热休克蛋白70与肝癌

热休克蛋白70(HSP70)广泛存在于细胞中,在应激刺激后过表达,可以参与蛋白质的合成及受损蛋白的修复。HSP70在肝癌治疗中的作用日益受到重视:利用其特异性和免疫原性,靶向治疗肝癌。并且可以利用其分子伴侣的特点,作为肝癌疫苗,诱发机体抗肝癌的免疫反应。HSP70在肝癌治疗中已初显成效,但也存在很多问题,需要更加深入的研究。总之,HSP70在肝癌治疗中有很大的应用前景。     

热休克蛋白70的抗肿瘤免疫效应研究

目的 :研究HSP70诱导的抗肿瘤免疫效应 ,为应用其治疗人类恶性肿瘤提供实验依据。方法 :应用细胞培养、液相色谱法、电泳技术、Western blot法等获得高纯度肿瘤中的HSP70 ,将其应用于同源的 61 5系小鼠 ,观察其抗肿瘤免疫效应。结果 :HSP70免疫后的小鼠能够抵抗同种肿瘤细胞的攻击 ,其中 1 0 μg免疫后的小鼠 1 0 0 %获长期生存 (>90d) ,无一死于肿瘤 ,5μg免疫后的小鼠肿瘤进展受到抑制 (平均生存 2 8 2± 4 8d) ,但无一小鼠获长期生存 ,上述两组与对照组 (平均生存 1 8 3± 3 6d)相比差异均具有显著性 (P <0 0 1 )。HSP70对荷瘤小鼠的治疗研究证明 ,5μgHSP70有一定的治疗作用 ,荷瘤小鼠平均生存 31 3± 2 9d ,而 1 0 μgHSP70治疗组的小鼠生存期 >58 8± 33 7d ,其中 40 %的小鼠所接种肿瘤完全消退 ,获长期生存(>90d) ,与其他组相比 ,差异具有显著性 (P <0 0 1 )。结论 :HSP70可诱发强大的抗肿瘤免疫效应 ,并且有良好的治疗作用 ,对于研究利用HSP70治疗人类的恶性肿瘤有重要的参考意义。     

热应激诱导兔脑热休克蛋白70的合成研究

探讨热应激与热休克诱导的脑组织不同细胞热休克蛋白７０合成。     

细胞外热休克蛋白70及其生物学功能

热休克蛋白(HSP)一直被描述为一种细胞内蛋白质在胞内发挥一系列生物学作用,参与细胞内蛋白质的折叠、装配、降解和修复过程。近年来,有研究发现HSP70能被主动释放到胞外,成为细胞外HSP70(extracellular HSP70,eHSP70),但关于其功能尚不清楚。循环HSP70水平与多种疾病进程密切相关。有研究发现暴露于物理和心理刺激源作用下,HSP70可能通过脂筏或Exosome介导的分泌途径释放到细胞外,作为一种生物活性因子影响多种疾病的进程。     

人热休克蛋白70基因的原核表达

目的 表达人热休克蛋白70（HSP70）并进行鉴定。方法 用PCR方法扩增人HSP70基因片段，经T-A克隆法克隆到载体pUCm-T中，并进行DNA测序，将人HSP70基因片段从载体pUCm-T中酶切后，构建重组表达载体pGEX-4T-1-HSP70，并转化大肠杆菌JM109，用IPTG诱导，收集细菌，菌体裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测。结果 人HSP70基因的PCR产物约为1.9kb。序列测定结果证实，所获目的序列与文献[3]报道的相一致，经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切鉴定证实。人HSP70基因已成功地克隆到表达载体pGEX-4T-1中，构建的表达载体pGEX-4T-1-HSP70，能很好地在大肠杆菌中表达相对分子质量（Mr)为96000并具有抗原特性的融合蛋白，结论 成功地克隆并表达了HSP70基因，为研究HSP70的结构。功能与临床应用提供了必要条件。     

热休克蛋白70复合物与肿瘤免疫

热休克蛋白 70 (HSP70 )家族是一类重要的应激蛋白 ,在肿瘤组织中可诱导其异常表达。由于HSP70在肿瘤免疫中发挥免疫佐剂的功能 ,并介导细胞免疫 ,协同抗原提呈细胞、αβT细胞、γδT细胞和NK细胞的作用 ,综合多种免疫效应杀伤肿瘤细胞 ,表明HSP70对开发肿瘤疫苗有重要的意义     

热休克蛋白70对HBV复制的影响

目的:探讨过表达热休克蛋白70(HSP70)对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法:运用RTq PCR检测HBV复制对HSP70表达的影响及过表达HSP70对HBV 3.5 kb m RNA的影响;运用Western blot法验证HSP70过表达效果及过表达HSP70对HBV核心蛋白的影响;RT-q PCR和Southern blot法分析过表达HSP70对HBV复制中间体的影响;运用双萤光素酶报告系统检测过表达HSP70对HBV启动子活性的影响。结果:HBV复制显著抑制HSP70的m RNA水平。过表达HSP70抑制HBV复制中间体、3.5 kb m RNA以及核心蛋白的表达,同时抑制HBV核心启动子的活性。结论:HBV复制抑制HSP70的表达。过表达HSP70抑制HBV的复制。本研究结果表明,HSP70通过抑制核心启动子的活性抑制HBV的复制。     

热休克蛋白70-hom基因多态性与强直性脊柱炎的相关性

目的　探讨热休克蛋白 70 - hom(heat shock protein70 - hom,HSP70 - hom)基因多态性与强直性脊柱炎的关系。方法　应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性方法检测了 98例强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者和 70名正常人的 HSP70 - hom基因第 2 4 37核苷酸的 Nco 限制酶位点的多态性。结果　 HSP70 - hom各基因型频率在 AS组中分别为 6 0 .2 % (AA)、35 .7% (AB)和 4 .1% (BB) ,在对照者中分别为 5 8.6 % (AA)、38.6 % (AB)和 2 .9% (BB) ,两组之间的基因型频率分布的比较 ,差异无显著性(χ2 =0 .2 80 ,P>0 .0 5 ) ;AA和 BB的等位基因频率在 AS组中分别为 77.9%和 2 2 .1% ,在对照者中分别为78.1%和 2 1.9% ,两者比较 ,差异无显著性 (χ2 =0 .0 0 2 ,P>0 .0 5 )。结论　 HSP70 - hom基因多态性不是影响中国人 AS患者致病的主要因素。     

热休克蛋白70与肠道病毒感染

热休克蛋白70 (HSP70)是HSP70家族中的重要成员.HSP70的主要功能是作为分子伴侣参与蛋白质的折叠与修饰.在病毒感染时,HSP70参与机体的抗感染免疫,从而保护细胞.因而研究HSP70与肠道病毒的相互作用具有意义.     

妊娠早期小鼠子宫内膜热休克蛋白70的免疫组化研究

目的 :研究妊娠早期小鼠子宫内膜热休克蛋白 70的表达。方法 :采用免疫组织化学方法。结果 :热休克蛋白 70主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞 ,内膜上皮、腺上皮中未见表达。与未孕小鼠相比 ,孕鼠热休克蛋白 70免疫反应阳性细胞显著增多 (P <0 .0 1 )且随妊娠日龄的增加而增加 (P <0 .0 1 )。结论 :热休克蛋白70可能参与了子宫内膜蜕膜反应中基质细胞的增殖 ,与蜕膜反应密切相关     

Induction of heat shock protein 72 synthesis by endogenous tumor necrosis factor via enhancement of the heat shock element-binding activity of heat shock factor 1

Endogenous tumor necrosis factor (enTNF) acts as a resistance factor against cytotoxicity caused by heat by inducing manganous superoxide dismutase (MnSOD), thereby scavenging reactive oxygen free radicals. On the other hand, it is also well known that heat shock proteins (HSP) which are induced by heat stress behave as cytoprotective factor against this stress. However, the relationship of these two resistance factors is not elucidated yet. In the present study, we therefore proposed the possibility that enTNF enhances HSP72 expression. Heat-sensitive L-M (mouse tumorigenic fibroblast) cells, which normally do not express enTNF, were transfected with a nonsecretory-type human TNF-α expression vector to produce enTNF. Stable transfectants showed resistance to heat treatment and an increase of HSP72 expression. Conversely, when HeLa (human uterine cervical cancer) cells, which normally produce an appreciable amount of enTNF, were transfected with an antisense TNF-α mRNA expression vector to inhibit enTNF synthesis, their heat sensitivity was enhanced and HSP72 expression was reduced by half. Although enTNF caused no difference in the level of heat shock factor (HSF) 1 in these cells, enTNF expression correlated well with the binding activity of HSF-1 to a ³²P-labeled synthetic oligonucleotide containing the human heat shock element (HSE). These results indicate that enTNF participates not only in intrinsic resistance against heat via induction of MnSOD but also via enhancement of the HSE-binding activity of HSF 1 followed by augmentation of HSP72 expression.     

睡眠剥夺对HSP70表达及脑超微结构的影响

目的：观察睡眠剥夺（SD）后大鼠脑组织HSP70表达的变化及对超微结构的影响。方法：44只雄性SD大鼠随机分为11组，每组4只，免疫组织化学方法检测HSP70的表达，电镜观察海马超微结构的变化。结果：睡眠剥夺后12小时即可在大脑皮质及海马观察到HSP70阳性细胞，2—3天数量达到高峰，7天时明显下降。白天睡眠剥夺12小时（SDd12h）组HSP70阳性细胞数较夜晚睡眠剥夺12小时（SDn12h）组多（P〈0．05）。RS组大脑皮质HSP70阳性细胞数较白天睡眠剥夺1天（SDd1d）组减少（P〈0．05）。白天睡眠剥夺3天（SDd3d）海马出现超微结构改变，白天睡眠剥夺7天（SDd7d）后改变更加明显。结论：睡眠剥夺可影响大鼠脑组织HSP70表达及超微结构。     

HSP70-肿瘤肽的纯化及其抗肿瘤免疫效应

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）－肿瘤肽分离、纯化方法，并观察其抗肿瘤免疫保护效应。方法：采用低渗均浆、超速离心、ConA-Sepharose亲和层析，ADP－Agarose亲和层析和DEAE离子交换的亲和层析，从热处理的小鼠肝癌（HCaF)细胞中分离、纯化HSP70－肿瘤肽，并通过主动免疫保护试验观察其抗肿瘤免疫效应。结果：蛋白得率为每g湿重瘤细胞可纯化50－100μg HSP70－肿瘤肽；经SDS－PAGE和Western blot检测，纯化的HSP70－肿瘤肽具有很高的纯度和特异性；HSP70－肿瘤肽主动免疫的小鼠可抵抗HCaF细胞的攻击，存活率达75％，结论：采用低压亲和层析可获得高纯度的HSP70－肿瘤肽，且可诱导明显的抗肿瘤免疫保护效应。     

The polymorphism of heat shock protein 70 genes in Chinese Han population in Fujian province

Heat shock protein 70 (HSP70) genes are themost important and conserve gene members intheheat shock protein family,and locate in an areaadjacent tothe TNFgenesinthe classⅢregionofmajor histocompatibilitycomplex(MHC) .Its geneproductsHSP70proteins are encoded by 3 differ-ent genes ,HSP70-1,HSP70-2andHSP70-hom.Previous studies showed that three kinds ofpolymorphisms existin3loci of thesethree genes ,i .e .+190 G/CBsrBⅠrestrictionsite onHSP70-1, +1267 A/GPstⅠrestriction site onHSP…     

我国福建汉族人HSP70基因多态性分析

目的了解福建省汉族人HSP70基因多态性分布，进而为探讨HSP70基因多态性与疾病的相关性提供遗传背景资料。方法应用聚合酶链反应技术、限制性内切酶分析检测了127名福建汉族正常人的HSP70基因3个多态性位点，并比较了部分不同地区和人群之间的基因型与等位基因频率。结果福建汉族人HSP70-1基因型（GG，GC和CC）分布频率分别是55．1％、40．2％和4．7％；HSP70-2基因型（从，AG和GG）分布频率分别是44．1％、铝．8％和6．9％；HSP70-hom基因型（Tr，TC和CC）分布频率分别是59.8％、37．0％和3．2％；HSP70-1等位基因频率G和C分别是75．2％和24．8％；HSP70-2等位基因频率A和G分别是68．5％和31．5％；HSP70-hom等位基因频率T和C分别是78．3％和21．7％。福建汉族人HSP70-1的基因型分布和等位基因频率同日本、墨西哥人群比较差异无统计学意义，与美国和西班牙人比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。福建汉族人HSP70-1的GG纯合型（55．1％）显著高于美国（42．6％）和西班牙（33．0％）人群；福建汉族人HSP70-2的基因型分布和等位基因频率与日本人比较差异无统计学意义，与墨西哥、美国和西班牙人群比较，差异有统计学意义（P〈0．05），福建汉族人HSP70-2的AA纯合型（44．1％）高于墨西哥（23．O％）、美国（38．8％）和西班牙（20．O％）人群；福建汉族人群的HSP70-hom基因型和等位基因频率分布同日本、墨西哥、美国和西班牙人群的基本一致，差异无统计学意义，福建汉族人群的HSP70基因型和等位基因频率分布同中国台湾汉族人基本一致，差异无统计学意义，与武汉地区汉族人某些位点存在差异。结论福建汉族人HSP70基因多态性分布不同于某些地区的人群，具有种族和地区差异。     

人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的基因克隆及序列分析

目的 获取人幽门螺杆菌（Ｈｐ）热休克蛋白Ａ亚单位（ＨｓｐＡ）的ＤＮＡ（ｈｓｐＡ）,并将它克隆到质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔ＾ＴＭ Ｘａ－３中进行核苷酸序列分析。方法 利用ＰＣＲ技术扩增ＨｓｐＡ,并将其它向插入ＰｉｎＰｏｉｎｔ＾ＴＭ Ｘａ－３载体中通过４种荧光染料标记,激光检测的方法进行核苷酸序列分析。结果 ＤＮＡ序列分析表明,所克隆的ＨａｐＡ ＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ公布的一致。结论 本研究获得了序列正     

热休克蛋白27、热休克蛋白65和肽素在青年缺血性脑卒中患者血清中的表达及其临床意义

目的 探讨热休克蛋白(HSP) 27、HSP65和肽素在青年缺血性脑卒中患者血清中的表达及其临床意义.方法 选取135例体检合格的健康人群为对照组,124例青年缺血性卒中患者为实验组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HSP27、HSP65和肽素表达水平的变化.结果 青年缺血性脑卒中的发病与患者的年龄、身高、体重和身体质量指数(BMI)没有显著的关系(F=26.38,P＞0.05).青年缺血性脑卒中患者和对照组相比,患者血清中HSP27、HSP65和肽素的表达水平显著升高(F=55.71,P＜0.05);女性脑卒中患者和男性脑卒中患者相比,患者血清中HSP27和肽素的表达水平较高,而HSP65表达水平较低(F=62.65,P＜0.05).结论 HSP27、HSP65和肽素可能是青年缺血性脑卒中的危险因素.     

替普瑞酮诱导肺纤维化大鼠肺HSP70表达及干预肺纤维化的研究

目的:研究替普瑞酮(GGA)对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化大鼠肺组织HSP70表达的影响及对大鼠肺纤维化的干预作用。方法:SD大鼠30只,随机分为假手术组(SO)、模型组(M)和替普瑞酮组(GGA)。M组和GGA组大鼠气管内一次性注射BLM 5 mg/kg,SO组大鼠气管内注射等体积的生理盐水。造模后第1天开始隔天灌胃给予GGA,持续到处死动物的前1天,模型组灌服等体积的生理盐水。记录大鼠每日体重,造模后第28天时处死大鼠,测定肺纤维化大鼠的肺系数、肺组织内HSP70表达及羟脯氨酸(HYP)的含量,观察肺组织病理改变。结果:GGA能提高博莱霉素处理后大鼠肺组织HSP70的表达(P<0.01);与M组相比,大鼠体重下降得到明显恢复(P<0.01),而肺组织的肺系数和羟脯氨酸(HYP)含量则明显降低(P<0.05),病理结果显示肺泡内结构完整,未出现类似M组肺组织实变现象,肺纤维化程度较轻。结论:替普瑞酮能诱导BLM肺纤维化模型大鼠肺组织HSP70表达,减轻肺纤维化程度。