脑梗死大鼠经血管内皮生长因子165基因治疗后热休克蛋白70的表达

OBJECTIVE: To investigate the expression of heat shock protein 70 (HSP70) in the brain of rats with cerebral infarction after the administration of vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) gene therapy, thereby to provide molecular basis for clinical gene therapy of cerebral infarction. METHODS: Twenty-five Wistar rats were divided equally into 5 groups, namely normal control group, sham-operated control group, middle cerebral artery occlusion group (MACO group), eukaryotic expression plasmid group (pUCCAGGS group) and gene therapy group (receiving pUCCAGGS/hVEGF165).Rat models of permanent MACO was established by ligation with nylon suture, and in the latter two groups, pUCCAGGS or pUCCAGGS/ hVEGF165 was directly injected into the infarcted area. Seven days after the infarction, the rats were killed to obtain the brain tissues for immunohistochemical detection of HSP70 expression. RESULTS: In the rat brain cortex of the normal and sham-operated control group, similar low levels of HSP70 expression were detected (P >0.05), while in the MCAO group and pUCCAGGS group, HSP70 levels were both significantly higher (P <0.01), showing no differences between the latter two groups (P >0.05). Most intense HSP70 expression was detected in the gene therapy group (P <0.01). In the penumbra of the infarct area, MCAO, pUCCAGGS, and gene therapy group all had high expression levels of HSP70, which were comparable in the former two groups (P >0.05), with the highest expression levels occurring in the latter group. Within the infarct area, similar expression pattern was observed (P <0.01). CONCLUSION: The elevated HSP70 expression in response to VEGF165 gene therapy in the rats as observed in this study suggests the potency of VEGF165 gene to induce HSP70 expression.     

热休克蛋白9Oα在血管内皮生长因子165基因治疗大鼠脑梗死中的表达及意义

目的观察热休克蛋白(HSP)90α在血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗大鼠脑梗死中的表达,为治疗脑梗死提供实验依据.方法雌性Wistar大白鼠25只,体重为250～300 g,随机分为5组,每组5只.正常对照组(A组)予常规饲养;假手术组(B组)在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中,仅将栓线插入颈内动脉约1cm即可;单纯MCAO对照组(C组),采用改进的线栓法制成永久性MCAO模型;空载质粒对照组(D组)在MCAO模型术后,头顶部剃毛,消毒后采用立体定位仪在梗死区相应部位钻一小孔,以5μl空载质粒(pUCCAGGS,20μg/μ1),然后缝合切口,精心饲养;治疗组(E组)的方法同D组,注入等量的pUCCAGGS/hVEGF165取代空载质粒.实验7 d后断头取脑,采用免疫组织化学的方法显示脑中的HSP90α表达情况.结果 A、B两组整个脑部均无HSP90α表达;C、D两组仅有少量表达;E组的半暗带内有明显表达,与C、D组的差异有显著性(P＜0.01),半暗带以外区域仅有少量表达或不表达.结论 VEG165基因可诱导HSP90α在特定部位表达.     

康复训练对大鼠脑梗死后Fos和Hsp70表达的影响

目的：研究康复训练对脑梗死大鼠大脑皮质Fos,Hsp70表达的影响,方法：采用60只SD大鼠制作脑梗死模型,1d后随面分为康复组和制动组,康复组每天给予平衡,抓握,旋转,行走等训练,制动组置于网状笼风固定,各组在1,7,14,21和28d检测Fos,Hsp70蛋白表达,结果,康复组和制动组大鼠大脑皮质出现Fos和Hsp阳性反应神经元,康复组反应明显较制动组强,对侧较梗死侧多,结论：康复训练可激活脑梗死大鼠大脑梗死灶周围和对侧向相应皮质神经元功能,促进运行功能恢复。     

热休克蛋白70减轻大鼠急性坏死性胰腺炎机制的实验研究

目的 探讨热休克蛋白70减轻大鼠急性坏死性胰腺炎的机制.方法 80只SD大鼠随机分为4组,急性坏死性胰腺炎模型组（A）、假手术组（B）、温生理盐水腹腔灌洗预处理后急性坏死性胰腺炎（ANP）组（C）和温生理盐水腹腔灌洗和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）抑制剂（SB202190）预处理后ANP组（D）,ANP模型由5%牛黄胆酸钠大鼠胰胆管逆行注射诱发而成.C组使用温生理盐水持续腹腔灌洗30 min,10 h后造ANP模型;D组在使用温生理盐水腹腔冲洗后,立刻行SB202190（10 mg/kg）腹腔注射,10 h后制造ANP模型.ANP术后6 h处死大鼠,检查各组大鼠血清细胞因子IL-6、TNF-α和IL-8;血清淀粉酶;取胰腺组织行病理检查,并使用PCR方法检测胰腺中热休克蛋白70（HSP70）/p38-MAPK的表达.结果 SB202190预处理组大鼠血清淀粉酶[（1779.77±84.90）U/L]和温生理盐水腹腔灌洗预处理组[（2845.70＆#177;204.78）U/L]明显低于ANP组[（4064.93±188.97）U/L,P＜0.05],但高于假手术组[（1221.47±54.58）U/L,P＜0.05];SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（t＝3.329,P＜0.05）.SB202190预处理组和温生理盐水腹腔灌洗预处理组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-8明显低于ANP组（P＜0.05）,但高于假手术组（P＜0.05）;SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（P＜0.05）.SB202190预处理组和温生理盐水腹腔灌洗预处理组胰腺组织p38MAPK mRNA含量明显低于ANP组（P＜0.05）,温生理盐水腹腔灌洗预处理组高于假手术组（P＜0.05）;SB202190预处理组低于温生理盐水腹腔灌洗预处理组（P＜0.05）.结论 HSP70可以通过调控p38MAPK从而下调细胞因子的表达,进而改善大鼠ANP病理生理.     

血管内皮生长因子对脑梗死大鼠热休克蛋白-70的影响

热休克蛋白 70 (HSP 70 )是细胞受有害刺激后产生的一组应激蛋白 ,与肿瘤的增殖及分化有关 ,有证据表明缺血可诱导HSP 70表达[1 3] 。另有证据表明 ,HSP 70可能具有保护脑细胞的作用[4 7] 。本研究着重观察HSP 70在血管内皮生长因子 (VEGF)基因有效治疗前后的变化 ,以进一步证实HSP 70的神经保护作用。一、材料与方法(一 )材料　雌性Wistar大白鼠 (购自湖北省医科院动物中心 ) 40只 ,随机分为 5组 :A组 (正常对照组 ) 5只 ,常规饲养。B组 (假手术组 ) 5只 ,在建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型过程中 ,将栓线插入颈内动脉约 1cm。…     

神经节苷酯GM1对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响

目的：探讨神经节苷酯GM1对脑缺血后的脑保护作用及其对脑缺血后热休克蛋白70表达的影响。方法：采用Koizumi‘s线栓法制作可复流大脑中动脉闭塞大鼠模型。32只雄性、健康Wistar大鼠随机分为正常组、MCAO组、生理盐水对照组、神经节苷酯GM1治疗组。MCAO后第5天处死动物，取脑组织进行Nissl染色及HSP70免疫组化检测。检测结果经CMIAS图像分析系统进行定量分析。结果：神经节苷酯GM1治疗组组海马各区神经元损伤轻，神经元脱失相对较少；MCAO后海马各区及大脑皮层均有不同程度的HSP70阳性细胞表达，GM1治疗后，海马各区及大脑皮层HSP70阳性细胞的数密度值较MCAO组减少。结论：GM1能减轻脑缺血后的神经元损伤，具有脑保护作用；抑制HSP70的表达亦可能是神经节苷酯GM1的脑保护作用机制之一。     

热休克蛋白70与心肌保护研究现状

热休克蛋白（heat shock protein，HSP）是指细胞在应激原特别是环境高温诱导下所产生的，由热休克基因所编码合成的，序列高度保守的一组蛋白质。近年来研究发现，以热、缺血缺氧为应激原或通过基因调控的方法诱导心肌细胞产生热休克蛋白，可使心肌具有抗热、抗缺血缺氧的保护作用。热休克蛋白按其分子量不同分为多个家族，其中，热休克蛋白70（HSP70）备受重视，已成为新近较重视的内源性心肌保护途径之一，在对抗心肌缺血再灌注损伤中发挥着极为重要的作用。     

急性颅脑外伤后局部脑组织热休克蛋白 70的表达

目的 探讨人颅脑外伤后伤灶周围神经细胞中热休克蛋白70(HSP70)的表达及其与损伤时间的关系.方法 采用免疫组织化学技术检测58例颅脑外伤患者伤后72 h内局部脑损伤区神经细胞中HSP70表达.结果 伤后6 h HSP70已出现阳性表达,24 h达高峰,至72 h仍呈较高水平;GCS≤7分组HSP70表达显著高于GCS≥8分组(P＜0.05),存活组表达显著高于2周内死亡组(P＜0.05).结论 HSP70在急性颅脑损伤后不同程度表达增强,并具时相规律性.     

热休克蛋白70在急性百草枯中毒大鼠肺脏中的表达

目的检测百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中肺组织热休克蛋白70(HSP70)的表达情况。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(n=18),ALI组(n=18)。ALI组用PQ灌胃(200 mg/kg)染毒建立大鼠ALI模型。对照组用等量生理盐水灌胃。采用RT-PCR检测大鼠肺组织HSP70的表达,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺组织病理变化。结果 ALI组大鼠肺组织HSP70的表达在染毒后12 h明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),24 h达高峰。MPO及EBD水平显著增高(P<0.01)。肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血。结论 HSP70在PQ中毒后的表达增多,可能参与了PQ诱导的ALI后的组织保护作用。     

双歧杆菌对实验性大鼠结肠炎中热休克蛋白70的影响

目的 观察实验性结肠炎热休克蛋白(HSP70) 、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达变化并研究双歧杆菌对其表达的影响.方法 40只SD大鼠随机均分为正常组、模型组、5-ASA组及双歧杆菌组.2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇制备大鼠结肠炎模型.5-ASA组给予奥沙拉秦钠胶囊100 m...     

VEGF165基因治疗鼠脑梗塞分子机制的初步研究

目的 :探讨血管内皮生长因子 16 5 (VEGF16 5 )基因治疗鼠脑梗塞中的有关分子表达情况 ,为临床研究脑硬塞的分子机制提供依据。方法 :采用改进的线栓法制成Wistar大鼠永久性大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,将质粒载体与VEGF16 5 (VascularEndothelialGrowthFactor)基因构成的重组DNA经颅骨注入到梗塞区 ,7d后断头取脑 ,用免疫组化的方法显示脑中的HSP70 (HeatShockProtein)和VEGF蛋白表达情况。结果 :治疗组VEGF和HSP70表达显著增高。结论 :缺血脑组织具有摄取并表达外源性VEGF基因的能力 ,且VEGF基因可诱导HSP70的表达     

新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区HSP70的表达

目的观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区热休克蛋白70(HSP70)表达的意义.方法应用免疫组化的方法观察新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织HSP70的表达.结果缺血再灌注6h后HSP70表达开始增高,24h达高峰,持续升高至第3天,其COD值与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论新生鼠脑缺血早期可诱导海马CA1区HSP70表达和合成增加,表明HSP70参与了脑缺血的病理生理过程,可能与脑缺血后神经细胞的内源性保护机制有关.     

静脉注射骨髓基质细胞对脑梗死大鼠血管内皮生长因子表达的研究

目的：观察静脉注射的骨髓基质细胞（MSC）在大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型大鼠脑内分布及血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法：采用Longa线栓法建立Wistar大鼠MCAO再灌注模型；从大鼠后肢骨髓分离、培养MSc；CD34、CD44、CD54免疫细胞化学染色鉴定MSC；5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记的MSC注射给动物模型，免疫组织化学染色观察BrdU阳性细胞分布及VEGF表达。结果：体外培养的MSC具有多态性和贴壁生长特性，多次传代后细胞生物学特性没有明显改变；MSC表达CD34（-）、CD44（＋）、CD54（＋）；治疗组BrdU阳性细胞主要分布于梗死灶周围。VEGF表达比对照组多（P〈0．05）。结论：静脉注射的MSC能游走、迁移至太鼠缺血脑组织并存活，同时促进VEGF表达。     

腺病毒载体介导血管内皮生长因子165基因治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 研究腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法 采用细菌内同源重组技术构建腺病毒重组载体Ad-VEGF.7日龄SD大鼠随机分成3组:假手术组(20只)、HIBD(20只)、Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,20只),Ad-VEGF移植组在HIBD后3 d于大鼠左侧感觉运动皮层区(坐标AP:+0.3mm,ML:-2 mm,DV:-1.5 mm)立体定位注射2μl重组体腺病毒悬液.移植后7 d采用免疫组织化学法检测鼠脑VEGF蛋白;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑神经元凋亡情况;大鼠3～4周龄时采用T迷宫觅食实验及足错误、姿势反射、肢体放置实验对其学习记忆、空间能力和感觉运动功能等行为学进行评估;采用尼氏染色法检测鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数目.结果 免疫组织化学法结果 显示皮层与海马Ad-VEGF组VEGF阳性细胞数均明显多于HIBD组(68.09±3.37比24.65±3.37,68.37±3.17比25.14±1.86,均P<0.05).TUNEL结果 显示Ad-VEGF组鼠脑神经元凋亡数目明显低于HIBD组(151.4±21.7比264.4±16.3,P<0.05);行为学检测结果 显示Ad-VEGF组的各项行为学测试成绩均较HIBD组有明显改善(均P<0.05),尼氏染色结果 显示Ad-VEGF组鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数日明显多于HIBD组(70.6±2.3比55.3±2.1,95.1±2.8比70.1±2.7,均P<0.05).结论 腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗可增加VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能,减轻缺氧缺血后的脑损伤,具有神经保护作用.     

谷氨酰胺增强氧化应激时肺微血管内皮细胞热休克蛋白70的表达

目的研究谷氨酰胺（Gln）对氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法采用体外培养Wistar大鼠PMVEC,分为阳性对照组（G组）、生理盐水组（PS组）、谷氨酰胺组（Gln组）、过氧化氢加生理盐水组（H₂O₂+PS组）和过氧化氢加谷氨酰胺组（H₂O₂+Gln组）。Western blotting检测PMVEC HSP70的表达情况,分别记录平均灰度值。结果与PS组（9.05±1.51）相比,Gln组（40.28±10.19）和H₂O₂+PS组（43.89±10.32）PMVEC HSP70表达分别增高4.5倍和5倍（P＜0.01）;与H₂O₂+PS组相比,H₂O₂+Gln组（65.59±14.53）HSP70表达进一步增高,约为PS组的7倍,接近G组（70.56±12.23）表达水平。结论谷氨酰胺可增强氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞HSP70表达。     

急性脑梗塞患者血清VEGF动态变化及其意义

为探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在急性脑梗塞发病中的作用及与脑梗塞体积、病情的关系 ,采用酶联免疫法动态测定了 42例急性脑梗塞患者起病后第 1,3,7及 14天血清VEGF含量。结果显示 :脑梗塞患者血清VEGF含量在各时间点均显著高于对照组 ,第 7天达峰值 ,峰值水平与梗塞灶大小及临床神经功能缺损评分密切相关。提示VEGF与脑梗塞病理生理过程密切相关 ,血清VEGF水平测定对判断脑梗塞病变严重程度及指导临床有重要价值     

心肺脑复苏后患者脑损害与热休克蛋白70的相关性

目的 探讨心肺脑复苏后患者发生脑损害与其自身的热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)的相关性.方法 随机选取湖北省中西医结合医院2013年6月-2015年2月收治的心肺脑复苏成功患者60例作为复苏组,另选60例健康人员作为对照组,对复苏组患者进行2h、5h、12h、24h、48h的动态HSP70测定,并对患者进行同一时间段颈静脉血氧饱和度(Oxygen saturation of jugular venous blood,SjvO2)的监测,分析HSP70与SjvO2的相关性.结果 进行心肺脑复苏的患者其HSP70的测得值在复苏后几小时即显著升高,于5h达到峰值,各个时间段的测定值均显著高于对照组(P＜0.01);复苏后2h、5h、12h、24h、48h这些时间段的HSP70值与患者的SjvO2值存在显著正相关(P＜0.01).患者清醒所需时间越短,其HSP70水平越高.结论 热休克蛋白70是具有细胞保护作用的应激蛋白,SjvO2值越低,HSP70值亦越低,脑损伤越重,其与心肺脑复苏后患者的脑损害程度存在相关性,可用于心跳骤停早期昏迷患者的脑损害估计.     

热休克预处理诱导HSP70蛋白表达减轻神经细胞的缺血损伤

目的 :研究热休克预处理对脑缺血再灌后热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达影响及对缺血神经细胞损伤的保护作用。方法 :采用沙鼠短暂前脑缺血再灌损伤模型 ,光镜观察缺血再灌后神经细胞损伤情况 ,免疫组化方法检测脑缺血后不同时期额叶HSP70蛋白表达。结果 :沙鼠脑缺血后HSP70蛋白仅在再灌后 1d有少量表达 (P <0 .0 1) ;缺血神经细胞在再灌后第 7d大多出现损伤改变 ;热休克预处理能增加沙鼠脑缺血再灌后各期HSP70蛋白表达 (P <0 .0 1) ,明显减轻缺血神经细胞损伤 (P <0 .0 1)。结论 :热休克预处理能通过增加HSP70蛋白表达 ,减少缺血神经细胞损伤。     

急性脑梗塞患者血管内皮生长因子水平的变化及临床意义

目的：探讨急性脑梗塞患者血清中血管内皮生长因子（VEGF）的变化及VEGF在急性脑梗塞病理生理过程中的作用.方法： 采用双抗体夹心酶联免疫分析（ELISA）法对55例急性脑梗塞患者（急性脑梗塞组）和30例正常对照者（正常对照组）血清VEGF水平进行测定,在急性脑梗塞患者发病的第1、7、14天分别测定血清VEGF水平,并与正常对照组进行了比较,同时比较了不同族别、不同梗塞面积、不同梗塞部位以及不同神经功能评分的急性脑梗塞患者血清VEGF水平.结果：急性脑梗塞患者发病第1、7、14天的血清VEGF水平均明显高于正常对照组（P〈0.05）;梗塞面积大的VEGF水平高于非大面积的VEGF水平,差异有统计学意义（P〈0.05）,神经功能评分重度的血清VEGF水平高于中度、轻度的VEGF水平,差异有统计学意义（P〈0.05）;不同族别、不同硬塞部位急性脑梗塞患者发病第1、7、14天的血清VEGF水平,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：急性脑梗塞患者血清VEGF水平明显增高,提示VEGF参与了急性脑梗塞的修复病理变化过程,有可能反映脑梗塞程度及预后.