢性乙型病毒性肝炎患者尿乳果糖、甘露醇排泄率比值的变化(L/M);采用酶联免疫吸附法检测上述两组人群血清二胺氧化酶(DAO)的变化,并加以比较。结果:与正常人相比,重度慢性乙型病毒肝炎患者尿乳果糖的排泄率增加(0.065 0±0.027 0 vs 0.086 0±0.022 5,P=0.002),尿甘露醇的排泄率无明显变化,而尿乳果糖/甘露醇排泄率的比值(L/M)明显升高(0.031 6±0.013 4 vs 0.043 0±0.019 8,P=0.011)。而重度慢性乙型病毒肝炎患者血清DAO的水平与正常相比也明显升高(6.654 7±2.221 7 vs 10.981 3±2.973 4,P<0.000 1)。结论:重度慢性乙型病毒肝炎患者肠黏膜通透性和血清DAO均明显增高,提示重度慢性乙型病毒性肝炎患者存在肠黏膜屏障的损伤。     

正常国人乳果糖和甘露醇排出率比值

目的测定正常国人口服乳果糖、甘露醇测试液后尿中乳果糖／甘露醇排出率比值（Ｌ／Ｍ）。方法用带脉冲电化学检测器的高压液相仪（ＨＰＬＣ－ＰＥＤ）分别测定６０例健康志愿者口服以往剂量（乳果糖１０ｇ、甘露醇５ｇ）和小剂量（乳果糖２ｇ、甘露醇１ｇ）测试液后,尿中乳果糖和甘露醇浓度,并计算乳果糖和甘露醇尿中排出率及其比值。结果口服以往剂量和小剂量测试液６ｈ后,正常国人尿中Ｌ／Ｍ比值分别为０．０２６±０．００６和０．０３６±０．００８。结论ＨＰＬＣ－ＰＥＤ方法检测灵敏度高,可减少乳果糖和甘露醇的测试量,测定乳果糖与甘露醇排出率比值反映肠粘膜通透性是一种实用的临床方法。     

保留灌肠和口服肠道去污剂在肝硬化患者治疗中疗效比较

目的:探讨应用保留灌肠和口服肠道去污剂两种给药途径在肝硬化患者治疗中血清内毒素水平和肠黏膜通透性的变化。方法:将67例肝硬化患者按给药途径随机分为保留灌肠组(n=34)和口服组(n=33)。两组除实施常规的保肝、降门脉压和利尿等对症支持治疗外,保留灌肠组通过导管向肠道注射肠道去污剂,而口服组则服用肠道去污剂,两组均治疗2周。比较两组患者治疗前后血清内毒素水平、尿液乳果糖/甘露醇排出比(L/M,肠黏膜通透性)和Child-Pugh评分,并分析肠黏膜通透性和血清内毒素水平的相关性。结果:两组患者的血清内毒素水平、尿液乳果糖/甘露醇排出比和Child-Pugh评分于治疗前无统计学差异。治疗2周后,保留灌肠组血清内毒素水平、尿液乳果糖/甘露醇排出比和Child-Pugh评分较口服组降低显著,差异有统计学意义。且肠黏膜通透性和血清内毒素水平呈正相关。结论:通过保留灌肠途径给予肠道去污剂治疗肝硬化患者较口服给药能更有效地降低血清内毒素水平,改善和保护患者的肠道屏障功能,在一定程度上有利于肝硬化患者肝功能的恢复。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定人肠黏膜通透性的方法学及其临床应用研究

目的进行高效液相色谱-蒸发光散射法测定人肠黏膜通通性的方法学研究,同时应用此方法研究重度融性乙型病毒性肝炎患者肠道屏障功能的变化并探讨其治疗方法。方法（1）采用高效液相色谱-蒸发光散射法检测30例健康人（正常组）和90例重度慢性乙型病毒性肝炎患者尿乳果糖、甘露醇排泄率比值（L／M）的变化,同时测定血清二胺氧化酶（DAO）的变化,以此两项指标来反映肠道屏障功能的变化并将两组加以比较。（2）将90例重度慢性乙型病毒性肝炎患者按随机数字表法分为对照组、乳果糖组,谷氨酰胺组3组,每组30例。对照组采用常规治疗;乳果糖组在常规治疗的基础上加用乳果糖10g,3：L／d;谷氨酰胺组在常规治疗的基础上加用谷氨酰胺颗粒10g,3：L／d。疗程均为2周。于治疗前后分别测定3组患者的肝功能、内毒素（ET）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、DAO、白介素-2（IL-2）、白介素-8（IL-8）、T淋巴细胞亚群、L／M等,并采用协方差分析法加以比较。结果采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定L／M的变化,甘露醇和乳果糖能得到很好地分离,乳果糖的线性范围为0．65—13．0μg/L（r=0．9980）,甘露醇的线性范围为0．74～14．7／μg／L（r=0．9983）。乳果糖和甘露醇日内精密度的相对标准偏差（RSD）分别为1．56％、0．65％（n=6）,日间精密度的RSD分别为1．77％、0．99％（n=6）。乳果糖的加样回收率为98．68％～100．4％,平均值为99．51％;甘露醇的加样回收率为99．52％-100．5％,平均值为99．94％。乳果糖在尿中的最低检测浓度为94．2-L,甘露醇在尿中的最低检测浓度为29．9μg/L。重度慢性乙型病毒性肝炎患者L／M、DAO水平明显升高（P〈0．01）。治疗2周后,与对照组相比,乳果糖组TBIL、ET、TNF-α的变化差异有统计学意义（P〈0．05）;与对照?     

消化道肿瘤患者肠道通透性研究

目的测定晚期消化道肿瘤患者肠道通透性的改变,探讨消化道肿瘤是否影响肠粘膜屏障功能。方法健康志愿者、晚期消化道肿瘤患者各16名,每人口服乳果糖、甘露醇液后采集6 h尿样。尿样和乳果糖、甘露醇的标准样经肟化处理后通过气相色谱分析仪进行检测分析。结果甘露醇峰、乳果糖峰出峰时间稳定,峰面积与含量呈线性相关;消化道晚期肿瘤患者与健康志愿者尿样中的乳果糖含量和乳果糖/甘露醇比值存在显著差异(P<0.05),乳果糖含量增高,而甘露醇含量2组无显著差异。结论晚期消化道肿瘤患者肠粘膜通透性增加,存在肠粘膜屏障功能障碍。     

高效液相色谱法测定人尿乳果糖及甘露醇

目的：建立一项快速、灵敏测定人尿乳果糖（Ｌ）及甘露醇（Ｍ）的实验方法。方法：烧伤病人口服给药：乳果糖１０ｇ，甘露醇５ｇ，高效液相色谱示差（ＨＰＬＣ－ＲＩ）检测法测定各时段Ｌ、Ｍ的排出量。结果：Ｌ、Ｍ的线性范围为４～５００ｍｇ／Ｌ，平均回收率为９６．３９％～９８．３７％，精密度（ＣＶ％）为２．６８～３．７４，最低检测限０．０５ｍｇ／Ｌ。结论：Ｌ／Ｍ的值增大，可示肠通透性增高     

溃疡性结肠炎患者肠黏膜通透性的改变

目的 应用高效液相色谱示差法评价溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜通透性的改变,并探讨肠黏膜通透性反映UC患者疾病活动程度的敏感性.方法 应用HPLC-RI检测15例UC患者和15例健康者口服乳果糖(L)和甘露醇(M)测试液后尿液中L、M含量,计算L/M比值,比较UC患者肠黏膜通透性的改变.分析肠黏膜通透性和血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)反映UC患者疾病活动程度的敏感性.结果 15例UC患者尿中L/M比值为,明显高于15例健康者(0.494±0.190 vs 0.039±0.014,P＜0.05),表明UC患者肠黏膜通透性明显高于健康者.UC患者肠黏膜通透性改变和Sutherland DAI评分间有良好的相关性,左半结肠病变患者ESR、CRP均在正常范围,但左半结肠肠黏膜通透性增高(P＜0.05).结论 UC患者肠黏膜通透性和健康者相比明显增高,并且反映疾病活动程度的敏感性高于ESR、CRP.     

多排螺旋CT检查口服不同小肠对比剂效果评估

目的 通过口服不同小肠中性对比剂进行腹部多排螺旋CT（MDCT）检查,评价各对比剂对小肠扩张度及肠壁结构的显示效果,从而优选对比剂.方法 行全腹部MDCT检查患者80例,随机分成口服纯净水、纯牛奶、甘露醇（2.5%等渗）和乳果糖（1：30倍稀释）4组,每组20例.患者检查前45min内分4次服用总量为1 800ml的相应液体,450ml/次,间隔15min.测量小肠平均扩张度及45 s增强期时相且肠腔扩张度最好肠段的肠壁与肠腔CT差值.全程小肠扩张度在0~30%,31%~50%,51%~80%,＞80%各记0、1、2、3分;肠壁结构显示不清楚记0分,清楚记1分.肠腔与肠壁对比度分差、一般、良好各记0、1、2分.结果 纯净水、纯牛奶、甘露醇和乳果糖组患者小肠肠腔扩张度分别为1.44±0.49、1.86±0.32、1.98±0.35和（1.99±0.27）cm,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中甘露醇和乳果糖组的肠腔扩张度较好.纯净水、纯牛奶、甘露醇和乳果糖组患者45s增强时相肠腔与肠壁CT差值为83.75±5.00、78.90±17.00、82.15±5.14和（82.70±5.38）HU,差异无统计学意义（P ＞0.05）.纯净水、纯牛奶、甘露醇和乳果糖组全程小肠肠腔扩张程度、肠壁结构显示清晰度、肠腔与肠壁对比度评分分别为7、0、9,45、13、24,55、15、32和56、16、34,其中乳果糖和甘露醇组的各项评分高于其余两组.结论 2.5%等渗甘露醇和1：30倍稀释乳果糖都可使80%以上小肠肠管一致性良好扩张,并清晰显示小肠肠壁结构,是理想的MDCT小肠造影口服肠道对比剂.     

乳果糖联合培菲康对肝硬化自发性细菌性腹膜炎患者肠黏膜屏障功能及炎性细胞因子的影响

目的探讨乳果糖联合培菲康对肝硬化自发性细菌性腹膜炎患者肠黏膜屏障功能、血清及腹水TNF-α、IL-6水平的影响。方法选择肝硬化自发性细菌性腹膜炎患者120例,随机分为常规治疗组(n=60)和联合治疗组(n=60),另外选择健康体检者30例为健康对照组。所有患者均于治疗前、治疗后口服糖分子探针乳果糖、甘露醇,采用高压液相色谱示差法测定尿乳果糖/甘露醇排泄率,测定治疗前后血清及腹水TNF-α、IL-6水平,并统计患者的病死率。结果治疗前常规治疗组和联合治疗组患者尿乳果糖/甘露醇排泄率,血清及腹水TNF-α、IL-6水平显著高于健康对照组(P<0.05,P<0.01);治疗后联合治疗组尿乳果糖/甘露醇排泄率、血清及腹水TNF-α、IL-6水平较常规治疗组明显下降(P<0.05或P<0.01);联合治疗组的病死率明显低于常规治疗组(8.33%vs 18.33%,P<0.05)。结论乳果糖联合培菲康可以降低肝硬化自发性细菌性腹膜炎患者血清及腹水TNF-α、IL-6水平,提高肠黏膜屏障功能,改善患者预后。     

消化道肿瘤患者肠道通透性研究

OBJECTIVE: To assess the intestinal barrier function of patients with advanced digestive tract malignant tumors by measuring the changes in intestinal permeability. METHODS: Sixteen patients with digestive tract tumors and 16 healthy volunteers were enrolled. After oral administration of mannitol and lactulose in deionized water, the 6-hour urine samples were collected for analyzing mannitol and lactulose concentrations using gas-liquid chromatography. RESULTS: Urine lactulose concentration and lactulose/mannitol (L/M) ratio of the tumor patients were increased in comparison with those of the healthy subjects (P<0.05). CONCLUSION: he intestinal permeability increased in these tumor patients, indicating intestinal barrier dysfunction.     

急性重症胰腺炎血行感染患者肠屏障功能障碍的临床研究

目的探讨急性重症胰腺炎血行感染患者与肠道屏障的临床相关性研究,并观察急性重症胰腺炎血行感染和术后感染之间的联系。方法对我院40例接受急性重症胰腺炎治疗并确诊为血行感染的患者进行临床分组治疗,对照组采用常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上实施肠屏障早期保护措施,比较两组胃肠功能评分和APACHEⅡ评分、C-反应蛋白（CRP）、血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血浆内毒素水平（LPS）、尿乳果糖,甘露醇值（UM）,并对两组患者的治疗后一般情况进行比较。结果观察组治疗后APACHEⅡ评分、CRP、TNF—-α、LPS均较治疗前有硅著下降,与对照组比较差异亦有高度统计学意义（P〈0．01）。结论早期进行肠屏障功能保护能有效提高患者胃肠功能,降低肠屏障通透性和炎性反应。     

Increased intestinal permeability in patients with inflammatory bowel disease

Intestinal permeability can be measured by the sugar absorption test. This test is based on determining the ratio of the urinary excretion of a large and a small carbohydrate after oral administration. The aim of this study was to determine which combination of carbohydrates used in the test gives the highest correlation with disease activity in inflammatory bowel disease. 26 patients with Crohn's disease, 21 patients with ulcerative colitis and 27 healthy control subjects were included in the study. The patients with inflammatory bowel disease had either minimal or highly active disease or were in remission. Two disaccharides (lactulose: L, and cellobiose: C) and two smaller carbohydrates (rhamnose:R, and mannitol:M) were given orally and the urinary excretion was measured by high pressure liquid chromatography followed by pulsed amperometric electrochemical detection on a gold electrode. The ratios C/R, L/R, C/M and L/M were used as indicators for intestinal permeability. - There were no side effects of oral sugar administration. All patients tolerated the test well. Lactulose, rhamnose and cellobiose concentrations are easily be measured in the urine whereas mannitol measurement requires the use of an anion exchanger. This produced inconsistent results. Patients with Crohn's disease or with ulcerative colitis had increased permeability indices in comparison to healthy controls, even in remission. The L/R ratio gave a better differentiation between the healthy controls and patients with active disease than the other agents. Changes in disease activity are best reflected by use of cellobiose/rhamnose excretion quotient.     

Effects of traditional Chinese medicine on intestinal mucosal permeability in early phase of severe acute pancreatitis

Background Traditional Chinese medicine has been used widely for many years in China to treat acute pancreatitis. We have investigated the effects of Dachengqi decoction on intestinal mucosal permeability and outcome in patients with severe acute pancreatitis （SAP）. Methods Forty patients with sustained SAP that required admission to the surgical intensive care unit were enrolled prospectively in the study. All of these patients were divided randomly into the Dachengqi decoction group （n=-20） and control group （n=-20） on admission. Intestinal permeability was assessed by measuring absorption of two metabolically inert markers, lactulose （L） and mannitol （M）, which were administered orally. Serum concentrations of endotoxin （lipopolysaccharide, LPS） and the ratio of lactulose to mannitol in urine （L/M） were detected in all patients. Results Compared with those in the control group, urinary L/M ratio decreased significantly in the Dachengqi decoction group on the 7th day after admission （P=0.001）. Also, serum concentrations of LPS were reduced on the 5th and 7th day after admission （P=-0.006, P=0.008, respectively）. Incidence of multiple organ dysfunction syndrome （MODS） and pancreatic infection was significantly lower in the Dachengqi decoction group compared with those in the control group （P=-0.038, P=-0.025, respectively）. Conclusion Dachengqi decoction may promote the recovery of intestinal mucosal permeability and decrease the incidence of MODS and pancreatic infection in patients with SAP.